生物化学实验2

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生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线

生物化学实验报告示范-3,5-二硝基水杨酸法测定葡萄糖标准曲线

实验二3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线马铃薯总糖含量测定实验目的1. 熟悉并掌握7200型分光光度仪的结构及工作原理和操作使用方法;2. 掌握分光光度法测定物质含量的基本操作步骤及微机绘制标准曲线的操作方法;3.掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖(葡萄糖)的原理及方法;4.掌握3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理与方法。

实验原理1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖(葡萄糖)的及标准曲线定制原理3,5-二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中加热反应后被还原成棕红色的氨基化合物,该有色物质在540nm 处有最大吸光度,且在一定浓度范围内(一般OD值在0.2~0.8范围内线性较好),还原糖的量与反应液的颜色强度(吸光度OD值)呈线性关系,利用分光光度仪,以分析纯葡萄糖为还原糖测定的标准品,在540nm处按梯度依次测定各葡萄糖浓度对应的反应液的吸光度(OD值)大小,通过微机处理数据,定制葡萄糖标准曲线,确定出3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定还原糖的线性回归方程;2. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法测定马铃薯总糖含量测定的原理先将马铃薯去皮,经机械粉碎,过滤和清水漂洗,烘干制成马铃薯淀粉;再精确称取干燥恒重后的马铃薯淀粉加酸水解为还原糖,经中和定容,配制成马铃薯总糖含量测定的待测液(即样品液);再以标准曲线测定的加样操作方法,测定出样品待测液的吸光度大小,将测定的吸光度大小代入其回归方程,即可计算出样品待测液的显色浓度,根据稀释倍数关系,计算出以还原糖的量表示的马铃薯总糖的量,并测定出马铃薯总糖百分含量。

该方法是半微量定糖法,操作简便,快速,杂质干扰较少。

实验操作1. 3,5-二硝基水杨酸比色定糖法定制葡萄糖标准曲线(1)葡萄糖标准溶液的配制:(2mg/mL)准确称取2000mg分析纯的葡萄糖(预先在105℃干燥至恒重),用少量蒸馏水溶解后定容至1000mL,冰箱保存备用(2)葡萄糖标准曲线定制加样操作及测定结果纪录(详见表1)按表1进行实验操作,在沸水浴中准确反应20min,取出后立即用冷水冷却,加蒸馏水定容至25mL,摇匀,用lcm的比色杯于540nm处测光密度值。

基础生物化学实验(第二版)

基础生物化学实验(第二版)

基础生物化学实验(第二版)根据教学计划,大多数高校开设的生物化学实验一般为36~54个学时,少数高校为72学时,在这么短的时间内要完成如此庞大的教学内容,传统的做法是每一个实验的头尾工作由教师代替完成,教师在实验前配制好实验所需的试剂,采集、培养、处理好实验材料,准备各种仪器设备,学生只是掐头去尾操作其中的一段;为了节省时间,课堂上学生被动的接受教师灌输的实验目的、原理、操作步骤等,然后,按部就班,“照方抓药”,按照思维定势,不假思索就能顺利得到预期的实验结果。

这种程序化的教学方法,严重束缚了学生创新思维的拓展,抑制了学生动手能力的施展。

不仅如此,开设的大多是内容简单、彼此孤立的“静态”实验,各个实验间缺乏内在联系。

由于缺乏学习兴趣,部分学生不仅不动脑思考,而且根本不动手操作,缺乏主动性,丧失了通过实验课堂培养学生发现问题、分析问题、解决问题能力的功能。

为了突显学生的主体地位,调动学生的学习积极性,培养学生的科学精神,提高学生的创新能力和综合素质,必须改革生物化学实验课的教学内容和教学模式。

2.1定性与定量实验相结合做为一门实验性学科,生物化学必须涵盖定性与定量实验才就是完备的研究方法。

定性分析就是运用物理、化学的手段,对生物活性分子展开“质”的分析,再通过概括和诠释、抽象化与归纳、分析与综合等方法,对赢得的各种信息展开思维加工,由表及里、去伪存真,以介绍生物大分子的存有形式。

定量实验就是以定性实验为基础的研究活动,研究生物大分子的性质、共同组成和影响因素之间的数量关系,搜集准确的数据,然后展开统计分析。

定性和定量融合研究有利于学生对生物大分子剥夺意义的基础上产生恰当的心智和精确的定位,重新认识生物分子运转、变化的本质规律,阐明其结构与功能的内在联系。

生物化学实验内容包含对糖、脂质、氨基酸、蛋白质、酶、维生素、核酸、激素等生命分子的研究,还包括物质新陈代谢与生物水解实验,实验方法囊括电解、酿造、Vergt、分光光度比色、各种层析技术(薄层、凝胶、色谱法、亲和层析)、色谱技术(气相、高效率液相色谱)、电泳、荧光、旋光法等。

实验二 总糖和还原糖的测定

实验二  总糖和还原糖的测定

本实验是利用3, ~ 本实验是利用 ,5~二硝基 水杨酸溶液( 水杨酸溶液(DNS法)与还 法 原糖溶液共热后被还原成棕 红色氨基化合物, 红色氨基化合物,在一定范 围内还原糖的量和棕红色物 质深浅的程度成一定比例关 可用于比色测定。 系,可用于比色测定。操作 简便,快速,杂质干扰较少。 简便,快速,杂质干扰较少。
三、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的制定 、 葡萄糖标准液的配制:准确称取 葡萄糖标准液的配制:准确称取100mg分 分 析纯的无水葡萄糖(预先在 析纯的无水葡萄糖(预先在105℃干燥至恒 ℃ 重),用少量蒸馏水溶解后,定量转移到 ),用少量蒸馏水溶解后, 用少量蒸馏水溶解后 100ml容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。浓 容量瓶中,再定容到刻度,摇匀。 容量瓶中 度为1mg/ml。 。 度为
将各管溶液混合均匀,沸水浴加热 将各管溶液混合均匀,沸水浴加热5min,取出后立 , 即用冷水冷却到室温,再向每管加入21.5ml蒸馏水, 蒸馏水, 即用冷水冷却到室温,再向每管加入 蒸馏水 摇匀。 波长处测定OD值 摇匀。于520nm波长处测定 值。以葡萄糖毫克数 波长处测定 为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。 为横坐标,光密度值为纵坐标,绘制标准曲线。
2、样品中总糖和还原糖含量的测定 、 还原糖的提取 (1)样品中还原糖的提取: )样品中还原糖的提取: 准确称取10g新鲜材料(或2g材料干样粉 准确称取 新鲜材料( 材料干样粉 新鲜材料 末),放在 烧杯中, ),放在100ml烧杯中,先以少量水调成糊 放在 烧杯中 蒸馏水, 状,然后加50~60ml蒸馏水,于50℃恒温水 然后加 ~ 蒸馏水 ℃ 浴中保温20min,过滤,将滤液收集在100ml ,过滤,将滤液收集在 浴中保温 容量瓶中,再定容至 容量瓶中,再定容至100ml。 。

