哺乳动物卵母细胞体外成熟培养中影响因素分析

层 卵丘 细 胞合 成 物 逐 级 传 送 给 卵母 细 胞 起 重 要 作 认 为 ，卯母 细 胞 的 成熟 率 与采 集 Ｃ Ｃ 时 的 卵泡直 Ｏｓ 用 。弓超 通过试 验对 牛卵母 细胞 不 同形式 的处 理 ， 讨 径关 系密切 ， 卵母 细胞 体外 培养 过程 中 ， 在 宜选 择 卵 论 细胞 问隙连 接对 于其 体外 成熟 的影 响作用 。在最 巢 发育 正 常 的卵泡采 集 ，不 宜选 择发 育过 大或 过 小 适 于 卵母 细胞 体 外 成 熟 的 浓度 （． Ｉ／Ｌ 条 件下 ， 的边 际 卵泡ｌ。在 挑选 卵 母 细胞 时 要尽 可能 挑 选 卵 １ ｍ ） ２Ｕ １ ２ １
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摘
要 ： 卵母 细胞 的 超微 结 构 、 从 卵母 细胞 获取 时相 关 因素 、 卵母 细胞 培 养液 体积 和 成 分 以及 体 外
培养 条件 四 个方 面 ， 别 阐述 了对 哺乳 动物 卵母 细胞 体 外生 长成 熟过程 中的影 响。 出在 卵母 细胞 分 提 体 外成 熟培养过 程 中各 种 因素 的调 控 机制 和相 关机 理仍 不 明确 ， 有待进 一 步研 究 。
朱 小 咖． ［８ 张 文 红 ， 伟杰 ． 鼠未 成熟 卯母 细 胞 体 外 培 养 ． 暨 ５］
哺 乳 动 物 卵母 细 胞 体 外 成 熟 培 养 中影 响 因素 分 析
王俊 全 ， 李守 杰 ， 洪 伟， 魏
｝南 胃
恒， 李娟 娟
７４０ ） １０ ０
（ 南 职业 技术 学 院 ， 西 渭 陕
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Ｃ Ｃ 分为 ４级 。 Ｏ ｓ 择级别 不 同 ， 培养成 熟率 泡 期 和黄体 期 卵巢 采集 到 的卵母 细胞 的体 外成 熟 率 Ｏｓ ＣＣ选 其 之 间存 在很 大差 异 。Ｐ ｖｏ 研究 中发 现 ， 熟率 由 和 卵 裂 率 分 别 为 ５ ． 、６６ ａｌ ｋ在 成 ９７ ５ ． ％ ％和 ３ ．％ 、６６ ， ９ ５ ３ ． 没 ％
外 培养 成 熟 、 和胚 胎 发育 的研 究 ． ． 受精 上海 实 验动 物 ［ ３ 李 子 义 ， 景 和 ， 兴 参 ， ． 同激 素 剂量 对 幼 鼠超 排 及 ６ Ｊ 谭 孙 等 不
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收 稿 日期 ：００ １－ ７ ２ １— １０
明带 中退 缩 ，此期 卵母细 胞 才最 适 合 于体 外培 养 成
卵 丘卵母 细胞 复合体 （ ｏ ｕｕ ｏｙ ｏ ｌｘｓ Ｃ ｍ ｌｓ ｃｔ ｃｍｐｅｅ ， ｏ ｅ
一
４ ｌ 。 作 者 简 介 ： 俊 全 （ ９ ３ ）男 ， 教 授 ， 究 方 向 ： 床 熟［ 王 １６ 一 ， 副 研 临
兽 医学 。
９ 一
黑 龙江动 物繁 殖
第１ ９卷
第 １期
２ １ 年 ０ １
Ｃ Ｃ 的质量 也直接 影 响到 卵母细胞 的成熟 。有 研究 巢 ２～８ ｌ卵泡采 卵为宜 。但是 如果选择 大卵泡 ， Ｏ ） ｌ ｍｉ 由
表 明 ， 牛体 内 ， 仅 与卵母 细胞 直 接联 系 的卵 丘 细 于卵泡 液 中含 有大 量浑 浊物 ， 在 不 不利 于 检卵 ， 而且 采 出 胞 与 卵母 细胞 有功 能联 系 ， 外层 卵 丘细胞 ， 至 颗粒 的卵泡 液浓度过 大有凝 固趋 向 甚 。桑 国俊 将卵泡 分为
