医学实验动物学06第九章 动物实验的基本技术和方法

• 经口给药 1. 拌入饲料或饮水中自由摄取
优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等 2. 灌胃
优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的痛苦，
需熟练掌握技术
大小鼠灌胃注意点
1. 用灌胃针。
2. 从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针 的方向，使其与食管的走向一致，然后 顺利插入。
3. 成年大鼠由于体型较大，不易保定。办 法：
1）一人保定、灌胃
2）操作者抓取后，将大鼠尾部按 在自己的胸部，达到固定尾部的目的， 然后灌胃。
兔灌胃法
采用两人操作法。
操作者用左手拇指和中指挤压家 兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口， 右手将开口器从一侧口角插入口腔 并固定，用泡在水中的14号细导尿 管，经开口器的孔插入，向前推进 约15cm，可达胃内，确认泡在水中 的导管另一端没有冒气泡，说明没 有误入气管，即可注入药液。灌胃 量为每只每次80-150mL。
4. 兔抓取的注意点 • 最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。 • 采用正确地抓取方法。 • 可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓取固
定，一人实验操作。
5. 犬抓取注意点
• 实验用犬有专用的比格犬和农村收购来的随意 来源犬。
• 犬是通人性的，随意来源犬购入后，饲养人员 和实验人员要经常亲近它们，使它放松对你的 警惕，容易直接抓取它们。
障碍，引起呼吸、心跳停止。 抢救方法： 要针对具体情况，采取对症治疗的措施。
1.立即停止供给麻醉剂 2.人工呼吸，吸氧 3.苏醒剂 4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂， 如0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注 50%葡萄糖溶液等。 （half）
五、实验动物的给药方法
• 一、经口给药法 • 二、注射法 • 三、其它途径给药方法 1. 呼吸道给药 2. 皮肤给药 3. 脊髓腔内给药 4. 脑内给药 5. 直肠内给药 6. 关节腔内给药
4.预实验 正式实验前的演习 预实验可用少量动物进行 预实验结果不能并入正式实验结果一起分析。
第二节 动物实验的基本操作技术和方法
一、动物的抓取
• 动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最 基本的一个环节。
• 应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻 柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最 低。
• 一般说来动物是不会主动攻击人的。 1. 小鼠抓取的注意点 2. 大鼠抓取的注意点 3. 豚鼠抓取的注意点
2. 灌胃给药
在给犬灌胃时，将犬固定于特制的固定架上， 实验时将木制开口器从一侧口角放入犬的口腔， 用左手或绳子固定，右手持12号胃管由开口器的 小圆孔向咽后壁方向不断插入，导管另一端臵于 一杯清水中，若连续出现气泡，说明插入呼吸道， 应立即拔出胃管，重新操作。如无气泡，说明没 有插入气管，插至约20cm，即可到达胃内。犬的 灌药量为每只每次200-500mL。
1. 口服给药
用右手将口服药片夹在拇指和食指之间，把 左手放在犬的圈套上，用拇指和食指压着犬的上 唇，用力使犬的头向后仰，继而把右手中指放在 犬的下颌向下压。当犬的嘴张大时，快速把药片 放在舌根隆起的部位，合上犬的嘴，维持头后仰 姿势，右手在咽喉部轻轻按摩。借助犬本能的吞 咽动作服下药片。
犬的经口给药法
• 全身麻醉简称全麻，全麻是指麻醉药通过呼 吸道吸入、静脉、肌肉、腹腔注射等途径， 进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧 失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢 神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或 在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不 留后遗症。
• 全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径， 吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用 非挥发性麻醉药。
• 另一方面从动物福利和动物实验伦理学考虑， 又需要减少一些不必要的动物实验，特别是 人类的宠物诸如猫、犬、猴等，或者在不得 不做的动物实验中尽可能将动物的痛苦、压 迫和不适降到最低。
• 国际上对动物实验伦理的要求:
⑴动物居住空间应符合标准,注意日常的饲育 管理,不使动物陷入饥饿、缺水和患病。
⑵尽可能地采用代替法最少地使用和牺牲动物。
摘眼球采血法
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ0.2-1.5
尾静脉切割采血法 0.010.05
眼眶后静脉采血法 0.02-0.1
1.0-8.0 0.1-0.5 0.2-1.0
大批动物集中采血，若一次少量 采，可反复几次
用于用血量少的检验，如血常规， 能长时期反复多次采血
能反复多次采血
腋窝动静脉采血法 心脏采血法 腹主动脉采血法
0.5-1.5 -
麻醉平稳、安全可靠、
停止吸入后很快苏醒
• 缺点：
需要一定的仪器设备，
（2）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全
麻的方法。在动物实验中比较常用。 常用麻醉药： 戊巴比妥钠、硫喷妥钠、氯氨酮、
Xylazine、乌拉坦、水合氯醛。 大动物：静脉注射或腹腔注射 啮齿类动物：腹腔注射