临床微生物检验_实验二

临床微生物检验_实验二

课后作业
复习今天接种细菌的各种生化反应原理与结果 预习第二天的各种生化反应原理及结果观察
第二天实验内容
试剂:苯丙、尿素、(赖氨酸、鸟氨酸、氨对)、 DNA酶、硝还、O/F 以上各种生化微量管 2支/人 O/F管 4支/人
菌种:大肠、变形、沙门、志贺、金葡、铜绿 其他:砂轮、接种针、酒精灯 观察昨天的生化反应结果并记录
③产生硫化氢 + 铁盐
FeS 黑色沉淀
应用:检测肠杆菌科细菌对乳糖、葡萄糖的分解和 产H2S能力。
克氏双糖铁试验结果示意图
未接种菌 的KIA
乳(-) 葡(+) H2S(-)
乳(-) 葡(+)
H2S(+)
乳(+) 葡(产酸产气) H2S(-)
各种生化培养基接种的细菌
葡萄糖: 大肠埃希菌 、 沙门菌或志贺菌
砂轮接种针酒精灯?观察昨天的生化反应结果并记录mr和vp加试剂后观察无色红色vp试验甲基红试验紫红色橘黄色加试剂后观察乳葡产酸产气h2s大肠埃希菌在kia中结果乳葡h2s伤寒沙门菌在kia中结果乳葡h2s志贺菌在kia中生长结果kakakaaa?原理
广州医科大学
临床微生物学检验
实验 第二周
实验内容
指示剂
颜色改变
酸→碱
溴甲酚紫
黄→紫
溴麝香草酚蓝 黄→蓝
甲基红
红→黄
中性红
红→黄
酚红
黄红
感应0 6.8~8.0 6.8~8.4
碳水化合物代谢试验
1、糖(醇、苷)类发酵试验
原理:细菌含发酵糖(苷、醇)类的酶不同, 分解糖(苷、醇)能力不同,代谢产 物不同,指示剂呈酸性或碱性反应。
(再35℃0.5~1小时后观察)

生物化学实验报告(共2篇)

生物化学实验报告(共2篇)

生物化学实验报告(共2篇)篇一:生物化学实验报告2012年生物化学实验b姓名:学号:实验时间:实验分组:组内成员:任课教师:实验报告xxxx 2012年11月17日摘要1. 实验部分1.1试剂与仪器1.试剂:(2)1 mol/l 醋酸,1 mol/l naoh,硫酸铵。

(3)平衡缓冲液:0.01 mol/l tris-hcl,ph 8.0。

(5)酶的底物溶液:用底物缓冲液配制15×10-3 mol/l 对硝基苯磷酸二钠溶液。

(7)分离胶缓冲液:1.5 mol/l tris-hcl缓冲液,ph 8.8,已加入10% sds。

(8)浓缩胶缓冲液:0.5 mol/l tris-hcl缓冲液,ph 6.8,已加入10% sds。

(13)脱色液:500 ml 10%甲醇和10%冰醋酸的脱色液1000 ml。

匀浆机、eppebdorf5型冷冻离心机、gsy—2型恒温水浴、uv762型紫外可见分光光度计。

1.2 小牛肠碱性磷酸酶提取方法2)将小肠粘膜液集中倒入匀浆机中,加冰冷蒸馏水,高速匀浆,重复多次。

3)缓慢加入冰冷正丁醇高速匀浆重复多次。

在4℃,10000 rpm条件下离心。

4)用滤布过滤去除杂质,倒入分液漏斗中,静止分层,取下层水相,用hac溶液调ph到4.9。

5)得到上清后放入离心管中,用naoh溶液调ph至6.5,称取硫酸铵加到离心管中溶解;再加冰冷丙酮,混匀,4℃静置30 min以上。

6)上清液中加入冰冷丙酮,4℃放置30 min以上。

4℃,10000 rpm,离心。

7)取沉淀溶于平衡缓冲液至全部溶解至冰箱保存待用。

1.3 小牛肠碱性磷酸酶酶活检测方法2)紫外分光光度计检测条件为405 nm波长,测定时间60 s,取值2 s,记录范围0.0-1.5。

上下倒2次,放回分光光度计中,测定酶动力学曲线1.4 聚丙烯凝胶制备分离胶制备(浓度10%,制备量10 ml)试剂用量 h2o30% 丙烯酰胺1.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 8.810% 过硫酸铵temed4.1 ml 3.4 ml 2.4 ml 100 μl 10 μl浓缩胶制备(浓度5%,制备量6 ml)试剂 h2o30% 丙烯酰胺0.5 mol/l tris-hcl缓冲液ph 6.810% 过硫酸铵temed用量3.4 ml 1.0 ml 1.5 ml 60 μl 8 μl1.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质含量3)各取100 μl加入到5 ml考马斯亮蓝试管中,混匀,反应5 min以上。

生物化学实验

生物化学实验
(1)温度对α-淀粉酶活性的影响 取3支试管,编号,各加入0.5%可溶性淀粉溶液3mL,分别置于冰水浴,37℃水浴及沸水浴中,保温5min,各缓缓加入1mLα-淀粉酶稀释液(试管勿从水浴中取出)继续保温5min,取出37℃水浴及沸水浴中试管置于冰水浴中冷却后,各加入碘—碘化钾溶液约1mL,比较各管颜色,并解释之。
(二)样品蛋白质浓度的测定 待测样品必须进行适当的稀释,使每毫升中含有0.5mg左右的蛋白质,才能进行测定。 该过程至少重复两次或平行测定两次。
7200分光光度计的使用
四、结果处理
固体样品中蛋白质含量=m’×Vm/Vn×1/m×10-3×100% 式中m′——由标准曲线查到的样品的蛋白质含量(mg) Vn ——用于显色的样品体积(ml) Vm —— 样品稀释后的体积(ml) m ——样品的质量(g)
三、操作方法
1. 样品制备 称取粉碎过40目筛的(玉米)样品2.50 g(精确至0.01 g)放入100 mL锥形瓶中; 沿器壁缓慢加入50 mL l%的盐酸溶液,并轻轻摇动使全部样品润湿; 将锥形瓶放入沸水浴中,预热3min,在沸水中准确加热15min; 立即取出,迅速冷却至室温。
2.样品测定 先加1 mL30%的硫酸锌溶液,充分混匀; 再加入1 mL亚铁氰化钾溶液,摇匀并全部转 移至 100 mL容量瓶中,用少量蒸馏水将锥形瓶冲洗几次; 若泡沫过多,加几滴无水乙醇消泡; 用蒸馏水定容至刻度; 混匀后过滤,弃去初始滤液15 mL,收集其余滤液 充分混匀; 进行旋光测定。
四、结果处理 皂化值=
式中 VA—空白瓶盐酸用量(mL); VB—样品瓶盐酸用量(mL); m—油脂的质量(g)。
五、思考题
1. 上式中(VA - VB )的含义是什么? 2. 试列出由皂化值计算油脂相对分子质量的公式。

