纤维素分解菌的分离步骤
纤维素降解菌的分离与鉴定
培养基的配置和分装
纤维素琼脂培养基： • (NH4)2SO4 2 g , • MgSO4· 7g， • H2O 1g, • NaCl 1g, • CaCO3 2g, • 水 500mL ,
• 121 ℃ 灭菌20 min，倒平板后,盖上不平板大小一致的无菌滤纸
（注意：滤纸要用秲醋酸浸泡一夜 ，用碘液检查是否有淀粉 ，若已去除完全 ， 则用 2％苏打水冲洗至中性，干热灭菌 后备用 ）。
环境中纤维素降解菌的筛选和初步鉴定
生物技术班
实验目的 实验原理 实验器材 实验步骤 实验结果与分析
实验目的 • 从环境中筛选出能降解纤维素的菌株 • 初步鉴定出菌株所属的类型
试验原理
• 纤维素酶酶系组成及降解机理 纤维素酶酶系包括内切葡聚糖酶(Cx酶）、外切 葡聚糖酶(Cl酶)，[来自真菌简称CBH，来自细菌简 称Cex)]和B．葡聚糖苷酶l，也称纤维二糖酶，简 称BG)。滤纸酶(FPase)活力代表了三种酶协同作用 后的总酶活力。 纤维素是有许多葡萄糖分子通过β-1，4一糖苷 键连接起来的大分子物质，对其的水解需要上述 三种酶的共同作用。酶的种类完整性、各种酶之 间的比例兲系等都会影响到纤维素酶的整体活力 。
分离
（1）无菌条件下，取富集后的培养液将土壤悬液秲释成101~10-7系列浓度。
（2）分别用秱液器精确地吸取各秲释菌液0.2 ~0.3 mL，对号 先后涂布于编好号刚果红培养基平板,（涂布时涂布棒要从 浓度小的梯度开始，将加入平板培养基上的土壤秲释液在 整个平板表面涂匀，涂完一个平板用酒精灯灭菌）。置于 30 ℃ 培养箱中，倒置培ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ一周。
初筛
以下各步骤均在无菌条件下进行。 （1）称取土壤样品10 g，倒入含有90 mL水和玱璃珠的三角 瓶中振荡5 min，使土样充分打散。（注意：等水冷却了 再倒入土样。） （2）取 5 mL悬液加入盛有 50 mL富集培养基 (纤维素琼脂培 养基 )的三角瓶,在 28 ℃和 150 r/min下, 振荡培养 3~ 5 d后 秱取 5mL培养液至另一盛有新鲜富集培养基的三角瓶中继 续培养。
一株纤维素高效分解性细菌的分离和筛选的开题报告
一株纤维素高效分解性细菌的分离和筛选的开题报
告
选题意义：
纤维素是植物细胞壁中最主要的成分，也是地球上最丰富的可再生
能源之一，其含量达到全球植被的40%以上。
但纤维素的高结晶度和难
降解性，使其无法被直接利用。
纤维素高效分解性细菌可以通过生物方
法将固体废弃物、能源作物等转化为生物质燃料和有机酸，具有被广泛
利用的潜力。
因此，本实验旨在筛选出纤维素高效分解性细菌，为纤维
素的利用提供理论基础和技术支持。
实验方法：
1. 样品的原料：从自然环境中采集土壤、水体等样品，用0.9% NaCl溶液过滤。
2. 样品的分离：分别取10μL、100μL等不同的样品，平板涂布在含有纤维素的LB琼脂平板上，并在30°C下孵育48-72小时。
3. 筛选纤维素分解性细菌：通过碘酸钾和怀尔德染色法筛选出纤维
素分解性细菌。
4. 纤维素水解酶产酶活呼吸速率测定：取纤维素分解性细菌培养物，分别在含有纤维素、葡萄糖和对照培养基中培养，同时进行产酶活和呼
吸速率的测定。
预期结果：
通过本实验可以得出纤维素高效分解性细菌的特点和产酶酶活呼吸
速率等重要性质，为纤维素的利用提供理论基础和技术支持，对环境保
护和资源利用具有重要意义。
实验设计2：从土壤中分离纤维素分解菌
《从土壤中分离分解纤维素的微生物》实验设计实验目的：1.利用特定的选择培养基和鉴定培养基从土壤中分离分解纤维素的微生物；2.掌握刚果红染色的机理和操作。
实验原理：1.以纤维素喂唯一碳源的选择培养基能选择分离分解纤维素的微生物；2.刚果红可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色复合物，而不与水解后的纤维二塘和葡萄糖发生这种反应。
实验仪器与用具：除实验五中用到的外，还需要恒温振荡培养箱实验材料和试剂：取自湿地或原生林地的土样（大于20g）羧甲基纤维素钠，酵母粉，磷酸二氢钾，蛋白胨，琼脂粉，氯化钠，刚果红，硝酸钠，硫酸亚铁，硫酸镁，磷酸氢二钠，纤维素粉，蔗糖（也可以用廉价的秸秆磨成粉末代替纤维素粉）实验步骤：将称量好的蔗糖，硫酸亚铁，硫酸镁，磷酸氢二钠，硝酸钠，2g纤维素粉（秸秆粉）倒入500ml锥形瓶内，再加入200ml蒸馏水，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀，得选择培养基，备用。
讲称量好的羧甲基纤维素钠，蛋白胨，酵母粉，氯化钠，磷酸二氢钾，硫酸镁，4g琼脂粉加入另一个500ml锥形瓶内，再加入200ml蒸馏水，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀，得鉴定培养基，备用。
用5ml微量可调移液器向编号为1--5号的试管内分别加入9ml蒸馏水，塞上棉塞，备用。
讲配制好的选择培养基，鉴定培养基，5支装有蒸馏水的试管，包好的培养皿（最少9个），枪头放入灭菌锅内在121度下灭菌20min。
灭菌后，取出灭菌锅内物品，放入超净台内，用酒精棉球擦拭超净台面和实验者的双手，点燃酒精灯，在酒精灯火焰附近将称量好的20g土样加入到选择培养基中，给锥形瓶封口，充分振荡摇匀。
将选择培养基放入恒温振荡培养箱内培养48h（震动培养箱转速为200r/min，控制温度为30度）。
等鉴定培养基冷却到不烫手时，在超净台内酒精灯火焰附近往每个培养皿内倒入20ml左右鉴定培养基，在超净台面轻轻摇匀，熄灭酒精灯，等培养基凝固后，将培养基平板倒置于超净台上。
48h后从恒温振荡培养箱中取出选择培养基，置于超净台上点燃酒精灯，再用1ml微量可调移液器移取1ml选择培养基的菌液到1号试管内，得到稀释10-1的稀释液，并用此方法依次稀释10倍，在5号试管内得到10-5的菌液稀释液，再用1ml微量可调移液器移取3号试管中的菌液，滴加2滴到平板上，用涂布器在平板上均匀涂布（注意涂布器要灼烧一下），依照此方法同样将4号5号试管内的菌液涂布到培养皿中，不同菌液每个涂2--3个平板，将涂布好的平板倒置放入恒温培养箱内，30度培养1--2d,1-2d后取出恒温培养箱内的平板。
2.3土壤中纤维素分解菌的分离
课题3 分解纤维素的微生物 的分离
一、基础知识
（一） 纤维素与纤维素酶 1.纤维素在生物圈的分布
纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质. 植物的根茎叶等器官都含有大量的维生素.地球 上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨.
