肉制品中亚硝酸盐测定实验
午餐肉中亚硝酸盐的测定
午餐肉中亚硝酸盐的测定午餐肉是一种常见的加工肉制品，亚硝酸盐是一种常用的食品添加剂，被用于午餐肉的保鲜和着色。
然而，过量的亚硝酸盐摄入可能对人体健康造成危害，因此需要进行亚硝酸盐的测定。
亚硝酸盐的测定方法有多种，常用的方法包括高效液相色谱法（HPLC）、催化分析法、光谱法等。
下面将介绍其中的两种常用方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）HPLC是一种高效、精确的物质定量分析方法，常被用于食品中亚硝酸盐的测定。
具体步骤如下：1. 样品制备：将午餐肉样品取一小块，加入适量的蒸馏水中搅拌均匀，取适量的稀释液，经过滤后得到样品。
2. 色谱柱选择：根据分析目标，选择合适的色谱柱。
常用的是反相色谱柱，比如C18柱。
3. 优化测定条件：通过调整流速、流动相组成等条件，找到合适的分析条件。
一般流动相选用水和有机溶剂的混合物，比如乙腈和水。
4. 样品进样：将制备好的样品注入色谱仪，确定进样量。
5. 柱温控制：根据色谱柱的要求，控制柱温。
6. 检测波长选择：选择合适的检测波长。
亚硝酸盐一般在220nm左右有较强的吸收。
7. 分析测定：运行色谱仪，记录并分析峰面积。
8. 定量计算：根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐的含量。
二、催化分析法催化分析法是基于亚硝酸盐与某些物质发生反应，生成显色产物，通过测定显色产物的吸光度来确定亚硝酸盐含量的一种方法。
常用的试剂是磷钼酸盐和硫酸。
具体步骤如下：1. 标准曲线制备：根据亚硝酸钠的溶液，制备一系列不同浓度的标准溶液。
2. 样品制备：将午餐肉样品取一小块，加入适量的蒸馏水中搅拌均匀，取适量的稀释液。
3. 反应试剂制备：将磷钼酸盐和硫酸按一定比例混合，制备催化试剂。
4. 反应体系调整：将制备好的样品与催化试剂混合，调整pH值和反应温度。
5. 显色反应：在适当的条件下，亚硝酸盐与催化试剂发生反应，产生显色物。
6. 吸光度测定：通过分光光度计测定显色物的吸光度。
7. 定量计算：根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐的含量。
熏肉制品中亚硝酸盐检测(分光光度法)
2011-2012仪器分析综合设计性实验报告熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定【摘要】亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。
此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。
本实验就是利用紫外分光光度法对熏肉制品中的亚硝酸盐进行定量测定。
本实验法对亚硝酸盐有很好的选择性，测量的灵敏度高。
【关键词】紫外分光光度法，熏肉制品，亚硝酸盐含量【引言】分光光度法同时测定多组分体系具有不需进行化学分离和引入过多试剂以及操作简便等优点而日益受到关注，用各种化学计量学方法和借助导数输出等方式解析重叠光谱是目前发展最快的领域之一。
用光度法测定肉制品中硝酸根及亚硝酸根，文献报道的有：紫外检测－离子色谱法、标准加入—偏最小二乘导数分光光度法、一阶导数分光光度法、比光谱导数法等。
【实验部分】一、方法原理：（α-萘胺法）自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下：肉制品中亚硝酸盐含量==50150020100010001⨯⨯⨯⨯m X （mg/kg ） 式中：X 为由测得的吸光度什在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL ）；m 为样品质量（g ）。
也就是样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，用分光光度计测量含量。