南医生化实验报告2

南医生化实验报告2

南医生化实验报告2生物化学实验报告一、实验目的1.自学并掌控碱裂解法抽取质粒dna的原理、各试剂的促进作用及具体内容操作步骤;2.自学并掌控pcr基因扩充的原理及具体内容操作步骤;3.自学并掌控紫外稀释法检测dna浓度与纯度的原理及方法;4.自学并掌控水平式琼脂糖凝胶电泳的操作方法。

二、实验原理1.质粒dna的抽取――碱裂解法在细菌细胞中,染色体dna以双螺旋结构存在,质粒dna以共价闭合环状形式存在。

细胞破碎后,染色体dna和质粒dna均被释放出来,但两者变性与复性所依赖的溶液ph值不同。

在ph高达12.6的碱性条件下,细菌的线性染色体dna氢键断裂。

其中,双螺旋结构解开而变性;而质粒中超螺旋结构共价闭合环状的两条互补链不会完全分离。

当以ph4.8的高盐缓冲液调节其ph值至中性时,变性的质粒dna复性并保存在溶液中,线状染色体dna不能复性而形成缠连的网状结构,通过离心与变性蛋白质与细胞碎片缠绕在一起形成沉淀;而质粒dna双链又恢复原状,重新形成天然的超螺旋分子,溶于上清液。

2.pcr基因扩增pcr(polymerasechainreaction)即为聚合酶链式反应,可以选择性扩充一段dna序列。

就是所指在dna聚合酶催化剂下,以dna为模板,特定引物为延展起点,通过变性、淬火、延展等步骤,在体外激活dna的过程。

这种延展―变性―淬火―延展的循环可以重复多次,圣戈当县须要的dna片段获得特异性的扩充。

具体步骤为:(1)变性:加热使模板dna在高温下(94℃)变性,双链间的氢键断裂而形成两条单链;(2)淬火:并使溶液温度降到50~60℃,模板dna与引物按碱基配对原则优势互补融合;(3)延展:溶液反应温度跌至72℃,耐磨dna聚合酶以单链dna为模板,在引物的鼓励下,利用反应混合物中的4种脱氧核苷三磷酸,按5’→3’方向造出优势互补dna。

上述3步为一个循环,即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。

生物化学实验2.双缩脲测定血清蛋白质含量

生物化学实验2.双缩脲测定血清蛋白质含量
实验四 双缩脲法测定 血清蛋白
蛋白质是生命的物质承担者,要揭示生命 的本质,探讨各种生命活动的物质基础,就必 须对蛋白质的结构、性质和功能进行深入的研 究,这首先就需要将蛋白质分离出来,进行纯 化,再进一步进行测定。
蛋白质是是构成人体及动物细胞组织的重要成分,参 与机体内的各种生命活动
人体内蛋白质含量直接关系着人体的健康状况,测定 蛋白质含量在临床上尤为重要。
4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0
-

1 2 4 6 8 10
混匀后,37℃水浴中放置20分钟,然后在540nm波长 处,以空白管调零,在分光光度计上读取各管吸光度, 以吸光度为纵坐标,蛋白质浓度(g/L)为横坐标,绘 制标准曲线。
实验步骤
2、样品测定
取2只试管,分别标上测定管和空白管,加入试剂
注意事项
加完试剂需要将试管混匀 注意水浴的温度及时间 分光光度计的正确使用
标准溶液
实验原理
绘制出蛋白质标准溶液的标准曲线:以吸光 度为纵坐标,蛋白质浓度(mg/mL)为横坐 标,绘制标准曲线。
在相同的实验条件下,测定未知蛋白质含量 的血清样品溶液,在540nm处的吸光度,查 标准曲线求得样品的蛋白质浓度(g/L)。
试剂和仪器
(一)试剂 1、双缩脲试剂:取3g硫酸铜,500mL蒸馏水 溶解,加9g酒石酸钾钠、5g碘化钾,加入 100mL6mol/L氢氧化钠,用蒸馏水稀释到 1000mL,贮存于塑料瓶中,避光保存。 2、0.9%(W/V)NacL溶液 3、小牛血清 4、蛋白质标准溶液
血清蛋白质中某些蛋白质含量的变化可以作为临床上 某些疾病诊断的依据
方 法 灵敏度 时间 原 理 干扰物质 说 明
凯氏定氮法 (Kjedahl法)