人类以淀粉为主要能量来源，但完全不能消 化纤维素，而反刍动物和大量的微生物则主要以 纤维素为能量来源。这是因为，在反刍动物的瘤 胃中生活着大量的可以分解纤维素的微生物。
3.将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸 应该埋进土壤多深？
答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相 对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存 的适宜环境。一般应将纸埋于深约10 cm左右 腐殖土壤中。
4.想一想，两种刚果红染色法各有哪些 优点与不足？你打算选用哪一种方法？
方法一是传统的方法，缺点是操作繁 琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生 混杂；其优点是这样显示出的颜色反应 基本上是纤维素分解菌的作用。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自 培养基中的 化合物A ，实验需要振荡培养， 由此推测“目的菌”的代谢类型 是 异养需氧 。
例1(20分)某化工厂的污水池 中，含有一种有害的、难于降 解的有机化合物A。研究人员 用化合物A、磷酸盐、镁盐以 及微量元素配制的培养基，成 功地筛选到能高效降解化合物 A的细菌(目的菌)。实验的主 要步骤如图所示。请分析回答 问题：（北京卷）
（二）分离的结果是否一致： 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌 和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是 细菌。但由于所取土样的环境不同，学生也 可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。
P30课题延伸：纤维素酶的测定方法
一般是采用对纤维素酶分解 滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖 进行定量的测定
分解纤维素的微生物的分离-教案
分解纤维素的微生物的分离-教案课 题专题3 分解纤维素的微生物的分离备课时间上课时间总课时数知识与技能简述纤维素酶的种类及作用，从土壤中分离出分解纤维素的微生物；掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术过程与方法分析分离分解纤维素的微生物的实验流程，弄懂实验操作的原理课程目标情感态度与价值观领悟科学探究的方法，发展科学思维和创新能力教学重点从土壤中分离分解纤维素的微生物教学难点从土壤中分离分解纤维素的微生物教学过程二次备课一、情境导入上节课我们探讨学习了土壤中尿素分解菌的分离与计数，这节课我们以纤维素分解菌的分离与纯化为例，巩固加深对这方面技术的理解和掌握。
二、授新课1．基础知识活动1：阅读“纤维素与纤维素酶”，回答下列问题：1．1纤维素是一种由葡萄糖首尾相连样制成的菌悬液直接涂布在选择培养基上；本课题通过选择培养使细菌增殖后，再涂布在鉴别培养基上。
其它操作基本基本共同。
活动4：阅读资料一“土壤取样”，回答下列问题：2．1纤维素分解菌大多分布在富含纤维素的环境中。
2．2为什么要在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌？生物适应一定环境，环境对生物具有选择作用，只有在纤维素含量丰富的环境中纤维素分解菌的含量才会高于其它普通环境，从而提高获得目的微生物的几率。
2．3将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应该埋进土壤多深？人工设置适宜环境，使纤维素分解菌相对聚集。
将纸埋于深约10cm的腐殖土壤中。
活动5：阅读资料二“选择培养基”，回答以下三个问题：2．4纤维素分解菌选择培养基属于液体培养基，原因是没有添加琼脂成分。
活动6：阅读“课题延伸”，回答：3．1为了确定分离得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶实验，纤维素酶的发酵方法有液体发酵和固体发酵。
3．2纤维素酶测定方法是对纤维素酶分解滤纸等纤维素所产生的葡萄糖含量进行定量测定。
三、当堂反馈例1．有关谷氨酸发酵的叙述中正确的是A．发酵中要不断通入空气B．培养条件不当将不能得到产品C．搅拌的唯一目的是使空气成为小泡D．冷却水可使酶活性下降解析：进行谷氨酸发酵的菌种是异养需氧型微生物，所以要在培养过程中不断通入空气，但是必须通入的是无菌空气，普通空气是不行的，容易造成杂菌污染。
纤维素分解微生物的分离与鉴定
环境微生物技术实验总结报告一、国内外研究进展：①纤维素资源据不完全统计，全球每年通过光合作用产生的植物物质高达1.8×1011 t，这些植物物质所含的能量相当于全球人类每年能量消耗量的20倍，食物中所含能量的200倍。
纤维素是构成植物细胞的基本成分，纤维素占全球植物总干重的30%一50%，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，它存在于所有植物当中。
在生物界中，结合于有机体中的碳达27×1010t，在自然界有机体中构成纤维素的碳约占40%，据此估算，在植物界中纤维素的总量约达26.0×1010t，而且自然界中的植物原料是年复一年地不断生长和更新的，可以说，纤维素在自然界中是一种最丰富的可再生的有机资源。
纤维素是一种不能被大多数动植物直接利用的多糖物质。
但对人类来说只要能将其降解成小分子物质，纤维素就会成为一种有广阔应用前景的资源。
而且这种潜在的资源数量是惊人的，其中的大多数作为绿色植物的成分在维持生态平衡中起作用而不宜利用，但是仍有数量可观的纤维素由人类生活和生产产生，它们主要存在于农作物秸秆和城市垃圾之类的废弃物中。
灾荒或战乱造成的粮食危机依然是正存在的和潜在的威胁;随着全球经济的飞速发展，地球上石油、煤炭的储量正以惊人的速度减少，能源危机成了世界大多数国家所面临的一个严峻问题;由于对资源的破坏性开采和利用，人类赖以生存的环境正在不断地恶化，对可再生资源利用的研究与开发的可持续发展战略己在世界各国逐步展开。
如何处理和利用废弃纤维素将成为一个十分紧要的问题。