二、主要试剂及仪器（1） 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6·3H 2O]溶于水，并稀释至100mL 。
（2） 乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH 3COO)2·2H 2O]，加3mL 冰醋酸溶于水，并稀释至100mL 。
（3） 饱和硼砂溶液：5.0克硼酸钠（Na 2BO 4·10H 2O ）溶于100mL 热水中，冷却备用。
【精品】熏肉中亚硝酸盐的测定设计实验报告
【精品】熏肉中亚硝酸盐的测定设计实验报告实验一、目的通过本次实验，掌握熏肉中亚硝酸盐的测定方法，了解熏肉中亚硝酸盐的含量对熏制效果的影响。
实验二、原理熏肉通常需要添加亚硝酸盐作为保鲜剂，同时还能给熏肉赋予特有的味道和颜色。
本实验采用直接滴定法测定熏肉中亚硝酸盐的含量。
首先将样品取出，平衡在室温下约30分钟，然后在加入过量的硫酸钾，使所有亚硝酸盐转化成亚硫酸盐。
然后将样品移入酸性的硫酸钾中，使亚硫酸盐转化成硫酸。
待冷却后，将所有硫酸溶液移入滴定瓶中，加入碘液作为滴定剂，使溶液发生紫色反应。
实验三、材料和方法所需材料：熏肉样品、硝酸钾、硫酸钾、碘液。
实验方法：1. 取出样品，平衡在室温下约30分钟。
2. 取0.5g的样品，加入25ml的硝酸钾，加热至沸腾。
3. 加入过量的硫酸钾，使所有亚硝酸盐转化成亚硫酸盐。
5. 冷却后将所有硫酸溶液移入滴定瓶中，加入碘液作为滴定剂，使溶液发生紫色反应。
6. 记录滴定过程中消耗的滴定剂的体积。
实验四、结果与分析实验仪器使用的滴定管标准误差为±0.01ml。
本次实验中，共测定了5个样品的亚硝酸盐含量，结果如下：样品编号体积（ml）亚硝酸盐含量（mg/kg）1 24.67 31.472 24.98 29.063 25.10 33.194 24.75 30.075 25.03 28.84根据公式：样品中亚硝酸盐含量（mg/kg）=滴定剂体积（ml）×调整系数×1000/样品重量（g）其中，调整系数是0.0071。
计算可得，样品1的亚硝酸盐含量为31.47mg/kg，样品2为29.06mg/kg，样品3为33.19mg/kg，样品4为30.07mg/kg，样品5为28.84mg/kg。
实验五、结论通过本次实验，可以得出熏肉中亚硝酸盐的含量平均约为31mg/kg，可以作为熏制过程中添加亚硝酸盐的标准。
同时，样品中亚硝酸盐含量的测定可以保证熏肉在腌制中的质量和保鲜作用。
实验十六肉制品中亚硝酸盐的测定
实验十六肉制品中亚硝酸盐的测定1、目的亚硝酸盐用于肉类制品做发色剂，肉制品由于使用亚硝酸盐而呈鲜红色，亚硝酸盐也是一种防腐剂，它可抑制微生物的繁殖。
但它作为一种食品添加剂，在食品中的使用有一定的限值，通过实验，掌握亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在肉制品中的使用情况。
2、原理肉制品中的亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮反应，生成重氮化合物，再与盐酸苯己二胺偶联成紫红色的偶氮染料，颜色的深浅与亚硝酸根含量呈正比关系，可直接比色测定。
3、实验材料与仪器3.1材料火腿（1）亚硝酸钠标准溶液（5ug/ml）：精确称取0.1000g亚硝酸钠（优级纯）以重蒸水定容到500ml。
再吸取此溶液25ml，以重蒸水定容到1000ml。
（2）发色试剂：0.4%对氨基苯磺酸溶液：溶解0.4g对氨基苯磺酸于20%盐酸中，并定容到100ml。
0.2%萘基盐酸二氨基乙烯：溶解0.2g萘基盐酸二氨基乙烯于100ml重蒸水中。
蛋白质沉淀剂：（3）硼砂饱和溶液：溶解25g硼砂于500ml热的重蒸水中（4）硫酸锌溶液：溶解150g硫酸锌于500ml重蒸水中3.2仪器721分光光度计，50ml容量瓶、烧杯、玻璃棒、500ml容量瓶、电炉、水浴锅。
4、操作步骤（1）亚硝酸钠标准曲线的绘制：用移液管分别吸取亚硝酸钠标准溶液（5ug/ml）0.2、0.4、0.60、0.8、1.0、1.0、2.0（各含1、2、3、4、5、6、7、8、9、10g亚硝酸钠）于一组50ml容量瓶中，加入0.4%对氨基苯磺酸溶液2ml摇匀，静置3-5min后，用分光光度计在540nm处测定光密度，以蒸馏水为空白，测定。
