核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
核蛋白提取试剂盒说明书
核蛋白提取试剂盒说明书货号：R0050规格：50T/100T 产品内容：保存：核/浆蛋白抽提试剂2-8℃保存，PMSF 于-20℃保存。
产品简介：本试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。
整个过程只需约60分钟就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。
得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。
本试剂盒通过浆蛋白抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。
然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒可以抽提50/100个样品（每个样品约2×106个Hela 细胞或40mg 组织）。
操作方法（仅供参考）：*裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
一、对于体外培养细胞：1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF ，使PMSF 的最终浓度为1mM 。
PMSF 需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM 。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。
500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500g 离心2～3分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20μL 细胞沉淀加入200μL 浆蛋白抽提试剂（2×106个细胞沉淀的体积约20μL 或40mg ）。
5．用移液器吹打或高速涡旋15秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。
细胞沉淀分散不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10秒，4℃12000～16000g 离心10分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE 、Western 等实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
碧云天 P0028细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
使用本试剂盒抽提到的细胞核蛋白与细胞浆蛋白均可直接用碧云天生产的BCA蛋白浓度测定试剂盒(P0009/P0010/P0010S/ P0011/P0012/P0012S)测定蛋白浓度。但不适合用Bradford法测定蛋白浓度。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. Yuan Q, Li PD, Li BH, Yang XZ, Xu SB, Liu XH, Zhou FX, Zhang WJ. Differential IL-4/Stat6 activities correlate with differential expression of regulatory genes SOCS-1, SHP-1, and PP2A in colon cancer cells. J Cancer Res Clin Oncol. 2008 Jun 7.
6. Chen G, Shen X, Yao J, Chen F, Lin X, Qiao Y, You T, Lin F, Fang X, Zou X, Lin L. Ablation of NF-kappaB expression by small interference RNA prevents the dysfunction of human umbilical vein endothelial cells induced by high glucose. Endocrine. 2009 Feb;35(1):63-74. Epub 2008 Nov 8.
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at -20℃for one yearExpire date：一、试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。
制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。
提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
二、试剂盒组份组份KGP150 （50 test）KGP1100 （100储存温度test）Buffer A 25 mL 25 mL ×24℃Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃DTT 50μL100μL-20℃蛋白酶抑制剂250μL500μL-20℃PMSF（100mM）400μL800μL-20℃三、操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中；2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL BufferA加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min；6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mLBuffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
细胞核-胞浆分离方法
本试剂盒提取的胞核和胞浆组分仍保持其生化功能，适合下游分析如转录活性，RNA 拼接，gel－shift 分析，报告分析，酶活性分析和 WB 等。
使用方法： 1. 取 5-10×106 个细胞①，在 4℃，500×g 条件下离心 2-3 分钟，小心吸取培养基， 尽可能吸干，收集细胞。 2. 用冷 PBS 洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。 3. 在细胞沉淀中加入 200μl 冷的提取液 A，涡旋振荡混匀或吹打混匀，置冰上振 荡 30 分钟。（没有振荡条件的话，也可冰上静置，中间每隔 5 分钟涡旋振荡或 吹打混匀。） 4. 在 4℃，1200×g 条件下离心 5 分钟。 5. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到胞浆组分，请置冰箱保存备用或直 接用于下游实验。 6. 沉淀用 PBS 洗涤一次，然后在 4℃，2000×g 条件下离心 5 分钟，弃上清。 7. 沉淀为细胞核组分，将沉淀用 200ul 保存液 B 重悬后保存备用或直接用于下游 实验。
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细胞核/胞浆分离试剂盒
产品组成：
产品组成 规格
提取液 A 核保存液 B 蛋白酶抑制剂混合物
BB-36021-1 50T 10ml 10ml 250ul
