21 生物化学实验--琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白
蛋白质电泳
琼脂糖凝胶电泳分离血清脂蛋白实验概要本实验介绍了血清蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理及操作步骤等。
实验原理琼脂糖主要通过氢键而形成凝胶。
电泳时因凝胶含水量大（98－99%），近似自由电泳，因为固体支持物的影响少，故电泳速度快，区带整齐。
而且由于琼脂糖不含带电荷的基团，电渗影响很少，是一种较好的电泳材料，分离效果较好。
血清中脂类物质与血清载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白（lipoprotein）形式存在。
各种脂蛋白中所含载脂蛋白的种类及数量不同，各种脂蛋白颗粒大小也相差很大，因此，以琼脂糖凝胶为支持物，在电场中可使各种脂蛋白颗粒分离开来。
琼脂糖凝胶电泳分离血清蛋白方法简单。
将血清脂蛋白用脂类染料苏丹黑（或油红等）进行预染。
再将预染过的血清加样于琼脂糖凝胶板加样槽中，通电后可以看到脂蛋白向正极移动，并分离出几个区带。
正常人血清脂蛋白可出现三条区带，从阴极到阳极依次为β－脂蛋白（最深），前β－脂蛋白（最浅）及α－脂蛋白（比前β－脂蛋白略深些），在原点处应无乳糜微粒。
有时前β－脂蛋白也显示不出来。
主要试剂1. 苏丹黑染色液将苏丹黑B加到无水乙醇中至饱和，摇荡使乙酰化。
用前过滤。
苏丹黑B0.5克甲醇50ml.冰乙酸10ml ,蒸馏水40ml2. 巴比妥缓冲液称取巴比妥钠15.4g、巴比妥2.76g及EDTA0.29g，加水溶解后再加蒸馏水至1000mL（pH为8.6，离子强度0.075），为电极缓冲液。
3. 凝胶缓冲液取三羟甲基氨基甲烷1.212g、EDTA0.29g及NaCl5.85g，用蒸馏水溶解后，稀释至1000mL，pH为8.6。
4. 琼脂糖凝胶称取琼脂糖0.45 g溶于50 mL凝胶缓冲液中，再加水50 mL。
在水浴中加热至沸，待琼脂糖完全溶解后，立即停止加热。
1. 37℃水浴锅2. 高速离心机3. 吸管4. 载玻片5. 低温冰箱6. 毛细管7. 电泳设备8. 80℃烘箱实验材料血清实验步骤1. 预染血清血清0.2mL中加苏丹黑染色液0.2mL，混合置37℃水浴中染色30分钟，离心（2000转/分）约5分钟。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳原理和操作血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清中脂蛋白的分析。
其原理是利用琼脂糖凝胶电泳的分离特性，将血清中的脂蛋白按照分子大小进行分离，从而获得脂蛋白的电泳图谱。
琼脂糖凝胶是由琼脂糖溶液制备而成的凝胶。
琼脂糖分子之间通过氢键结合，在溶液中形成网状结构，能够阻碍大分子的迁移，使分子在凝胶中按照分子大小逐渐分离。
根据琼脂糖凝胶的浓度和凝胶体积，可以调整分离脂蛋白的范围和分辨率。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下：1. 样品制备：将要分析的血清样品进行离心，将清除过量脂蛋白颗粒。
取适量样品于离心管中，加入适量凝胶缓冲液，混匀。
2. 制备凝胶：根据所需的凝胶浓度，称取相应质量的琼脂糖溶解于电泳缓冲液中，并加热至溶解。
待溶液温度降至室温后，加入凝胶稳定剂并混匀。
3. 填充凝胶孔：将凝胶溶液倒入电泳池，待凝胶凝固后，用专用的样品载体或者微量移液器将样品填充到凝胶孔中。
注意不要将样品液面超过凝胶表面。
4. 电泳分离：将电泳池连接电源，设定合适的电泳条件，如电压和电流。
在电泳过程中，离子在电场作用下沿着琼脂糖凝胶的移动方向迁移，分离出不同迁移速度的脂蛋白组分。
5. 染色和观察：电泳结束后，取出凝胶，进行染色和观察。
目前常用的染色方法有银染、共伴染色和乳化状胶体金染色等。
在染色后，可以使用分子影像仪或者专用的凝胶分析系统进行图像捕捉和分析。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳可以用于分析血清中各种脂蛋白的分布和比例，如低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）等。
通过分析脂蛋白的电泳图谱，可以得到脂蛋白的相对含量和分子大小的分布情况，进一步了解脂质代谢的状态以及与某些疾病的关联。
总之，血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生化分离和分析技术，主要用于血清脂蛋白的分离和分析。
通过其原理和操作步骤的了解，我们可以更好地利用该技术进行实验和数据解读，为脂质相关疾病的研究提供有力的支持。
琼脂糖凝胶电泳高效检测与鉴定蛋白质
琼脂糖凝胶电泳高效检测与鉴定蛋白质蛋白质是生物体内重要的大分子有机化合物，参与了众多生命过程的调控和实现。
为了研究和了解蛋白质的结构和功能，科学家们经过长期的努力，发展出了多种高效的蛋白质检测和鉴定方法。
本文将重点介绍一种被广泛应用的技术——琼脂糖凝胶电泳。
