第六章 胺类药物的分析幻灯片
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芳香胺类药物的分析药物分析与分析化学教研室 ppt课件
Analysis of Aromatic amines
第七章
芳香胺类 药物的分析
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学 教研室】 ppt课件
1
学习要求
❖ 了解：
❖ 苯丙胺类的鉴别试验、特殊杂质检查和含量测定。
❖ 芳香胺类药物的体内分析方法。
❖ 理解：
❖ 苯乙胺类药物鉴别反应。
❖ 非水溶液滴定法、比色法、紫外分光光度法和高效液相 色谱法测定本类药物的原理及应用。
19
第一节 芳胺类药物的分析
二、酰胺类
O
HO
N C CH3 HO
H 3C O C H N
S O
Feature)
N H C O C H 3
2.水解产物易酯化： 水解产物(醋酸)+乙醇/硫酸→醋酸乙酯
特殊香味
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学 教研室】 ppt课件
20
第一节 芳胺类药物的分析
二、酰胺类
HO
N C CH3 HO
paracetamol
（二）主要性质(Feature)
3. 对乙酰氨基酚→三氯化铁反应
专属鉴别
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学 教研室】 ppt课件
芳烃胺类
R1
苯乙胺类 H H
C C N R2 H
OH R3
adrenaline, dopamine hydrochloride
OH
H
O Ar
N R
苯丙胺类
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学
oxprenolo教l,研c室a】rtepoptl课ol件hydrochloride
4
Contents
1
芳胺类
第七章
芳香胺类 药物的分析
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学 教研室】 ppt课件
1
学习要求
❖ 了解：
❖ 苯丙胺类的鉴别试验、特殊杂质检查和含量测定。
❖ 芳香胺类药物的体内分析方法。
❖ 理解：
❖ 苯乙胺类药物鉴别反应。
❖ 非水溶液滴定法、比色法、紫外分光光度法和高效液相 色谱法测定本类药物的原理及应用。
19
第一节 芳胺类药物的分析
二、酰胺类
O
HO
N C CH3 HO
H 3C O C H N
S O
Feature)
N H C O C H 3
2.水解产物易酯化： 水解产物(醋酸)+乙醇/硫酸→醋酸乙酯
特殊香味
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学 教研室】 ppt课件
20
第一节 芳胺类药物的分析
二、酰胺类
HO
N C CH3 HO
paracetamol
（二）主要性质(Feature)
3. 对乙酰氨基酚→三氯化铁反应
专属鉴别
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学 教研室】 ppt课件
芳烃胺类
R1
苯乙胺类 H H
C C N R2 H
OH R3
adrenaline, dopamine hydrochloride
OH
H
O Ar
N R
苯丙胺类
芳香胺类药物的分析【药物分析与分析化学
oxprenolo教l,研c室a】rtepoptl课ol件hydrochloride
4
Contents
1
芳胺类
第06章胺类药物分析
Ar
NH2
HCl NaNO2
重氮盐
OH- 橙黄～猩红色
?? 萘酚
? 具有潜在芳伯氨基，如对乙酰氨基酚，水解后可得 芳伯氨基，能发生类似反应。
※ 盐酸丁卡因（芳香第二胺结构）与
NaNO2作用生成乳白色N-亚硝基化合物 沉淀。
NH(CH2)3CH3
NaNO2 H+
COOCH2CH2N(CH3)2
NO N(CH2)3CH3
?如盐酸量增加，则反应向左进行。 ?如盐酸浓度太大，反到会使游离芳伯氨
的量减小（成盐），而影响重氮化反应 速度，使反应速度减慢。
?ⅲ．反应速度与滴定时温度的关系
?一般，温度升高反应速度加快。 ?但重氮化反应所生成的重氮盐不稳定，
温度升高重氮盐分解速度也加快。
?另外，温度高时，滴定液亚硝酸钠也容 易分解逸失，而影响测定结果。
?USP采用这个方法指示终点。
?ⅲ．外指示剂法
?淀粉-KI糊剂或试纸
?原理： 当达到滴定终点时，溶液中稍过量 的NaNO2在酸性条件下氧化KI析出I2， I2遇淀粉显蓝色。
2NaNO2 ? 2KI? 4HCl? NO? I2 ? 2KCl? 2NaC?l 2H2O
?