（2）肉制品中亚硝酸盐的抽提：称取经搅碎混匀的试样2g于50ml烧杯中，加入硼砂饱和溶液10ml，用玻璃棒搅和，继以70℃左右的重蒸水约40ml将其冲入100ml的容量瓶中，置沸水浴中加热15分钟，取出，一面转动，一面滴加2.5ml硫酸锌溶液，摇匀，放置片刻，撇去上层脂肪，清液用滤纸过滤，滤液必须清澈，待用。
亚硝酸盐的测定实验报告
一、实验目的本实验旨在学习亚硝酸盐的测定方法，了解亚硝酸盐在食品中的存在及其对人体健康的影响。
通过实验，掌握亚硝酸盐的提取、分离和定量分析方法，提高对食品中亚硝酸盐含量的检测能力。
二、实验原理亚硝酸盐（NO2-）是一种常见的食品添加剂，广泛应用于肉制品的加工中，具有发色、防腐和抗微生物作用。
然而，过量的亚硝酸盐摄入对人体健康有害，可能导致急性中毒、慢性疾病甚至癌症。
因此，对食品中亚硝酸盐含量的检测具有重要意义。
本实验采用盐酸萘乙二胺法测定亚硝酸盐含量。
该方法基于亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在酸性条件下发生重氮化反应，生成重氮盐，再与N-1-萘基乙二胺盐酸盐偶合形成玫瑰红色染料。
通过比色法测定染料的吸光度，可以计算出样品中亚硝酸盐的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 火腿肠样品- 试剂：对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、亚硝酸钠标准溶液等- 仪器：酸度计、分光光度计、离心机、移液器、容量瓶、试管等2. 实验步骤：1. 样品处理：将火腿肠样品剪碎，称取适量，加入蒸馏水溶解，搅拌均匀。
2. 提取：将样品溶液用酸度计调至pH 2.0，加入适量的亚铁氰化钾和乙酸锌，充分混合，静置30分钟，使蛋白质沉淀。
3. 分离：将上层清液转移至离心管中，离心分离蛋白质沉淀。
4. 测定：取一定量的上层清液，加入对氨基苯磺酸和N-1-萘基乙二胺盐酸盐，充分混合，静置15分钟，使染料形成。
5. 比色：用分光光度计测定染料的吸光度，与标准曲线比较，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
四、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据亚硝酸钠标准溶液的浓度和吸光度，绘制标准曲线。
2. 样品测定：对火腿肠样品进行测定，得到样品中亚硝酸盐的吸光度。
3. 结果计算：根据标准曲线和样品吸光度，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
五、实验讨论1. 实验过程中，酸度对亚硝酸盐的测定结果有较大影响。
实验过程中应严格控制酸度，确保测定结果的准确性。
2. 亚铁氰化钾和乙酸锌在实验中起到沉淀蛋白质和除去脂肪的作用，提高实验的灵敏度。
实验二,肉品中亚硝酸盐的鉴定
实验二肉制品中亚硝酸盐含量的测定——格里斯试剂比色法一、实验目的掌握肉制品中亚硝酸盐含量的测定方法和卫生评定。
二、实验原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮化合物后，再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色燃料。
其颜色深浅与亚硝酸含量成正比，与标准比较定量。
三、器材与试剂1器材：分光光度计、小型粉碎机；天平，PH仪（或碱性PH试纸），水浴锅，温度计，200ml 容量瓶（20个），滤纸（30~40片），三角漏斗（20左右），200ml烧杯（20个），30个25ml 带塞离心管，1ml吸管若干，暗室。
双汇鸡肉肠，玉米肠，火腿肠60g各三根，午餐肉罐头一盒，熏火腿一根2试剂：（1）氯化铵缓冲液：1L容量瓶中加入水500ml水，准确加入20ml盐酸，振荡混匀，准确加入50ml氢氧化铵，用水稀释至刻度。
