专题13 生物工程教师版

专题十三 生物工程

【例题精讲】

1. 图中a 表示基因工程，c 表示发酵工程，d 表示克隆技术，则e 和b 分别表示（ ） A. 胚胎移植和细胞培养 B. 显微注射技术和细胞培养技术 C. 细胞培养和花粉离体培养 D. 显微注射技术和花粉离体培养

技术 2. 卵细胞作为生殖细胞，在生物技术中可用于（ ）

①克隆动物时细胞核的受体； ①进行体外受精，培育试管动物； ①形成受精卵，作为培育转基因动物的受体细胞；

①植物组织培养形成试管苗； ①动物细胞融合形成单克隆抗体； ①形成受精卵，利用转基因和植物组织培养，培育抗虫棉植株． A ．①①①① B ．①①① C ．①①① D ．①①①

3. 下图表示

利用植物体细胞杂交技术获得杂种植物白菜-甘蓝的过程，以下说法错误

的是（ ）

A ．①过程表示利用酶解法去除细胞壁获得原生质体的过程

B ．①过程常用聚乙二醇诱导原生质体融合

C ．①过程中高尔基体活动旺盛

D ．最终获得的杂种植物体细胞内含19条染色体 4. 对右图表示的生物技术的分析中正确的是（ ）

A 若右图表示植物体细胞杂交过程,则从C 到D 需用的技术是植物组织培养

a c e d

b

B若右图表示动物体细胞核移植过程,用胚胎分割技术可获得多个性别不同的克隆动物

C若右图表示单克隆抗体的制备,则A是经过免疫的T淋巴细胞,B是骨髓瘤细胞

D若右图表示基因工程的操作流程图,则C表示重组质粒，D是供体细胞

5. 固定化酶是20世纪60年代迅速发展起来的一种技术。科研人员用海藻酸钠作为包埋剂来固定小麦酯酶，以研究固定化酶的相关性质和最佳固定条件。酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率，包括酶活性和酶的数量。图甲、乙、丙为部分研究结果。下列有关叙述中，错误的是（）

A．由甲图可知，固定化酯酶比游离酯酶对温度变化适应性更强

B．由乙图可知，浓度为3%的海藻酸钠包埋效果最好

C．由丙图可知，固定化酯酶一般可重复使用3次，之后若继续使用则酶活力明显下降D．固定化酶的酶活力较高，主要原因是增加了酶与底物的接触面积

（四2020松江二模）现代生物技术。（11分）

脱氧核苷酸链是有方向的，一端为5’端，另一端

为3’端，DNA分子两条脱氧核苷酸链反向平行。DNA

复制时，称为引物的小段核苷酸链先与模板链配对结合，

然后在引物的3’端进行子链延伸，在引物的5’端不能

进行子链延伸（如图18）。

36．（2分）在图18的数字编号①~①中，代表解旋过程

的是________，此过程中发生断裂的键是_________。

图18

聚合酶链反应（PCR）可自动化重复进行图18所示的①~①步骤，每完成一次①~①步骤称为完成一个循环，每个循环各步骤的反应条件设计为：步骤①在94①持续30秒，步骤①在55①持续30秒，步骤①在72①持续1分钟。某研究小组拟用PCR技术和引物1、2从图19所示DNA分子中扩增出编码蛋白质H的基因，并开展后续研究。

图19

37．（2分）下列关于PCR的叙述中，正确的是_______。

A．PCR是检测生物遗传多样性最可靠的方法

B．可从人体细胞提取DNA聚合酶用于PCR反应

C．通过PCR扩增目的基因属于化学方法人工合成

D．若引物能与模板DNA多个位置结合，则可提高PCR扩增效率

38．（2分）通过上述PCR反应获得目的基因片段后，拟将其插入质粒pZHY1中构建重组DNA分子pZHY2。已知在pZHY1上存在Eco RI、Bam HI、Kpn I、Xba I 4种限制酶的识别序列（如表3），则应选用的限制酶组合是________。