BB-36021-2 100T 20ml 20ml 500ul
储存条件： 提取液 2-8℃保存； 蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期： 一年。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
产品简介： 贝博细胞核/胞浆分离试剂盒可以从哺乳动物细胞中分离细胞核和胞浆组分。此试剂
膜-胞浆蛋白提取方法
膜-胞浆蛋白提取方法膜-胞浆蛋白提取方法膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格试剂 A 试剂 B 试剂 C蛋白酶抑制剂混合物蛋白稳定剂BB-3111-150T 10ml 20ml 10ml 250μl 100ulBB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul储存条件：蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。
产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承当各种生物功能，在疾病的发生、开展过程中扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析^p 及质谱分析^p 等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和外表活性剂增溶。
去污剂处理睬使膜蛋白丧失其天然构造，因此阻碍了膜蛋白的功能研究。
贝博膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。
本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少穿插污染。
提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析^p 、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
应用实例：1 4 4图片说明：用膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提取细胞样本的'SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。
图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。
图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
使用方法：A．细胞蛋白提取①1. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心汲取培养基，尽可能吸干，搜集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞样品中参加200μl冷的试剂 A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，2ul蛋白稳定剂，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒说明书
胞浆蛋白—核蛋白抽提试剂盒产品编号产品名称包装SINP001 胞浆－核蛋白抽提试剂盒50×产品简介：细胞核和细胞浆目前成为研究细胞组分的两个热点，获得高浓度的细胞核蛋白和细胞浆蛋白成为得到好的研究结果的重要实验过程。
本试剂盒主要原理是在低渗透压条件下，使细胞充分膨胀，然后破坏细胞膜，释放出细胞浆蛋白，离心得到细胞核沉淀。
最后通过高盐的细胞核蛋白抽提试剂抽提得到细胞核蛋白。
本试剂盒是本公司非放射性EMSA试剂盒（cat; SIDET001, SIDET003, SIDET004,）实验成功的重要部分，经BCA测定24cm2贴壁细胞(或50ml规格培养瓶养的悬浮细胞)抽提物，核蛋白浓度约为 2.5ug/ul或更高。
抽提得到的蛋白可以用于Western，EMSA，footprinting，报告基因检测以及酶活力测定等后续操作。
本试剂盒可足够您进行50次抽提操作！包装清单：试剂包装总量5X Buffer A 1瓶35ml/瓶2X Buffer B1支 1.5ml/支Solution I（溶液I）1支 1.75ml/支Solution II（溶液II）1支 1.75ml/支Solution III（溶液III）1支 1.5ml/支PMSF Solution 1支0.85ml/支User Manual (说明书)1份1份/Kit保存温度： 4℃保存。
Ⅰ.准备抽提试剂：按照下列方法制备胞浆－核蛋白抽提液：1.制备3ml胞浆蛋白裂解液I ：试剂体积5X Buffer A0.6mlSolution I（溶液I）30ulSolution II（溶液II）30ulPMSF Solution 15uldd-H2O 2.325ml总体积 3.0ml注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
2.制备1.02ml胞浆蛋白裂解液II：试剂体积Solution III（溶液III）20ul胞浆蛋白裂解液I 1.0ml总体积 1.02ml3.制备1ml核裂解液：试剂体积2X Buffer B25ulSolution I（溶液I）0.5ulSolution II（溶液II）0.5ulPMSF Solution0.25uldd-H2O23.75ul总体积 50ul注：PMSF Solution须在抽提试剂加入到样品中前2-3分钟内加入。
胞浆、胞核提取(细胞)
胞浆/胞核提取（细胞）
一、胞浆蛋白的提取
1、估计细胞的量
5*1051*1065*106
Cytosol Extraction Buffer A(ul) 25 50-100 300-500 Cytosol Extraction Buffer B(ul) 1.2-1.5 3-6 18-30
Nuclear Extraction Buffer (ul) 5-10 20 100
2、每个培养皿PBS洗两次，吸干PBS（冰上操作）
3、每个培养皿加入150ul CEB-A,把细胞刮下，每个皿刮80次，直到无滑腻感，说明细胞全部刮下，将细胞转入EP管，注射器抽吸10次左右，充分裂解细胞
4、冰上孵育20min,每5min震荡10s
5、离心1000*g，4℃，5min,把上清液吸入新EP管内，为胞浆蛋白，沉淀物包含粗制核蛋白（尽量把上清吸干净）
一、细胞胞核蛋白的提取
1、粗制核蛋白由上述步骤5得到，去除膜成分，用100ul CEB-A加入5ul CEB-B，漩涡震荡10s，冰上孵育1min，在低温离心机中以1000*g，4℃，5min,倒上清，并收集细胞碎片
2、用100ul CEB-A清洗细胞核碎片，1000*g，4℃，5min,去上清
3、加入70-100ul 冰的NEB转移到粗制细胞核中涡旋
4、将EP管放到冰上孵育30min，并间隔震荡5次
5、1200*g，4℃，5min
6、将含有核蛋白的上清液转移到新的离心管中，-20℃保存。
蛋白提取试剂盒选择指南