生物化学实验3篇

生物化学实验3篇

生物化学实验第一篇:分离和纯化酶酶是一种具有催化作用的蛋白质,在生物化学研究中具有重要意义。

为了研究酶的性质和机制,需要对酶进行分离和纯化。

一、酶的分离方法1.分离基于酶的物理性质的方法,包括沉淀法、沉降法、过滤法和电泳法等。

2.基于酶的化学性质进行分离的方法,包括离子交换色谱法、凝胶过滤法、亲和层析法和扩散法等。

二、酶的纯化方法酶纯化的目的是通过不同的技术方法消除干扰因素,获得特异性高和纯度高的酶。

酶纯化一般通过以下步骤完成:1.初步分离:选择一种合适的分离方法(如沉淀法、凝胶过滤法或离子交换色谱法等),使酶从细胞或组织中分离出来。

2.活性测定:确定所分离出的物质是否为酶。

3.酶的纯化:经过不断的纯化步骤(如扩散法、凝胶层析法、电泳法、亲和层析法等),获得特异性高和纯度高的酶。

4.酶的结构与功能分析:对纯化后的酶进行结构与功能分析,探索其催化机理和调控机制。

三、酶的应用酶在生命科学和工业生产中应用广泛,主要应用包括:1.生命科学领域:用于疾病诊断、药物设计、基因工程、蛋白质工程和代谢组学等研究。

2.工业生产领域:用于食品加工、医药生产、纺织印染、制浆造纸、环境治理和能源生产等领域。

总之,酶的分离和纯化为酶的结构与功能分析和应用提供了基础。

随着生命科学和工业生产的不断发展,酶的应用前景日益广阔。

第二篇:酶催化反应酶是一种生物催化剂,能够加速生物化学反应,提高反应速率和效率。

酶催化反应的基本原理是:酶与底物结合,形成酶底物复合物,通过降低反应的活化能,促进反应速率,使底物转化成产物,最终释放出酶和产物。

具体而言,酶催化反应通常包括以下步骤:1.酶与底物的结合:酶与底物之间形成酶底物复合物,通常通过酶和底物之间的亲和性实现。

2.转化过渡态形成:酶催化的反应需要一定的能量(活化能)才能进行。

酶通过与底物结合,改变底物的构象,使底物转化成具有更高自由能的过渡态。

3.过渡态降解:在过渡态中,酶通过结构变化(催化中心的变化)降低了催化反应的活化能,促进了底物的转化,并释放出产物和酶。

生物化学实验2.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质

生物化学实验2.醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白质

5. 染色 电泳完毕后断电,用镊子取出薄膜条投入染
液氨基黑中1分钟,染色过程中不时轻轻晃动 染色皿,使染色充分。 6. 漂洗
用漂洗液漂洗,不停摆动薄膜条,至背景 颜色脱去。将薄膜夹在干净滤纸中,吸去多余 溶液。
注意: 控制染色和漂洗的时间,防止背景过深或 某些区带太浅。
五、结果与分析:
一般的染色后的薄膜上 可显现清楚的五条区带。 从正极端起,依次为白蛋 白、α1球蛋白、α2球蛋 白、β球蛋白和γ球蛋白
实验二 醋酸纤维素薄膜电泳分离蛋白质
蛋白质是生命的物质承担者,要揭示生命 的本质,探讨各种生命活动的物质基础,就必 须对蛋白质的结构、性质和功能进行深入的研 究,这首先就需要将蛋白质分离出来,进行纯 化,再进一步进行测定。
蛋白质是是构成人体及动物细胞组织的重要成分,参 与机体内的各种生命活动
人体内蛋白质含量直接关系着人体的健康状况,测定 蛋白质含量在临床上尤为重要。
注意: 分清电泳槽上的正负极 如有很多膜条同时电泳时,膜条间应相距 1~3mm ,使之不互相接触,以免相互干扰。
4. 电泳 将电泳槽和电泳仪连接,注意电泳槽上的
正负极(红正黑负)。调节电流1.5mA/1膜; 通电时间45-60分钟。
点样端
1.滤纸桥 2.电泳槽 3.醋酸纤维素薄膜 4.电泳槽膜支架 5.电极室中央隔板
区带观察:1.排列顺序 2.区带宽窄 3.颜色深浅
临床意义
肝硬化:白蛋白降低,γ-球蛋白极度升高; 肝癌患者:白蛋白与球蛋白间多出一条甲胎蛋白
(AFP)带; 急慢性肾炎、肾病综合症:白蛋白降低,a1、a2
和β球蛋白升高;
注意事项
分清光面和毛面 取样要适量、均匀(点样器下端均匀沾有一层血 清即可) 点样时动作要轻稳,用力要均匀,点样时用力不 能太大,以免损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带 分离效果。 只能点一次。 分清电泳槽上的正负极 如有很多膜条同时电泳时,膜条间应相距1~ 3mm ,使之不互相接触,以免相互干扰。

实验2 蛋白质的沉淀与透析

实验2 蛋白质的沉淀与透析
用,小分子物质可以自由通过与周围的缓冲溶
液进行物质交换,大分子物质(蛋白质)保留
在透析袋中而彼此分离。
Hale Waihona Puke 实验步骤】1. 蛋白质的检查
取卵清蛋白/NaCl 溶液2ml和10%NaOH溶
液1ml,摇匀,加
1%CuSO4溶液1~2滴,
边加边摇。
2. 蛋白质的可逆沉淀作用
1) 球蛋白沉淀
取卵清蛋白/NaCl溶液
4. 蛋白质透析效果检查
1)Cl-的检查:
取洗出液约2ml,
加10%HNO3溶液1~2滴 至酸性,加1%AgNO3 2~3滴,观察有无白色 沉淀。
2)NH4+的检查:
取洗出液2滴加入白瓷板穴中,
加纳氏试剂1滴,观察有无黄红色沉
淀。
一些物理因素(如剧烈震荡、搅拌等)或
化学因素(如重金属离子、有机酸等),会破
坏蛋白质的稳定的构象,引起蛋白质变性。即 使除去了使蛋白质沉淀的因素,蛋白质也不能 再溶于原来的溶剂中, 即为不可逆沉淀作用。
在实验室分离纯化蛋白质的过程中,常利
用透析的方法除去蛋白质溶液中的小分子物质
(无机盐、单糖等)。利用透析膜的半透膜作
2ml,倾斜试管,沿管壁 慢慢加入饱和硫酸铵溶液 2ml,轻轻混匀,静置 5min。
2)清蛋白沉淀
过滤,除去盐
析出的蛋白质。 向滤液中加入
硫酸铵粉末至饱和。
3. 蛋白质的透析
(1)装样:取一段透析袋,将一端夹住,由 开口端加入含有硫酸铵的清蛋白沉淀(不可 装太满,并适当排出空气),夹住袋口。
(2)透析:取10倍以上蛋白质体积的去离子 水,将装好样品的透析袋悬于大烧杯中部。 在烧杯底部放一个磁子,缓慢搅拌以促进溶 液交换。更换洗脱溶液数次(约30min一次), 至达到透析平衡为止。

