安徽医科大学研究生细胞培养技术2016年考试重点

1.汇合(Confluent)：指细胞增殖生长相互连接成片占据

所有底物面积现象。

2.密度抑制(Density inhibition)：由于细胞密度过大，培养液营养耗尽、代谢产物过多和生存空间消失所引起

细胞增殖的抑制现象。

3.连续细胞系或永生性细胞系或株(Continuous cellline)：具有在体外可反复传代无限增殖能力的细胞群。

4.接触抑制(Contact inhibition)：指细胞相互接触后

失去运动(移动)的现象。

5.ips细胞：是指利用病毒载体将四个转录因子（Oct4, Sox2, Klf4 和c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使

其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。

6.成体干细胞可塑性：成体干细胞是存在于发育成熟机

体组织中的具有自我更新和分化潜能的细胞。已证实,骨髓、神经、肌肉、脂肪等多种组织中的干细胞具有多向

分化的潜能。这些干细胞可以打破胚层界限,横向分化为

其他组织的成熟细胞,这种性质称为干细胞的可塑性,是

成体干细胞应用于临床的理论基础,具有广阔的临床应用

前景

7.平衡盐溶液：简称盐溶液，集缓冲液的缓冲能力、生

理盐水的等渗性以及培养液的营养供应特点于一体。兼

具缓冲和调节溶液的酸碱度、维持渗透压、同时供给细

胞生存所需的能量和无机离子成分的作用。

8.灭菌（sterilization）：杀灭物体上所有微生物的方法，包括病原微生物和非病原微生物、繁殖体和芽胞。

9.单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb)：指由一

个B淋巴细胞克隆所产生的，只识别一种抗原决定簇的

均质抗体。

10.转化细胞系：通常包括恶性肿瘤转化细胞系及一般转

化细胞系，其中恶性肿瘤转化细胞系具有无限增殖的能

力与致瘤性，而一般转化细胞是通过对正常细胞体外经

理化生物因素诱发，仅具有无线增殖的能力。

二.问答题：

1.试述“克隆”的基本概念并举例说明其在细胞培养工

作中的实际意义。

答：（1）克隆概念：是指通过一定方法获得由单个细胞

无性繁殖形成的细胞集落；

（2）单克隆抗体的意义：1）检验医学诊断试剂;2）蛋

白质的提纯；3）肿瘤的导向治疗和放射免疫显像技术。2.试述三维细胞培养技术的基本概念，原理，优缺点及

实际意义。

答：（1）概念：把细胞悬液接种在一定立体形态的支架上，使细胞生长在三位环境中的培养方法；

（2）原理：三维细胞培养将具有三维结构的不同材料载

体与各种细胞在体外共培养，使细胞在载体的三维立体

空间结构中迁移、生长，形成三维的细胞-载体复合体。（3）优缺点：1）三维环境中的细胞室呈椭球形，直径

在10～30um，二维环境中的细胞是呈扁平铺展，厚度在

3um；2）三维环境中细胞表面几乎完全和其他细胞或细

胞外基质接触，二维环境中细胞表面大概是50%与液体接触，大概另50%与扁平的培养面接触，仅有很少部分彼此之间接触；3）三维和二维环境中的细胞在分化、药物代谢、基因和蛋白表达、一般细胞功能、体内相似性、形态、增殖、对刺激响应和生存性等方面存在差异，所以

三维细胞培养更大程度模拟体内环境；

（4）实际意义：1）实验性治疗，如免疫疗法、药物耐

受等；2）代谢及代谢环境研究：三维培养细胞可有效的

模拟在体细胞的生长环境；

3.根据细胞形态不同可将贴附生长型细胞分为哪几种类

型并简述其主要生长特点。

答：（1）成纤维细胞型：生长特点一般并不紧靠连成片，而是排列成放射状，漩涡状或栅栏状；（2）上皮细胞型：生长特点易相连成片，相靠—紧密相连—成薄层—铺路

石状生长时呈膜状移动，很少脱离细胞群而单个活动；（3）游走型细胞：生长特点培养需要支持物，分散生长，不连接成片，在培养皿中生长位置不定，处于活跃的游

走或变形运动，因此外形不规则且不断变化，密度大连

接成片呈多角形不易与其他类型的细胞区别；（4）多形

型细胞生长特点特点无规律的形态，细胞分胞体和胞突，胞突细长形，似丝状伪足，胞体略呈多角形，如神经细胞。

4.简述干细胞研究的意义。

答：（1）移植治疗；（2）克隆动物及转基因动物的生产；（3）转基因干细胞基因治疗；（4）为发育生物学

研究提供理想的体外模型；（5）高效新型药物的发现、

筛选及动物和人类疾病的模型；（6）总之，干细胞研究

对细胞组织移植治疗，体外研究动物、人胚胎的发生发展，新的人类基因发现，药物的筛选和致畸实验及克隆

动物、转基因动物等领域将产生重要的影响。

5.简述干细胞研究的主要内容及其问题。

答：（一）主要内容：（1）干细胞的分离与鉴定；（2）干细胞的自我更新（3）干细胞的定向分化；4）干细胞

的临床应用；

（二）问题：伦理，技术成熟度，人体实验，稳定性，

免疫排斥等；

6.简述天然培养基与合成培养基各自的优缺点。

答：（一）天然培养基：（1）优点：①血清中含有基本

的营养物质；②血清中含有激素与生长调节因子；③血

清中含有促进细胞粘附和铺展的因子；④血清中含有结

合蛋白；⑤血清中含有抗机械损害的非特异性保护物质；

⑥血清中含有pH缓冲物质；⑦血清中含有蛋白酶抑制剂；（2）缺点：①血清中也存在不少有害于细胞生长和繁殖

的物质，例如补体、免疫球蛋白和一些生长抑制因子等；

②血清的成分不明确，影响对结果的分析；③对多数动

物细胞来讲，血清并不是细胞在体时直接接触的生理性

液体，只有在伤口愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态；

④血清也具有潜在的细胞毒作用；不同动物、不同批次

的血清成分和活性差别较大，使得培养结果不稳定；⑥

在培养液中使用血清会增加成本；⑦血清中有时所含的

生长因子水平不足而需要补充。

（二）合成培养基（1）标准化生产，组成成分及含量明

确便于精密地测定培养的细胞与培养液内物质变化的情况。

（2）便于控制和调整实验设计并使培养条件标准化。（3）合成培养液中没有不透明物质，使得培养的细胞形

态清晰透明，便于观察记录。

（4）缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。7.试述细胞体外培养常用那些消毒灭菌的方法及其适用

范围；

答：（1）紫外线是一种低能量的电磁辐射，可以杀灭多

种微生物。其中以革兰氏阴性菌最为敏感；其次是革兰

氏阳性菌，如金黄色葡萄球菌等；再次为芽胞；真菌孢

子的抵抗力最强。作用机制：破坏微生物核酸。应用：

培养室内空气、塑料培养皿/板、操作台等表面进行消毒。（2）压力蒸汽灭菌：是目前最常用的一种灭菌方法。其

通过高温高压及在蒸汽环境中存在的潜热作用和良好的

穿透力，使菌体蛋白质凝固变性而使微生物死亡。布类

衣物、玻璃器皿、金属器械、胶塞和某些培养用液

（ PBS、 Hanks）等都可应用这一方法.

（3）高温干热灭菌：体外培养中的干热灭菌主要是用电

热烤箱内160℃以上的高热，并保持90~120min，杀死细

菌和芽胞，达到灭菌的方法。主要用于吸管、玻璃培养瓶、金属器械以及不能和蒸汽接触的物品（如粉剂，油

剂等）。