表3

A．Bam HI和Eco RI B．Bam HI和Kpn I

C．Eco RI和Kpn I D．Eco RI和Xba I

39．（2分）将重组DNA分子pZHY2导入大肠杆菌后，就可通过大规模培养大肠杆菌制备蛋白质H。若要获得纯化的蛋白质H，下列操作步骤中I代表_______，II代表_______。

破碎细胞→过滤→I→II→通过冷冻干燥结晶蛋白质

①改变pH沉淀蛋白质①加入硫酸铵沉淀蛋白质

①将蛋白质进行固定化 ④ 通过层析提纯蛋白质

40．（3分）若要制备抗蛋白质H 的单克隆抗体，相关说法中正确的有_______。（多选） A ．可以用上述步骤所得纯化的蛋白质H 作为抗原免疫动物 B ．从动物的脾脏收集B 淋巴细胞，并使之与杂交瘤细胞融合

C ．单克隆抗体是由单个杂交瘤细胞增殖产生的杂交瘤细胞群分泌的成分单一的抗体

D ．从PCR 扩增目的基因到制备单克隆抗体，共涉及基因工程、发酵工程、细胞工程

36.（2分）① 氢键 37.（2分）C 38.（2分）B 39.（2分）①① ①

【评分标准】第1空必须将①①均写出方可得分。 40. （3分）ACD

【评分标准】选ACD 得3分，选AC 、AD 或CD 得1分，其他答案得0分 （2019虹口区二模）回答有关现代生物技术的问题（12 分）

乙肝是由乙型肝炎病毒（HBV ）引起的一种慢性传染病，主要采用基因工程乙肝疫苗进行防治。科研人员采

用转基因技术将乙肝

（4 分）下列①～④表示获得重组 C HO 细胞的步骤，其中步骤④是 ；①-④步骤的正确排序是 。

①重组 D NA 分子导入CHO 细胞

②筛选成功导入HBsAg 基因的CHO 细胞 ③人工合成HBsAg 基因

④

？

（2 分）大量培养重组酵母和重组C HO 细胞生产乙肝疫苗过程中，需将培养液中H BsAg 与其他

杂质分离，可采用的方法是

（。A．破碎细胞B．加入硫酸铵C．改变p H D．冷冻干燥

（2 分）利用重组酵母和重组C HO 细胞生产乙肝疫苗，分别属于生物工程中的、领域。

（4 分）利用重组C HO 细胞和重组酵母生产基因工程乙肝疫苗，目前都在进行规模化生产，但两

种

方法各有不足和优势。请在下列选项中选择合适的编号填入表

3

对应的①结构简单、遗传操作较为容易②表达的HBsAg 更接近天然形式，疫苗稳定性好

③表达的HBsAg 与天然形式存在差异④培养条件要求高，生产成本较高

⑤可将H BsAg 分泌到胞外，易于分离提纯⑥易于培养、繁殖迅速，生产成本较低

表

3

（4 分）HBsAg 基因与运载体的连接2分③④①②2 分（顺序错0分）

（

2

分

）

B

C

（2 分）发酵工程动物细胞培养技术（细胞工程）

（

（每空格1分）

（2019静安区二模）生物工程（12分）

近年来，糖尿病的发病率急剧上升。目前认为，1型糖尿病是一种自身免疫病，患者胰

岛B 细胞数量减少。对于1型糖尿病，除了传统的注射胰岛素疗法外，科学家还在积极探索新的方法。图4显示科学家通过两种新型的途径，获得了两种不同类型的类胰岛B 细胞，其中P 基因和M 基因能表达相应产物调节胰岛B 细胞发育。

图4

1. （2分）途径一中的过程①可以认为是________。

A ．分化过程

B ．分裂过程

C ．脱分化过程

D ．再分化过程

2. （2分）途径二中过程①需要的工具酶有________。

3. （2分）据图分析，途径一和途径二分别属于生物工程中的________。

A ．细胞工程、基因工程

B ．基因工程、细胞工程

C ．细胞工程、酶工程

D ．酶工程、基因工程

4. （2分）1型糖尿病患者的胰岛B 细胞易受免疫攻击，而上述途径一中获得的类胰岛B

细胞（类型一）不会被免疫系统识别、攻击，下列分析中合理的是________。 A ．类胰岛B 细胞内部的遗传物质与胰岛B 细胞不同 B ．类胰岛B 细胞表面的特异蛋白与胰岛B 细胞不同 C ．胰岛B 细胞发生基因突变转化为类胰岛B 细胞 D ．皮肤细胞发生基因突变，使免疫系统不能识别