蛋白提取试剂盒选择指南蛋白提取试剂盒选择指南样本动物细菌植物真菌酵母昆虫应用I II I II I II I II I II I II蛋白部位应用I：WB、1D电泳、活性检测、纯化；应用II：等点聚焦、2D电泳、质谱总蛋白3101 3181 3123/8 3182 3124 3183 3127 3189 3125 3185 3126 3193膜蛋白3103/16 3188 3151 3187 3152 3184 3156 3190 3157 3192 3153核蛋白3102 3154 3159 3168胞浆蛋白3113 3180磷酸化蛋白3105/8 G+菌3129 核/质3169 藻类-总3131 核/质31681 液体-总3133糖蛋白3107 G-菌3130 叶绿体3179 藻类-膜3170 土壤-总3132膜/胞浆/核分步提取3104 细菌外膜31512 叶绿体膜3175 血浆3137膜/胞浆3111 线粒体3172 血清3138核/胞浆3112 线粒体膜3173线粒体3176/7线粒体膜3158核膜3174石蜡包埋3164甲醛固定3165冻存样品31211 脑组织31227骨组织总蛋白3161 脂肪组织31226蛋白提取试剂盒选择指南相关产品：蛋白提取BB-3101 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒BB-3102 BestBio贝博生物核蛋白提取试剂盒BB-3103 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒BB-3104 BestBio贝博生物膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒BB-31042 BestBio贝博生物细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒BB-3105 BestBio贝博生物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-31051 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-3106 BestBio贝博生物活性蛋白提取试剂盒BB-3108 BestBio贝博生物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-31081 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-3109 BestBio贝博生物糖蛋白富集试剂盒BB-3111 BestBio贝博生物膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3112 BestBio贝博生物核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3113 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒BB-3114 BestBio贝博生物细胞跨膜蛋白提取试剂盒BB-3115 BestBio贝博生物细胞核蛋白提取试剂盒BB-31152 BestBio贝博生物组织核蛋白提取试剂盒BB-3116 BestBio贝博生物细胞膜蛋白提取试剂盒BB-31161 BestBio贝博生物细胞质膜蛋白提取试剂盒BB-3117 BestBio贝博生物组蛋白提取试剂盒BB-31171 BestBio贝博生物植物组蛋白提取试剂盒BB-31172 BestBio贝博生物昆虫组蛋白提取试剂盒BB-31173 BestBio贝博生物酵母组蛋白提取试剂盒BB-3118 BestBio贝博生物胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒BB-3121 BestBio贝博生物细胞蛋白提取试剂盒BB-31211 BestBio贝博生物冻存细胞蛋白提取试剂盒BB-3122 BestBio贝博生物组织蛋白提取试剂盒BB-31226 BestBio贝博生物脂肪组织蛋白提取试剂盒BB-31227 BestBio贝博生物脑组织蛋白提取试剂盒BB-3123 BestBio贝博生物细菌蛋白提取试剂盒BB-3124 BestBio贝博生物植物蛋白提取试剂盒BB-31241 BestBio贝博生物植物根茎蛋白提取试剂盒BB-3125 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒BB-3126 BestBio贝博生物昆虫蛋白提取试剂盒BB-31262 BestBio贝博生物昆虫胞浆蛋白提取试剂盒BB-3127 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-31272 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-3128 BestBio贝博生物大肠杆菌蛋白提取试剂盒BB-3129 BestBio贝博生物革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒BB-3130 BestBio贝博生物革兰氏阴性菌蛋白提取试剂盒BB-3131 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒BB-3132 BestBio贝博生物土壤蛋白提取试剂盒BB-3133 BestBio贝博生物液体样本蛋白提取试剂盒BB-31332 BestBio贝博生物乳清蛋白提取试剂盒BB-3134 BestBio贝博生物白细胞蛋白提取试剂盒BB-3135 BestBio贝博生物血液单核细胞蛋白提取试剂盒蛋白提取试剂盒选择指南BB-3136 BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒BB-3137 BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒BB-3138 BestBio贝博生物血清蛋白提取试剂盒BB-3139 BestBio贝博生物血细胞蛋白提取试剂盒BB-3140 BestBio贝博生物全血蛋白提取试剂盒BB-31401 BestBio贝博生物血小板蛋白提取试剂盒BB-31452 BestBio贝博生物溶酶体蛋白提取试剂盒BB-31453 BestBio贝博生物高尔基体蛋白提取试剂盒BB-31454 BestBio贝博生物内质网蛋白提取试剂盒BB-3141 BestBio贝博生物厚壁微生物蛋白提取试剂盒BB-3151 BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒BB-31511 BestBio贝博生物细菌跨膜蛋白提取试剂盒BB-31512 BestBio贝博生物细菌外膜蛋白提取试剂盒BB-31515 BestBio贝博生物支原体膜蛋白提取试剂盒BB-3152 BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒BB-31521 BestBio贝博生物植物跨膜蛋白提取试剂盒BB-3153 BestBio贝博生物昆虫膜蛋白提取试剂盒BB-31531 BestBio贝博生物昆虫跨膜蛋白提取试剂盒BB-3154 BestBio贝博生物植物核蛋白提取试剂盒BB-3155 BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒BB-3156 BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒BB-3157 BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒BB-31572 BestBio贝博生物酵母膜蛋白/细胞质蛋白提取试剂盒BB-3158 BestBio贝博生物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3159 BestBio贝博生物真菌核蛋白提取试剂盒BB-3160 BestBio贝博生物大肠杆菌膜蛋白提取试剂盒BB-3161 