牡丹花提取物抑菌作用的研究_徐春华

牡丹花（Paeonia suffruticosa Andr.）属于芍药科、芍 药属植物，素有“花中之王”之称，牡丹花的资源非常丰 富，遍布我国的各个省市，其中主要的种植地有洛阳、 菏泽、彭州和北京等[1]。牡丹花中含有大量的天然活性 物质，朱素英研究了牡丹花中多酚物质的抗氧化作 用，发现牡丹花多酚具有较强的 DPPH 自由基清除能 力[2]。孙泽飞则对牡丹花中的黄酮类化合物进行了提 取，并研究了此类物质的抗氧化能力[3]。但是关于牡丹 花天然提取物抑菌效果的研究则少有报道。本试验利 用水对牡丹花进行浸提，从而得到牡丹花的提取物， 并进一步研究牡丹花提取物的抗菌特性、最低抑菌浓
牡丹花提取物对供试菌株的 MIC 见表 2。 由表 2 的结果可知，牡丹花提取物对大肠杆菌、沙 门氏菌和单增李斯特氏菌的 MIC 为 0.2；对金黄色葡 萄球菌和蜡样芽孢杆菌的 MIC 为 0.3；对黑霉菌、青霉 和黄曲霉的 MIC 为 0.4。上述结果表明牡丹花提取物 对细菌的抑菌作用优于酵母和霉菌，其中大肠杆菌、 沙门氏菌和单增李斯特氏菌的 MIC 相同且最低，这些
葡萄糖琼脂培养基（Potato Dextrose Agar，PDA）。
效果
1.2 试验仪器
牛津杯法分析牡丹花提取物对供试菌株的抑菌
pH 计：上海仪电科学仪器股份有限公司；真空干 效果见表 1。
燥箱：南京平岗机械设备有限公司；真空泵：上海阳光 泵业有限公司；恒温培养箱：上海姚氏仪器设备厂。
表 1 牡丹花提取物对供试菌种的抑制作用 Table 1 The inhibition of peony extract to tested strains
利用滤纸片法[5]测定牡丹花提取物的抑菌效果， 选取内孔直径为 6 mm 的滤纸片，每个平皿中均匀放 置 4 个滤纸片，并加入 100 μL 5 %的待测菌液，重复 3 次[5]。作为对照，选取相同体积的无菌蒸馏水和相同 pH 的盐酸溶液作为对照。在上述试验中供试细菌采用 TSA 培养基，酵母菌和霉菌采用 PDA 培养基。 2.4 牡丹花提取物 MIC 的测定
由表 1 所知，0.3 %的牡丹花提取物对细菌、酵母 菌和霉菌都有明显的抑菌作用，其中对细菌的抑菌效 果优于对酵母菌和霉菌的抑菌效果。在供试细菌中， 牡丹花提取物对大肠杆菌、沙门氏菌和单增李斯特氏 菌的抑菌效果较强，抑菌圈直径均达到 14 mm 以上， 而对金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌的抑菌圈直径 为 12 mm~14 mm；对啤酒酵母和所有霉菌的抑制作用 大致相同，抑菌圈均在 10 mm~12 mm。在对照组中，pH 为 3.35 的 HCl 溶液对细菌有一定的抑菌效果，抑菌圈 在 8 mm~12 mm 之间，其中对大肠杆菌的抑菌效果最 强，但是 pH 为 3.35 的 HCl 溶液对酵母和霉菌没有抑 菌效果。作为空白对照组，无菌蒸馏水对供试细菌、酵 母菌和霉菌都没有抑菌作用。以上结果表明牡丹花提 取物对细菌、酵母菌和霉菌都具有明显的抑菌作用。 3.1.2 牡丹花提取物对供试菌株的 MIC
将 100 μL 的菌液接种到 NB 液体培养基中，37 ℃ 培养 18 h，然后三区划线，细使用 TSA 培养基，37 ℃培 养 24 h；霉菌使用 PDA 培养基，37 ℃培养 48 h。挑取上 述微生物的单菌落，在 NB 培养基中活化，离心取悬浮 液，调节浓度在 107 CFU/mL。 2.3 牡丹花提取物对供试菌株抑菌效果的测定
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无菌蒸 馏水
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注：-为无抑菌圈；+表示抑菌圈直径为 6.0 mm~8.0 mm；++表示抑菌圈 直径为 8.0 mm~10. 0 mm；+++表示抑菌圈直径为 10.0 mm~12.0 mm； ++++表示抑菌圈直径为 12.0 mm~14.0 mm；+++++表示抑菌圈直径> 14.0 mm。
Study on Bacteriostasis of Peony Extract XU Chun-hua
（Dalian Vocational Technology College，Dalian 116037，Liaoning，China） Abstract：In this study，Staphylococcus aureus，Escherichia coli O157，Bacillus cereus，Salmonella，Listeria monocytogenes，Saccharomyces cerevisiae Hansen，Aspergillus niger，Penicillium and Aspergilus flaus were chosen as the tested strains to analyze the antibacterial activity of the peony extract，explore the relationship be－ tween pH and bacteriostatic effect of peony extract，finally study the thermal stability of the peony extract. The results showed that the peony extract had obvious inhibitory effect to the bacteria，yeast and mold，and the abil－ ity against bacteria（MIC = 0.2-0.3）was better than that against yeast（MIC = 0.4）and mold（MIC = 0.4）. The HCl with the same pH had certain bacteriostasis to tested bacteria，but the effect was significantly lower than the peony extract. In addition，the peony extract had certain thermal stability，bacteriostatic activity of which was not affected under 55 ℃，and was reduced with the increase of temperature and treatment time，under the con－ dition of 90 ℃ for 20 min，the antibacterial activity of peony extract was lost. Key words：peony extract；bacteriostasis；pH；thermal stability