一、琼脂糖凝胶电泳的原理和步骤琼脂糖凝胶电泳是一种基于凝胶的电泳方法，通过将蛋白质溶液加在琼脂糖凝胶上进行电泳分离。
该方法根据蛋白质的分子量和电荷来实现分离和鉴定。
1. 准备琼脂糖凝胶：将琼脂糖加入缓冲液中，加热溶解后迅速倒入凝胶模板中。
待凝胶凝固后，注入缓冲液使其浸泡在缓冲液中。
2. 扩样和加载：将蛋白质溶液进行热变性处理，添加胰酶以消化蛋白质，将扩样液均匀地加载到琼脂糖凝胶中。
3. 电泳：将凝胶放入电泳槽中，连接电源进行电泳。
根据蛋白质的分子量和电荷，选取合适的电压和电泳时间进行分离。
4. 染色和观察：电泳结束后，将凝胶染色以显现蛋白质的分离带。
常用的染色方法有银染色、荧光染色等。
观察和分析染色后的凝胶图像，可以确定蛋白质在凝胶中的迁移位置。
二、琼脂糖凝胶电泳的优点和应用琼脂糖凝胶电泳作为一种常用的蛋白质检测和鉴定方法，具有以下优点：1. 简单易行：琼脂糖凝胶电泳操作简单，不需要复杂的设备和试剂，适用于初学者和实验室常规使用。
2. 廉价经济：琼脂糖凝胶电泳所需的试剂和材料相对较低成本，适合大规模样品分析和快速筛查。
3. 分离效果好：琼脂糖凝胶电泳通过可调控的凝胶浓度和孔径大小，能够实现对不同大小和电荷的蛋白质的有效分离。
4. 广泛适用：琼脂糖凝胶电泳适用于各种生物样品，包括细菌、真菌、动植物组织等。
该方法在生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用。
主要应用领域如下：1. 蛋白质组学研究：通过琼脂糖凝胶电泳，可以对蛋白质样本进行快速的分离和鉴定，为后续的质谱分析和蛋白质相互作用研究提供基础数据。
2. 疾病诊断：琼脂糖凝胶电泳可以用于检测血清和尿液中的异常蛋白质，从而辅助疾病的早期诊断和病情监测。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
实验一：琼脂糖凝胶电泳对DNA提取实验目的：学习使用水平式琼脂糖凝胶电泳进行DNA的提取。
实验原理：琼脂糖凝胶电泳是利用琼脂糖溶化再凝固后能形成带有一定孔隙的固体基质的特性。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。
根据DNA分子量不同，采用外加电场使其分开，用生物染料嵌入DNA分子后在紫外下显色。
1）在电场的作用下及中性pH的缓冲条件下，带负电的核酸分子向正极迁移。
由于糖——磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。
2）在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。
具有不同的相对分子质量和不同构型的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。
3）生物染料在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从负极向正极泳动时，生物染料从正极向负极移动，就会嵌入DNA分子中形成络合物，使DNA在紫外光下发射很强的荧光。
在生物染料足够的情况下，荧光的强度正比于DNA的含量，这样就可以检测DNA的浓度。
实验材料：微量移液器(2μl和4μl)，高压灭菌锅，电泳仪，琼脂糖平板电泳装置，微波炉等。
TAE电泳缓冲液，琼脂糖凝胶，PCR扩增样品实验步骤：1胶液的制备：称取0.2g琼脂糖,置于200ml锥形瓶中, 加入20ml TAE稀释缓冲液，放入微波炉里加热至琼脂糖全部熔化，沸腾。
取出摇匀。
加热时应盖上封口膜, 以减少水份蒸发。
2胶板的制备：将有机玻璃胶槽两端分别用透明胶带(宽约1cm)紧密封住。
将封好的胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子。
3向冷却至50-60℃的琼脂糖胶液中小心地倒入胶槽内, 使胶液形成均匀的胶层。
检查有无气泡。
4室温下约20分钟后，琼脂糖溶液完全凝固，小心垂直拔出梳子和挡板，注意不要损伤梳底部的凝胶，清除碎胶。
将凝胶放入电泳槽中。
5加入电泳缓冲液（TAE）至电泳槽中，使液面高于胶面约1mm。
血清蛋白(serumprotein)琼脂糖凝胶电泳
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ateElement('script清血清 0.2mL 中加苏丹黑染色液 0.2mL，混合置 37℃水浴中染色 30 分钟，离心约 5 分钟。以除去悬浮于血清中染料沉渣。
2、制备琼脂糖凝胶板将已配制好的 0.5%琼 脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶 溶液浇注在载玻片上，约 3mL。静置半小时后凝 固。
3、点样将剪好的滤纸条对折，以折边在距 凝胶一端 2cm 处切一点样口。将毛细管插入预染 好的血清中，待吸入部分血清后，取毛细管使其
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【注意事项】
1、电泳样品应为新鲜的空腹血清。