途径一： 途径二：

+某种诱导因子

+某种诱导因子

+某种诱导因子

皮肤细胞

内胚层样细胞 （类似多能干细胞）

类胰腺细胞

类胰岛B 细胞

（类型一）

胰岛素

①

P 基因

M 基因 运载体

胰岛素

重组DNA 分子

导入

类胰岛B 细胞

（类型二）

胰岛A 细胞 ②

5.（4分）途径二中，重组DNA分子导入胰岛A细胞后会形成类胰岛B细胞，请从分子

层面分析，与正常胰岛A细胞相比，类胰岛B细胞（类型二）所具备的特点：______ ___________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________。

33．C34．限制酶、DNA连接酶35．A36．B

37．类胰岛B细胞（类型二）中有导入的P基因和M基因（1分）；

类胰岛B细胞（类型二）中有P、M基因转录形成的相应mRNA（1分）；

类胰岛B细胞（类型二）中有P、M基因表达形成的相应蛋白质（1分）；

类胰岛B细胞（类型二）中有（胰岛素和）胰岛素基因转录形成的mRNA（1分

【课堂反馈】

1. 酶工程应用的千余种商品酶，大多数利用下列方法生产的是（）

A. 微生物发酵

B. 动物细胞培养

C. 植物细胞培养

D. 人工合成

2. 单克隆抗体与血清抗体相比，优越之处在于（）

A．单克隆抗体能够制成“生物导弹”

B．单克隆抗体可以在体外培养

C．单克隆抗体的特异性强，灵敏度高，产量也大大高于血清抗体

D．单克隆抗体的制备过程简单

3. 植物体细胞杂交能解决不同植物之间由于生殖隔离而不能进行有性杂交的问题。植物体细胞杂交过程不涉及（）

A．酶的使用

B．使用生长素和细胞分裂素

C．诱导两种不同的细胞融合

D．不同的植物细胞间的融合体现了生物膜的功能特点

4. 把成年三倍体鲫鱼的肾脏细胞核移植到二倍体鲫鱼的去核卵细胞内，培养并获得的单克隆鱼是（）

A. 二倍体

B. 有性生殖的产物

C. 高度不育

D. 性状与三倍体鲫鱼完全相同

5. 由基因型为Aa植株的花粉和基因型为Bb植株的花粉，除去细胞壁后，进行原生质体融合，可以得到多少种基因型不同的细胞（仅考虑两个细胞的融合）（）

A．6种B．8种C．10种D．12种

6.下列关于酶和固定化酶的研究与应用的叙述中错误的是（）

A. 从酶的固定方式看，包埋法比化学结合法对酶活性影响小

B. 作为消化酶使用时，蛋白酶制剂以口服给药

C. 尿糖试纸含有固定化的葡萄糖酶和过氧化氢酶，可以反复使用

D. 酶制剂中的酶最终来源于活细胞

7. 关于“克隆羊”、“试管羊”、“转基因羊”的说法合理的是（）

A．在培育过程中，都用带了动物细胞培养技术、核移植技术、胚胎移植技术

B．它们的遗传物质都只来自于一个亲本

C．它们都是通过无性生殖获得的

D．它们在形成过程中，一般都有卵细胞参与

8．将携带抗M基因、不带抗N基因的鼠细胞去除细胞核后，与携带抗N基因、不带抗M 基因的鼠细胞融合，获得的胞质杂种细胞具有M、N两种抗性。该实验证明了（）

A．该胞质杂种细胞具有全能性B．该胞质杂种细胞具有无限增殖能力

C．抗M基因位于细胞质中D．抗N基因位于细胞核中

（2019松江二模）现代生物技术（11 分）

中国科学院神经科学研究所利用CRISPR-Cas9 基因编辑技术（图14）构建了一批敲除调控生物节律关键基因BMAL1 的生物节律紊乱猕猴，作为抗失眠治疗研究的动物模型。