②农业废弃物资源的利用现状植物纤维素资源的开发利用对解决粮食和能源短缺以及环境污染问题有极其深远的意义。
我国的纤维素资源极为丰富，每年的农作物秸秆产量达5.7x107吨，约相当于北方草原年打草量的50倍。
但是，农作物秸秆产生数量多且产生时间集中(每年到收获季节农村就会有大量的秸秆产生)，而我国的农作物秸秆主要用于燃料、畜禽饲料与自然堆肥，不仅利用效率低，而且随着农村生活水平的提高，农作物秸秆成为农村固体废弃物的主要来源。
纤维素酶产生菌的分离和筛选专业大实验
纤维素酶产生菌的分离和筛选方案目标：从自然界采用选择性分离的方法，获得纤维素酶的高产菌株。
意义：把含纤维的自然资源及纤维废料加以充分利用，转化成糖类作为食品工业和发酵工业的原料或制成优质饲料，具有深远的现实意义。
1.材料与方法1.1材料与仪器1.1.1原辅料土壤品来自南阳理工学院以下各处离地表3-8cm深处泥土装入塑料瓶中，带回实验室处理。
（1）新校区竹林腐叶下的土壤（2）校门口东边的松树林腐叶子下的土壤（3）青年公寓外小树林（4）2号教学楼后面花园的土壤1.1.2试剂羧甲基纤维素CMC、NaCl、MgS04·7H20、KH2P04、酵母浸粉、蛋白胨、蒸馏水、琼脂、Na2HP04、酵母膏、刚果红试剂。
1.1.3仪器小铁铲和无菌纸或袋（可省）、小烧杯、100ml量筒、滤纸、漏斗、棕色试剂瓶、1000ml三角烧瓶1个、500ml三角烧瓶1个、试管24个、高压蒸汽灭菌锅、培养皿24个、36支1mm无菌吸管、无菌玻璃涂棒12支、显微镜、无菌水。
1.2培养基及试剂的配制1.2.1培养基配制初筛培养基A：羧甲基纤维素CMC 20g、NaCl 5．0g、MgS04·7H20 0．2g、KH2P041．0g、酵母浸粉 5.0g、蛋白胨10g、蒸馏水1000mL、琼脂20g，pH自然，121℃湿热灭菌20min。
复筛培养基B：CMC 10g、Na2HP04 1.25g、KH2P040.75g、MgSO4·7H2O 0.1g、蛋白胨1.25g、酵母膏O.25g、蒸馏水500mL、琼脂10g，pH自然，121℃灭菌20min。
2.2.2试剂配制1％刚果红试剂：称取刚果红试剂1g于干净的小烧杯中，用量筒量取蒸馏水100ml使之溶解，过滤，贮于棕色试剂瓶中。
2.3方法2.3.1初筛的方法步骤(1)配初筛培养基A，灭菌，倒平板。
(2)用稀释涂平板的方法分离纤维素分解菌。
稀释涂布平板法步骤：A．倒平板将配好的琼脂培养基溶化，待冷至55—600C时，用右手持盛培养基的三角烧瓶，置火焰旁边，左手拿平皿并松动瓶盖，用手掌边缘和小指、无名指夹住拔出，瓶口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿盖在火焰附近打开一缝，迅速倒入培养基约15ml，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布，平置于桌面上，待冷凝后即成平板。
人教版高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳
专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
分解纤维素的微生物的分离
A、人能不能对纤维素消化吸收？为什么？ 答：不能，因为人体不能合成纤维素酶。人以 淀粉为主要的能量来源。 B、食物中的纤维素有什么作用？ 答：食物中的膳食纤维可刺激胃肠蠕动和分泌 消化液，有助于食物的消化和排泄。
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C、反刍动物能利用纤维素吗？为什么？ 答：能，在反刍动物的瘤胃中生活着大量可以 分解纤维素的微生物，能产生大量的纤维素酶
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（3）梯度稀释： 吸取上清液1 mL富集后的培养液，注入盛有9 mL的无菌水的无菌大试管中，充分混匀；然后 再用一只1 mL无菌吸管从此试管中吸取1 mL注 入另一盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀 释至106稀释度。 （4）涂布培养 将鉴别培养基平板分别标号，分别将稀释度为 106～104的菌悬液各取0.1mL，对号滴加到鉴别 培养基平板，并用涂布器均匀涂布。将培养基平 板于300C倒置培养,至菌落长出。每个稀释度下 需涂布3个平板
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方法二：配制质量浓度为10mg/mL的CR溶液， 灭菌后，按照每200mL培养基加入1mL的比例 加入CR溶液，混匀后倒平板。等培养基上长出菌 落后，产生纤维素酶的菌落周围将会出现明显的 透明圈
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2、挑菌 在产生明显的透明圈的菌落，挑取并接种到纤 维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C 培养，可获得纯培养。
④讨论:如果找不到合适的环境，可以将滤纸埋 在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你 认为滤纸应该埋在土壤中多深？
答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对 集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的 适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右 的土壤中。
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（2）选择培养 ①目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能 够从样品中分离所需要的微生物 ②操作：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有 30 mL培养基的摇瓶中。将摇瓶置于摇床上，在 30 ℃下振荡培养1～2 d，至培养基变混浊。吸 取一定的培养液（约5 mL），转移至另一瓶新 鲜的选择培养基中，以同样的方法培养到培养液 变浑浊。