2、加热溶化琼脂时，须防止水份蒸发过多。 琼脂糖凝胶最好随用随制，以免凝胶表面干燥， 影响分离效果。
实验六：血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳
实验六：血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳血清脂蛋白的琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和鉴定血清脂蛋白的方法。
血清脂蛋白是由蛋白质和脂质组成的颗粒物质，其中包括低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒等。
琼脂糖凝胶电泳可以根据脂蛋白的电泳迁移率和染色性质将脂蛋白分离出不同的带，从而达到分离和鉴定的目的。
实验仪器和试剂：1.琼脂糖凝胶电泳仪2.琼脂糖凝胶板（gel plate）3.20%甘油4.3%琼脂糖5.样品（血清）6.样品缓冲液：Tris-HCl pH 8.97.标准品实验步骤：1.制备琼脂糖凝胶板：取100ml 3%琼脂糖加入十倍浓度的Tris-HCl pH 8.9缓冲液中，搅拌均匀后加入20%甘油，将混合液倒入冷却好的凝胶板中，把已冷却的仪器旋转至仪器倾斜角度20度左右，使混合液均匀地分布在凝胶板的倾斜表面上。
等待凝固即可使用。
2.标记标准品：将标准品加入混合样品缓冲液，在84摄氏度下进行10分钟的煮沸，再进行冷却。
将手套清洗干净并干燥，然后将标准品注入样品单元格中，约10分钟后转动仪器延长电泳时间（通常电泳时间为1个小时左右），直到标准品移动到合适的位置、大小和颜色为止。
标准品的分子量从低分子量到高分子量分别为白色脂蛋白（pre-beta脂蛋白）、β-脂蛋白（LDL）、α-脂蛋白（HDL3）、HDL2和脂蛋白(a)。
3.样品电泳：将样品加入混合样品缓冲液，并煮沸10分钟以去除有机物，然后冷却。
将样品注入样品单元格中，待样品在电泳板上电泳1小时。
电泳结束后，先将凝胶板在120ml的异丙醇/冰醋酸/石油醚混合物中浸泡5-10秒钟，然后在以色列碘溶液中染色。
结果分析：在琼脂糖凝胶板上可以看到不同的带，这些带是由血清脂蛋白的不同组分组成的。
根据标准品的移动位置和样品的移动位置，可以将样品中的脂蛋白分为不同的带。
每个带代表一个不同的脂蛋白类别，通常来说，可以将带分为以下5类：白色脂蛋白（pre-beta脂蛋白）、β-脂蛋白（LDL）、α-脂蛋白（HDL3）、HDL2和脂蛋白(a)。
血清脂蛋白琼脂糖电泳实验报告
血清脂蛋白琼脂糖电泳实验报告血清脂蛋白琼脂糖电泳实验报告引言：血清脂蛋白是人体内一类重要的脂质运输蛋白，它们在体内起着运输和代谢脂质的关键作用。
血清脂蛋白琼脂糖电泳是一种常用的分离和检测血清脂蛋白的方法，通过该实验可以了解血清脂蛋白的组成和分布情况，为研究脂质代谢相关疾病提供重要依据。
实验目的：通过血清脂蛋白琼脂糖电泳实验，了解血清脂蛋白的组成和分布情况，探讨其与脂质代谢相关疾病的关系。
实验材料与方法：1. 实验材料：- 血清样本：来自健康志愿者的血清样本。
- 琼脂糖电泳胶：用于分离血清脂蛋白的琼脂糖电泳胶。
- 标准样本：包含已知脂蛋白组分的标准样本。
2. 实验方法：- 样本制备：将血清样本离心，取上清液作为实验样本。
- 电泳操作：将样本和标准样本分别加载到琼脂糖电泳胶孔中，进行电泳操作。
- 显色与分析：电泳结束后，使用特定染色剂显色，观察和分析血清脂蛋白的带状分布。
实验结果与讨论：在本次实验中，我们通过血清脂蛋白琼脂糖电泳的方法，成功地分离和检测了血清脂蛋白。
根据实验结果，我们观察到了不同带状分布的血清脂蛋白，包括高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）、极低密度脂蛋白（VLDL）等。
HDL是一种具有良好保护作用的脂蛋白，它能够从组织中回收多余的胆固醇，将其运输至肝脏进行代谢。
因此，HDL被普遍认为是“好胆固醇”，其水平的升高与心血管疾病的风险降低相关。
在琼脂糖电泳实验中，HDL通常呈现为电泳胶上迁移较快的带状。
与HDL相反，LDL是一种较为不利的脂蛋白，它将胆固醇从肝脏运输至组织细胞，过多的LDL会导致胆固醇在血管壁上沉积，增加心血管疾病的风险。
在琼脂糖电泳实验中，LDL通常呈现为电泳胶上迁移较慢的带状。
VLDL是一种主要由甘油三酯组成的脂蛋白，它参与脂质代谢过程中的甘油三酯运输。
高水平的VLDL与糖尿病、肥胖等疾病密切相关。
在琼脂糖电泳实验中，VLDL通常呈现为电泳胶上迁移速度介于HDL和LDL之间的带状。
血清脂蛋白电泳原理和操作方法
血清脂蛋白电泳原理和操作方法血清脂蛋白电泳是一种常用的临床检验方法，用于检测血液中脂蛋白的含量和分布情况。
其原理是利用电场将血清中的脂蛋白分子按照其电荷和大小进行分离，进而通过电泳染色或免疫印迹等方法进行分析。
血清脂蛋白电泳的操作方法如下：1. 样本制备：首先，将待测血清标本离心分离清澈的血浆。
避免搅拌或摇晃，以防止脂蛋白在离心过程中发生聚集。
然后，取清澈的血浆进行进一步的操作。
2. 准备凝胶：将脂蛋白电泳所需的琼脂糖凝胶制备好。
通常使用琼脂糖凝胶浸润缓冲液来充分浸润凝胶，并确保凝胶的均匀性。
