寄生虫实验技术

定量透明法
蠕虫卵的检查及计数。 蠕虫卵的检查及计数。 将约4× 目尼龙网或金属筛网覆盖粪便， 将约 ×4cm的100目尼龙网或金属筛网覆盖粪便， 的 目尼龙网或金属筛网覆盖粪便 自筛网上刮取粪便， 自筛网上刮取粪便，填满置于载玻片上的定量板的 模孔。掀起定量板，将留下的粪样覆盖一含甘油－ 模孔。掀起定量板，将留下的粪样覆盖一含甘油－ 孔雀绿溶液的约为5.0～ 的玻璃纸条， 孔雀绿溶液的约为 ～2.6cm的玻璃纸条，展平加 的玻璃纸条 压后粪便铺成长椭圆形。 压后粪便铺成长椭圆形。经1～2h粪便透明后镜下 ～ 粪便透明后镜下 计数。 计数。 将所得虫卵数× ，再乘粪便性状系数， 将所得虫卵数×24，再乘粪便性状系数，即为每克 粪便虫卵数。 粪便虫卵数。
排泄物与分泌物等的检查
2．十二指肠液和胆汁：检查贾第鞭毛虫滋养体、 ．十二指肠液和胆汁：检查贾第鞭毛虫滋养体、 华支睾吸虫卵、肝片形吸血卵和布氏姜片虫卵等； 华支睾吸虫卵、肝片形吸血卵和布氏姜片虫卵等； 可滴于载玻片上加盖片后直接镜检。 可滴于载玻片上加盖片后直接镜检。 为提高寄生虫检出率，可加生理盐水稀释搅拌后， 为提高寄生虫检出率，可加生理盐水稀释搅拌后， 分装离心管， 离心5～ 分钟 分钟， 分装离心管，以2000rpm离心 ～10分钟，取沉渣 离心 涂片镜检。如过于粘稠，先加10％ 涂片镜检。如过于粘稠，先加 ％NaOH消化后再 消化后再 离心。 离心。
沉淀法
原虫包囊和蠕虫卵等比重大时效果较好。 原虫包囊和蠕虫卵等比重大时效果较好。 重力（离心）沉淀法：取粪便 ～ 重力（离心）沉淀法：取粪便20～30g，加 ， 水混悬后用2～ 层湿纱布过滤 滤液静置25 层湿纱布过滤； 水混悬后用 ～3层湿纱布过滤；滤液静置 分钟或离心（ 分钟， 分钟或离心（1500～2000rpm）1～2分钟， ～ ） ～ 分钟 重复洗涤直至上清液清澈为止。 重复洗涤直至上清液清澈为止。最后取沉渣 涂片镜检。 涂片镜检。 检查包囊时，换水间隔时间宜延长至约 。 检查包囊时，换水间隔时间宜延长至约6h。
排泄物与分泌物等的检查
3．尿 肾虫病等。一般离心后取沉渣镜检。 ． 肾虫病等。一般离心后取沉渣镜检。 乳糜尿时需加等量乙醚， 乳糜尿时需加等量乙醚，用力振荡使脂肪溶 于乙醚。然后除去脂肪层后离心， 于乙醚。然后除去脂肪层后离心，取沉渣镜 检。 4．阴道分泌物：伊氏锥虫、阴道毛滴虫等。 ．阴道分泌物：伊氏锥虫、阴道毛滴虫等。 直接涂片法。 直接涂片法。
其它器官组织检查
5. 皮屑检查：疥螨。用刀片刮取健康部和病患交界 皮屑检查：疥螨。 处的痂皮进行镜检（需出血）。 处的痂皮进行镜检（需出血）。 直接检查法：置平皿或黑纸上，曝晒或加热（ 直接检查法：置平皿或黑纸上，曝晒或加热（4050℃ ）， 分钟后， ℃ ），30-40分钟后，移去皮屑检查白色虫体。 分钟后 移去皮屑检查白色虫体。 显微镜镜检：置载玻片，滴加煤油、 ％ 显微镜镜检：置载玻片，滴加煤油、10％NaOH、 、 液体石蜡， ％甘油后， 液体石蜡，50％甘油后，上加另一载玻片按压后检 查。 虫体浓集法：置试管中，加入10％ 虫体浓集法：置试管中，加入 ％ NaOH后过夜或 后过夜或 加热使皮屑溶解，而后静置或离心（ 加热使皮屑溶解，而后静置或离心（2000rpm， ， 5min）使虫体沉淀后镜检。 ）使虫体沉淀后镜检。