纤维素分解菌的筛选流程
纤维素分解菌的筛选流程1.首先从自然环境中采集潮湿的土壤样本。
First, collect moist soil samples from the natural environment.2.将土壤样本分离并进行稀释处理。
Separate and dilute the soil samples.3.接种土壤样本到富含纤维素的培养基中。
Inoculate the soil samples into a cellulose-rich medium.4.培养一段时间以促进纤维素分解菌的生长和繁殖。
Culture for a period of time to promote the growth and proliferation of cellulose-degrading bacteria.5.筛选并分离出有纤维素降解能力的菌株。
Screen and isolate bacteria with cellulose degradation ability.6.通过观察和测定菌株的生长特性来初步鉴定。
Preliminary identification of bacterial strains by observing and measuring their growth characteristics.7.进行酶活性测定以确认菌株的纤维素降解能力。
Enzyme activity assays to confirm the cellulose degradation ability of bacterial strains.8.将具有潜在应用前景的菌株进行进一步鉴定和纤维素降解能力测定。
Further identification and cellulose degradation ability testing of bacterial strains with potential application prospects.9.将菌株进行16S rRNA基因测序以了解其系统发育关系。
纤维素分解菌的分离与筛选
纤维素分解菌的分离与筛选廖咏梅;王佳婧【摘要】以纤维索粉或滤纸条为唯一碳源,从海南土样中初筛出能够分解纤维素的菌株共6株,采用滤纸条液体培养基,纤维素固体培养基,刚果红鉴别培养基进行复筛,获取滤纸条断裂较明显,透明圈较大,红色水解圈较大的菌株2株,编号为Q-4,Q-6.通过对不同时间Q-4,Q-6 FPA酶活力的测定,确定48 h为其最佳发酵时间,而对不同接种量Q-4,Q-6 FPA酶活力的测定,确定两株菌的最佳接种量为5％.【期刊名称】《西华师范大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(034)003【总页数】5页(P241-245)【关键词】滤纸酶活力;纤维素降解菌;筛选【作者】廖咏梅;王佳婧【作者单位】西华师范大学生命科学学院,四川南充637009;西华师范大学生命科学学院,四川南充637009【正文语种】中文【中图分类】Q939.9纤维素(如蔗渣、稻草、麦杆等)是地球上最丰富的可更新的资源之一，占地球总生物量的40%，是目前分布最广而又未得到充分利用的天然碳水化合物．纤维素的降解主要有酸水解法[1]，高压蒸汽处理法，焚烧法，和生物法等．前3种方法能耗高，易造成二次污染．而生物法的核心是将纤维废弃物经微生物转化为简单糖类或蛋白质等产品，具有无污染，能耗低等优点，这样既可解决环境污染，又可作为饲料，缓解粮食危机．所以对纤维素酶的研究显得尤其重要．纤维素微生物的研究始于1912年， 20世纪50年代以前主要是研究防止微生物对天然纤维的破坏作用；60到70年代主要研究利用纤维素资源生产单细胞蛋白;70年代以后，研究的重点又逐步转移到开辟新能源和防止环境污染上来．近二、三十年来，研究领域又在纤维素酶菌株的选育、纤维素酶组分及降解机制、纤维素酶合成的调节和控制以及纤维素酶应用等方面取得较大进展．纤维素的基本构造是由微纤维组成，而微纤维又由原纤维所组成．原纤维含有15-40个以结晶性或非结晶性组成的纤维素分子．而纤维素分子是由许多吡喃型的D-葡萄糖残基以1，4-β-糖苷键，相联结而成的多糖链，在纤维素链之间存在氢键．纤维素不溶于水，其基本结构单位是纤维二糖．纤维素酶是降解纤维素生成葡萄糖的一组酶的总称，它往往不是单种酶，而是三种功能不同的酶组成，这三种酶是:(1)C1酶，即β-1，4葡聚糖外切酶；(2) Cx酶，即β-1，4-葡聚糖内切酶;(3)β-葡萄糖苷糖酶，也称纤维二糖酶．Wood提出三类酶在发挥作用时表现出协同作用，单独作用则效果极差．其作用如图1所示. 纤维素酶的来源很广泛，真菌、细菌、放线菌等在一定条件下均能产生纤维素酶．但纤维素酶的比活力一般都很低，因而产酶成本高．据估计，纤维素水解成葡萄糖所需的酶蛋白要比淀粉相应水解所需的酶蛋白多100倍．这是影响纤维素酶广泛应用的重要原因之一．因而，筛选纤维素酶比活力高的菌株具有重要的意义．1 材料与方法1.1 样品来源海南土样1.2 培养基1.2.1 滤纸条液体培养基KH2PO4 0.5g ，KNO3 1.0g ，MgSO4．7H2O 0.5g ， NaCl 0.5g，，蒸馏水1 000mL，pH 7.2 ，配好液体培养基后，分装入试管中，每个试管约5mL，然后在每个试管中分别加入处理后的滤纸条(长5cm，宽0.8cm)，即为滤纸条液体培养基．滤纸条处理：用1% 醋酸浸泡滤纸24h，用碘液检查确无淀粉后，再用2% 苏打水冲洗至中性，晾干或烘干备用．1.2.2 纤维素固体培养基：NaCl 0.1 g ，NaNO3 2.5 g，MgSO4．7H2O 0.3g，纤维素粉 3g，FeCl30.01g，蒸馏水 1 000mL，琼脂 18 g， pH 7.2 左右．纤维素粉的制备：取脱脂棉20g撕碎揉成团装入1 000 mL三角瓶中，用500 mL 25%浓硫酸浸泡1-2d，并加入小玻璃珠数粒，有利于棉花的打碎，浸泡到脱脂棉没有韧性为止，用蒸馏水洗至中性为止，在恒温烘箱里(50℃左右)烘干，用研磨棒研成粉末备用．1.2.3 刚果红鉴别培养基(NH4)2SO4 2g，MgSO4 0.5g ，KH2PO4 1g，NaCl 0.5g，纤维素粉 20g，刚果红 0.2g，蒸馏水 1 000 mL，琼脂 20g，pH7.0左右[2]．