3. 样本加载：将预处理的血浆样本加载到琼脂糖凝胶孔中。
为了获得更好的分离效果，通常将血浆样本稀释以调节其浓度。
4. 电泳操作：将装有样品的琼脂糖凝胶板放置在电泳槽中。
然后，连接电极，以产生稳定的电场。
根据实验的需要，可以选择不同的电场条件，如电压和电流密度。
5. 电泳结束：在预定时间内进行电泳。
根据脂蛋白的电泳迁移率和分离效果，可以调整电泳时间。
6. 固定凝胶：电泳结束后，将凝胶板取出，用酸性醇溶液进行固定。
这可以确保蛋白质在凝胶上的位置固定，并防止蛋白质的迁移。
7. 染色或免疫印迹：固定后的琼脂糖凝胶可以选择染色方法或者进行免疫印迹。
染色方法可以直接显示脂蛋白的位置，免疫印迹可以使用抗体识别特定的脂蛋白。
总结起来，血清脂蛋白电泳是一种通过电场将血清中的脂蛋白分子分离的方法。
其操作步骤包括样本制备，凝胶制备，样本加载，电泳操作，电泳结束，凝胶固定，染色或免疫印迹等。
注意在操作过程中确保样本和凝胶的稳定性，以及调整电泳条件来获得最佳的分离效果。
琼脂糖凝胶电泳实验报告
琼脂糖凝胶电泳实验报告一、实验目的琼脂糖凝胶电泳是分子生物学实验中常用的技术之一，其目的主要包括以下几个方面：1、分离和鉴定 DNA 片段：通过电泳可以将不同大小的 DNA 片段在琼脂糖凝胶中按照分子量大小进行分离，从而能够直观地观察到DNA 样品的组成和纯度。
2、检测 DNA 的质量：通过观察电泳图谱中 DNA 条带的亮度、清晰度和完整性，可以评估 DNA 样品的质量，判断是否存在降解、杂质污染等情况。
3、定量分析 DNA 浓度：结合已知浓度的 DNA 标准品，通过比较样品条带与标准品条带的亮度，可以对 DNA 样品的浓度进行大致的估算。
二、实验原理琼脂糖是一种从海藻中提取的线性多糖聚合物。
当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固，会形成网状的凝胶结构。
由于琼脂糖凝胶具有分子筛效应，DNA 分子在电场中会向正极移动，其迁移速度取决于 DNA 分子的大小和构象。
较小的 DNA 分子在凝胶中受到的阻力较小，迁移速度较快；较大的 DNA 分子受到的阻力较大，迁移速度较慢。
因此，不同大小的 DNA 分子在琼脂糖凝胶中会被分离成不同的条带。
在电泳过程中，通常使用溴化乙锭（EB）等荧光染料对 DNA 进行染色。
EB 能嵌入DNA 分子的碱基对之间，在紫外线照射下发出荧光，从而使 DNA 条带得以显现。
三、实验材料与设备1、实验材料DNA 样品：本次实验使用的是经过提取和纯化的λDNA 样品。
琼脂糖：选用高纯度的琼脂糖粉末。
电泳缓冲液：5×TBE 缓冲液（Tris硼酸EDTA），使用时稀释至1×TBE 工作液。
上样缓冲液（Loading Buffer）：含有甘油、溴酚蓝等成分，用于增加样品密度，便于样品沉入加样孔，并指示电泳进程。
核酸染料：溴化乙锭（EB）溶液。
2、实验设备电泳仪：提供稳定的直流电源，用于产生电场。
水平电泳槽：放置琼脂糖凝胶，容纳电泳缓冲液。
凝胶成像系统：用于观察和拍摄电泳结果。
琼脂糖凝胶电泳在蛋白质分离与检测中的应用
琼脂糖凝胶电泳在蛋白质分离与检测中的应用在生物科学领域中，蛋白质分离与检测是一项重要的实验技术，而琼脂糖凝胶电泳作为常用的方法之一，被广泛应用于蛋白质的分离与检测。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的原理和应用，以及其在蛋白质研究中的重要性。
1. 琼脂糖凝胶电泳的原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于凝胶介质进行分离的电泳技术。
它利用琼脂糖在制备过程中形成的三维网状凝胶，通过凝胶孔隙大小的差异，使得不同大小的蛋白质能够在电场中移动，并在凝胶中分离。
2. 琼脂糖凝胶电泳的操作步骤（1）制备琼脂糖凝胶：首先，按照配方将琼脂糖和缓冲液混合，然后进行加热搅拌，使其完全溶解。
接着，将溶液倒入凝胶板中，并插入电泳仓。
等待凝胶固化后，准备进行电泳操作。
（2）样品加载：将待分离的蛋白质样品与加载缓冲液混合，并进行加热处理，使其完全溶解。
然后，将样品缓冲液慢慢地加载到凝胶板上的孔洞中。
（3）电泳操作：在已经装载好凝胶板的电泳仓中，连接正负电极，分别接入电源。
然后，设置适当的电流和电压，开始电泳过程。
等待一定时间后，关闭电源，取出凝胶板。
（4）染色与检测：将凝胶板浸泡在染色液中，使蛋白质分子可见。
然后，用适当的方法进行定量检测。
3. 琼脂糖凝胶电泳的应用琼脂糖凝胶电泳作为一种常用的蛋白质分离与检测技术，在科学研究和生物医学领域有着广泛的应用。
（1）分子量测定：琼脂糖凝胶电泳可用于分析蛋白质样品中不同分子量的成分，并通过与已知分子量的标准物质进行比较，确定待测蛋白质的分子量。
（2）蛋白质分离：琼脂糖凝胶电泳的凝胶孔隙大小可以调节，可以根据蛋白质的大小范围进行选择，从而使得不同大小的蛋白质能够在凝胶中分离。
这为蛋白质组分的分析和研究提供了便利。
（3）多蛋白质复合体分析：琼脂糖凝胶电泳也可以用于研究多蛋白质复合体的组成和大小，通过凝胶孔隙的选择，可以分离出不同组分的复合体，并通过染色和检测，得到有关复合体的相关信息。