BestBio贝博生物骨组织蛋白提取试剂盒BB-3162 BestBio贝博生物高脂肪样本蛋白提取试剂盒BB-3163 BestBio贝博生物神经元蛋白提取试剂盒BB-3164 BestBio贝博生物石蜡包埋组织蛋白提取试剂盒BB-3165 BestBio贝博生物甲醛固定组织蛋白提取试剂盒BB-31651 BestBio贝博生物固定细胞蛋白提取试剂盒BB-3166 BestBio贝博生物冻存样本核蛋白提取试剂盒BB-3167 BestBio贝博生物植物核蛋白/细胞器蛋白提取试剂盒BB-3168 BestBio贝博生物酵母核蛋白提取试剂盒BB-31681 BestBio贝博生物酵母核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3169 BestBio贝博生物植物核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒BB-3170 BestBio贝博生物藻类膜蛋白提取试剂盒BB-3171 BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒BB-31711 BestBio贝博生物组织线粒体蛋白提取试剂盒BB-3172 BestBio贝博生物植物线粒体蛋白提取试剂盒BB-31721 BestBio贝博生物丝状真菌线粒体蛋白提取试剂盒BB-3173 BestBio贝博生物植物线粒体膜蛋白提取试剂盒BB-3174 BestBio贝博生物细胞核膜蛋白提取试剂盒BB-3175 BestBio贝博生物植物叶绿体膜蛋白提取试剂盒BB-3176 BestBio贝博生物线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3177 BestBio贝博生物组织线粒体/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3178 BestBio贝博生物线粒体膜/胞浆蛋白提取试剂盒BB-3179 BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒BB-31791 BestBio贝博生物植物膜蛋白/叶绿体蛋白提取试剂盒BB-3180 BestBio贝博生物植物胞质蛋白提取试剂盒BB-3181 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）蛋白提取试剂盒选择指南BB-31812 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31813 BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3182 BestBio贝博生物细菌总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3183 BestBio贝博生物植物总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31836 BestBio贝博生物叶绿体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3184 BestBio贝博生物植物质膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31841 BestBio贝博生物植物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3185 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3186 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3187 BestBio贝博生物细菌膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3188 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3189 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3190 BestBio贝博生物真菌膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3191 BestBio贝博生物线粒体蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3192 BestBio贝博生物酵母膜蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3193 BestBio贝博生物昆虫总蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-3194 BestBio贝博生物丝状真菌蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31951 BestBio贝博生物血浆蛋白提取试剂盒（2D电泳用）BB-31961 BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31962 BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31963 BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31964 BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31965 BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31966 BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31967 BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31968 BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法）BB-31981 BestBio贝博生物细胞蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31982 BestBio贝博生物组织蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31983 BestBio贝博生物植物蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31984 BestBio贝博生物细菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31985 BestBio贝博生物昆虫蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31986 BestBio贝博生物酵母蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31987 BestBio贝博生物血液蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）BB-31988 BestBio贝博生物真菌蛋白快速提取试剂盒（离心柱法，2D电泳用）。
蛋白提取制备相关产品_百替生物