厚涂片透明法
取约5mg粪便，置于载玻片上，覆以浸透甘 粪便，置于载玻片上， 取约 粪便 孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压， 油－孔雀绿溶液的玻璃纸片，轻压，使粪便 铺开。置于30～ ℃温箱中约半小时或25℃ 铺开。置于 ～36℃温箱中约半小时或 ℃ 小时。 约1小时。待粪膜稍干，即可镜检。 小时 待粪膜稍干，即可镜检。
试管滤纸培养法
也称钩蚴培养法。 也称钩蚴培养法。根据钩虫卵在适宜条件下可在短 时间内孵出幼虫的原理设计的方法。 时间内孵出幼虫的原理设计的方法。 加水约1ml于洁净试管内，将滤纸剪成与试管等宽 于洁净试管内， 加水约 于洁净试管内 但管稍长的T字型纸条 取粪便约0.2～ 字型纸条。 但管稍长的 字型纸条。取粪便约 ～0.4g，均匀 ， 地涂抹在纸条竖条的上部2／ 处 地涂抹在纸条竖条的上部 ／3处，再将纸条插入试 下端浸泡在水中，粪便不接触水面。 管，下端浸泡在水中，粪便不接触水面。在20～ ～ 30℃条件下培养 天后肉眼或放大镜检查试管底部。 天后肉眼或放大镜检查试管底部。 ℃条件下培养3天后肉眼或放大镜检查试管底部 钩蚴在水中作蛇形游动，虫体透明。 钩蚴在水中作蛇形游动，虫体透明。
适于肛周产卵（蛲虫），或肛门附近可发现虫卵 适于肛周产卵（蛲虫），或肛门附近可发现虫卵 ）， 带绦虫）的寄生虫虫卵检查法。 （带绦虫）的寄生虫虫卵检查法。 棉签拭子法：将湿棉签或角匙在肛门周围擦拭， 棉签拭子法：将湿棉签或角匙在肛门周围擦拭，随 后将其放入盛有饱和盐水的试管中充分溶解， 后将其放入盛有饱和盐水的试管中充分溶解，然后 取液面液体进行镜检，也可离心后取沉渣镜检。 取液面液体进行镜检，也可离心后取沉渣镜检。 透明胶带法：用长约 透明胶带法：用长约6cm，宽约 ，宽约2cm的透明胶带粘 的透明胶带粘 擦肛门周围皮肤，取下胶带，平贴在玻片上镜检。 擦肛门周围皮肤，取下胶带，平贴在玻片上镜检。
带绦虫孕节检查法
绦虫节片用清水洗净，置于两载玻片之间， 绦虫节片用清水洗净，置于两载玻片之间， 轻轻压平，对光观察内部结构， 轻轻压平，对光观察内部结构，并根据子宫 分支情况鉴定虫种。 分支情况鉴定虫种。 也可用注射器从孕节后端正中部插入子宫内 徐徐注射炭素墨汁或卡红， 徐徐注射炭素墨汁或卡红，待子宫分支显现 后计数。 后计数。
毛蚴促孵法
将沉淀法处理后的粪便沉渣置于三角瓶内， 将沉淀法处理后的粪便沉渣置于三角瓶内， 不加水，或将粪渣置于吸水纸上， 不加水，或将粪渣置于吸水纸上，再放在 20～30℃温箱中过液。检查时，加清水，2 ～ ℃温箱中过液。检查时，加清水， 小时后就可见到孵出的毛蚴。 小时后就可见到孵出的毛蚴。
