细胞存活率分析(MTT Assay)

細胞存活率分析(MTT Assay)

培養24小時

培養24小時 培養4小時培養24小時 Time

用570nm 的ELISA 讀OD 加入細胞至96well 中 吸去100μl 液體，加入MTT

吸去100μl GM，加入100μl 新GM 及藥物 吸去全部液體，加入100μl DMSO

實驗步驟：

1. 將細胞消化後，以Growth Medium(10%FBS)稀釋到適當體積，再均勻接種到

96 well plates 中，每well 接種200μl。接種完畢後，在盤面最外圍的well(X well)處加入100μl 的無菌二次水(DDW)。

Note：A375細胞→75T flask 可接種4盤 96well plates

2. 將細胞移入37℃培養箱，培養16~24小時。

3. 將Medium 換成0.1%FBS 的Medium 100μl 靜置24hr

4. 加藥：一次處理同一稀釋濃度的3個well，先以tip 吸去100μl 在well

中的GM，再加入100μl 新的DMEM(不含FBS)，之後再加入藥物至well 中。

5. 將細胞移入37℃培養箱，培養24小時。

6. 移除well 中100μl 液體，並加入1/10 volume(10μl)的MTT(5mg/ml)到每

個well 中。

Note：MTT 在GM 中的最終濃度為0.5mg/ml。

7. 將細胞移入37℃培養箱，作用4小時。

8. 吸除well 中的GM 與藥物的混合液體，並加入100μl SDS-HCl 到每well

中。

9. 將細胞移入37℃培養箱，培養24小時。

10. 用570 nm filter 的ELISA reader 來測定OD 值。

計算：

OD TC0 ─OD TC100 =TC 50之OD, 再以內插法求得drug 的TC 50

2

盤面設計： X X X X X X X X X X

X X X

X X

X X

X X

X X

X X X X X X X X X X X X X

X X z X 的部分，加入200μl 無菌DDW z 灰色的部分為藥物處理組

藥物：

z MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide]為可溶於水的黃色染劑，會被細胞中NADPH 還原為不溶於水的深藍色結晶

(MTT-formazan)，此結晶必須先用DMSO 溶解後，才能用ELISA reader 讀取吸光值，若細胞活性越強，藍色越深，若細胞死亡，則呈現黃色。

z 將MTT 溶解於1×PBS 中形成5mg/ml 的黃色溶液，用filter(0.22μm)過濾，並保存在-20℃中。

z

經MTT 染色的細胞