蛋白提取制备相关产品蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提, 100 extractions)S1250 100 次提取 700 元概述：实体组织如大脑富含磷脂、神经纤维或血管壁含大量结缔组织、而脂肪则有大量油脂，常规方法难以有效从这些组织提取蛋白。
蛋白抽提试剂盒-I用于从各种实体软组织或细胞快速提取总蛋白。
用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织，或用裂解结合缓冲液振荡重悬培养细胞，然后加入抽提试剂去除非蛋白成分，离心分离即可得到总蛋白；简便高效，30-60分钟内完成提取。
试剂盒可进行100次提取，可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备。
每次可提取1～100 mg实体组织或1 x 107细胞。
一次从10-100mg实体组织提取的总蛋白的量通常足以进行数十次Western Blot或免疫沉淀。
适用：(1) 各种实体软组织。
如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等。
(2) 各种原代和传代细胞。
组成：(1) 裂解-结合缓冲液100 ml；(2) 抽提试剂100 ml。
每毫升裂解缓冲液和抽提试剂可提取100 mg组织或1 x 107细胞。
储存：室温2年。
蛋白抽提试剂盒-II (液体样品蛋白抽提和回收，100 extraction)S1255 100 次提取 480 元200 次提取 780 元概述：蛋白抽提试剂盒-II 用于液体样品中蛋白浓缩、提取、或脱盐、脱去垢剂、脱还原剂等。
适用于各种液体样品(10 µl～1000 ml)，如蛋白溶液、胞浆胞核蛋白提取液、细胞或微生物培养基上清液、血液、尿液、脑脊液等各种体液。
蛋白回收率95%，远高于经典的丙酮或三氯醋酸沉淀法，且可有效去除样品中的脂质，不影响后续SDS-PAGE和Western Blot实验。
可用1.5ml离心管微量提取也可大规模制备，15分钟完成提取，简便高效。
该试剂盒也适于从细胞悬液提取总蛋白。
Thermo-Scientific-NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒
Thermo-Scientific-NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒描述Thermo Scientific NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒提供了高效的细胞裂解和抽提方法，可在两个小时之内完成胞浆蛋白与核蛋白的分离操作。
NE-PER核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒的特性：• 快速—在两个小时之内获得胞核与胞浆内的可溶性蛋白组分• 可靠—NE-PER试剂盒已经被950篇以上的发表文献引用• 通用–适用于培养细胞或组织（仅适用于新鲜样本）的核蛋白抽提• 可扩展—两种规格试剂盒，满足从细胞和组织中抽提样本的应用需求• 方便—操作简单，无需超速梯度离心• 兼容性好—获得样本适合于多种下游应用，包括免疫印迹、凝胶迁移分析、蛋白分析、报告基因分析以及酶活性分析NE-PER试剂盒为用户提供了高效的核蛋白抽提方法，用户只需拥有台式微量离心机、离心管和移液器，进行简单的分步式细胞裂解及核蛋白与胞浆蛋白离心分离即可。
NE-PER试剂盒能够高效地将胞浆蛋白与核蛋白溶解和分离为不同组分，交叉污染以及基因组DNA/mRNA 的干扰均降到了最低。
一旦经过脱盐或稀释，分离后的蛋白即可用于免疫分析和蛋白相互作用实验，如迁移率分析(EMSA)、免疫共沉淀(Co-IP)和拉下实验。
分离胞核和制备核蛋白抽提物的方法很多，但大多数制备核蛋白抽提物的制备方法都很耗时，并需要机械匀浆、冻融循环、反复离心或透析，而这些都可能影响核蛋白的完整性。
NE-PER 核蛋白-胞浆蛋白抽提试剂盒使用了基于试剂的分离方案，能够分步裂解细胞并从胞浆中分离出完整的细胞核，然后再从基因组DNA与mRNA中抽提核蛋白。
这一温和的过程可在两小时之内完成，且使用培养细胞时仅需标准的桌台式离心机即可。
此外，用户还可以从细胞培养物或组织样本中分离得到具有活性的核蛋白与胞浆蛋白。
本试剂盒能够从两百万个细胞中提出200至500µg胞浆蛋白和100至200µg的核蛋白（浓度为1mg/mL）。
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒 说明书
细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
产品名称 细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
包装 100次
产品简介：
¾ 碧云天的细胞膜蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒(Membrane and Cytosol Protein Extraction Kit)提供了一种比较简单、方便地 从培养细胞或组织中抽提细胞膜蛋白和细胞浆蛋白的方法。抽提的膜蛋白不仅包括质膜上的膜蛋白，也包括线粒体膜、 内质网膜和高尔基体膜等上的膜蛋白。
¾ 膜蛋白抽提试剂中含有蛋白酶抑制剂、磷酸酯酶抑制剂和EDTA等，后续不适合用于蛋白酶、磷酸酯酶等受这些抑制剂影 响的酶的活性测定，但抽提获得的膜蛋白或细胞浆蛋白适合用于检测蛋白的磷酸化水平。
¾ 本试剂盒按照本说明书的操作步骤可以抽提100个细胞或组织样品。
包装清单：
产品编号 P0033-1 P0033-2
沉淀导致上清样品被污染。 7. 抽提膜蛋白：4℃，14000g离心10秒，尽最大努力吸尽上清。可以轻轻触碰到沉淀，甚至吸走很少量的沉淀。加入膜
蛋白抽提试剂B 200微升(如有必要，也可以加大到300微升)，最高速剧烈Vortex 5秒重悬沉淀，冰浴5-10分钟。重复前 述步骤的vortex和冰浴孵育1-2次，以充分抽提膜蛋白。随后，4℃，14000g离心5分钟，收集上清即为细胞膜蛋白溶 液。可-70℃保存备用。对于一些有特殊用途的膜蛋白，可自行配制适当的膜蛋白抽提试剂进行膜蛋白抽提。
2. 准备细胞或组织样品： a. 对于细胞 (1) 收集细胞 对于贴壁细胞：培养约2000-5000万细胞，用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞或用含有EDTA但不含胰酶的细胞消化 液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。尽量避 免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的膜蛋白。 对于悬浮细胞：培养约2000-5000万细胞，直接离心收集细胞，吸除上清，留下细胞沉淀备用。 (2) 洗涤细胞：用适量冰浴预冷的PBS轻轻重悬细胞沉淀，取少量细胞用于计数，剩余细胞4℃，600g离心5分钟沉淀 细胞。弃上清，随后4℃，600g离心1分钟，以沉淀离心管管壁上的残留液体并进一步沉淀细胞，尽最大努力吸尽残 留液体。 (3) 细胞预处理：把1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A加入至2000-5000万细胞中，轻轻并充分悬浮细胞， 冰浴放置10-15分钟。 b. 对于组织： 取约100毫克组织，用剪刀尽量小心剪切成细小的组织碎片。加入1毫升临用前添加了PMSF的膜蛋白抽提试剂A，轻 轻悬浮组织碎片，冰浴放置10-15分钟。注：如果组织样品比较少，也可以使用更少的组织量，例如30-50mg，后续 试剂的用量及操作步骤不变；组织用量较少时，最后获得的膜蛋白也较少。
胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒（真核细胞）
胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒（真核细胞）第一篇：胞浆蛋白核蛋白膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)胞浆蛋白/核蛋白/膜蛋白抽提试剂盒(真核细胞)(Catalog #DBI-1021;DBI-1022;Store kit at 4℃)描述: 本试剂盒提供了蛋白抽提试剂A，蛋白抽提抽提试剂B，蛋白抽提试剂C 三种具有独特组分的缓冲液。
所有试剂采用PIPES缓冲系统。
通过实验，可以得到：细胞胞浆蛋白（其中含有含有可溶性的骨架蛋白）；细胞膜蛋白（其中包含细胞质膜蛋白和细胞器膜蛋白）；细胞核蛋白；其最后剩余的沉淀为难溶性的胞质骨架和纤维蛋白。
提取方法简单，可靠，快速。
获得的各种部分蛋白纯度高，可用于PAGE 电泳、Western Blot、免疫共沉淀、EMSA等后续研究。
该试剂盒所得到的蛋白溶液适合用Bradeford法（DBI生物产品：DBI-1045,1046）蛋白定量和BCA方法（DBI生物产品：DBI-1047,1048）进行定量。
II 试剂盒组分: III.蛋白质抽提步骤: A.注意事项和试剂准备: • 打开试剂盒后，于4度保存蛋白抽提液；于-20度保存蛋白酶抑制剂，样品缓冲液（6×）。
• 使用前, 加10ul的蛋白酶抑制剂于1ml蛋白抽提试剂A中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——A)；加2ul的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂B中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——B)；加2ul 的蛋白酶抑制剂于200ul蛋白抽提试剂C中，使成为蛋白抽提混合试剂(该混合物被称为Extraction Buffer Mix ——C)；试剂盒组分DBI-1021 DBI-1022 包装 50 次100 次颜色蛋白抽提试剂A 蛋白抽提试剂A-1 蛋白抽提试剂B 蛋白抽提试剂C 混合型蛋白酶抑制剂(100×)SDS-PAGE 样品缓冲液(6×)50ml 500ul 50ml 25ml 1支 5支100ml 1000ul 100ml 50ml 1支 10支棕色棕色棕色棕色棕色绿色• 在试验过程中确保抽提混合物始终保存在在碎冰中。
WB干货丨返校后你必须要知道的WB样本前处理产品组合方案
WB干货丨返校后你必须要知道的WB样本前处理产品组合方案在五一黄金旅游季后，天气回暖。
在全国军民同心的共同努力下，疫情日渐好转，而在家隔离多日的小伙伴们对科研事业孜孜以求的精神“断崖式”增长。
在复工复学的大潮中，小伙伴们怀着激动的心情回到了心心念念的实验室，开启自己热爱的实验生涯。
有了成熟的蛋白样本前处理方法，WB实验就成功了一大半。
蛋白提取根据研究对象的不同，我们需要对细胞不同区域的相关蛋白进行深入研究，此时Abbkine的ExKine系列胞浆/胞膜/胞核等区域蛋白提取的试剂盒在科学家精益求精的科研态度下应运而生。
比如：ExKine™细胞核蛋白与胞浆蛋白提取试剂盒（KTP3001）；ExKine™总膜蛋白提取试剂盒（KTP3004）；ExKine™总蛋白提取试剂盒（KTP3006）；除了对细胞不同区域显微结构进行研究，我们的研究水平也会更深入地进入到细胞的亚显微结构。
要研究亚显微结构，首先我们的落脚点就在不同细胞器中的蛋白研究，科学家们将会把细胞质内结构相对独立的细胞器进行提取，再用温和的细胞裂解液（如：RIPA细胞裂解液）对提取的细胞器进行裂解，便可提取到纯净的不同细胞器蛋白。
再对该类蛋白进行定性定量的深入研究。
蛋白纯化随着基因重组技术的发展，越来越多的融合蛋白成为人们研究靶蛋白的一个重要手段。
而其中一个重要运用就是标签蛋白。
运用标签蛋白的抗原特异性强且对靶蛋白的结构功能几乎不存在影响这个特征，人们可以用标签蛋白纯化填料将带有相应标签的重组蛋白进行识别并分离出来。
由此，Purkine系列蛋白纯化工具应运而生。
比如：PurKine™组氨酸标签Ni【镍】-IDA树脂温馨提示：如果是不带标签的普通蛋白，则不需要以上操作，为避免蛋白降解，在细胞/组织裂解之后，直接进入第三步。
蛋白定量比如：蛋白质定量试剂盒（BCA法）K TD3001好了，关于WB实验的介绍就先到这里啦，下期我们再接着介绍哦。
【精编_推荐】胞核胞浆胞膜制备试剂盒
胞核胞浆胞膜制备试剂盒Nucl-Cyto-MemPreparationKit货号：P060004描述：从哺乳动物新鲜或冻存的组织块、贴壁或悬浮培养细胞中，制备细胞核、细胞膜与胞内质膜、细胞浆等三种主要亚细胞组分。
独特的试剂成分与优化的制备方案相结合，使胞核-胞膜-胞浆制备过程简单易行，无需特殊设备和超速离心，制备过程可在1小时内完成。
制备的细胞核、细胞浆组分纯度甚高，而且较少交叉污染。
单一的细胞膜的纯化是一个特殊问题，本试剂盒制备的胞膜是细胞膜和细胞器如线粒体、内质网、高尔基体及其质膜的混合物。
制备的细胞核是完整的未裂解的细胞核，但胞浆组分为可溶性胞浆蛋白。
制备的亚细胞组分的纯度可胜任后续免疫共沉淀、SDS-PAGE、2-Dgel电泳、WesternBlotting、酶活性测定、受体分析等。
组成：(50extractions,8x106cellsperextraction)CER,CytosolExtractionReagent，25ml;MER,MembraneExtractionReagent，2.5mlNER,NuclearExtractionReagent，50ml;SuspensionBuffer，10ml储存：4ºC避光保存1年。
收集细胞：准确计数，每一制备使用等量的细胞数，将明显改善后续检测结果的一致性。
每一制备约需要8x106~1x107个细胞。
贴壁细胞：PBS冲洗细胞皿，胰蛋白酶消化细胞。
800xg离心5-10min。
弃上清，用PBS重悬洗涤细胞并再次离心收集细胞。
注意：为避免胰蛋白酶在后续制备过程中降解蛋白质，可用无酶细胞消化液(Non-enzymeCellDisassociationSolution)使贴壁培养的细胞与瓶皿分离。
悬浮细胞：800xg离心5-10min。
弃上清。
用PBS重悬洗涤细胞并再次离心收集细胞。
估计细胞沉淀压积PCV(packedcellvolume)：通常1x106个细胞离心后的PCV约为10-20μl，1x107个细胞的PCV约为100μl。
胞质蛋白或核蛋白提取方法
胞质蛋白或核蛋白提取方法实验目的从细胞和动物组织制备核蛋白和胞浆蛋白。
实验试剂核蛋白/胞质蛋白提取试剂盒。
实验步骤（一）细胞蛋白提取（1）取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3 min，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
（2）用冷PBS洗涤细胞2次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
（3）每20 μL冷的Buffer A，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s，置冰上10 min。
（4）再次高速涡旋振荡5 s，然后在4℃，16000×g条件下离心5 min。
（5）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