实验二 血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

实验二  血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳

7.记录和分析实验结果 7.记录和分析实验结果
漂洗完毕后将薄膜取出, 放在滤纸上。将薄膜上的5条色带根据其颜 色深浅、形状、大小及相对位置进行描述、记录在预习本上,并判 断分析其结果。
8.整理好桌面上的仪器和试剂, 8.整理好桌面上的仪器和试剂,并注意清洁自己的操作 整理好桌面上的仪器和试剂 请老师验收,实验报告当场交给老师。 台,请老师验收,实验报告当场交给老师。七 Nhomakorabea注意事项
薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。 1、薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。 点样时,应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去, 2、点样时,应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去,吸水量以不干不 湿为宜。 湿为宜。 点样时,动作要轻、 用力不能太大, 3、点样时,动作要轻、稳,用力不能太大,以免损坏膜片或印出凹陷 影响电泳区带分离效果。 影响电泳区带分离效果。 点样应点在薄膜的毛面上,点样量要适量,不宜过多或过少。 4、点样应点在薄膜的毛面上,点样量要适量,不宜过多或过少。 电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负极端,且点样面向下。 5、电泳时应将薄膜的点样端置于电泳槽的负极端,且点样面向下。 应控制染色时间。时间长,薄膜底色不易脱去;时间太短, 6、应控制染色时间。时间长,薄膜底色不易脱去;时间太短,着色不 易区分,或造成条带染色不均匀,必要时可进行复染。 易区分,或造成条带染色不均匀,必要时可进行复染。
三、实验器材
1. DYY-6C型 双稳定时电泳仪和 型 DYY-Ⅲ型电泳槽,均为北京市六 Ⅲ型电泳槽, 一仪器厂生产 2. 醋酸纤维薄膜(2 cm×8cm) 醋酸纤维薄膜( × ) 3. 培养皿:一排桌子公用 套,包括 培养皿:一排桌子公用5套 平衡、染色各用一套,漂洗用3套 平衡、染色各用一套,漂洗用 套。 4. 点样器 5. 滤纸 6. 载玻片 7. 镊子 8. 玻棒

食品生物化学实验 课件 实验二 糖类性质实验 (一) ———糖类颜色反应(共10张PPT)

食品生物化学实验 课件 实验二 糖类性质实验 (一) ———糖类颜色反应(共10张PPT)
戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛,后者与间苯三酚结合成樱桃红
因α-为萘糠酚醛反及应糠2(醛.试M衍剂o生l物i对s此c反h应反均应呈)阳性,故此反应不是糖类的
将3支试管同时放入沸水浴中,注意观察 /L阿拉伯糖(溶1液),莫混氏匀(。Molisch)试剂50g/
Lα-萘酚的酒精溶液,称取α-萘酚
α-萘5酚g反,应溶(于M9o5l%i乙s醇c中h,反总应体)积100mL,贮于棕色瓶内,使用前配制。 衍生物,后者能与α-萘酚生成紫红色物质。
阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。
3.杜氏实验 戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛,后者与间苯三酚结合成樱桃红
色物质。
三、器材与试剂
(2)塞氏(Seliwanoff)试剂0.
(1)莫氏(1M.器o材lisch)试剂50g/
取3支试管分别加入10g/L的葡萄糖溶液、10g/L
戊糖在浓酸溶试液管中,脱试水管生架成糠,醛滴,管后,者水与浴间苯锅三。酚结合成樱桃红
,记录各管颜色的变化及变化时间。
3.杜氏实验取3支试管分别加入杜氏试剂1mL,再分别加入
1滴10g/L葡萄糖溶液、10g/L半乳糖溶液、10g
/L阿拉伯糖溶液,混匀。将试管同时放入沸水浴中,观察颜色的 变化,并记录颜色变化的时间。
思考题
α-萘酚反应(Molisch反应) 间苯二酚反应(Seliwanoff反应) 05g溶于30mL浓盐酸中,再用蒸馏水稀释至100mL。 杜氏实验取3支试管分别加入杜氏试剂1mL,再分别加入
将3支试管2同时ư放入沸α水-浴萘中,酚注反意应观的察原理是什么?
,记录各管颜色的变化及变化时间。 间苯二酚反应(Seliwanoff反应) 取3支试管分别加入10g/L的葡萄糖溶液、10g/L (2)塞氏(Seliwanoff)试剂0. 糖类性质实验(一)———糖类颜色反应 (1)莫氏(Molisch)试剂50g/ 硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层,在液面交界处有紫红色环 果糖溶液、10g/L蔗糖溶液各0.

生物化学实验内容(二)

生物化学实验内容(二)

生物化学实验内容(二)引言概述:生物化学实验是生物学和化学相结合的实验,旨在探究生物体内化学过程和反应机制。

本文将介绍生物化学实验的内容,包括酶活性测定、蛋白质分离与纯化、核酸提取和分析、生物膜模型的构建以及基因克隆实验。

通过这些实验,我们可以深入了解生物体内的分子机制,为生物医学研究和药物开发提供重要的实验基础。

正文内容:1. 酶活性测定- 酶的选择和提取方法- 酶活性检测的原理和方法- 酶动力学参数的计算和分析- 酶的变性和抑制实验方法- 酶的催化机制和反应动力学的实验研究2. 蛋白质分离与纯化- 蛋白质提取和组织裂解方法- 蛋白质分离的凝胶电泳原理和方法- 蛋白质纯化的柱层析方法和技术- 蛋白质结构和功能研究的实验策略- 蛋白质鉴定和定量的质谱分析方法3. 核酸提取和分析- 核酸提取的方法和材料选择- 聚合酶链式反应(PCR)的实验原理和步骤- DNA测序和序列分析的实验技术- RNA的转录和翻译实验方法- 基因表达和调控的实验研究4. 生物膜模型的构建- 磷脂类生物膜的制备方法- 生物膜相关蛋白的定位方法- 生物膜的功能和透过性研究实验- 生物膜与药物相互作用的实验策略- 膜蛋白结构和功能分析的实验技术5. 基因克隆实验- DNA片段的扩增和限制性酶切- 载体构建和转化的实验步骤- 基因突变和基因敲除的实验方法- 基因表达和蛋白质产量的测定- 基因编辑和CRISPR-Cas9的应用总结:生物化学实验的内容涵盖了酶活性测定、蛋白质分离与纯化、核酸提取和分析、生物膜模型的构建以及基因克隆实验。

通过这些实验,我们可以深入了解生物体内的分子机制,为生物医学研究和药物开发提供重要的实验基础。

通过实验结果的进一步分析和研究,我们可以揭示生物体内的化学反应过程,并推动科学技术的进步。

实验报告实验二氮、磷、钾、铁元素对植物生长的影响

实验报告实验二氮、磷、钾、铁元素对植物生长的影响

广州大学实验报告实验项目实验二氮、磷、钾、铁元素对植物生长的影响学院专业班级姓名学号指导教师实验日期2016年月日- 2016年月日实验二、氮、磷、钾、铁元素对植物生长的影响题目:氮、磷、钾、铁元素对绿豆幼苗生长的影响摘要本试验选用绿豆为材料,进行缺氮、缺磷、缺钾、缺铁的溶液培养,进行历时将近一个月的组织培养,并定期观察和记录了绿豆在缺乏某种矿质元素的培养液中生长时的表现形状,比较了营养缺乏植株与正常植株之间的外部形态、株高根长、过氧化物酶活性、硝酸盐还原酶活性的差异,对氮、磷、钾、铁四种元素对绿豆幼苗生长的重要性进行了分析,从而了解这些矿质元素对植物生理作用的影响情况。