和胚 胎体外 生产 的主要 资源 。 ２２ 卵泡直 径与 卵母 细胞 的成熟 相关 性 ．
２３ 卵母 细胞 的采集 时期 ．
哺 乳 动物不 同性周期 阶段 的卵巢 可 分为 卵泡 期
和 黄体 期 ，采集 卵母 细胞 选择 在不 同的时 期对 于 卵
目前 ， 国 内按 照 Ｃ Ｃ 分 级 标 准 ，通 常 都 将 母 细胞体 外成 熟也 有一定 的影 响 。 Ｏｓ 有研 究表 明 ， 卵 从
细胞的合成物也要输送到卵母细胞 中嘲 。与此同时 ， ３级 ： 大卵泡 （ ＞８ｍ 、 ｍ） 中卵泡 （ ｍ≤ ２ｍ ≤８ｒ 和 ｍ） ａ
卵母 细胞 中合 成 的因子 也要 通过 细 胞 间的 间 隙连接 小 卯泡 （ ＜２ｍ 。Ｃ Ｃ 成 熟 率分 别 为 大卵 泡 组 ｍ） Ｏ ｓ 输 送 到卵 丘细 胞［ ７ １ 以， 。所 在卵 丘一 卯母 细胞 复 合体 １ ． ％、 卵泡组 ６ ． ％、 卯泡 组 １．６ 中卵泡 ７０ ７ 中 １２ 小 ８ ９ ％， ０ （ Ｏ 体外 成 熟 培养 过 程 中 ， 丘 细胞 问 的 间 隙连 组 显著 高于大 卵泡组 和小 卵泡 组 （ Ｃ Ｃ） 卯 Ｐ＜００ ）大 卵 泡 ．１ ， 接 对 卵母 细胞 合成 物质 逐级 传 向外 层卵 丘细 胞 和外 组 和小 卵 泡组 差异 不显 著 （ Ｐ＞００ ） 】 亚丽 研究 ．５ 。宋
发 现 卵母一 卵 丘细 胞之 间 的间 隙连 接对 卵母 细 胞 的 丘 细胞 基本 完 整的 卵母 细胞 ，对 于卵 丘 细胞部 分 或 成熟 有 着直 接 的影 响 ，并且 是体 外成 熟 的一 个 有利 完 全脱落 的则要 舍弃 。 有实验 表 明 ， 有第 １ 体 的猪 极
条 件［ Ｓ ｌ 外， 。另 卵母 细胞 的皮 质 区存 在大 量 的皮 质颗 卵母 细胞 进行 ＩＳ 受精 和分 裂 率分别 达 到 ３ ．％和 ＣＩ ２ ９
分挖 掘优 良母 畜 的繁 殖潜 力 ，加 速 良种 家畜 的繁殖 纤维 中心最多 ，但 尚未发生致密化 ；到直径 ３ ～ ｌ ． ５Ｉｍ ５ Ｔ 和育 种进 程 ，而且 为胚 胎 工程 的其它 研究 以及拯 救 卵泡 ， 颗粒 细 胞突 起 开始 退化 ， 卵母 细胞 微 绒 毛 自透
１ ９７． ． ９ ２
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的卵母 细 胞在 模拟 体 内 的生 长环境 培 养 ，使 其在 体 义 Ｉ 】本 文从 卵母 细胞 的超微结 构 、 １。 ＿ ２ 卵母 细胞 的获取 外 达 到成熟 。卵母 细 胞成熟 发 育能 力对 其后受 精 率 、 等 几个 方 面详 细分 析 了其 对哺 乳 动物 卵 母 细胞 体外
关键 词 ： 卵母 细胞 ； 体外培 养 ； 影响 因素
中 图分 类 号 ：８ ４３ ￥ １． 文献标 识 码 ： Ｂ 文章 编号 ：０ ５ ２ ３ （ ０ ）ｌ ０ ０ — ６ １０ — ７ ９ ２ １ ０ 一 ０ ９ ０ １
卵母细胞体外成熟培养 （ Ｍ） Ｉ 是指离体条件下 濒 危 动 物 和 开 发 利 用 珍 稀 动 物 等 方 面 具 有 重 要 意 Ｖ
母 细胞 体外 生 长成熟 过 程 中 的各种 影 响 因素及 其 作 体外 受精 的基 础 。因此 ， 明卵泡 细胞 变化 与 卵母 细 探