因为纤维素是由葡萄糖残基以β-1，4-糖苷键连接而成的现状大分子，纤维素水解酶能够水解此糖苷键使其变成纤维二糖和葡萄糖，水解后的糖类同刚果红染料可形成红色沉淀，颜色浓郁、厚重，所以此水解圈在菌落生长过程中便逐渐清晰可见，不易发生错误识别[3]．1.2.4 种子培养基蛋白胨10g ，酵母粉5g ，NaCl 5.0g ，葡萄糖 10g ，牛肉膏 5g ，pH 7.2 ，蒸馏水 1 000 mL ．1.2.5 液体发酵培养基(NH4)2SO4 2g，KH2PO4 4g，酵母膏0.5g，CaCl2.2H2O 0.3g，MgSO4·7H2O 0.3g，纤维素粉10g，蛋白胨3g.，蒸馏水 1 000mL ，pH7.2．1.3 菌株纯化与菌落形态观察取适量的土样放入250 mL的三角瓶中，加入适量的无菌水和玻璃珠，振荡使土样均匀分散，然后采用梯度稀释的方法对样品进行稀释，再采用涂布或划线的方法进行样品的初筛，培养约48h后，挑取培养皿中不同菌落形态的菌株于刚果红鉴别培养基中，不断重复此过程直到分离出纯化的菌株为止，观察菌株的生长情况．分离纯化得到的菌株分别挑单菌落于滤纸条液体培养基、纤维素固体培养基、刚果红鉴别培养基进行复筛，选出滤纸条断裂较快，透明圈大，红色沉淀圈大的为实验对象．1.4 DNS法测定纤维素酶的活力1.4.1 纤维素酶测定原理纤维素经纤维素酶水解后生成还原糖，还原糖能将3，5-二硝基水杨酸中硝基还原成橙黄色的氨基化合物(3-氨基-5-硝基水杨酸)，在一定的范围内还原糖的量与反应液的颜色强度呈正比，利用比色法测定其还原物生成量来表示酶的活力．1.4.2 3，5-二硝基水杨酸显色剂(DNS显色剂)的制备称取2.5g 3，5-二硝基水杨酸溶于蒸馏水中，加入5g氢氧化钠、40g酒石酸钾钠和125mL水，加热溶解后再加入重蒸酚0.5g、无水亚硫酸钠0.125g，待全部溶解后冷却，定容至250mL，贮于棕色瓶中，放置一周后使用，用之前过滤．1.4.3 葡萄糖标准曲线的绘制用蒸馏水溶解100.0mg经干燥至恒重葡萄糖，定容到100 mL，取5支50 mL的比色管，按表1量取试剂:加入以上试剂后，在沸水中煮沸显色15 min．冷却至室温，加蒸馏水21mL，摇匀，以1mL蒸馏水代替糖作空白管．在550 nm处比色，以光密度为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标，绘出葡萄糖标准曲线[4]，如图2.表1 葡萄糖标准液的制备Tab．1 Preparation of glucose standard solution试管号葡萄糖/mL 蒸馏水/mL DNS/mL0 0 1 31 0.2 0.8 32 0.4 0.6 33 0.6 0.4 34 0.8 0.2 35 1 0 31.4.4 滤纸酶(Filter Paper Activity，FPA)活力的测定在25mL试管中加入1.0mL经适当稀释的酶液如果酶活较低可不用稀释，放入一条1cm×6cm新华一号滤纸，于38℃恒温箱中保温60min，取出后加入3mL DNS指示剂，放入沸水浴中煮15min使酶失活，冷却至室温后加蒸馏水定容至25mL，摇匀于550nm下比色，测OD值，空白样的制作是在25mL的试管中加入1.0mL经适当稀释的酶液如果酶活较低可不用稀释与前面的样要保持一致，放入一条1cm×6cm新华一号滤纸后迅速加入3mLDNS指示剂并放入沸水浴中煮15min是酶失活，冷却至室温后加蒸馏水定容至25mL，摇匀．1.4.5 酶活力的计算公式为(1)其中：X为酶单位，单位IU/mL；W为从葡萄糖标准曲线中查得的葡萄糖的浓度；N为酶液稀释总倍数；T为反应时间；M为样品体积 [5]．1.4.6 粗酶液的制备分别挑取降解效果较好的菌株于种子培养基中，培养1-2d后按5%的接种量分别接于80 mL的发酵培养基中，培养适当时间的发酵液在3 000r/ min，4℃离心15 min，上清液即为用于测定的粗酶液．2 结果与分析2.1 纤维素分解菌的筛选根据菌株在以纤维素为唯一碳源的刚果红培养基上的生长和红色沉淀圈情况进行初步筛选，筛选出6株降解效果较好的菌株，编号分别为Q-1，Q-2，Q-3，Q-4，Q-5，Q-6分别接入斜面培养基保存备用．2.2 复筛观察各菌株的透明圈大小和滤纸条的断裂程度表2 各培养基中菌株的生长情况Tab.2 Strains’growth situation on different cultures培养基Q-1Q-2Q-3Q-4Q-5Q-6滤纸培养基(分解度) + + + +++++++纤维素固体培养基(透明圈直径)1mm1.5mm0.6mm1.8mm0.5mm2.3mm刚果红鉴别培 (红色沉淀圈直径)0.8mm1.4mm1.0mm1.5mm0.1mm2.5mm(+)滤纸边缘膨胀; (++)滤纸整齐膨胀并下弯; (+++)滤纸不定形;断裂； (++++)全成糊状．由表可知，Q-6菌株对滤纸的分解能力在六株菌中的最强；其次为Q-4和Q-5．在纤维素固体培养基中Q-6菌株的透明圈最大，其次为Q-4．在刚果红鉴别培养基中，Q-6菌株的透明圈最大，其次为Q-4．所以我们选用Q-4、Q-6为我们研究的对象．2.3 菌株菌落形态观察Q 4，Q 6菌株菌落形态观察结果如表3所示．表3 Q 4，Q 6纤维素分解菌的菌落形态Tab.3 Colonial morphology of cellulose-decomposing microorganisms比较内容Q-4Q-6菌落颜色表面白色表面绿色(培养初期为白色致密菌丝)菌落大小较大较大菌落质地,气味干燥干燥,有强烈的土腥味2.4 不同时间酶活力测定的结果在250 mL的三角瓶中装入80mL发酵培养基，按5%接种量于37℃，150 r/min 摇床上培养，在不同培养时间取样，测定发酵液的酶活力，结果如下如图3 所示，菌Q-4的滤纸酶活开始时基本上一直处于上升趋势，在第2d和第4d酶的活力出现两个峰值，在第4d达到最高峰为21.43IU/mL，此后酶活开始下降．为此选用出现第一个峰值时的时间作为测定酶活的时间．Q-6的滤纸酶活在开始时也基本上处于上升趋势，在第2d时酶活达到最高峰为22.67IU/mL，此后酶活趋于稳定．2.5 不同的接种量对菌株产酶的影响在80 mL的发酵培养基中，分别加入培养48h(48h为Q-4菌株酶活的第一高峰时间)的Q-4种子培养液，按照接种量2%，5%，10%，15%，20%接种，摇床发酵在48h后测滤纸酶活．