关键词绿豆幼苗,缺素溶液培养,植物生长1.前言 (1)2.实验材料 (1)2.1 材料选择 (1)3.实验方法 (1)3.1材料处理方法 (1)3.2形态特征的拍摄和绿豆株高、根长的测定 (2)3.3硝酸还原酶活性的测定 (3)3. 4过氧化物酶活性(POD)的测定 (3)4.实验结果和分析 (4)4.1氮、磷、钾、铁元素对绿豆幼苗外部形态的影响 (5)4.2氮、磷、钾、铁元素对绿豆幼苗幼苗株高和根长的影响 (5)4.6氮、磷、钾、铁元素对绿豆幼苗叶片硝酸还原酶活性的影响 (9)4.7氮、磷、钾、铁元素对绿豆幼苗叶片过氧化物酶活性的影响 (9)5.讨论 (10)6.结论 (11)致谢 (12)参考文献…………………………………………………………………………绿豆(Lycopersicum esculentum Mill.),果实用作蔬菜或水果,是我国种植面积较大的豆科植物之一。

随着过加对外贸易的发展,绿豆也成为了对外贸易的重要产品之一,因此绿豆对发展农业具有十分重要的意义。

为了提高绿豆的产量和品质,掌握绿豆植株生长发育对外界环境条件营养物质的需要是非常重要的。

生命的显著特点是活细胞能从周围环境中吸收物质并利用这些物质建造自己的躯体或用作能源,植物有机体所需要的元素就是植物的营养元素。

生物化学实验 实验二 氨基酸纸层析

生物化学实验 实验二 氨基酸纸层析

喷雾器均匀喷上 茚三酮溶液,电吹 风热风吹干至看到 AA紫色斑点。用铅 笔将图谱上的斑点 圈出,测斑点及溶 剂前沿距原点的距 离,计算Rf值。
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五、实验结果与分析
1.计算各斑点的Rf值 2.指出混合氨基酸样品中各斑点分别应为何种氨基酸,为什么?
α=
溶质在溶剂Ⅰ(固相)中的浓度 溶质在溶剂Ⅱ(液相)中的浓度
4. 纸层析
以滤纸为支持物而进行的层析 固定相:滤纸纤维吸附的水 流动相:被水饱和的有机溶剂
纸层析是分配层析的一种,在滤纸上水被吸附在纤维素的 纤维之间形成固定相。当有机相沿纸流动经过层析点时,层析 点上溶质就在水相和有机相之间进行分配。由于溶质中各组分 的分配系数不同,移动速率也不同,因而可以彼此分开。
2.层析法的种类:
依据被分离物性质不同分为:吸附层 析、离子交换层析、凝胶层析、亲和层 析、分配层析、聚焦层析
依据操作方式不同又分为:纸层析、 柱层析、薄层层析
3.分配层析
利用混合物中各组分在两互不相溶的溶剂中溶 解性能不同,即分配分配系数不同,而将其分开。
分配系数
当把一种物质在两种不混溶的溶剂中振荡时, 它将在这两相中不均匀的分配。达到平衡时,这 种物质在两种溶剂中的浓度之比是一个常数。该 常数就是分配系数
慢;极性越弱, Rf值越大,移动越快。 溶剂系统pH:
溶剂系统pH会影响极性基团的解离
除此之外,滤纸及温度和层析时间,都会对Rf值产生影响。
三、实验试剂及器材
1.试剂 0.5%(W/V茚三酮溶液 标准氨基酸溶液: (1)0.4%Ala, (2)0.4%Leu, (3)0.4%Asp(4) 0.4%Lys 氨基酸混合液: Ala,Leu, Asp混合配制 溶剂系统:正丁醇:88%甲酸:水(15:3:2,V/V)

生物化学实验技术(2)常用分离技术

生物化学实验技术(2)常用分离技术

二.硫酸铵的使用
硫酸铵中常含有少量的重金属离子, 硫酸铵中常含有少量的重金属离子,对蛋白质巯基 有敏感作用,使用前必须用H 处理: 有敏感作用,使用前必须用H2S处理:将硫酸铵配成浓 溶液,通入H 饱和,放置过夜, 溶液,通入H2S饱和,放置过夜,用滤纸除去重金属离 浓缩结晶,100℃烘干后使用 烘干后使用。 子,浓缩结晶,100℃烘干后使用。 另外,高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性(PH=5.0左 另外,高浓度的硫酸铵溶液一般呈酸性(PH=5.0左 ),使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH。 使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH 右),使用前也需要用氨水或硫酸调节至所需PH。
第三节 其他沉淀法一.Fra bibliotek电点沉淀法 二.生成盐复合物沉淀法 三. 选择性变性沉淀 四.非离子多聚物沉淀法
一.等电点沉淀法
两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低, 两性电解质分子上的净电荷为零时溶解度最低,不同的 两性电解质具有不同的等电点,以此为基础可进行分离。 两性电解质具有不同的等电点,以此为基础可进行分离。 利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性, 利用等电点除杂蛋白时必须了解制备物对酸碱的稳定性, 不然盲目使用十分危险。 不少蛋白质与金属离子结合后, 不然盲目使用十分危险。 不少蛋白质与金属离子结合后,等 电点会发生偏移,故溶液中含有金属离子时,必须注意调整PH 电点会发生偏移,故溶液中含有金属离子时,必须注意调整PH 值。 等电点法常与盐析法、 等电点法常与盐析法、有机溶剂沉淀法或其他沉淀方法联 合使用,以提高其沉淀能力。 合使用,以提高其沉淀能力。
使用硫酸铵时: 使用硫酸铵时:
1)必须注意饱和度表中规定的温度,一般有0℃或室温两种, )必须注意饱和度表中规定的温度,一般有 ℃或室温两种, 加入固体盐后体积的变化已考虑在表中; 加入固体盐后体积的变化已考虑在表中; 2)分段盐析中,应考虑每次分段后蛋白质浓度的变化。一种 )分段盐析中,应考虑每次分段后蛋白质浓度的变化。 蛋白质如经二次透析,一般来说,第一次盐析分离范围( 蛋白质如经二次透析,一般来说,第一次盐析分离范围(饱 和度范围)比较宽,第二次分离范围较窄。 和度范围)比较宽,第二次分离范围较窄。 3)盐析后一般放置半小时至一小时,待沉淀完全后才过滤或 )盐析后一般放置半小时至一小时, 离心。过滤多用于高浓度硫酸铵溶液,因为此种情况下, 离心。过滤多用于高浓度硫酸铵溶液,因为此种情况下,硫 酸铵密度较大, 酸铵密度较大,若用离心法需要较高离心速度和长时间的离 心操作,耗时耗能。离心多用于低浓度硫酸铵溶液。 心操作,耗时耗能。离心多用于低浓度硫酸铵溶液。