金黄色葡萄球菌 56.7 88.6 100 100 100
0.3
结果与表 1 中的试验结果的趋势一致，进步一说明了 试验结果的可靠性。 3.2 热稳定性分析
热稳定性分析见表 3。 由表 3 可知，牡丹花提取物具有一定的热稳定
大肠杆菌 76.2 100 100 100 100
0.2
蜡样芽胞杆菌 66.1 90.5 100 100 100
2 方法 2.1 牡丹花提取物的制备
根据向延菊[4]等的方法，利用水对牡丹花进行提 取，牡丹花 ∶ 水为 1 ∶ 5（g/mL），并将 3 次提取的牡丹花 提取液合并，将牡丹花提取液在 40 ℃下进行浓缩，随 后将牡丹花提取液放入真空干燥箱干燥，最后得到牡 丹花提取物的干粉。 2.2 供试菌株的纯化培养
将 MIC 的牡丹花提取物进行热稳定处理，分别在 50、70、90、110 ℃下分别处理 10、20、30 min 后计算牡 丹花提取物在不同处理条件下的抑Fra Baidu bibliotek率，试验方法如 2.4。
供试菌种
金黄色葡萄球菌 大肠杆菌
蜡样芽胞杆菌 沙门氏菌
单增李斯特氏菌 啤酒酵母 黑曲霉 青霉 黄曲霉
抑制效果
0.3 %的牡丹花 HCl 溶液 提取物（pH3.35） （pH3.35）
作者简介：徐春华（1980—），女（汉），讲师，硕士，研究方向：微生物。
度（MIC）和热稳定性；并与相同 pH 下的 HCl 做对照， 分析其抗菌作用与 pH 之间的内在联系，以期为牡丹 花的综合利用提供理论参考。
1 材料与仪器 1.1 主要材料
牡丹花：选取完全盛开的牡丹花，且无腐败变质 的花瓣。
供试菌株：金黄色葡萄球菌 （Staphylococcus au－ reus）、大肠杆菌（Escherichia coli O157）、蜡样芽孢杆菌 （Bacillus cereus）、沙门氏菌（Salmonella）、单增李斯特 氏 菌 （Listeria monocytogenes）、 啤 酒 酵 母（Saccha－ romyces cerevisiae hansen）、黑曲霉（Aspergillus niger）、
天然产物
徐春华：牡丹花提取物抑菌作用的研究
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表 2 牡丹花提取物对供试菌种的抑菌率
Table 2 The bacteriostatic rate of peony extract to tested strains %
供试菌种
牡丹花提取物的浓度
牡丹花提取
0.1 % 0.2 % 0.3 % 0.4 % 0.5 % 物的 MIC
0.3
沙门氏菌 84.2 100 100 100 100
0.3
单增李斯特氏菌 89.5 100 100 100 100
0.3
啤酒酵母 70.4 88.6 95.3 100 100
0.4
黑曲霉
60.1 76.4 89.1 100 100
天然产物
食品研究与开发
Food Research And Development
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.15.037
2016 年 8 月 第 37 卷第 15 期
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牡丹花提取物抑菌作用的研究
徐春华 （大连职业技术学院，辽宁 大连 116037）
摘 要：以金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌、沙门氏菌、单增李斯特氏菌、啤酒酵母、黑曲霉、青霉和黄曲霉作 为供试菌株分析了牡丹花提取物的抑菌作用，并探讨了该提取物抑菌效果与 pH 之间的关系，最后研究了牡丹花提取 物的热稳定性。结果表明：牡丹花提取物对细菌、酵母菌和霉菌都有明显的抑制作用，且对细菌（MIC=0.2~0.3）的抑制效 果优于酵母菌（MIC=0.4）和霉菌（MIC=0.4）。相同 pH 下的 HCl 对供试细菌具有一定的抑菌作用，但是效果明显低于牡丹 花提取物。此外，牡丹花提取物的具有一定的热稳定性，在 55 ℃以下抑菌活性不会受到影响，但会随着温度和处理时间 的增加而降低，在 90 ℃ 20 min 的条件下对供试菌株的抑菌作用全部消失。 关键词：牡丹花提取物；抑菌；pH；热稳定性
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徐春华：牡丹花提取物抑菌作用的研究
天然产物
青霉（Penicillium）和黄曲霉（Aspergilus flaus）。
3 结果与分析
试剂：营养肉汤培养基（Nutrient Broth，NB）、胰酪 3.1 牡丹花提取物对供试菌株的抑菌效果及 MIC
胨大豆琼脂培养基（Tryptose Soya Agar，TSA）、马铃薯 3.1.1 牛津杯法分析牡丹花提取物对供试菌株的抑菌
把牡丹花提取物加入到 TSA 和 PDA 培养基，调 节浓度到 0.3 %、0.4 %、0.5 %、0.6 %和 0.70 %，并以加 入相同体积无菌蒸馏水和相同 pH 的 HCl 的培养基作 为对照组，吸取 10 μL107 CFU/mL 的供试菌液进行涂 布接种，在 28℃的条件下培养 48 h，然后进行平板计 数，上述每个梯度做 3 个平行。最后进行抑菌率的计 算，公式如下：抑菌率/%=1 g 作用后的菌落数×100/7， 当抑菌率为 100 %时对应的提取物浓度即为牡丹花提 取物的 MIC。 2.5 牡丹花提取物热稳定性试验