遇淀粉显蓝色
?使用方法：
?滴定时，把淀粉 KI 试 液 滴 在 白 磁 板上，用玻璃棒 蘸取少量被滴定 的溶液，在白磁 板上划，如果立 即出现蓝色即已 到滴定终点。
＊反应速度受多种因素影响
?ⅰ．反应速度与药物结构的关系
重氮化反应机制：
NaNO 2 ? HCl ? HNO 2 ? NaCl
HNO 2 ? HCl ?
NOCl
氯化亚硝酰
? H 2O
N
Ar-NH2
篇胺类药物分析PPT课件
第44页/共106页
（2）电位法 USP（24）
（3）外指示剂法 KI—淀粉糊剂或试纸
2NaNO2+2KI+4HCl→ 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
（4）内指示剂法 中性红 不可逆指示剂
第45页/共106页
4. 测定方法 盐酸普鲁卡因 ChP（2000） 取本品约0.6g，精密称定，照永停
第24页/共106页
2. 硫氰酸盐衍生物
盐酸丁卡因 ChP（2000） [鉴别] （1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠 溶 液 10ml 溶 解 后 ， 加 25% 硫 氰 酸 铵 溶 液 1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水 洗 涤 ， 在 80℃ 干 燥 ， 依 法 测 定 （ 附 录 ⅥC），熔点约为131℃。
第31页/共106页
精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml 中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶 液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml 中含30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两 种溶液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠 为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮甲醇（14∶1 ∶ 1 ∶ 4）为展开剂，展开后，取 出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲 氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成） 喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应 的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较， 不得更深。
盐酸普鲁卡因胺
第3页/共106页
酰胺类药物的基本结构
R3
R1
NH C R2
O R4
第4页/共106页
HO
NHCOCH3
对乙酰氨基酚（扑热息痛）
C2H5O
NHCOCH3
（2）电位法 USP（24）
（3）外指示剂法 KI—淀粉糊剂或试纸
2NaNO2+2KI+4HCl→ 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
（4）内指示剂法 中性红 不可逆指示剂
第45页/共106页
4. 测定方法 盐酸普鲁卡因 ChP（2000） 取本品约0.6g，精密称定，照永停
第24页/共106页
2. 硫氰酸盐衍生物
盐酸丁卡因 ChP（2000） [鉴别] （1）取本品约0.1g，加5%醋酸钠 溶 液 10ml 溶 解 后 ， 加 25% 硫 氰 酸 铵 溶 液 1ml，即析出白色结晶；滤过，结晶用水 洗 涤 ， 在 80℃ 干 燥 ， 依 法 测 定 （ 附 录 ⅥC），熔点约为131℃。
第31页/共106页
精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml 中含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶 液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml 中含30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两 种溶液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠 为粘合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮甲醇（14∶1 ∶ 1 ∶ 4）为展开剂，展开后，取 出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲 氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成） 喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应 的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较， 不得更深。
盐酸普鲁卡因胺
第3页/共106页
酰胺类药物的基本结构
R3
R1
NH C R2
O R4
第4页/共106页
HO
NHCOCH3
对乙酰氨基酚（扑热息痛）
C2H5O
NHCOCH3
第六章胺类药物的分析讲课文档
对乙酰 氨 H C 、 基 l 对 酚氨基
第18页，共79页。
盐酸丁卡因
盐酸 丁 Na卡 2 N H C O 因 l 乳白
（N-亚硝基化合物）
此反应是重氮化偶合反应吗？
第19页，共79页。
（二）水解产物的反应
1. 盐酸普鲁卡因 ChP（2000）