用机 理进 行 了广 泛 的研 究 ，并尽 可 能模 拟 卵母 细胞 胞成 熟度 之 间 的关 系 ，确定 卵母 细胞 核 和胞 质 的成
成熟 的体 内卵泡 和输卵管环境进行体外成熟培养 ， 熟时 间 、 过程 和特 征 ， 以便挑 选 用于 体外 培 养 的卵 母 旨在建立一套完全在体外培养条件下快速生产和保 细胞就 尤 为重要 Ｉ 有 研 究表 明 ， 直径 Ｉ ～ ３ Ｊ 。 在 ． ３ ５ ｍｍ卵 存大量优质廉价卵母细胞的体系，这不仅有利于充 泡 卵母 细胞 中 ， 线粒体 全都变 为带 帽状 ， 内出现的 核仁
Ｐ ００ ）但 高 到低 的顺 序 为 Ａ级 、 Ｂ级 、 和 Ｄ级 ，实验 中各 有 显 著 差 异 （＞ ．５ ， 卵泡 期 培 养 效 果 好 于 黄 体 Ｃ级 组 之 间 的差 异 均 达 到极 显 著水 平 （ ００ ）其 中 Ａ 期 ｌ。 Ｐ＜ ．１， １ ４ ｌ
． 级 Ｃ Ｃ 成 熟 率 达 到 ６ ．１ ， Ｏｓ ３８ ％ Ｂ级 Ｃ Ｃ 成 熟 率 达 ２４ 获取 卵巢 时 的温度 和卵巢 的运输 时 间 Ｏｓ 到 ４ ．１ ， ７８ ％ 明显 高 于 Ｃ级 和 Ｄ级 。Ｃ级 Ｃ Ｃ 仅有 Ｏｓ
粒 ，皮质 颗粒 沿质 膜下 排列 是 卵母 细胞 质成 熟 的一 ３ ．％， 无第 １极 体 卵 ， ２６ 而 则仅 为 １ ．％和 １ ． ， ６３ ０９ 没 ％ 个 重要 标 志 。 体 外 培养 ２ ， 质颗 粒如 果 沿质 有 卵子 能 发育 到囊 胚期 。说 明 只有成 熟 的卵母 细 胞 ４ｈ后 皮 膜 下呈 单线 状 排列 ， 卵母 细胞 可得 到成 熟 ； 则 如果 培 才诱 导 精核正 常发 育 养 异 常 出现 成 团分布 ， 则会 造成 培养失 败［ ８ １ 。 ２ 卵母 细胞获 取 时相关 因素 影响 ２１ Ｃ Ｃ 级 别对 卵母 细胞 成熟 的影 响 ． Ｏｓ
胚 胎 卵裂 率 、 胚形 成 率 均具 有直 接 的影 响 ， 囊 是制 约 培 养 的影 响 ，为卵 母 细胞 的受 精 以及 胚 胎 的培 养 等 体 外 生产囊 胚 率 和胚胎 移 植受 胎率 的关 键 。为 了探 后续 工作 奠 定基 础 。
索 形 成 大量 早期 胚 胎 所 需 的成 熟 卵母 细胞 来 源 ， 国 １ 卵母细 胞 的超微 结构 对其 体外 成熟 培养 的影 响 内外 学 者对 哺乳 动物 卵 母 细胞体 外 培养 特 别是 对 卵 卵母 细 胞 的发 育在 超微 结 构 的研 究 是成 功进 行
．
从屠宰场获得的卵巢，其保存温度具有非常关
１ ５ ｊ 保 个 别 发育成熟 ， Ｄ级 Ｃ Ｃ 未见到 发育 成熟 的 卵母 细 键 的作 用［。马红 以生理 盐水 为保存 液 ， 存时 间在 Ｏｓ 研究 不 同卵巢 保存 温度 对 牛卵母 细胞 体 外 胞 因此 ， 。 Ａ级和 Ｂ级 Ｃ Ｃ 是 卵母 细胞 体 外 培养 ４ｈ左 右 ， Ｏｓ 成熟 的影 响 。结果 表 明 ， 一定 时 间 内 ， 在 温度 控 制在 ２ ～ ７ ， 以减 少 因温度 变 化而对 卵 母细胞 造 成 的 ０３℃ 可
小 试管小 ［ １ 尹海林 ，陈秀兰． 鼠卵母细胞体外培养成熟及 “ ６］ 鼠” 的研究． Ｊ ［． Ｊ 遗传 ，９ ９３ １８ ，． 郑凤娇． 小鼠超数排卵的试验方法． ｌ 【 生物学通报 ， Ｊ ［２ 杨慧 ， ６ Ｊ
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