（4）疾病诊断：琼脂糖凝胶电泳在临床诊断中也有一定的应用，特别是对于一些蛋白质异常变化与疾病相关的情况。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验报告
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验报告血清脂蛋白是一种由蛋白质和脂质组成的复合物，在人体中的生理功能主要包括运输脂质和调节胆固醇代谢等。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离血清脂蛋白的实验方法。
本实验旨在通过琼脂糖凝胶电泳的方式分离血清脂蛋白，从而了解不同脂蛋白的特征和分布情况。
一、实验原理琼脂糖凝胶电泳是一种利用琼脂糖凝胶的孔隙度分离分子的电泳方法。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验中，首先将血清样品加入琼脂糖凝胶管道中，然后进行电泳分离。
在电泳过程中，血清脂蛋白在琼脂糖凝胶孔隙中运动，由于不同脂蛋白的大小、密度和电荷等性质不同，所以它们在琼脂糖凝胶中的移动速度和分离程度也会不同。
二、实验步骤1.取适量琼脂糖凝胶，按照说明书制备琼脂糖凝胶管道。
2.将琼脂糖凝胶管道放置于电泳槽中，向孔道中注入TBE缓冲液。
3.取适量血清样品，加入琼脂糖凝胶管道中。
4.进行电泳实验，设置合适的电压和电流密度，在一定时间内进行分离。
5.取出琼脂糖凝胶，染色并进行照相。
三、实验结果在本实验中，我们分别对正常人血清和高脂血症患者血清进行了琼脂糖凝胶电泳实验。
实验结果显示，正常人血清中主要存在有高密度脂蛋白（HDL）、低密度脂蛋白（LDL）和极低密度脂蛋白（VLDL）等脂蛋白，而高脂血症患者的血清中，LDL含量较高，HDL含量较低。
四、实验分析血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验是一种快速、准确、简便的血清脂蛋白分离方法。
通过本实验，我们可以了解不同脂蛋白的特征和分布情况，有助于更好地了解血脂代谢的状况。
同时，本实验还可以用于临床诊断和治疗高脂血症等疾病。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳实验是一种重要的实验方法，可以用于分离不同脂蛋白、了解血脂代谢状况和临床诊断等方面。
在实验中需要注意操作规范、仪器设备维护和实验数据分析等方面，以确保实验结果的准确性和可靠性。
实验七.血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳分析浅谈
【思考题】
1.琼脂糖凝胶电泳有哪些操作要点？
2. 在不同的实验方法（超速离心、琼脂糖凝
胶电泳、PAGE）中，正常人血清脂蛋白如 何分类，电泳后的相对位置及其与超速离心 法的对应关系？ 3.各种脂蛋白的功能？为什么正常人血清脂 蛋白电泳时见不到乳糜微粒区带？
【正常参考值】
乳糜微粒（CM） 0～0 %
【注意事项】
1.预染血清与温度有关，低温着色慢，高温着色快，
37℃较为适宜。 2.浇注琼脂糖凝胶板要尽量使厚薄均一，否则会影 响脂蛋白的分离效果。 3.将凝胶板放入电泳槽中，应切记与电力线平行、 样品端置负极、搭桥滤纸不能搭在样品上。 4.制备干胶时，要严控制脱水的温度和速度，避免 脱水时温度过高、速度太快引起凝胶收缩龟裂。
【实验器材】
1.电泳仪、电泳槽
2.载玻片 3.台式离心机
Байду номын сангаас 【实验操作】
1.预染血清 血清0.2ml中加苏丹黑色液0.02ml，混合置37℃水浴中染色 30分钟，离心（2，000转/分）5分钟。 2.制备琼脂糖凝胶板 将已配制好的0.50%琼脂糖凝胶于水浴中加热融化， 用吸管吸取约3ml凝胶溶液浇注在载玻片上，立即放上“桥”，静置待 其凝固后，小心取下“桥”。 3.电泳 将凝胶板平行放入电泳槽中，加样孔端置负极。用四层滤纸于巴 比妥缓冲液浸湿，然后轻轻盖贴在凝胶板两端，滤纸的另一端则浸于电 泳槽内的巴比妥缓冲液中。接通电源后低压加样，加样完后电压调为 120～130V。经电泳35～50分钟，即可见到分离的区带。 4.如果需要保留电泳图谱，可将电泳后的凝胶板放入干胶机中制成干胶 片。若无干胶机，可用玻璃纸包好凝胶板（连同载玻片），其上平铺多 层吸水滤纸，滤纸上再压上书等重物，吸干凝胶中的水分。也可将凝胶 板先放入清水中浸泡脱盐2小时，然后放烘箱（80℃左右）中烘干，但 应陋随时注意温度的变化以及凝胶的脱水程度，以避免凝胶在脱水过程 中龟裂。
血清脂蛋白电泳原理和操作方法
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血清脂蛋白电泳原理和操作方法
导语：血清脂蛋白，当前在临床应用方面，它的作用还是比较大的，所以对于很多的患者，就想全面了解一下血清脂蛋白电泳原理和操作方法，为了你能尽
血清脂蛋白，当前在临床应用方面，它的作用还是比较大的，所以对于很多的患者，就想全面了解一下血清脂蛋白电泳原理和操作方法，为了你能尽快的了解，下面内容就做了详细的介绍，你可以充分的了解一下，相信会对自己以后有帮助.