（6）在沉淀中加入200 μL冷的Buffer B，2 μL蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15 s。
（7）置冰上40 min，每隔10 min高速涡旋振荡15 s。
（8）在4℃，16000×g条件下离心10 min。
（9）快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
（二）组织蛋白提取（1）取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），置冰上5 min，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
（2）在4℃，500×g条件下离心2-3 min，弃上清。
（3）按照细胞蛋白的提取方法的第三步骤往下操作即可。
（4）上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项（1）实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
（2）整个过程须保持样品处于低温状态。
蛋白提取系列最后一节：核蛋白提取
蛋⽩提取系列最后⼀节：核蛋⽩提取不知不觉年算是过完了，这次离开家不知下次归期⼜是何时，每每羡慕本地⼈家，可以随时随地回家，可以不⽤太长时间的奔波，可以在⽗母⾝边。
回家，⼀说起来就让⼈很开⼼，虽然回家这星期特别忙碌，但是⼼情却是⽆⽐放松，挨家挨户的串亲戚，哥哥，婶婶，姐姐，姐夫，东奔西跑的认长辈，舅舅，舅妈，⼤爷，⼤娘，觥筹交错的瞎聊天，来来往往，热热闹闹，甚是开⼼。
⼀年不见，⼩侄⼦竟会跑了，去年见还是抱在怀⾥，不顺⼼就哇哇地哭，⼩侄⼥要上⼀年级了，还会背英语了，⼤侄⼥都要上初中了，好像会打扮⾃⼰了。
现在⼩孩⼦都坐满⼀桌了，正如我们⼩时候，四五个哥哥姐姐在前⾯跑着玩，五六岁的我在后⾯开⼼的跟着，刚会跑的妹妹在后⾯喊着，姐，等等我，啪唧，⼜摔了⼀跤。
正如我们⼩时候，⼀⼤院⼦的⼈打牌，2定主，升级，拱猪，争上游，你应该先出3，xx拿错牌了，还是xx打的好。
正如我们⼩时候，初中以后学习压⼒还是来了。
正如我们⼩时候，那时候所有的家⼈都还在。
仿佛看到了当时的⽗母，是不是也像我们现在⼀样年轻，是不是也在努⼒拼搏，为我们撑起⼀⽚天，是不是也曾想过多陪陪⾃⼰的⽗母。
以后的⾃⼰不知道能不能做到像⽗母⼀样那么优秀，但是⼀定会多回家陪陪⽗母，⽗母在，⼈⽣尚有来处。
提蛋⽩的系列到现在就差不多结束了核蛋⽩的提取也如之前⼀样，⾃⼰配制和试剂盒提取都有提及。
A液：5mM PIPES pH 8.0， 85mM KCL， 0.5%NP40，1%cocktailB液：50mM Tris-Cl pH 8.1， 10mM EDTA，1% SDS，1% cocktail细胞样品1.如提取总蛋⽩⼀样，弃去培养基，在培养⽫中加⼊1ml冷的PBS，洗三次，再加⼊PBS。
2.⽤细胞刮尽可能刮下细胞，收集到1.5mlEP管中。
预冷离⼼机，4℃，1,000g，离⼼4分钟（为尽可能多的获得细胞，可将离⼼后的上清再重复刮细胞⼀次）。
3.弃掉上清，将细胞重悬于A液中（加⼊的体积按10^6/200ul，10cm dish加1ml）。
蛋白免疫印迹
蛋白免疫印迹2.6.1 提取细胞胞浆蛋白及核蛋白(1) 首先用枪头吸去培养皿中的培养液，将皿倒扣在滤纸上，尽可能吸干培养基，用4 o C PBS洗涤三遍，洗净培养基。
(2) 将含有RIPA、磷酸酶抑制剂和PMSF的裂解液均匀加入培养皿中，用细胞刮快速刮取细胞，将细胞刮至一侧，用裂解液混匀，吸出移入EP管中。
(3) 将含有细胞和裂解液的EP管置于冰上15分钟摇匀，每5分钟震荡一次。
(4) 预冷超速离心机，4 o C 14000rpm 20分钟，吸取上清液即为胞浆蛋白，并分装于EP管中做好标记，置于冰上，将样品分别取2μl用BCA法测蛋白浓度。
(5) 将剩下的沉淀加入含有RIPA、磷酸酶抑制剂和PMSF的裂解液继续裂解，将含有沉淀物和裂解液的EP管置于冰上15分钟摇匀，每5分钟震荡一次。
(6) 预冷超速离心机，4 o C 14000rpm 20分钟，吸取上清液即为胞核蛋白，并分装于EP管中做好标记，置于冰上，将样品分别取2μl用BCA法测蛋白浓度。
2.6.2 蛋白浓度测定(1) 按BCA试剂盒( p0010s 碧云天) 说明书配平标准蛋白，最终浓度为0.5 mg/ml。
(2) 将标准蛋白按0，1，2，4，8，12，16，20 μl分别加到96孔板中，加去离子水补足到20 μl。
加2 μl样品到96孔板的样品孔中，加蒸馏水补足到20 μl，各孔加入200 μl BCA反应液，其中标准蛋白相对应的浓度分别0，0.025，0.05，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 (单位mg/mL)。
(3) 37 o C温箱孵育30 min。
(4) 在多功能微孔板检测仪(酶标仪00075393)上测定吸光度值，按照吸光度值和已知的标准品浓度做图，并得出标准曲线和方程，再根据目的蛋白所测得的吸光度值带入方程计算得出相应样品的蛋白浓度，乘以稀释倍数(10倍)即为样品实际浓度。
(5) 将样品配成等体积等浓度，加入总体积五分之一的蛋白上样缓冲液(碧云天，P0015)，煮沸10 min，放入-20o C保存。
细胞和动物组织核蛋白的提取方法
细胞和动物组织核蛋白的提取方法产品组成 310001 310002规格 50 assays 100 assaysBuffer A (Cytoplasmic Extraction Reagent) 10ml 20mlBuffer B (Nuclear Extraction Reagent) 10ml 20ml蛋白酶抑制剂混合物 250ul 500ul使用方法：A．细胞蛋白提取1. 取5-10×106个细胞，在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 每20ul细胞压积中加入200μl冷的Buffer A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒，置冰上10分钟。
4. 再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，16000×g条件下离心5分钟。
5. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到胞浆蛋白，请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
6. 在沉淀中加入200μl冷的Buffer B，2ul蛋白酶抑制剂混合物，高速涡旋振荡15秒。
7. 置冰上40分钟，每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
8. 在4℃，16000×g条件下离心10分钟。
9. 快速将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到核蛋白。
B．组织蛋白提取1. 取适量组织样本剪碎，加冷PBS，用组织匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体（或用液氮研磨），冰上静置5分钟，小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
2. 在4℃，500×g条件下离心2-3分钟，弃上清。
3. 按照细胞蛋白的提取方法的第3步骤往下操作即可。
上述蛋白提取物请分装后于-80℃冰箱保存备用。