图14

【CRISPR-Cas9 基因编辑的工作原理】

CRISPR-Cas9 基因编辑系统由单链向导RNA（sgRNA）和Cas9 蛋白组成，其中sgRNA 的碱基序列可以人为任意设计，当其与靶DNA 上某序列发生局部互补结合时，

Cas9 蛋白就可以像“剪刀”一样切断此处的DNA 序列。

40.（2 分）sgRNA 和Cas9 蛋白组成的系统，在功能上最接近于。

A. DNA 水解酶

B. RNA 聚合酶

C. 限制性内切酶

D. 限制性外切酶

41.（3 分）图15 所示为D NA 分子局部结构示意图，方框中所示结构称为，

C

a

s 9

蛋白的作用位点是图

1 5

中的

（选A. DNA 聚合酶 B. RNA 聚合酶 C. DNA 连接酶 D. RNA 连接酶

42.（2 分）在构建BMAL1 基因敲除的生物节律紊乱猕猴时，应通过何种技术将CRISPR-Cas9

基因编辑系统导入猕猴的何种细胞。

A. 干细胞技术、受精卵

B. 干细胞技术、去核卵细胞

C. 显微注射技术、受精卵

D. 显微注射技术、去核卵细胞

【生物节律紊乱猕猴的批量生产】

中国科学院神经科学研究所采用CRISPR-Cas9 基因编辑技术所获得的第一代生物

节律紊乱猕猴中，个体之间BMAL1 基因被编辑的程度各不相同，导致每只猕猴所表现出的

生物节律紊乱程度存在差异。

43.（4 分）科学家认为，第一代生物节律紊乱猕猴无法直接作为抗生物节律失常治疗研

究的动物模型，请从实验设计基本原则的角度分析其原因

；为了克服这一局限，在第一代生物节律紊乱猕猴基础上构建第二代能够直接用作抗生物节

律失常治疗研究的动物模型时，应借助的现代生物技术是 。

4

.

（

2

分）

C

41.

（

1

（腺嘌呤）脱氧核苷酸 （1 分）①

（1 分）C

42.（2 分）C 43.（2 分）每一只猕猴的生物节律紊乱程度都不同，既无法基于单一变量原则研究比较不同治疗方案的优劣，也无法基于平行重复原则对同一治疗方

案的疗效多次实验取平均值； （2 分）取某一具有特定生物节律紊乱程度的猕猴体细胞核若干，通过细胞核移植

技术克隆出若干与其具有相同性状的第二代猕猴。 （2018崇明一模）回答下列有关现代生物技术以及生物工程的问题（12分） 7岁的哈桑因LAMB3基因突变患有交界型大疱性表皮松解症，他的皮肤变得像纸一样脆弱，

轻微磕碰就会受伤且伤口难以愈合，并伴有多种炎症威胁其生命。科学家通过基因治疗对其皮肤进行改造拯救了哈桑，治疗过程的示意图如图14。

34．（2分）图14治疗过程所涉及的基因工程的目的基因是 ，受体细胞是 。 35．（2分）图14中过程①需要将重组DNA 转化为逆转录病毒的遗传物质。根据已有知识，

