薄层色谱法测苯甲酸含量

薄层色谱法测苯甲酸含量

一、原理

试样酸化后，用乙醚提取苯甲酸、山梨酸。将试样提取液浓缩，点于聚酰胺薄层板上，展开。显色后，根据薄层板上苯甲酸、山梨酸的比移值。与标准比较定性，并可进行概略定量。

二、试剂

1、异丙醇。

2、正丁醇。

3、石油醚:沸程30℃ -60℃.

4、乙醚:不含过氧化物。

5、氨水。

6、无水乙醇。

7、聚酰胺粉:200目。

8、盐酸(1十1):取100 mL盐酸，加水稀释至200 mL,

9、氯化钠酸性溶液(40 g/L):于氯化钠溶液(40 g/L)中加少量盐酸(1+1)酸化。

10 、展开剂如下:

（1）正丁醇+氨水+无水乙醇(7+1+2).

（2）异丙醇十氨水+无水乙醇(7+1+2),

11、苯甲酸标准溶液2.0mg/ml:准确称取0.2000 g苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2.0 mg苯甲酸。

12、显色剂:溴甲酚紫一乙醇(50%)溶液(0. 4 g/L)，用氢氧化钠溶液(4 g/L)调至pH=8

三、仪器

1、吹风机。

2、层析缸。

3、玻璃板:10 cmX18 cm,

4、微量注射器:10μL,100μL

5、喷雾器。

四、分析步骤

1 试样提取

称取 2. 5 0g 事先混合均匀的试样，置于25m L带塞量筒中，加0.5 m L盐酸(1+1)酸化，用15,10 mL乙醚提取两次，每次振摇1 min，将上层醚提取液吸入另一个25 mL 带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3 mL氯化钠酸性溶液(40 g/L)洗涤两次，静止15 min，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤入25 mL容量瓶中，加乙醚至刻度，混匀。吸取10. 0 mL乙醚提取液分两次置于10 mL带塞离心管中，在约40℃的水浴上挥干，加入0. 10 mL 乙醇溶解残渣，备用。

2 测定

2.1 聚酰胺粉板的制备:称取1.6 g聚酰胺粉，加0.4g可溶性淀粉，加约15 mL水，研磨3 min-5 min，立即倒人涂布器内制成10cmX18cm、厚度0.3 mm 的薄层板两块，室温干燥后，于80℃干燥1h，取出，置于干燥器中保存。

2.2 点样:在薄层板下端2 cm的基线上，用微量注射器点1μL,2μL试样液，同时各点1 μL,2μL苯甲酸标准溶液。

2.3 展开与显色:将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂(10.1或10.2)的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至10 cm，取出挥干，喷显色剂，斑点成黄色，背

景为蓝色。试样中所含苯甲酸的量与标准斑点比较定量(苯甲酸的比移值为0.73) 3 结果计算

试样中苯甲酸的含量按下式进行计算。

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100010100025A x V m V ?=??? 式中:

X — 试样中山梨酸的含量，单位为克每千克(g/kg);

A- 测定用试样液中苯甲酸的质量，单位为毫克(mg) ;

V1— 加入乙醇的体积，单位为毫升(mL) ;

V2— 测定时点样的体积，单位为毫升(mL) ;

m — 试样质量，单位为克(g);

10— 测定时吸取乙醚提取液的体积，单位为毫升(mL) ;

25— 试样乙醚提取液总体积，单位为毫升(mL).

注:本方法还可以同时测定山梨酸、果酱、果汁中的糖精。

2.直接定量法

a. 斑点面积测量法 以半透明纸扫下TLC 图上的斑点界限，然后测量其面 积。将斑点面积同平行操作的标准样面积相比较进行定量。

b. 目测法 将被测样品和系列溶液点在同一薄层板上，展开后用适当方法 显色，可以得到系列斑点，将被测样品的斑点面积大小和颜色与标准系列的斑点相比较，可推测出样品的含量范围。这种定量法非常适用于对常规大量样品的重复分析。