原理
脂蛋白是在碱性pH条件下，以琼脂糖凝胶或醋酸纤维条带作为载体，从阳性方向来进行分离的。
形成的蛋白区带可以用脂肪染料如苏丹黑或者油红染色，它们只用于脂蛋白染色。
在琼脂中可能会有附加的聚阴离子和二价阳离子沉淀。
脂蛋白沉淀带用光密度计可立即定量分析。
脂蛋白区带也可以被切开后重新溶解，对各区带进行胆固醇浓度的直接酶法检测。
另外，有报道在用薄层琼脂糖凝胶上进行电泳分离后，可直接检测各脂蛋白组分中的胆固醇含量的方法。
操作方法
(1)将缓冲液加入电泳槽内，调节两侧槽内的缓冲液，使其处于同一平面。
(2)醋酸纤维素薄膜的准备：取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线，做点样标记。
编号，并标明正、负极后，将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡，待充分浸透后(一般为20min)取出，夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。
(3)将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。
用微量吸管吸取无溶血血清3～5μl于横线处沿横线加样，样品应与薄膜的边缘保
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21生物化学实验--琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白
21 生物化学实验--琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白【目的】1. 掌握琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白的实验原理和操作方法。
2. 熟悉血清脂蛋白改变在临床上的重要意义。
【原理】电泳是指带电颗粒在电场的作用下，向着与其自身所带电荷相反的电极移动的现象。
根据电泳支持物的不同，血清脂蛋白电泳可分为滤纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四类。
由于各种脂蛋白所含载脂蛋白和脂类的种类及数量不同，分子量大小相差较大，并且在一定 pH 值溶液中所带电荷量不同，电泳移动的速度必然有差别，因此，通过电泳可以将不同种类的血清脂蛋白彼此分离。
血清脂蛋白经苏丹黑 B 预染后，以琼脂糖为载体，在 pH 8.6 巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带(图 3-9 )。
正常人空腹状态下，血清脂蛋白电泳后可出现三条区带，从阳极到阴极依次为α- 脂蛋白带、前β- 脂蛋白带及β- 脂蛋白带。
点样槽处不会出现乳糜微粒，有时前β- 脂蛋白也显示不出来。
区带的宽窄及颜色的深浅粗略地反应了各种脂蛋白的量。
另外，可以将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。
或者，将电泳后凝胶板上各区带切下，比色定量分析出各种脂蛋白的百分比含量。
图 3-9 预染血清脂蛋白电泳图谱【器材】1 (电泳仪2 (恒温水浴箱3 (离心机4 (微量加样器5 (烫槽器6 (载玻片7 (扫描仪8 (分光光度计9 (小号试管10 (吸管11 (纱布12 (烘箱【试剂】1 (电泳缓冲液( pH8.6 ，离子强度 0.075 的巴比妥缓冲液) 称取巴比妥钠15.458g ，巴比妥 2.768g ，乙二胺四乙酸( EDTA ) 0.29g ，加适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。
2 (凝胶缓冲液( pH8.6 三羟甲基氨基甲烷缓冲液)称取三羟甲基氨基甲烷 1.212g ， EDTA 0.29g ， NaCl 5.85g ，用适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。
血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳.
实验五血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
[原理]血清脂蛋白经饱和乙酰苏丹黑B染色后，以琼脂糖凝胶为载体，在pH8.6
巴比妥缓冲液中电泳分离，各种脂蛋白将分成不同区带。
[器材]
1.玻片
2.水平式电泳仪
[试剂]
1.0.5%琼脂糖（Agarose）溶液：称取0.5g琼脂糖，加巴比妥缓冲液100ml，盛于三角烧杯中，置沸水浴中煮沸溶解，备用。
2.新鲜血清（无溶血）
3.pH8.6、I=0.075 巴比妥缓冲液:称取15.4g巴比妥钠，2.76g巴比妥，0.292gEDTA，以水溶解后加至100ml，调pH至8.6，4℃保存。
4.苏丹黑B染色液：苏丹黑B 100mg，异丙醇10ml，混合。
置37℃水浴使之充分溶解后，离心取上清液置室温备用。
[操作]
1. 制板
配制0.5%的琼脂糖或预先配好置4℃冰箱，用时置沸水溶解，再冷却到50℃～60℃，取约4ml琼脂糖迅速铺在玻璃片上，然后放上开槽器（注意：①开