肛门拭子检查法
淘虫检查法
考核驱虫疗效，粪便中淘取蠕虫鉴定计数。 考核驱虫疗效，粪便中淘取蠕虫鉴定计数。 取服药后24～ 小时的全部粪便 加水搅拌， 小时的全部粪便， 取服药后 ～72小时的全部粪便，加水搅拌， 用筛（ 目 或纱布滤出粪渣， 用筛（40目）或纱布滤出粪渣，经水反复冲 洗后，倒在盛有清水的大型玻皿内。 洗后，倒在盛有清水的大型玻皿内。 检查混杂在粪渣中的虫体时， 检查混杂在粪渣中的虫体时，应在玻皿下衬 以黑纸。 以黑纸。
排泄物与分泌物的检查
1．痰液 可查肺吸虫卵、棘球蚴的原头蚴、粪类 ． 可查肺吸虫卵、棘球蚴的原头蚴、 圆线虫幼虫、蛔蚴、钩蚴等。 圆线虫幼虫、蛔蚴、钩蚴等。 先用直接涂片法检查，阴性时改用浓集法。 先用直接涂片法检查，阴性时改用浓集法。 浓集法：收集多量痰液置玻璃杯中，加入等量 ％ 浓集法：收集多量痰液置玻璃杯中，加入等量10％ NaOH溶液，搅匀后置 ℃温箱内消化，待痰液变 溶液， 溶液 搅匀后置37℃温箱内消化， 为稀液时分装离心管内， 离心5～ 分 为稀液时分装离心管内，以1500rpm离心 ～10分 离心 钟，取沉渣涂片检查。 取沉渣涂片检查。
其它器官组织检查
4．肌肉压片检查：旋毛虫幼虫、猪囊尾蚴等。 ．肌肉压片检查：旋毛虫幼虫、猪囊尾蚴等。 从腓肠肌或肱或股二头肌取米粒大小的肌肉 或肌肉结节，置于载玻片上， 或肌肉结节，置于载玻片上，加50％甘油一 ％ 盖上另一载玻片均匀用力压紧， 滴，盖上另一载玻片均匀用力压紧，低倍镜 下观察。 下观察。 须立即检查，否则幼虫变得模糊，不易检出。 须立即检查，否则幼虫变得模糊，不易检出。 也可经组织固定后作切片染色检查。 也可经组织固定后作切片染色检查。
免疫学方法
浮聚法
利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮， 利用比重较大的液体，使原虫包囊或蠕虫卵上浮， 集中于液体表面。检查钩虫卵效果最好。 集中于液体表面。检查钩虫卵效果最好。 饱和盐水浮聚法：取黄豆粒大的粪便置于浮聚瓶中， 饱和盐水浮聚法：取黄豆粒大的粪便置于浮聚瓶中， 加入少量饱和盐水调匀， 加入少量饱和盐水调匀，再慢慢加入饱和盐水到液 面略高于瓶口但不溢出为止。在瓶口覆盖一载玻片， 面略高于瓶口但不溢出为止。在瓶口覆盖一载玻片， 静置15分钟后 将载玻片迅速提起翻转，镜检。 分钟后， 静置 分钟后，将载玻片迅速提起翻转，镜检。 可用硫酸锌或蔗糖代替饱和盐水。 可用硫酸锌或蔗糖代替饱和盐水。
其它器官组织检查
1．骨髓：wk.baidu.com什曼原虫无鞭毛体等。直接涂片； ．骨髓：利什曼原虫无鞭毛体等。直接涂片； 甲醇固定，染色，油镜检查。 甲醇固定，染色，油镜检查。 2．淋巴结：利什曼原虫、丝虫成虫：切面涂 ．淋巴结：利什曼原虫、丝虫成虫： 染色后镜检。 片，染色后镜检。 3．直肠粘膜：日本血吸虫卵及阿米巴滋养体 ．直肠粘膜： 从直肠粘膜病变组织取样， 等。从直肠粘膜病变组织取样，压片镜检或 染色镜检。 染色镜检。