实验二总糖和还原糖的测定

实验二总糖和还原糖的测定
生命科学学院
生物化学实验
糖的定量分析---还原糖的测定
刘敏
2017.9.30/10.11-12
Why, What, How
Traditional biochemistry principles
+
Big Data
Analysis
True & False
一、目的 二、原理 三、试剂与器材 四、步骤 五、结果计算 六、注意事项 七、思考题
半缩醛羟 基
H 葡萄糖分子(环式) 葡萄糖分子(链式)
硫代硫酸钠间接滴定法原理:在碱性溶液中, 二价铜离子被还原糖还原成一价的砖红色氧化 亚铜(Cu2O)沉淀——Fehling’s solution (1849) 氧化亚铜在酸性环境中与定量的过量碘起反应 (氧化)成二价铜(蓝色),再用标准硫代硫 酸钠滴定剩余的碘,即可算出还原糖的含量。
2
4
(注:用移液器量取溶液,禁用量筒!)
2. 各试管冷却后,摇动试管,使试管底部的红色沉淀分来自散后倾入相应的三角瓶中;
3. 分别在每个试管中加入2mL 2%碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4,以洗涤管中的残留物,并转入相应的三 角瓶中,最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次(均使用移 液管); 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入淀 粉指示剂5滴,继续滴定至蓝色消失为止(??)。
2-
S4O6
+ 2 I-
因此,用硫代硫酸钠滴定剩余的碘,在有已知浓度 的标准还原糖浓度时,可以间接地计算出未知样品的还 原糖的含量。
•碱性铜试剂:硫酸铜 + 草酸钾
稳 定 性
•Fehling试剂:硫酸铜 + 酒石酸钾钠
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《生物化学实验》教学方案湖南文理学院生命科学学院学院生化与分子生物学教研组实验一蛋白质的性质实验( 1 )—蛋白质和氨基酸的呈色反应授课题目:蛋白质的性质实验( 1 )——蛋白质和氨基酸的呈色反应( 3 学时)授课对象:生科、农学、动科专业授课教师:教学目标及基本要求:1 、了解蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。

2 、了解某些蛋白质和氨基酸的呈色反应原理。

3 、学习几种常见的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。

教学内容提要及时间分配:1 、实验原理讲解: 12 分钟双缩脲反应的原理茚三酮反应的原理黄色反应的原理坂口反应的原理考马斯亮蓝反应的原理2 、实验试剂与器材 2 分钟3 、实验步骤讲解: 10 分钟4 、总结。

2 分钟教学重点及难点:1 、双缩脲反应的原理。

2 、蛋白质、氨基酸与水合茚三酮的显色反应。

教学方法:采用启发式教学,结合理论,对实验步骤进行分析并给于适当示范。

教学手段(挂图、幻灯、多媒体…等):采用板书等手段进行教学。

使用的教材及参考资料:1 、生物化学实验指导,自编讲义。

2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年。

思考题:1 、如果蛋白质水解后双缩脲反应呈阴性时,可以对水解反应程度作出什么样的推论?2 、茚三酮反应的阳性结果为何颜色?能否用茚三酮反应可靠鉴定蛋白质的存在?3 、考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质含量的原理是什么?4 、如何正确使用分光光度计?5 、测定蛋白质含量还有哪些方法,测定原理有哪些不同?本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等)1 、结合理论内容讲述实验内容,效果较好。

2 、强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。

实验二蛋白质的性质实验( 2 )—蛋白质等电点的测定和沉淀反应授课题目:蛋白质的性质实验( 2 )——蛋白质等电点的测定和沉淀反应( 3 学时)授课对象:生科、农学、动科专业授课教师:教学目标及基本要求:1 、了解蛋白质的两性解离性质。

2 、学习测定蛋白质等电点的一种方法。

3 、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。

4 、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

5 、了解蛋白质变性与沉淀的关系。

教学内容提要及时间分配:1 、实验原理讲解: 10 分钟蛋白质的两性解离性质蛋白质等电点的概念测蛋白质溶解度最低时的溶液 p H 值为其等电点稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素蛋白质沉淀反应的类型2 、实验操作讲解: 10 分钟蛋白质的盐析重金属离子沉淀蛋白质某些有机酸沉淀蛋白质有机溶剂沉淀蛋白质乙醇引起的变性与沉淀3 、总结。

2 分钟教学重点及难点:1 、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素。

2 、蛋白质变性与沉淀的关系。

教学方法:采用启发式教学,结合理论,对实验步骤进行分析并给于适当示范。

教学手段(挂图、幻灯、多媒体…等):板书, PPT 。

使用的教材及参考资料:1 、生物化学实验指导,自编讲义2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年思考题:1 、稳定蛋白质亲水胶体颗粒的因素有哪些?2 、蛋白质变性与沉淀的关系。

3 、解释蛋白质两性反应中颜色及沉淀变化的原因。

4 、该方法测定蛋白质等电点的原理是什么?本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等)1 、结合理论内容讲述实验内容,效果较好。

2 、强调实验基本操作规范,培养学生对实验现象的观察和实验结果的思考。

实验三牛乳中蛋白质的提取与鉴定授课题目:牛乳中蛋白质的提取与鉴定( 3 学时)授课对象:生科、农学、动科专业授课教师:教学目标及基本要求1 、学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。

教学内容提要及时间分配1 、实验原理讲解: 8 分钟蛋白质在其等电点 p H 溶液中溶解度降底。

根据这个原理,将牛乳的 p H 调整至 4.8 ,即酪蛋白的等电点时,酪蛋白即沉淀出来。

用乙醇除去酪蛋白沉淀中不溶于水的脂肪,得到纯的酪蛋白所得酪蛋白的定性鉴定2 、实验条件及步骤讲解: 7 分钟酪蛋白的制备酪蛋白的性质鉴定乳清中可凝固性蛋白质的鉴定教学重点及难点:酪蛋白的制备。