[鉴别] （2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后， 加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；
瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解后，加
水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置100ml
量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10m1，加水
至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸收
度，按C8H9NO2的吸收系数
E 1% 1cm
为715 计算，即得。
第48页，共79页。
原料药 吸收系数法
A 百分含 E量 11c%ml100nV10% 0
第29页，共79页。
三、杂质检查
1. 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯 甲酸的检查
杂质来源 水解产生
检查方法 TLC 杂质对照品法
允许杂质存在的最大量
L
供试品量
100%
30103 10100%1.2% 2.510
第30页，共79页。
盐酸普鲁卡因 水解 对氨基苯甲酸 +
2-二乙氨基乙醇
对氨基苯甲酸 -CO2苯胺
ms USP（24） 对照法
第49页，共79页。
亚 硝 酸 钠 滴 定 法 中 ， 加 KBr 的 作 用 是
（B）
A. 添加Br B. 生成NO+·Br C．生成HBr D. 生成Br2
E. 抑制反应进行
第50页，共79页。
中国药典（1990年版）所收载的亚硝酸钠
第18页，共79页。
盐酸丁卡因
盐酸 丁 Na卡 2 N H C O 因 l 乳白
（N-亚硝基化合物）
此反应是重氮化偶合反应吗？
第19页，共79页。
（二）水解产物的反应
1. 盐酸普鲁卡因 ChP（2000）
[鉴别] （2）取本品约0.1g，加水2ml溶解后， 加10％氢氧化钠溶液1ml，即生成白色沉淀；
瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解后，加
水至刻度，摇匀，精密量取5m1，置100ml
量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液10m1，加水
至刻度，摇匀，在257nm的波长处测定吸收
度，按C8H9NO2的吸收系数
E 1% 1cm
为715 计算，即得。
第48页，共79页。
原料药 吸收系数法
A 百分含 E量 11c%ml100nV10% 0
第29页，共79页。
三、杂质检查
1. 盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯 甲酸的检查
杂质来源 水解产生
检查方法 TLC 杂质对照品法
允许杂质存在的最大量
L
供试品量
100%
30103 10100%1.2% 2.510
第30页，共79页。
盐酸普鲁卡因 水解 对氨基苯甲酸 +
2-二乙氨基乙醇
对氨基苯甲酸 -CO2苯胺
ms USP（24） 对照法
第49页，共79页。
亚 硝 酸 钠 滴 定 法 中 ， 加 KBr 的 作 用 是
（B）
A. 添加Br B. 生成NO+·Br C．生成HBr D. 生成Br2
E. 抑制反应进行
第50页，共79页。
中国药典（1990年版）所收载的亚硝酸钠
第六章胺类药物的分析幻灯片
CH3
HCl
盐酸利多卡因
有无酚羟基?
有无芳香第一胺？
CH3
C4H9 N
NHCO
HCl
CH3
盐酸布比卡因
性质
1. 水解后显芳香第一胺特性：芳酰氨基 利多卡因和布比卡因在酰胺基邻位存在两 个甲基，受空间位阻的影响，较难水解， 因此其水溶液较稳定。
2. 水解产物易酯化：对乙酰氨基酚和醋氨苯 酯，水解后生成醋酸，可在酸性介质中与乙 醇反应，生成醋酸乙酯。
盐酸普鲁卡因 水解 对氨基苯甲酸 + 2-二乙氨基乙醇
对氨基苯甲酸 -CO2 苯胺 [O]
醌类化合物 （黄色）
已黄的注射液不仅疗效下降，且毒性增加
《中国药典》2005年版规定，TLC法检查对氨基苯甲酸
精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中 含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。 取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含 30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶 液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘 合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇 （14∶1 ∶ 1 ∶ 4）为展开剂，展开后，取出晾 干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基 苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷 雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的 杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较， 不得更深。
（六）氯化物的鉴别反应
盐酸普鲁卡因、盐酸丁卡因、盐酸利多卡 因的水溶液。
供试品+稀硝酸+Ag+
白色凝乳状
+氨试液
溶解+稀硝酸
沉淀
（七）UV