虫卵计数法
斯陶尔（ 斯陶尔（Stoll）氏法。 ）氏法。 在三角烧瓶的颈部画56和 两个刻度。 在三角烧瓶的颈部画 和60ml两个刻度。先 两个刻度 溶液至56ml处，再加粪便 加0.1mol/L NaOH溶液至 溶液至 处 到60ml处，然后放进玻璃珠充分摇动混悬。 处 然后放进玻璃珠充分摇动混悬。 粪液置于载玻片， 取0.075或0.15ml粪液置于载玻片，镜下计算 或 粪液置于载玻片 虫卵数。乘以200或100得每克粪便虫卵数。 得每克粪便虫卵数。 虫卵数。乘以 或 得每克粪便虫卵数 雌虫数＝每克粪便虫卵数× 小时粪便克数 雌虫数＝每克粪便虫卵数×24小时粪便克数 / 已知雌虫每天排卵总数 成虫总数＝雌虫总数× 成虫总数＝雌虫总数×2
寄生虫实验技术
病原学检查 血清学检查
病原学检查
粪便检查 血液检查法 排泄物与分泌物等的检查 其它组织器官检查
粪便检查
直接涂片法 浓聚法 沉淀法 浮聚法 肛门拭子检查法 虫卵计数法 淘虫检查法 试管滤纸检查法 定量透明法 带绦虫孕节检查法 厚涂片透明法 毛蚴孵化法
直接涂片法
检查蠕虫卵、原虫包囊和滋养体。 检查蠕虫卵、原虫包囊和滋养体。 简便，连作 次以提高检出率 次以提高检出率。 简便，连作3次以提高检出率。 滴一滴生理盐水于载玻片，用牙签挑取绿豆大小的粪块， 滴一滴生理盐水于载玻片，用牙签挑取绿豆大小的粪块， 在生理盐水中涂抹均匀；厚度以可辨认下面的字迹为宜。 在生理盐水中涂抹均匀；厚度以可辨认下面的字迹为宜。 也可固定后染色。一般在低倍镜下检查， 也可固定后染色。一般在低倍镜下检查，用高倍镜观察 时加盖片。 时加盖片。 检查包囊时用碘液。 检查包囊时用碘液。 检查隐孢子虫卵囊时用金胺酚改良抗酸染色法。 检查隐孢子虫卵囊时用金胺酚改良抗酸染色法。
毛蚴孵化法
在适宜温度的清水中， 在适宜温度的清水中，血吸虫卵内的毛蚴短时间 内可孵出。 内可孵出。 取粪便约30g，先经沉淀法浓集，将粪便沉渣倒入 ，先经沉淀法浓集， 取粪便约 三角烧瓶内，加清水至瓶口， 三角烧瓶内，加清水至瓶口，在20～30℃的条件 ～ ℃ 下经4～ 小时后肉眼或放大镜观察结果 小时后肉眼或放大镜观察结果。 下经 ～6小时后肉眼或放大镜观察结果。如水面 下有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。 下有白色点状物作直线来往游动，即是毛蚴。必 要时也可用吸管将毛蚴吸出镜检。 要时也可用吸管将毛蚴吸出镜检。
血液检查
诊断疟疾、丝虫病。 诊断疟疾、丝虫病。 皮肤消毒后用取血针刺破皮肤，挤出血滴， 皮肤消毒后用取血针刺破皮肤，挤出血滴，用载玻 片蘸取。然后用一边缘光滑的载片为推片， 片蘸取。然后用一边缘光滑的载片为推片，将血滴 推成血膜。 推成血膜。 充分晾干后，用甲醇或无水酒精对血膜进行固定。 充分晾干后，用甲醇或无水酒精对血膜进行固定。 然后进行染色，晾干后镜检。 然后进行染色，晾干后镜检。