必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6-9.7。
（2）0.42mol/L硫酸锌溶液：称取120g硫酸锌【ZnSO4.7H2O】，用水溶解，并稀释至1000mL。
（3）20g/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠用水溶解，稀释至1L。
（4）对氨基苯磺酸溶液：称取10g对氨基苯磺酸，溶于700ml水和300ml冰乙酸中，至棕色瓶中混匀，室温保存。
（5）1g/L N-1-萘基乙二胺溶液：称取0.1gN-1-萘基乙二胺，加60%乙酸溶液并稀释至100ml，混匀后，至棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
（6）显色剂：临用前（4）（5）等体积混合。
（7）亚硝酸钠标准贮存液：准确称取于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠（NaNO2）0.2500g，用水溶解移入500ml容量瓶中，加100ml氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在4℃避光保存，此溶液每毫升相当于500μg亚硝酸钠。
（8）亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液1.0ml，置于100ml容量瓶中，加水稀释至刻度。
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定报告
实验题目熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定20092401081一、目的与要求：1、明确亚硝酸盐的测定与控制成品质量的关系。
2、明确与掌握盐酸萘乙二胺法的基本原理与操作方法。
二、引言(一)亚硝酸盐的介绍亚硝酸盐是作为发色剂使用于腌制香肠、腊肉和火腿等肉制品中，因其可缓慢的分解释放出氧化氮（NO），使肉中的肌红蛋白亚硝基化形成稳定的亚硝基肌红蛋白色素，从而保持肉制品中的固有色泽；另一方面，亚硝酸盐还具有防腐作用，能够抑制肉毒梭状芽孢杆菌，防止肉类制品的腐败变质。
但是，亚硝酸盐不仅本身具有毒性，往往因使用过量或使用方法不当而导致食物中毒发生。
因为进入体内的亚硝酸盐常常与蛋白分解生成的胺类结合成强致癌物亚硝胺。
若熟肉制品中亚硝酸盐残留量过高，必然导致这种潜在危险的增大。
硝酸盐及亚硝酸盐被用于肉类食品中，硝酸盐本身具有一定杀菌作用，大部分的应用可能会转化少量的亚硝酸盐。
（二）亚硝酸盐的测定方法(1) 分光光度法分光光度法目前广泛采用的是盐酸素二胺分光光度法和酚二磺酸分光光度法。
这2种方法均为水质分析方法标准，最低检出浓度亚硝酸盐为0.003mg/L （试份体积为50ml），硝酸盐最低检出浓度为0.02mg/L（试份体积50ml），水样中某些共存离子对测定产生干扰，需作适当前处理以消除对测定的影响。
此外，所用试剂如盐酸萘乙二胺等有毒性，且操作较繁琐。
近年来，许多分析工作者致力于高灵敏度亚硝酸盐和硝酸盐的分析方法研究。
（2）紫外分光光度法紫外分光光度法测定硝酸盐和亚硝酸盐，人们关注的研究课题之一是探索不经任何分离而同时测定NO3-和NO2-。
该法具有较好的准确度和精密度，操作简便，计算准确，速度快，是一种很有应用前景的方法。
荧光光度法灵敏度高，近年来对荧光光度法测定NO2-和NO3-的研究增多。
（4）催化动力学法高甲友等研究了亚硝酸根对溴酸钾氧化罗丹明B的催化效应，提出了一个新的测定痕量的NO2催化荧光和催化光度法。
实验 肉制品中亚硝酸盐的测定
实验肉制品中亚硝酸盐的测定（盐酸萘乙二胺法）一、目的与要求：1.熟练掌握样品制备、提取的基本操作技能。
2.明确与掌握盐酸萘乙二胺比色法测定亚硝酸盐的基本原理及操作方法。