盐酸布比卡因 ChP（2000） [鉴别] （2）取本品，精密称定，按干燥 品计算，加0.01mol/L盐酸溶液制成每1ml 中含0.40mg的溶液，照分光光度法（附录 ⅣA）测定，在263nm与271nm的波长处有 最 大 吸 收 ； 其 吸 收 度 分 别 为 0.53 ～ 0.58 与 0.43～0.48。
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三、鉴别
（一） 重氮化-偶合反应
1. 原理
芳伯氨基
NaNO2 H+
重氮盐
碱性β-萘 酚
偶氮染料
适用范围： 具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基
H2N
COOC2H5
苯佐卡因
H 2N
C O O C H 2C H 2N (C 2H 5)2 H C l 盐酸普鲁卡因
2. 方法
（1） S 重氮化偶合 沉淀（橙黄到猩红色） 如：苯佐卡因，盐酸普鲁卡因
盐酸普鲁卡因（二乙胺基乙醇酯）
盐酸普 鲁卡因
NaOH ↓白（普鲁卡因）
△ 油状物
△
过量
沉淀溶解 HCl ↓白
HCl 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇
（↑碱性）
2. 苯佐卡因（乙醇酯）
苯佐卡因 NaOH 乙醇 I2 碘仿
△
黄色沉淀及臭气
3. 对乙酰氨基酚与醋氨苯砜
水解
S
醋酸
乙醇 H+
乙酸乙酯
香味
盐酸普鲁卡因胺
抗心律失常药
酯键
酰胺键
不属对氨基苯甲酸酯类药物, 但结构
与化学性质相似
二 、酰胺类药物
R3
R1
N C R2
HO
R4
结构特点: 苯胺的酰基衍生物, 具芳酰氨基
典型药物:
对乙酰氨基酚 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 醋氨苯砜
HO
H 3 C O C H N
NHCOCH3
对乙酰氨基酚
O S O
外指示剂法：
Ar—NH2
HCl Ar—N ≡N+Cl
NaNO2
碘化钾 淀粉糊
蓝色
2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
优：
灵敏度较高
缺： （1）使用不方便 （2）碘化钾在未到终点时，在酸性条
件下可被空气氧化析出碘。 （3）外试消耗供试品
（二）非水溶液滴定法
醋酸汞：用以形成不离解的氯化汞，加3-5ml 以消除氢卤酸的干扰
结晶紫：非水溶液滴定指示剂 pH 0.5（绿）～2.0(蓝）
（三）UV法
对乙酰氨基酚在稀碱性溶液中， 在257±1nm波长处有最大吸收，可用 于其原料及其制剂（包括对乙酰氨基 酚片剂、注射液、栓剂）的含量测定。
对乙酰氨基酚 Ch.P（2000）
来源：由还原剂铁粉与对氨基酚的氧化 物引起
方法：比色与比浊
检查方法
取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2） 20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试 液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与 对乙酰氨基酚对照品1.0g 加对氨基酚 50g用同一方法制成的对照液比较，不 得更深。
允许杂质存在的最大量
L
2. 硫氰酸盐衍生物
盐酸丁 25%硫氰酸胺
卡因
5%醋酸
测熔点（131 燥
（六）UV
苯环的紫外吸收特性
（七）IR
适用于结构复杂而相互差别小的 药物鉴别与区别。 例：盐酸普鲁卡因与盐酸普鲁卡因胺
四、杂质检查
（一）盐酸普鲁卡因注射液中杂质的检查
杂质来源： 制备或贮藏过程中水解
非水溶液滴定法步骤
除另有规定外,精密称取供试品适量〔约消耗 高氯酸滴定液(0.1mol/L)8ml〕， 加冰醋酸10～30ml使溶解，加各药品项下规 定的指示液1～2滴， 用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定。 终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并
将滴定的结果用空白试验校正。
醋酐：用以除去溶剂中的水分
检查方法： TLC的杂质对照品法
精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中 含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。 取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含 30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶 液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘 合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇 （14∶1 ∶ 1 ∶ 4）为展开剂，展开后，取出晾 干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基 苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷
为了避免滴定过程中HNO2 的分 解逸失，可采用快速滴定法。
快速滴定法：滴定管尖插入液面下2／3 处，在搅拌下一次性放下大部分滴定液， 近终点前才提出滴定管，冲洗管尖，再 缓缓滴定至终点。
（5）终点指示
终点指示方法
永停滴定法 外指示剂法 电位法 内指示剂法
电位滴定法:
原理： 以参比电极与指示电极同时浸入
雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的
杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较， 不得更深。
允许杂质存在的最大量
L
供试品量 100%