下列对过程①、①遗传信息传递的表示最准确的是 。 A ．DNA→DNA B ．RNA→RNA C ．DNA→RNA→DNA D ．RNA→DNA→RNA

36．（2分）逆转录病毒在宿主细胞中能够合成“整合酶”，它能切开DNA 双链的特定区域，

便于目的基因与宿主DNA 整合。整合酶的作用类似于基因工程工具中的 。

图14

37．（3分）图14中过程①所涉及的技术属于生物工程中的 。过程①所需考虑的

环境条件有 、 。（列举2条即可）

38．（3分）下列关于逆转录病毒的特点中，其作为载体有利于提高基因治疗成功率的

有 。（多选）

A ．没有细胞结构

B ．感染率高

C ．对宿主细胞没有毒性

D ．一般只感染处在分裂状态的细胞

【答案】34．未突变的LAMB3基因（1分）上皮细胞（1分） 35．C （2分） 36．限制酶（2分）

37．动物组织和细胞培养技术（1分）无菌、适宜的温度、适宜的营养条件、适宜的pH 值、

供应氧气、适宜的渗透压等（答对一条的一分，满分2分） 38．BCD （3分，漏选得2分，错选不得分） （2018杨浦区一模）生物工程（11分）

蛋白酶广泛用于化工、食品、医药工业，因此采用生物工程技术规模化生产重组蛋白酶具有重要经济价值。已知某蛋白酶编码基因的两端分别为Kpn I 和Cla I 限制酶酶切位点，现将之插入在质粒pCL Y9合适位点处（图15），并导入大肠杆菌L44株中高效表达。L44株因缺乏gatB 基因不能以NH 4Cl 为原料合成重要的细胞大分子，而且对氯霉素（Cm ）敏感。

温度（℃）

80

30 Cla 0 相

对酶活性（%）

60 20 40 80 100 10

20

40 50 0

6

70

Sma I

Cm r ：氯霉素抗性基因

蛋白酶

其它酶

图15图16

38.（2分）若用Cla I和Kpn I酶切pCL Y9可获得0.8和4.8 kb两种片段；而用Kpn I和Sma I 酶切重组质粒可获得2.5kb和3.1 kb两种片段，那么目的基因的大小是kb。

39.（2分）为了获得含重组质粒的细胞，应采用两步法筛选。其中用于第一步筛选的固体培养基的配方是。

A. 蛋白胨、酵母粉、牛肉膏

B. 葡萄糖、NH4Cl、生长因子

C. 牛肉膏、酵母粉、NH4Cl、氯霉素

D. 葡萄糖、蛋白胨、生长因子、氯霉素

40.（2分）上述含重组质粒的大肠杆菌经大规模培养后，破碎菌体获得细胞裂解液。图16是裂解液中多种酶活性随温度变化的趋势，由此可以判断该重组蛋白酶在实际应用中的最佳反应温度范围应从①到①。

41.（3分）一般而言，固定化处理能不同程度地提高酶的热稳定性。若将上述大肠杆菌细胞裂解液不经分离纯化直接固定化，能否充分体现这种蛋白酶的使用优势？，为什么？。

42.（2分）本大题中所涉及的生物工程包括。（多选）

A. 基因工程

B. 细胞工程

C. 发酵工程

D. 酶工程

【答案】38.（2分）0.8

39.（2分）B

40.（2分）55 70

41.（3分）不能杂酶也会因固定化而变得热稳定，这样不便与高温蛋白酶的活性相隔离

42.（2分）A、C 、D

（2018虹口二模）回答有关现代生物技术应用的问题。

乳糖不耐受是由于乳糖酶（LCT)分泌少，不能完全消化分解母乳或牛乳中的乳糖所引起的非感染性腹泻。我国利用生物技术培育出转基因低乳糖奶牛新品种，给患乳糖不耐症患者带来福音。上图为转基因低乳糖奶牛培育流程。下图是使用限制酶BamH①切开DNA产生的结果。

（1）. 图中的牛胎儿成纤维细胞无法直接发育成个体，需要去核卵母细胞的细胞质诱导才能实现。

A. 细胞全能性

B. 细胞核全能性

C. 细胞质全能性

D. 细胞融合

（2）. 据图分析，BamH①的识别序列以及切割位点（用“↓”表示）是________。

（3）. 图中质粒S用BamH①和Hind①联合酶切后形成1.8kb和8.2kb(1kb=1000对碱基)两种片段，若用BamH①和EcoR①联合酶切重组质粒T，获得1.6kb和8.8kb两种片段，则转入的LCT基因长度为____kb。

（4）. 分析图，成功导入质粒T的牛胎儿成纤维细胞与转基因低乳糖奶牛的乳腺细胞中的

化合物，在表中用“√”表示存在，用“×”表示不存在。

（5）. 培育转基因奶牛涉及的生物技术有_____________________(写出两种）。【答案】（1）. B （2）.

（3）. 2.2 （4）.