• 实验动物麻醉应注意的事项
（1）吸入麻醉法
• 常用药物为乙醚、异氟烷等。吸入麻醉法有开放吸 入和气管内插管吸入两种方法。动物实验大都采用 开放吸入法
• 开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿、 异氟烷小动物吸入麻醉机国外已研制成功。
• 气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，异氟烷 是最常用的麻醉药。
• 吸入麻醉的优点：
⑶在必须使用犬、猫和猴时，在实验前应进行 训练，尽可能地减少动物的恐惧和不安。
⑷实验结束和动物不可能恢复时，应采取安乐 死。
⑸要爱护动物和对由于实验死亡的动物应持有 怜悯和感谢之情。
★我国2006年9月13日，科技部颁布了《关于 善待实验动物的指导性意见》
2. 动物实验技术和方法是实践性非常 强的，不能仅靠书本理论知识，需要 通过反复实践加以掌握。
第九章 动物实验的基本 技术和方法
第一节 动物实验前的准备工作
一、动物实验的设计 二、实验动物的正确选择
种属、品系、性别、年龄、数量、微生物学级别 例：实验动物生产许可证： SCXK（沪）2009-0021
实验动物质量合格证
三、动物实验场所的确定 例：实验动物使用许可证：SYXK（沪）2013-0026 四、实验动物的订购、运输；验收与检疫
四、实验动物的麻醉方法
• 对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验过 程中引起的痛苦和不适，确保实验动物的安全 和动物实验的顺利进行，是动物实验伦理的一 个重要方面。
• 应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康 状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂 和麻醉方法。
• 麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验 动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。
适用于大动物 4. 脱毛法：脱毛剂
• 常用脱毛剂配方 配方1：硫化钠8g溶于100mL水中。 配方2：硫化钠：肥皂粉：淀粉的比例为 3：1：7，再加水调成糊状。 配方3：硫化钠10g和生石灰15g溶于 100mL水中。
• 配方1和2适用于家兔和啮齿类动物的脱 毛，配方3适合给犬脱毛。
• 脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。
运输与包装的注意点：温度控制、符号级别的包装 核对与验收 （实验动物质量合格证 ） 普通级动物与随意来源动物的隔离与检疫
动物实验前须引起重视的事项
1.动物福利和动物实验伦理问题
• 饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作为 人类的替身进行各种生物医学研究。
• 一方面随着生物医学的发展，实验动物的使 用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；
如过敏试验 脑内注射常用于病毒学接种
尾静脉
• 静脉注射 1. 大小鼠尾静脉注射 2. 大鼠、沙鼠、豚鼠后肢浅背侧足中静脉
注射 3. 兔耳缘静脉注射
4. 犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射
• 其它途径给药方法 1. 呼吸道给药： 2. 皮肤给药： 3. 脊髓腔内给药： 4. 脑内给药： 5. 直肠内给药： 6. 关节腔内给药：
猫
2.5kg-
3.0kg
>3.0kg
犬
10kg-
15kg
最大容积 （ml） 4-5 6.0 100
150
200 50-80
100-050 200-500
• 注射法 注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、
肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。
药物吸收速度： 静脉注射＞腹腔注射＞肌肉注射＞皮下注射。 皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，
六、实验动物体液的采集方法
（一）采血法 • 大小鼠 1. 剪尾 2. 尾静脉切割 3. 大鼠后肢足中静脉采血 4. 眼眶后静脉丛采血 5. 摘眼球采血 6. 腋窝动静脉采血 7. 心脏采血 8. 腹主动脉采血
大小鼠心脏采血
眼眶后静脉从采血
尾静脉切割采血
• 一个动物到底能采多少血，取决于动物 的体重、定期活体采血还是处死采血。
6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻 醉过程中密切观察动物的反应，如 血压、脉搏、呼吸和体温，及时调 节麻醉药剂量，保证手术顺利进行。
7.动物在麻醉期间、手术后至苏醒期 体温会下降，应注意手术室的室温。
8. 注意术后护理。
• 麻醉意外的抢救 原因： 麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深 后果： 中枢神经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能
• 不要轻易使用长柄铁钳，钳伤造成的伤害会使 它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。
• 抓取后用绳子将嘴绑住。
二、动物编号常用的标记方法
• 适用需要个体识别的实验 1. 染料标记法：适合白色被毛的动物，如小
鼠、大鼠、豚鼠、兔等。 黄色：常用3-5%苦味酸溶液 红色：常用0.5%中性红溶液 咖啡色: 2%硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液
• 动物的全血量为动物体重的8%左右，其 中约30%储藏在全身毛细血管内。全血中 约50%是有形成分。据此可测算处死后的 采血量和血清量。
• 采血为全血量的10%时，两个星期恢复；