同样在80mL的发酵培养基中，分别加入培养36h的Q-6种子培养液，按照接种量2%，5%，10%，15%，20%接种，摇床发酵在36h后测滤纸酶活．结果见图4.根据实验数据可以看出Q-4在接种量为5%时的酶活稳步增高此后在平稳中开始略有降低．Q-6在接种量为0%-15%时的酶活基本稳步增高，在接种量为15%时最高，此后开始降低．综上，纤维素是地球上最丰富而可再生的生物聚合物，经初步统计，已发现的具有降解纤维素能力的微生物有近200种．本实验筛选获得的两株菌Q-4，Q-6其FPA酶活最高分别达到20.31U，22.67U，具有较高的酶活力．通过对不同时间Q-4，Q-6 FPA酶活力的测定可以看出，Q-4培养第2d和第4d酶活都达到一个峰值，从经济效益，发酵效率来看，确定48h为其最佳发酵时间，Q-6培养第2d 酶活达到最高，所以可以确定48h为Q-4，Q-6的最佳发酵时间．通过对不同接种量Q-4，Q-6 FPA酶活力的测定可以看出，接种量为5%时FPA酶活都较高，虽然Q-6的FPA酶活在接种量为15%是达到最高，但在此之前增长都不太明显，所以从经济效益等方面来看，两株菌的最佳接种量定为5%．参考文献：[1] FAN L.T.ET A L．Cellulose Hydrolysis.New York: Spring-verlag，1987:121-147[2] 陈敏．一种改进的纤维素分解菌鉴别培养基.[J] 杭州师范学院学报(自然科学版)，2001，18(5):[3] 叶姜瑜．一株纤维素分解菌鉴别培养基．[J] 微生物学通报，1997，24(4)[4] 中山大学生物系生物化学微生物学教研室编[M].生物化学技术导论.北京：人民教育出版社，1981：24-25[5] 齐云.一株能分解纤维素的高温耐碱放线菌[J].应用与环境生物学报.2003.9(3)。
土壤中纤维素分解菌的分离的基本流程
土壤中纤维素分解菌的分离基本流程
一、准备土壤样品
1.采集土壤样品
2.确保样品来源地点多样化
3.确保样品新鲜度
二、筛选培养基
1.选择富含纤维素的培养基
2.考虑添加抑制其他微生物生长的物质
三、分离纤维素分解菌
1.制备稀释液
2.涂布法分离
（1）涂布土壤样品于培养基表面
（2）孵育培养皿
3.筛选产菌圈
（1）选择形态特征不同的产菌圈
（2）转接单菌落
四、纤维素分解菌的鉴定
1.形态学鉴定
（1）细胞形态
（2）芽胞形态
2.生理生化鉴定
（1）生长条件
（2）生化反应
五、保存纤维素分解菌
1.制备保存培养基
2.保存方式
（1）冷冻保存
（2）低温保存
六、应用研究
1.纤维素分解菌的代谢特性研究
2.纤维素降解酶的产出研究
以上是土壤中纤维素分解菌的分离基本流程。
高中生物 专题2 课题3 分解纤维素的微生物的分离教学案(含解析)高二生物教学案
分解纤维素的微生物的分离一、纤维素与纤维素酶1．纤维素(1)化学组成：(2)含量：是地球上含量最丰富的多糖类物质。
(3)分布：棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素。
2．纤维素酶(1)组成：纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种组分，即C 1酶、C X 酶和葡萄糖苷酶。
(2)作用：纤维素C 1酶、C X 酶,纤维二糖葡萄糖苷酶,葡萄糖二、纤维素分解菌的筛选1．原理：纤维素分解菌产生的纤维素酶能分解刚果红和纤维素形成的红色复合物，使培养基上出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
2．方法：刚果红染色法⎩⎪⎨⎪⎧ 方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红三、实验流程四、纤维素分解菌的进一步鉴定1．为确定得到的透明圈中的菌落是纤维素分解菌，需要进行发酵产纤维素酶的实验，发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。
2．纤维素酶的测定方法，一般是采用对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖 1.纤维素酶是一种复合酶，包括C1酶、CX 酶和葡萄糖苷酶等组分。
2．纤维素酶的作用：纤维素――→C1酶、CX 酶 纤维二糖――→葡萄糖苷酶葡萄糖 3．刚果红可与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
4．以纤维素为主要碳源的选择培养基培养可以增加纤维素分解菌的浓度。
5．分离后，为确定得到的是纤维素分解菌，还需进行发酵产纤维素酶的实验。
进行定量测定。
1．寻找纤维素分解菌应到( )A．湿润的环境中 B．富含纤维素的环境中C．富含无机盐的环境中 D．池塘中解析：选B 在寻找目的菌株时，要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找，因此寻找纤维素分解菌应到富含纤维素的环境中寻找。
2．在加入刚果红的培养基中出现透明圈的菌落是( )A．分解尿素的细菌 B．硝化细菌C．分解纤维素的细菌 D．乳酸菌解析：选C 分解纤维素的细菌能将纤维素分解，刚果红—纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。
2-3 分解纤维素的微生物的分离
预习导学
课堂讲义
课堂讲义
专题2
微生物的培养与应用
1 ．本实验中采用的接种方法是哪种？并没有对细菌进行计 数，为什么还要进行充分的稀释？
答案
接种方法为稀释涂布平板法，充分稀释的目的是尽
量使纤维素分解菌与其他杂菌分离，形成单纯由纤维素分 解菌形成的菌落。
预习导学
课堂讲义
课堂讲义
专题2
微生物的培养与应用
体培养基中微生物与营养成分的接触更充分，可以提高微生
物的 代谢效率 。
预习导学
课堂讲义
课堂讲义
专题2
微生物的培养与应用
解析
该培养基的主要碳源是纤维素粉，氮源有NaNO3、酵
母膏。因没有凝固剂成分，因此，该培养基从物理状态上看 属于液体培养基。因该培养基仅以纤维素粉为唯一碳源，因 此，可用于选择培养纤维素分解菌。
(2)此配方为__________培养基(根据物理状态)。
(3)此培养基选择出的微生物主要是_________________。
预习导学 课堂讲义