（5）. 动物细胞培养技术、细胞核移植技术、转基因技术

【课后巩固】

1．以下不．能说明细胞全能性的实验是（）

A．将诱变处理的小麦种子培育成植株B．将紫罗兰的叶组织培育成植株C．将番茄与马铃薯细胞融合并培育成植株D．将转基因的棉花茎块培育成植株

2. 对愈伤组织的叙述中不正确的是（）

A.高度液泡化呈无定形形状的一群薄壁细胞

B.是失去分裂能力高度分化的一群细胞

C.既有分裂能力又有分化能力的一群细胞

D. 具有发育成一个完整植物体的潜能

3. 固定化单宁酶应用于茶饮料加工，可消除其中的苦涩味。下列有关叙述正确的是（）

A. 在单宁酶纯化时可釆用透析法去除杂蛋白

B. 固定化单宁酶可以回收，但不能再利用或连续使用

C. 温度、pH和重金属离子都可能影响固定化单宁酶活性

D. 酶的高效性决定固定化单宁酶不会降解茶饮料中的有益成分

4. 在制备单克隆抗体的过程中，对骨髓瘤细胞和免疫的B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）

①B淋巴细胞①小鼠骨髓瘤细胞①B淋巴细胞自身融合细胞①小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞①杂交瘤细胞

A．①①①① B．①①① C．①① D．①①

5. 胚胎干细胞可诱导分化成神经细胞，用于治疗因特定神经元死亡而导致的帕金森病。下列关于胚胎干细胞的叙述错误的是（）

A．具有增殖能力B．能诱导分化成各种细胞

C．不具有细胞周期D．比神经细胞容易培养

6. 相对细菌和植物细胞而言，动物细胞离体培养更需要关注培养基的渗透压，这是因为动物细胞（）

A．没有细胞壁，对培养基的渗透压更敏感

B．渗透压远高于细菌或植物细胞的渗透压

C．没有成熟大液泡，渗透压调节能力差

D．生长缓慢，各生长阶段对环境的渗透压要求不同

7. 关于哺乳动物细胞体外培养的难易程度，下列表述中正确的是（）

A．乳腺癌细胞易于乳腺细胞，胚胎细胞易于脂肪细胞

B．乳腺细胞易于乳腺癌细胞，胚胎细胞易于脂肪细胞

C．乳腺细胞易于乳腺癌细胞，脂肪细胞易于胚胎细胞

D．乳腺癌细胞易于乳腺细胞，脂肪细胞易于胚胎细胞

（2017杨浦二模）（五）回答下列有关生物工程的问题（13 分）

纤维素分子不能进入酵母细胞，为了使酵母菌能够利用环境中的纤维素为原料生产酒精，构建了含3种不同基因片段的重组质粒。请据图分析回答问题:

40.由图可知，目的基因有（）（多选）。

A.质粒

B.纤维素酶基因

C.信号肽基因

D.A 基因

41.获取目的基因的方法一般包括_________________和______________________。

42.本研究构建重组质粒时可选用四种限制酶，其识别序列如下图。为防止酶切片段的自身

环接，可选用的限制酶组合是（）（多选）。

A．①②B．①③C．②④D．③④

43.纤维素酶基因与质粒拼接起来需要____________酶。

44.在以纤维素为唯一碳源的培养基上分别培养菌株Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，不能存活的是菌株_______。

45. 利用纤维素生产酒精，菌株_____更具有优势，其优势在于_______________。

【答案】40、B C D（2 分）

41、从生物体细胞中分离通过化学方法人工合成

42、B、C（2 分）

43、DNA 连接（2 分）

44、II （2 分）

45、Ⅳ分泌的纤维素酶固定于细胞壁，减少因培养液更新而造成的酶的流失，提高酶的重复利用率。（2分）

（八2016闵行一模）回答下列有关生物工程的问题。（10分）

Rag2基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗，其技术流程如图20（图中数字序号表示的是相关过程）。

