Agilent 1100 LC_MSD 液相色谱质谱联用仪作业指导书

本细则根据高效液相色谱仪方法通则（JY∕T 024－1996）、有机质谱分析方法通则（JY∕T 003－1996）和美国Agilent 公司液相色谱质谱联用仪操作说明书制定。

1．适用范围

本方法适用于有机样品定性及定量分析。

样品要求：待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。若样品或配制的样品溶液发生沉淀，挥发，变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。

分子量范围：（100 ～2300）amu（单电荷）

分析前要求：在液相色谱仪上确定分离条件，使待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐。

2．引用标准

有机质谱分析方法通则（JJG003－1996）

3．术语、符号、代号

详见《有机质谱分析方法通则》（JJG003－1996）

4．方法、原理

详见《有机质谱分析方法通则》（JJG003－1996）

5．试剂和材料

所有的溶剂均选用色谱级试剂，所用水的电导率应大于18KΩ，其余试剂为分析纯。

6．仪器设备

仪器：Agilent 1100 LC/MSD SL（液相色谱-质联用仪），配有ESI及APCI离子源

分子量范围：（100 ～2300）amu（单电荷）

扫描分辨率：半峰宽小于1；

检测灵敏度：SIM S∕N ≥10∶1；1 pg Reserpine；

SCAN S∕N ≥10∶1；50 pg Reserpine。

7．分析步骤

7. 1 环境：10℃～30℃，相对湿度小于70％。

7. 2 仪器校正：按仪器操作说明书进行调整，使得到的标准谱图在允许误差之内关注质量轴精度，质量轴稳定度，扫描分辨率，灵敏度。

7. 3 测定过程

7. 3. 1 开机：

（1）开空气泵、液相色谱和质谱仪电源开关,开PC机后使其联机成功，之后打开真空泵阀门。

（2）真空度达到2╳10-5Pa后，通过调谐系统检查质谱运行情况。

7. 3. 2 设定液相色谱和质谱参数:

选择合适的色谱柱、流动相，设置梯度程序及柱温。

选择离子源模式，设置质谱参数。

数据采集的范围及条件设置。

7. 3. 3 本底检查：按设定的色谱条件运行一遍空程序以检查基线和本底，若发现柱子不干净则应冲洗柱子和质谱仪，直至基线平稳无峰为止。

7. 3. 4 运行样品

（1）PC机上运行设置好的程序。待工作站显示仪器状态为“Ready”时，设置样品信息，进样。按“Start”键，PC机自动采集数据。

（2）运行好样品后，冲洗色谱柱，流动相中如含有挥发性缓冲盐，必须用5%甲醇或5%乙腈过渡，冲洗排出流路中可能有的缓冲液。

7. 3. 5 关机：

放真空，再关液相色谱、质谱和PC机电源。

8. 分析数据

（1）调出谱图，根据定性及定量分析的需要，分别打开离子色谱图和质谱图，进行分析。

（2）若谱图未达到要求，需重新改变色谱、质谱条件。

9. 高效液相色谱的定性分析

9.1 利用纯物质对照定性

在一定的色谱条件下，一个未知物只有一个确定的保留时间。因此将已知纯物质在相同的色谱条件下的保留时间与未知物的保留时间进行比较，就可以定性鉴定未知物。若二者相同，则未知物可能是已知的纯物质；不同，则未知物就不是该纯物质。

纯物质对照法定性只适用于组分性质已有所了解，组成比较简单，且有纯物质的未知物。

9.2 加入已知物增加峰高法

当未知样品中组分较多，所得色谱峰过密，用上述方法不易辨认时，或仅作未知样品指定项目分析时均可用此法。首先作出未知样品的色谱图，然后在未知样品加入某已知物，又得到一个色谱图。峰高增加的组分即可能为这种已知物。

10.高效液相色谱的定量分析

定量分析的任务是求出混合样品中各组分的百分含量。色谱定量的依据是，当操作条件一致时，被测组分的质量（或浓度）与检测器给出的响应信号成正比。即：

w i = f i· A i

式中w i为被测组分i的质量； A i为被测组分i的峰面积； f i为被测组分i

的校正因子。可见，进行色谱定量分析时需要：

（1）准确测量检测器的响应信号—峰面积或峰高；

（2）准确求得比例常数――校正因子；

（3）正确选择合适的定量计算方法，将测得的峰面积或峰高换算为组分的百分含量。

色谱定量分析的依据是被测组分的量与其峰面积成正比。但是峰面积的大小不仅取决于组分的质量，而且还与它的性质有关。即当两个质量相同的不同组分在相同条件下使用同一检测器进行测定时，所得的峰面积却不相同。因此，混合物中某一组分的百分含量并不等于该组分的峰面积在各组分峰面积总和中所占的百分率。

10.1 归一化法

把所有出峰组分的含量之和按100%计的定量方法称为归一化法。

10.2内标法

当样品各组分不能全部从色谱柱流出，或有些组分在检测器上无信号，或只需对样品中某几个出现色谱峰的组分进行定量时可采用内标法。

所谓内标法，是将一定量的纯物质作为内标物加入到准确称量的试样中，根

据试样和内标物的质量以及被测组分和内标物的峰面积可求出被测组分的含量。

10.3外标法

外标法实际上就是常用的标准曲线法。首先用纯物质配制一系列不同浓度的标准试样，在一定的色谱条件下准确定量进样，测量峰面积（或峰高），绘制标准曲线。进样品测定时，要在与绘制标准曲线完全相同的色谱条件下准确进样，根据所得的峰面积（或峰高），从曲线查出被测组分的含量。

11．异常事故处理

11. 1 若出现异常现象，应停止采集，检测软件运行情况或等待维修人员。

11. 2 在运行过程中若突然断电，应立即关闭仪器上所有电源开关，等重新供电

后再重新开机，原检测结果无效。

11.3分析重复性误差大于规定值时，应检查仪器测定条件。待条件复原后，重

新配制样品，再次进行测定。

11. 4 真空泵抽出气体应导出室外。

12．期间检查

为了保证仪器随时处于良好状态，在两次仪器检定之间至少对仪器进行一次期间检查。将PC机设定到诊断状态，做CHECK TUNE，期间检查的主要参数包括：

（1）质量轴精度

（2）质量轴稳定度

（3）扫描分辨率

（4）灵敏度

起草人：陶萍