二、原理：样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，生成的重氮化合物，再与盐酸萘乙二氨偶合形成紫红色染料，此“染料”颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，其最大吸收波长为538nm ,可以测定吸光度并与标准比较定量。
反应式如下：见教材P3161．重氮化反应：2．偶合反应：三、样品、试剂与仪器样品：品名：厂家：试剂：1.蛋白质沉淀剂（公用）（1）饱和硼砂溶液：称取5克硼酸钠(Na2B07·10H20)，溶于100毫升热水中，冷却后备用。
(2) 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K4Fe9(CN)5.3H2O]，溶于水后，稀释至100毫升。
乙酸锌溶液：称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸，溶于水定容50mL。
2.显色剂（1）0.4％对氨基苯磺酸溶液：称取0.4克对氨基苯磺酸，溶于100毫升20％的盐酸中，避光保存。
100ml/4组（）0.2％盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2克盐酸萘乙二胺，溶于100毫升重蒸馏水中，避光保存。
100ml/4组3.亚硝酸钠标准原液：精密称取0.1000克于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500毫升容量瓶中，并稀释至刻度。
此溶液每毫升相当于200微克亚硝酸钠。
4.亚硝酸钠标准使用液(5μg NaNO2/ml)：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00毫升，置于200毫升容量瓶中，加重蒸馏水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5μg亚硝酸钠。
亚硝酸钠标准原液由教师提供。
5.1：4盐酸配制显色剂1用，每4组100ml。
仪器：1. 小型绞肉机。
2. 721分光光度计。
3．25ml比色管每组7支四、操作方法：1.样品处理：称取5.0克经绞碎混匀的样品，置于50毫升干洁的小烧杯中，加入12.5毫升饱和硼砂溶液，以玻璃棒搅拌均匀，以70℃左右的重蒸馏水约300毫升分数次将样品全部洗入500毫升容量瓶中。
实验四肉制品中亚硝酸盐含量的测定.doc
实验四肉制品中亚硝酸盐含量的测定——重氮化偶合比色法一、实验目的掌握肉制品中亚硝酸盐含量的测定方法和卫生评定。
二、实验原理亚硝酸盐在酸性溶液中与格氏试剂中的对氨基苯磺酸重氮化作用，生成的重氮化合物与α—萘胺发生偶合反应，生成紫红色的偶氮化合物。
颜色的深浅与亚硝酸盐含量成正比，故可以其显色度与已知量的亚硝酸盐标准溶液比较定量。
三、器材与试剂分光光度计、纳氏比色管；饱和升汞溶液；格氏试剂；亚硝酸盐标准使用液（2μg/mL）；盐酸四、操作方法1、样液的制备准确称取剪碎的样品约5.0g，置于250mL烧杯中，加100mL水，混匀，加热至约80℃，移入250mL容量瓶中，用水数次洗涤烧杯，洗液注入容量瓶中，加水至容量瓶的2/3容积，置沸水浴中加热1h，不时振摇，然后加5mL饱和升汞溶液，冷却，再加水至刻度，混匀，过滤，滤液备用。
2、测定取6支清洁干燥的50mL纳氏比色管，编号后5个标准管中分别加入0、1、2、3、4mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0、2、4、6、8μg亚硝酸钠），样品管中加入5mL上述滤液，各管均加水至50mL刻度处混匀。
然后分别加入2滴盐酸溶液和2mL格氏试剂，混匀，37℃加热20 min，用1㎝石英比色杯，以零管调节零点，于波长525nm处测吸光度，绘制标准曲线比较。
3、计算11121115010001000m A V V m A X ⨯=⨯⨯⨯=式中：X 1——样品中亚硝酸盐含量（mg/㎏）；m 1——样品质量（g ）；A 1——从标准曲线测得样液中亚硝酸盐含量（μg ）； V 1——样品处理滤液总体积（mL ）； V 2——测定时取用样品滤液体积（mL ）。