注意事项：1. 实验过程中的所有BestBio-贝博生物试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。
2. 整个过程须保持样品处于低温状态。
储存条件：-20℃保存。
有效期：一年。
碧云天 P0028细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒
4. Yuan Q, Li PD, Li BH, Yang XZ, Xu SB, Liu XH, Zhou FX, Zhang WJ. Differential IL-4/Stat6 activities correlate with differential expression of regulatory genes SOCS-1, SHP-1, and PP2A in colon cancer cells. J Cancer Res Clin Oncol. 2008 Jun 7.
5. Lu J, Yue BH, Wang CM, Bai ST, Sheng GY. Efficacy of RNAi-induced down-regulation of wild-type FLT3 on NF-kB pathway in THP-1 cell line. Life Science Journal. 2008;Vol.5,No.2.
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。 4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。(对于二百万Hela细胞，其细胞沉淀的体积大约为
全蛋白抽提试剂盒
凯基全蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at 4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。
获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。
二、 试剂盒组份组份 KGP250 （50 tests） KGP2100（100 tests）储存温度 Lysis Buffer 50 mL 100 mL 4℃磷酸酶抑制剂 250 μL 500μL -20℃蛋白酶抑制剂 50 μL 100 μL -20℃PMSF（100mM）500 μL 1000 μL -20℃L三、 操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入5 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。
冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入5μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。
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凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
Cat Number：For Research Use Only
Store at -20℃ for one year
Expire date：
一、 试剂盒说明
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。
制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。
提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
二、 试剂盒组份
组份 KGP150 （50 test） KGP1100 （100 test） 储存温度
Buffer A 25 mL 25 mL ×2 4℃
Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃
Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃
DTT 50μL 100μL -20℃
蛋白酶抑制剂 250μL 500μL -20℃
PMSF（100mM）400μL 800μL -20℃
三、操作步骤
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一
离心管中；
2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；
3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；
6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；
8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1、取培养细胞5×106～1×107个/mL，4℃离心，500×g,3 min收集细胞，弃去培养液，用预冷的PBS洗涤两遍；
2、用移液枪尽可能取去上清，勿留残液，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；
3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；
6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；
8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
四、 注意事项
1、 所有的试剂及器具均需预冷后使用；
2、 细胞的数量不应少于0.5×107个/mL；，
3、 以上各缓冲液的使用量是以20μL细胞压积为例，如细胞压积不同，请参考下表加入各缓冲液。
细胞压积PCV Buffer A Buffer B Buffer C
10μL 100μL 5.5μL 50μL
20μL 200μL 11μL 100μL
50μL 500μL 27.5μL 250μL
100μL 1mL 55μL 500μL
4、一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，
则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐，建议使用凯基透析Buffer (Cat: KGB—P001)透析后进行后续分析。
五、 凯基相关产品（详见凯基网站）
1、蛋白提取
核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
全蛋白提取试剂盒
膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
线粒体蛋白提取试剂盒
磷酸化蛋白提取试剂盒（简易型）
活性蛋白提取试剂盒
红细胞裂解液
细菌蛋白提取试剂盒
酵母蛋白提取试剂盒
植物蛋白提取试剂盒
蛋白裂解液系列
2、蛋白定量
BCA法蛋白定量检测试剂盒
Bradford法蛋白定量检测试剂盒
Lowry法蛋白定量检测试剂盒
3、蛋白染色
蛋白质银染检测试剂盒
蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒
考马斯亮蓝蛋白快速染液
4、蛋白分子量Marker
蛋白分子量Marker（14KD-116KD）
蛋白分子量Marker（10KD-200KD）
预染蛋白分子量Marker（20KD-118KD）
预染彩色蛋白分子量Marker（11KD-250KD）。