教学方法:1 、结合理论实际,深入浅出。

2 、实验操作过程给于示教。

教学手段(挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等)板书, PPT 。

使用的教材及参考资料1 、生物化学实验指导,自编讲义2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年思考题:1 、牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。

本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在问题、改进措施等)1 、实验内容结合理论内容进行讲述,效果较好。

2 、强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。

实验四氨基酸的分离鉴定——纸层析法授课题目:氨基酸的分离鉴定——纸层析法( 3 学时)授课对象:生科、农学、动科专业授课教师:教学目标及基本要求通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法。

教学内容提要及时间分配1 、实验原理的说明 10 分钟纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法层析溶剂由有机溶剂和水组成物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用 R f 值(比移)来表示在一定的条件下某种物质的 R f 值是常数。

R f 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关。

2 、实验操作讲解: 5 分钟教学重点及难点1 、扩展剂的制备。

2 、氨基酸样品的点样。

教学方法理论与实际相结合,深入浅出,培养学生综合运用所学课程知识。

实验过程中向学生提出问题,让学生在实验中观察思考,提高学生的分析问题,解决问题的能力。

教学手段(挂图、幻灯、多媒体 . . 等)板书, PPT ,示教。

使用的教材及参考资料1 、生物化学实验指导,自编讲义2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年思考题:1 、何谓 Rf 值?影响 Rf 值的主要因素是什么?2 、层析缸中平衡溶剂的作用是什么?3 、滤纸为什么要在层析缸中预先悬空密封饱和 30min ?4 、展开时为什么要调节滤纸使溶剂前沿线平行于点样线?5 、实验结果为什么有时会产生拖尾、相邻氨基酸分不开等异常现象?本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等)在实验中向学生提问题,可增强学生的好奇心,对于理解实验原理很有帮助。

实验五酶的特性(设计型实验)授课题目:酶的特性(设计型实验)( 6 学时)授课对象:生科、农学、动科专业授课教师:教学目标及基本要求1 、加深对酶的性质的认识:本实验由温度对酶活力的影响; PH 对酶活力的影响;酶的激活剂及抑制;酶的专一性 4 组实验组成。

2 、学会设计并实施影响酶催化活性因素的实验方案。

教学内容提要及时间分配1 、实验原理讲解: 10 分钟酶的催化作用受温度的影响。

在最适温度下,酶的反应速度最高。

大多数动物酶的最适温度为 37 - 40 ℃,植物酶的最适温度为 50 - 60 ℃酶的活力受环境 pH 的影响极为显著。

不同酶的最适 pH 值不同酶的活性受活化剂或抑制剂的影响酶具有高度的专一性,淀粉和蔗糖无还原性2 、实验设计方案讲解: 5 分钟教学重点及难点1 、影响酶催化活性的因素。

2 、实验方案设计及原理方法选择。

教学方法:结合理论实际,深入浅出。

实验操作过程给于示教。

教学手段(挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等)多媒体,板书,画图,示教。

使用的教材及参考资料1 、生物化学实验指导,自编讲义2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年思考题:1 、实验方法设计及选择的原理和依据2 、进行设计性实验的经验与体会3 、什么是酶的最适温度及其应用意义?4 、什么是酶反应的最适 pH ?对酶活性有什么影响?5 、什么是酶的活化剂?6 、什么是酶的抑制剂?与变性剂有何区别?本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等)1 、学生实验结合理论内容进行自行设计,讲述实验设计方法,效果较好。

2 、学生自己设计实验方案,探讨影响酶催化活性的因素,培养学生分析和解决实际问题的能力,提高学生的主动性和创造性,得到能力的培养。

实验六酵母核糖核酸的分离及组分鉴定授课题目:酵母核糖核酸的分离及组分鉴定( 3 学时)授课对象:生科、农学专业授课教师:教学目标及基本要求:了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法。

教学内容提要及时间分配:1 、实验原理讲解: 10 分钟酵母核酸中 RNA 含量较多。

RNA 可溶于碱性溶液,在碱提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸沉淀,由此即得到 RNA 的粗制品。

核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。

加硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。

2 、实验操作讲解: 5 分钟3 、总结 2 分钟教学重点及难点:核酸组分鉴定的实验依据。

教学方法:理论结合实践,深入浅出。

实验操作过程给予示教。

教学手段:板书, PPT ,示教。

使用的教材及参考资料1 、生物化学实验指导,自编讲义2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年思考题:1 、如何得到高产量 RNA 的粗制品?2 、现有三瓶未知溶液,已知它们分别为蛋白质、糖和 RNA ,采用什么试剂和方法鉴定?(自行设计简便的实验)本单元教学总结:对学生的实验预习、实验纪律、实验操作、实验报告、实验整理等环节进行督导,使学生养成良好的实验习惯,提高实验技能。

实验七紫外分光光度法测定核酸的含量授课题目:紫外分光光度法测定核酸的含量( 3 学时)授课对象:生科、农学、动科专业授课教师:教学目标及基本要求1 、了解紫外分光光度计的基本原理和使用方法。

2 、学习用紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法。

教学内容提要及时间分配1 、实验原理讲解: 10 分钟核酸、核苷酸及其衍生物都具有共轭双键系统,能吸收紫外光。

RNA 和 DNA 的紫外吸收高峰在 A260nm 波长处。

一般在 A260 波长下,每 mL 含 1ugRNA 溶液的光吸收值为 0.02 0 。

故测定未知浓度 RNA 或 DNA 溶液 A260nm 波长的光吸收值即可计算出其中核酸的含量。

此法操作简便。

若样品内混杂有大量的核苷酸或蛋白质等能吸收紫外光的物质,则测定误差较大,故应设法预除去。

2 、实验操作讲解: 5 分钟紫外分光光度计的使用教学重点及难点1 、核酸的制备2 、紫外分光光度计的使用教学方法:理论结合实践,深入浅出。

实验操作过程给予示教。

教学手段(挂图、幻灯、多媒体⋯⋯等)板书, PPT ,示教。

使用的教材及参考资料1 、生物化学实验指导,自编讲义2 、基础生物化学实验,高等教育出版社,王秀奇主编,第二版, 2003 年思考题或作业:1 、紫外分光光度计的使用方法和操作要点?2 、若样品中含有蛋白质和核苷酸等杂质,如何排除干扰?本单元教学总结(教学的主要经验、效果、存在的问题、改进措施等)1 、强调实验基本操作规范,让学生养成良好的实验习惯,具有扎实的实验技能。

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