图20

64．在核移植前应去除 的细胞核。

65．过程①，重组胚胎培养到一定时期时，可从其 中分离出的ES 细胞的特点是 。

66．过程①中，需要构建含有Rag2基因的表 达载体，具体过程如图21。图中Amp r 表示青 霉素抗性基因，Tet r

表示四环素抗性基因，限 制酶Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ切割形成的末

端均不相同。可以根据Rag2基因的

设计引物，利用PCR 技术扩增Rag2基因片段。 为了使目的基因和质粒定向连接并且有利于受 体细胞的筛选，④过程采用的酶是 ，

⑤过程采用的酶是 。如果用限制酶Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ同时对质粒进行切割，假设同时只有任意两个位点被切断且每次机会相等，则形成的DNA 片段有 种，其中含有完整四环素抗性基因的DNA 片段占 。 67．在ES 细胞培养液中加入 可以体外诱导定向形成造血干细胞。

68．为检测Rag2基因的表达情况，可提取治疗后小鼠骨髓细胞的 ，用抗Rag2蛋白的抗体进行杂交实验。

64．卵母细胞

65．内细胞群；具有全能性，能够分裂和分化形成所有组织和器官

66．脱氧核苷酸序列（或核苷酸序列或遗传信息）；Pst I 酶和EcoR I 酶；DNA 连接酶；6；1/6

67．特定的促进分化的因子 68．蛋白质

图21

④

⑤

④

Pst I

（四2020崇明一模）回答下列有关现代生物技术以及微生物培养的问题（12分）

为有效地控制疟疾的传播，研究人员对一种特异性地感染蚊子的真菌——平沙绿僵菌进行基因改造，让它产生一种更快地杀死携带疟原虫的蚊子的毒素。基因改造过程如图8。

34．（3分）下列对于图8中基因工程操作有关的工具及目的对应正确的是 。（多

选）

序号 工具或操作 目的 A ① 限制酶 获取毒素基因 B ① 限制酶、连接酶 构建重组质粒 C ② 其它微生物介入

重组质粒导入受体细胞 D

③

荧光检测

筛选含有毒素基因的绿僵菌

35．（2分）蚊子是疟原虫的病媒，疟原虫由蚊子叮咬传播给人。该基因工程的目的是切断

疟疾传染链环节中的 （传染源/传播途径/易感人群）。

36．（3分）在实验室内大量繁殖绿僵菌的过程中，保证培养条件无菌的操作有 。

（多选）

A ．按营养所需配置培养基

B ．将配置好的培养基置于121℃、高压下15min

C ．在超净工作台上接种

D ．使用灼烧后的接种环挑取绿僵菌的孢子

图8

毒素基因

质粒

平沙绿僵菌细胞

农杆菌转化 ①

荧光标记基因 ②

③ 微生物培养 发出荧光的

平沙绿僵菌

该基因工程中使用的平沙绿僵菌，天然具有灭蚊效果。图9为对照组、野生绿僵菌和转基因绿僵菌环境下蚊子的存活情况。 37．（4分）研究者在导入毒素基因的同时，

也转入了控制该基因表达的“开关”，使毒素基因只有在蚊子体内才能被激活。请从防治效果和安全性两方面对该控蚊策略进行评价： 。

34． BCD （3分，漏选得2分，错选不得分） 35． 传播途径（2分）

36． BCD （3分，漏选得2分，错选不得分）

37． 防治效果评价：①转基因绿僵菌环境下，蚊子的存活率下降迅速，防治效果良好；②尽管转基因绿僵菌环境下蚊子的存活率下降迅速，但后期趋于平缓，接近于野生绿僵菌环境，防治效果不持久。安全性评价：①该毒素基因仅在蚊子体内表达，避免了对自然界中其它生物产生毒害，提高了安全性；②蚊子的数量大幅下降，可能对其它生物的生存造成影响。(共4分，“防治效果”评价占2分，“安全性”评价占2分。评价内容客观且合理即给分) （五2020杨浦一模）生物工程（11分）

疫

图9

蚊子的存活率（%）

对照组

1

75% 50% 25% 3

5

7 9

11

时间（天）

100% 13

15

野生绿僵菌 环境

转基因绿僵菌环境

病菌或病毒

质粒

灭活或减毒

疫苗Ⅰ

疫苗 Ⅱ

疫苗 Ⅲ

分离

蛋白质

① ②

③ 大肠杆菌

图17