课堂讲义
专题2
微生物的培养与应用
【问题导析】 (1)该培养基中 纤维素是主要的碳源，所以可以用于筛选 纤维 素分解菌 。 (2)由于该培养基中没有加入 琼脂 ，所以为液体培养基。液
KH2PO4
预习导学 课堂讲义
0.9 g
课堂讲义
MgSO4·7H2O
专题2 0.5 g
微生物的培养与应用
KCl
酵母膏
0.5 g
0.5 g
水解酪素
0.5 g
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。 (1) 此培养基配方中为微生物提供碳源主要是 ___________ 、 氮源是________________。
分解纤维素的微生物的分离
设置对照的主要目的是排除实验组中非测试 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试 因素对实验结果的影响
A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同， 一是由于土样不同，二是由于培养基污染或培养基混有 其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。 其它氮源。究竟是哪个原因，可以通过实验来证明。实 验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种， 验方案有两种。一种方案是可以接种其它菌种，看是否 有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。 有菌落的出现，验证培养基是否混有其它氮源。另一种 方案是将A 方案是将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培 作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 所以，在实验中一般都应设置对照组， 所以，在实验中一般都应设置对照组，使实验更有 说服力。 说服力。
（4）细菌的计数 选取菌落数在30～300的平板进行计数。 选取菌落数在30～300的平板进行计数。在 30 的平板进行计数 同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数， 同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数， 然后求出平均值， 然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度 计算出样品中细菌的数目。 计算出样品中细菌的数目。
四、课题延伸
本课题对分解纤维素的微生物进行了 初步的筛选。但是， 初步的筛选。但是，这只是分离纯化的第 一步。为确定得到的是纤维素分解菌， 一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还 需要进行发酵产纤维素酶的实验。 需要进行发酵产纤维素酶的实验。
五、结果分析与评价
1.培养物中是否有杂菌污染以及选择 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择 培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长， 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长， 说明培养基没有被杂菌污染。 说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的 菌落数目明显大于选择培养基的数目， 菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选 择培养基已筛选出一些菌落。 择培养基已筛选出一些菌落。
专题二 课题3 分解纤维素的微生物的分离
（二）纤维素分解菌的筛选 。 1、筛选方法： 筛选方法： 2、筛选纤维素分解菌的原理 刚果红是一种染料，它可以与像 刚果红是一种染料， ， 这样的多糖物质形成 ，但并 不和水解后的 和 发生这 种反应。 种反应。当我们在含有纤维素的培养基中加 入刚果红时， 入刚果红时，培养基中会出现以 为 中心的 。这样，我们就可以通过 这样， 圈来筛选 。
链接高考
2009年40.【生物 选修1 2009年40.【生物——选修1生物技术实践】（15分） 选修 生物技术实践】 15分 在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外， （1）在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外， 温度 还要考虑______ ______和渗透压等条件。 ______、______和渗透压等条件 还要考虑______、酸碱度 和渗透压等条件。由于该细菌 易培养 具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、 具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、 生活周期短 ______等优点 因此常作为遗传学研究的实验材料。 等优点， ______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。 在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染， （2）在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染， 灭菌 需对培养基和培养皿进行________ 消毒、灭菌）； ________（ ）；操 需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操 消毒 作者的双手需要进行清洗和______ ______； 作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌 可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性， 可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还 损伤DNA DNA的结构 损伤DNA的结构 __________。 能__________。