槽放在中央，距一侧1.5cm处；②避免产生气泡），静置室温待凝固，把开槽器
小心取下，样品槽即制成。
2. 加样
取预染血清20 l加入样品槽（预染血清：血清0.2ml + 苏丹黑B染色液
0.02ml）
3. 电泳
将载有琼脂糖凝胶玻片（已加血清样品）放在电泳槽中，槽内倒入巴比妥缓
冲液，用四层纱布搭板，加样端接负极，电压120V，待最前端区带泳动至玻片
2/3处时可终止电泳，观察实验结果。
[参考值]
正常人血清脂蛋白可分出三条区带：
β脂蛋白（占55%，着色最深）
前β脂蛋白（占15%，着色最浅）α脂蛋白（占30～40%，着色居中）在原点处应无乳糜微粒可见。
血清脂蛋白琼脂糖电泳实验报告
血清脂蛋白琼脂糖电泳实验报告实验报告：血清脂蛋白琼脂糖电泳
摘要：
本实验使用琼脂糖电泳技术对血清脂蛋白进行分离和鉴定，通过比较样品和对照电泳结果，确定了不同类型的脂蛋白和其相应的含量。
结果表明，该方法可以有效地用于血清脂蛋白分离和定量分析。
材料与方法：
1.血清样品：收集健康成年人血清样品20份，存放在冰箱中备用。
2.琼脂糖：选用pH为8.6的琼脂糖。
3.电泳仪器：选用四铜板平板电泳仪。
实验步骤：
1.准备样品：将收集的血清样品离心，取上清液。
2.制备琼脂糖凝胶：依据琼脂糖的说明书进行制备。
3.制备样品及对照混合液：将不同类型的脂蛋白添加至混合液
中制备出不同类型的样品和对照混合液。
4.样品电泳：将样品和对照混合液置于琼脂糖凝胶孔中，进行
电泳。
5.染色：电泳结束后，将琼脂糖凝胶进行染色，观察分离和相
对含量情况。
结果与分析：
通过本实验的脂蛋白琼脂糖电泳实验结果，可以看出不同类型
的脂蛋白呈现明显的分离带，其次序为VLDL、IDL、LDL、HDL。
与对照电泳结果相比较，样品中不同类型脂蛋白的含量亦得出。
结论：
本实验使用琼脂糖电泳技术可有效应用于血清脂蛋白的分离与定量分析。
在血清脂蛋白鉴定与分类方面具有一定的临床应用价值。
琼脂糖凝胶电泳分离血浆脂蛋白
复习思考题
• 名词解释 1.迁移率 2.电渗 3.电泳 • 问答题 1.影响电泳迁移率的因素有哪些？ 2.试述琼脂糖凝胶电泳分离脂蛋白的原理。
参
人民卫生出版社 《电泳》科学出版社
考
周新
书
主编
目
第三版
《临床生物化学及生物化学检验》
何忠效
张树政
主编
《蛋白质电泳实验技术》
科学出版社 汪家政
郭尧君 范敏 主编
D-半乳糖
3，6-脱水-L-半乳糖
琼脂糖链依分子内和分子间氢键及其它力的作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型 凝胶。
琼脂糖凝胶的特点
（一）优点 1.因不含硫酸根和羧基，几乎消除了琼脂的电渗 2.对蛋白质吸附极微，故无拖尾现象。 3. 凝胶结构均匀，孔径较大，可用来分离酶的复合 物、核酸、病毒 等大分子物质。 4.透明度较好，可直接或干燥成薄膜后进行染色。 5. 不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量 测定 6.有热可逆性
（三）结 构 特 征
CM 甘油三脂 胆固醇 蛋白质 带电量（Q） pH8.6为例 颗粒大小（mm） 密度 电泳速度 形态 多 多 少 少 大 低 慢 规则 不规则 VLDL LDL HDL 少 少 多 多 小 高 快
• pH 8.6 > pI ，各种脂蛋白均带负电，电 泳时由负极到正极； VLDL 为圆形，受阻力 小，LDL形态不规则，受阻力大，所以VLDL 跑在前。
《蛋白质技术手册》 科学出版社
脂类
少量糖
（二）分类 1. 按电泳法分 乳糜微粒（chylomicron,CM） -脂蛋白 （-位） 前-脂蛋白（2-位）） -脂蛋白 （1-位）
2. 按超速离心法分 乳糜微粒(chylomicron,CM) ( < 0.96 ) 极低密度脂蛋白 (0.961.006) (very low density lipoprotein, VLDL) 中间密度脂蛋白 (1.0061.019) (intermediate density lipoprotein, IDL) 低密度脂蛋白LDL(1.0191.063) (low density lipoprotein, LDL) 高密度脂蛋白HDL(1.0631.21) (high density lipoprotein, HDL)
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琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白
【目的】
1. 掌握琼脂糖凝胶电泳法分离预染血清脂蛋白的实验原理和操作方法。
2. 熟悉血清脂蛋白改变在临床上的重要意义。
【原理】
电泳是指带电颗粒在电场的作用下，向着与其自身所带电荷相反的电极移动的现象。
根据电泳支持物的不同，血清脂蛋白电泳可分为滤纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳四类。
由于各种脂蛋白所含载脂蛋白和脂类的种类及数量不同，分子量大小相差较大，并且在一定 pH 值溶液中所带电荷量不同，电泳移动的速度必然有差别，因此，通过电泳可以将不同种类的血清脂蛋白彼此分离。