30103 10
100%1.2%
2.510
以下那种药物中应检查对氨基苯 甲酸
A. 盐酸普鲁卡因 B. 盐酸普鲁卡因胺 C. 注射用盐酸普鲁卡因 D. 盐酸普鲁卡因胺片 E. 盐酸普鲁卡因注射液
NaNO2 Ar—N ≡N+Cl
HCl
适用范围：具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基
2. 测定条件 （1）溴化钾的加入
溴化钾起催化剂的作用
NaNO2 + HCl → HNO2 +NaCl HNO2 + HCl → NO·Cl + H2O
N O+ Cl-
N H2
慢
H N NO
快
N N OH
快
N N + C l-
2. 有关物质 检查方法：TLC 以对氯乙酰苯胺为杂质对照品，检
查多种杂质的限量。 对氯乙酰苯胺：杂质对照品法 其它杂质：参比杂质对照品法
3. 对氨基酚 来源：乙酰化不完全或发生水解 检查原理与方法：对照法
对氨基酚 亚硝基铁氰化钠 蓝色配位化合物
（对照）
OH-
比色
OH-
（样品）
亚硝基铁氰化钠
1. 乙醇溶液的澄清度与颜色
第六章 胺类药物的分析幻灯片
H2N
COOC2H5
苯佐卡因
H 2N
C O O C H 2C H 2N (C 2H 5)2 H C l 盐酸普鲁卡因
H 3 C (H 2 C )3 H N
C O O C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 )2 H C l
盐酸丁卡因
H 2 N
C O N H C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 )2H C l
HNO2+H2O
终点： 溶液中开始有亚硝酸，电极起氧化 还原反应，电流计偏转，为终点。
永停滴定法（附录ⅦA）
用作重氮化法的终点指示时，调节R1 使加于电极上的电压约为50mV。取供试品 适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外， 可加水40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，而 后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化 钾2g，插入铂—铂电极后，将滴定管的尖端 插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液 （0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴 随搅拌，至近终点时，将滴定管
待滴定液，测量电位，随着滴定进行 电位也逐渐变化，电位发生突跃即为
终点 。
内指示剂法:
原理： 过量的亚硝酸氧化指示剂变色如：
中性红、橙黄IV-亚甲蓝和二氰双邻氮 菲亚铁
缺点：重氮盐有色干扰
永停滴定法 Ch.P（2000）
原理：
电极：铂—铂电极
阳极 NO+H2O HNO2+H++e
阴极 NO+H++e
2. 酯键或酰胺键的水解
利用水解产物的性质来进行鉴别 注： 水解速度受空间位阻、光线、热
或碱性条件的影响
3. 弱碱性（脂烃胺侧链）
与生物碱沉淀试剂生成沉淀，非 水溶液滴定法测定含量。
游离碱易溶于有机溶剂； 其盐 可溶于水。
4. 其它取代基（酚羟基） 可区别对乙酰氨基酚与醋氨苯酚
5. 与金属离子沉淀 6. UV和IR
对乙酰氨基酚 Ch.P（2000） [鉴别] （2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1， 置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1， 滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀 释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即 显红色。
（3）盐酸丁卡因 NaNO2 N-亚硝基乳白色沉淀
H+
H 3 C (H 2 C )3 H N
取本品约40mg，精密称定，置250ml
量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解
后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，
（2） S 水解
重氮化偶合 沉淀
如：对乙酰氨基酚，醋氨苯砜
盐酸普鲁卡因 Ch.P（2000） [鉴别] （1）本品显芳香第一胺类的鉴别
反应（附录Ⅲ） 取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要 时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚 硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数 滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色 沉淀。
N H C O C H 3
醋氨苯砜
H3C
NHCOCH2N(C2H5)2
CH3
. HCl . H2O
CH3
C4H9 N
NHCO
盐酸利多卡因
. HCl
CH3
盐酸布比卡因
（一）化学结构及性质
1. 芳伯氨基或潜在芳伯氨基 （1）重氮化偶合反应 （2）用亚硝酸钠滴定法进行含量测定
注: 盐酸丁卡因无此特性 利多卡因与布比卡因难水解
最常用
酸度 加快重氮化反应速度 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物
酸度 阻碍芳伯氨基的游离 亚硝酸易分解
N样 :N盐酸= 1: 2.5 ~6
（3）温度 T ，V T ， 亚硝酸逸失，重氮盐分解
在室温下（10°C— 30°C）进行滴定
（4）滴定速度