实验设计
1.实验流程 1.实验流程
分解纤维素的微生物的分离
第7课时 分解纤维素的微生物的分离学习目标 1.掌握纤维素酶的种类和作用及纤维素分解菌的筛选方法。
2.理解并掌握纤维素分解菌的筛选过程及刚果红染色法的原理。
3.掌握纤维素酶的测定方法。
一、纤维素分解菌的筛选1．纤维素与纤维素酶 (1)纤维素①基本组成单位：-----------。
②分布：主要分布在植物--------------等器官中。
特别提醒 纤维素的分布、主要性质和作用分布 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物，此外，木材、作物秸秆等也富含纤维素主要性质 常温下比较稳定，不溶于水及一般有机溶剂；纤维素不具有还原性，但在一定条件下能进行水解反应，产生葡萄糖，故其水解产物具有还原性 作用植物细胞细胞壁的主要成分；一种重要的膳食纤维，具有刺激胃肠蠕动、促进消化液分泌的功能；此外纤维素可用于造纸、纺织、制造炸药等(2)纤维素酶①组成：是一种复合酶，至少包括三种组分，即C 1酶、C X 酶、葡萄糖苷酶。
②作用：纤维素―――――――→C 1酶和C X 酶纤维二糖―――――――→葡萄糖苷酶葡萄糖特别提醒 除自然环境中存在的分解纤维素的微生物外，在草食性动物牛、马、羊等的消化道内，也共生有分解纤维素的微生物，其可产生纤维素酶分解纤维素，而人体没有分解纤维素的能力。
2．纤维素分解菌的筛选 (1)方法：--------------。
①方法一：先培养------------，再加入-------------进行颜色反应。
②方法二：在------------时就加入刚果红。
特别提醒 方法一需要用NaCl 溶液洗去培养基表面浮色后，再进行观察，方法二不需要。
(2)原理纤维素＋刚果红→红色复合物↓纤维素酶纤维二糖和葡萄糖，不能和刚果红形成红色复合物 ↓以--------------心的透明圈1．如何设计实验证明纤维素酶能分解纤维素？提示 设计对照实验。
取两支试管，分别加入等量的滤纸条和缓冲液，在一支试管中加入纤维素酶，另一支试管中加入等量蒸馏水，振荡反应一段时间后，可观察到加入纤维素酶的试管中滤纸条被水解，而加入蒸馏水的试管中滤纸条没有变化。
下列关于分离纤维素分解菌的实验的叙述,错误的是
下列关于分离纤维素分解菌的实验的叙述,错误的是
A. 经选择培养后将样品直接涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
B. 当土壤样品中纤维素分解菌数量较多时,选择培养这一步可以省略
C. 可先在固体培养基上培养微生物,再用刚果红溶液染色
D. 鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素分解后的产物不能和染料形成红色复合物
答案：
[答案]A
分析：
[解析]分离纤维素分解菌时,经选择培养后,样品应稀释后涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上,A项错误;选择培养的目的是增加菌体浓度,当土壤样品中纤维素分解菌数量较多时,选择培养这一步可以省略,B项正确;可先在固体培养基上培养微生物,再用刚果红溶液染色,也可以在倒平板时加入刚果红,C项正确;鉴别纤维素分解菌的原理是纤维素分解后的产物不能和染料形成红色复合物,D项正确。
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涂布到鉴别纤维素分解菌培养基上
微生物培养
土壤取样 挑选产生透明圈的菌落 纯化培养
〖思考 3〗实验流程中“选择培养”的培养基类型是什么？该培养的目的是什么？ 液体选择培养基。其目的是使纤维素分解菌增殖，含量增多。 〖思考 4〗本实验流程与尿素分解菌的分离实验流程有哪些异同？ 尿素分解菌的分离实验流程是将土样制成的菌悬液直接涂布在选择
纤维素分解菌的分离步骤
课题：分解纤维素的微生物的分离 教学目标： （一）知识与技能 简述纤维素酶的种类及作用，从土壤中分离出分解纤维素的微生物；掌握从土壤 中分离某种特定微生物的操作技术 （二）过程与方法 分析分离分解纤维素的微生物的实验流程，弄懂实验操作的原理 （三）情感、态度与价值观 领悟科学探究的方法，发展科学思维和创新能力 教学重点：从土壤中分离分解纤维素的微生物 教学难点：从土壤中分离分解纤维素的微生物 教学过程 （一）引入新课 上节课我们探讨学习了土壤中尿素分解菌的分离与计数，这节课我们以纤维素分 解菌的分离与纯化为例，巩固加深对这方面技术的理解和掌握。 （二）进行新课 1．基础知识 活动 1：阅读“纤维素与纤维素酶”，回答下列问题： 1．1 纤维素是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是含量最丰富的多 糖类物质。纤维素能被土壤中某些微生物分解利用，这是因为它们能够产生纤维 素酶。 延伸：草食性动物是怎样消化食物中纤维素的？肠胃中的共生物生物。
1．2 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。纤维素的分解需要在纤维素 酶的催化作用下完成，请完成下列过程：
纤维素
纤维二糖
葡萄糖 C1 酶、Cx 酶 葡萄糖苷酶
〖思考 1〗实验分析：投影的小实验是如何构成对照的？ 在一支试管中添加纤维素酶，另一支试管不添加纤维素酶；尽管醋酸－醋酸钠缓 冲液用量不同，但都能维持相同的 pH。 〖思考 2〗1 个酶活力单位是指在温度为 25 ℃，其它反应条件最适宜情况下， 在 1 min 内转化 1mmol 的底物所需要的酶量。 活动 2：阅读“纤维素分解菌的筛选”，回答下列问题： 1．3 筛选纤维素分解菌的方法是刚果红染色法。该方法可以通过颜色反应直接 筛选。 2．4 素酶分 解后，红色复合物无法形成，出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，我们可以通 过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 2．实验设计 活动 3：完成实验方案流程图，讨论回答问题： 选择培养