血清脂蛋白经苏丹黑 B 预染后，以琼脂糖为载体，在 pH 8.6 巴比妥缓冲液中进行电泳，可将脂蛋白分成不同的区带（图 3-9 ）。
正常人空腹状态下，血清脂蛋白电泳后可出现三条区带，从阳极到阴极依次为α- 脂蛋白带、前β- 脂蛋白带及β- 脂蛋白带。
点样槽处不会出现乳糜微粒，有时前β- 脂蛋白也显示不出来。
区带的宽窄及颜色的深浅粗略地反应了各种脂蛋白的量。
另外，可以将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。
或者，将电泳后凝胶板上各区带切下，比色定量分析出各种脂蛋白的百分比含量。
图 3-9 预染血清脂蛋白电泳图谱
【器材】
1 ．电泳仪
2 ．恒温水浴箱
3 ．离心机
4 ．微量加样器
5 ．烫槽器
6 ．载玻片
7 ．扫描仪
8 ．分光光度计
9 ．小号试管
10 ．吸管
11 ．纱布
12 ．烘箱
【试剂】
1 ．电泳缓冲液（ pH8.6 ，离子强度 0.075 的巴比妥缓冲液）
称取巴比妥钠 15.458g ，巴比妥 2.768g ，乙二胺四乙酸（ EDTA ） 0.29g ，加适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。
2 ．凝胶缓冲液（ pH8.6 三羟甲基氨基甲烷缓冲液）
称取三羟甲基氨基甲烷 1.212g ， EDTA 0.29g ， NaCl 5.85g ，用适量蒸馏水溶解后加至 1000ml 。
3 ．琼脂糖凝胶（ 1% ）
称取琼脂糖 1g ，溶于 50ml 凝胶缓冲液中，再加蒸馏水 50ml ，然后在水浴中加热至沸腾，待琼脂糖完全溶解后立即停止加热并分装于试管中，冰箱4℃ 保存，备用。
4 ．苏丹黑 B 染色液
将适量苏丹黑 B 加到无水乙醇中至饱和，震荡使之乙酰化，用前过滤。
5 ．固定液
取冰醋酸 5ml 加 75% 乙醇 95ml 。
6 ．预染血清
取空腹血清 0.18ml ，加苏丹黑 B 染色液 0.02ml ，混合后置于37℃ 水浴中染色 30min ， 2000r/min 离心约 5min 以除去悬浮于血清中的染料沉渣，取其上清液即为预染血清。
【操作】
1 ．制备琼脂糖凝胶板
将已配制好的 0.9~1% 琼脂糖凝胶于沸水浴中加热融化，用吸管吸取凝胶溶液浇注在水平放置的载玻片上，每片约 3ml 。
静置约 5~10min 即能凝固（天热时需延长时间，也可放入冰箱中数分钟加速凝固）。
在即时凝固的凝胶板一端约 2cm 处用烫槽器加热后稍用力下压使之下陷接近玻片，切忌勿透，用滤纸片吸干槽中水分。
2 ．加样
用微量加样器取预染血清约 15μl 注入凝胶板加样槽中。
3 ．电泳
将已加入预染血清的凝胶板水平移至电泳槽中，使加样端接在阴极一侧，用电泳槽缓冲液把四层纱布浸湿做成“ 引桥” ，敷于胶板的两端，各搭住凝胶板约1cm 左右，“ 引桥” 的另一端浸于电泳槽内的巴比妥缓冲液中，使血清样品扩散进入凝胶， 5min 后接通电源，电压 120~130V ，电流约为 3~4mA/ 凝胶板，电泳 40~50min ，待最前端区带电泳至玻片 2 ／ 3 处时即可终止电泳。
4 ．固定
将电泳后的凝胶板浸入固定液中固定约 20min ，以增强区带的不溶性和加强与染料的结合力。
5 ．漂洗与烘干
将固定后的凝胶板用自来水漂洗数次，然后置于80℃ 烘箱中烘干成薄片状保存或进行扫描定量。
6 ．定量测定
（ 1 ）扫描定量：将已烘干的凝胶片直接放到吸光度扫描仪上，通过扫描得出各种脂蛋白的百分比含量。
（ 2 ）比色定量：将电泳后凝胶板上各区带切下，另外取相当于区带宽窄的无色凝胶作为空白对照，分别移入盛有 3ml 蒸馏水的试管内，将各管同时置于沸水浴中 5min 溶解为透明澄清的溶液，稍冷却，用分光光度计，选波长 600nm ，分别记录各管吸光度值。
【计算】
血清某种脂蛋白占血清总脂蛋白的百分比，按以下公式计算：
【注意事项】
1 ．电泳样品应为新鲜的空腹血清。
2 ．加热溶化琼脂糖时，须防止水份蒸发过多。
琼脂糖凝胶最好随用随制，以免凝胶表面干燥，影响分离效果。
3 ．点样口要大小适宜，边缘整齐、光滑，否则会影响电泳图谱。
4 ．琼脂糖凝胶的浓度如果大于 1% ，β- 脂蛋白和前β- 脂蛋白不易分开；浓度过低，则凝胶的机械强度太低，不易操作。
5 ．浇注琼脂糖凝胶板要尽量使厚薄均一，否则会影响脂蛋白的分离效果。
6 ．将凝胶板放入电泳槽中，应切记与电力线平行、样品端置阴极、引桥纱布不能搭在样品上。
7 ．如果用一形状大小和小槽一样的有机玻璃片，在琼脂糖凝胶凝固前固定于适当位置上，当凝固后取出有机玻璃片，凝胶板上即留下小槽可直接加样。
8 ．正常人空腹血清各种脂蛋白百分比含量参考值见表 3-11 。
表 3-11 正常人空腹血清各种脂蛋白百分比含量
【思考题】
1 ．琼脂糖凝胶电泳的原理的优缺点是什么？
2 ．试比较血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳与预染血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳的原理与方法。
3 ．试分析前β- 脂蛋白与α- 脂蛋白含量改变分别对人体健康的影响。