4、判定标准香肠（腊肠）、香肚、广式腊肉、火腿≤20mg/kg 肉灌肠、肴肉、咸猪肉≤30mg/kg腌腊肉制品罐头（包括午餐肉、咸牛肉、咸羊肉、火腿猪肉、猪肉香肠等）≤50mg/kg 西式蒸煮、烟熏火腿、西式火腿罐头≤70mg/kg 五、结果分析与讨论1、 数据结果（吸光度值）2、 制作标准曲线3、 计算样品中亚硝酸钠含量4、 综合判定。
熏肉中亚硝酸盐的测定设计实验报告
一、实验题目：熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定二、1．摘要：以α- 萘胺为显色剂, 利用紫外可见分光光度计, 测定了广州市售的熏肉中亚硝酸盐的含量。
本实验进一步探究了实验的最佳条件: 最大吸收波长、参比溶液、酸度、显色剂的用量和显色时间。
结果表明:pH值在3~4之间, 参比溶液为去离子水时, 显色剂用量为2mL/50mL试液, 显色时间在15min时, 显色稳定, 样品吸光度达到最大值, 实验能达到较理想的效果。
2．关键词：熏肉; 亚硝酸盐; 紫外- 可见分光光度法三、引言亚硝酸盐作为一种食品添加剂被广泛用于肉制品加工中。
它的发色、防腐、抗微生物作用至今仍无法用其它的物质所替代。
但它对于人体健康的危害是众所周知的。
为了有效的控制其毒性, 检测其在食品中的残留量, 目前常采用的测定方法主要有光度法、色谱法、电化学法。
其中光度法又分为盐酸萘乙二胺法、格里试剂比色法、催化光度法、紫外光度法；色谱法中有离子色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法；电化学法又分为示波极谱法、伏安法。
还有一些新的方法如化学发光法、荧光法、原子吸收光谱法等。
而分光光度法以其设备简单、操作快捷、灵敏度高、结果直观的优点, 深受欢迎[1]。
本实验研究了以α- 萘胺为显色剂, 利用紫外可见分光光度计测定肉制品中的亚硝酸盐的含量的方法。
结果证明, 此方法简单、快捷、准确, 是一种食品检测的好方法。
1、光度法1．1 盐酸萘乙二胺法-与对氨基苯磺酸反应生成重氮化合物后，再与盐酸萘在弱酸性溶液中，NO2乙二胺偶联生成紫红色的偶氮染料，用分光光度法在540 nm处测定，与标准曲线比较定量。
1．2 格里试剂比色法GB5009．033—2003测定方法中，其中一种方法就是格里试剂比色法，其原-，然后用亚铁氰化钾和乙酸锌沉理是在弱碱性条件下，用热水从样品中提取NO2-与对氨基苯磺酸发生重氮化后，再和N—1淀蛋白，过滤后，在弱酸条件下，NO2—萘基乙二胺耦合形成红色偶氮染料，最大吸收波长为538 nm，所选择的显色剂不一样，最大吸收波长也有所不同。
实验七肉制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定
实验八肉制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定一、亚硝酸盐测定（一）原理 : 样品经沉淀蛋白质，除去脂肪后，在弱酸条件下与对氨基苯磺酸重氮化以后，再与 N-1- 萘基乙二胺偶合形成紫红色染料，与标准比较定量。
（二）试剂1. 氯化铵缓冲液：在 1L 玻璃烧杯中，加入 500ml 水，准确加入 20ml 盐酸，混匀，准确加入 50ml 氨水，必要时用稀盐酸和稀氨水调试至 pH9.6-9.7 。
2. 硫酸锌溶液（ 0.42mol/L ）：称取 120g 硫酸锌用水溶解，并稀释至 1000ml 。
3. 氢氧化钠溶液（ 20g/L ） : 称取 20g 氢氧化钠用水溶解，稀释至 1000ml 。
4. 对氨基苯磺酸溶液：称取 1g 对氨基苯磺酸，溶于 70ml 水和 30ml 醋酸中，置棕色瓶中混匀，室温保存。
5. N-1- 萘基乙二胺溶液：称取 0.1gN-1- 萘基乙二胺，加 60% 醋酸溶解，并稀释至100ml ，混匀后，置棕色瓶中，在冰箱中保存，一周内稳定。
6. 显色剂：临用前将 N-1- 萘基乙二胺和对氨基苯磺酸溶液等体积混合。
7. 亚硝酸钠标准溶液：准确称取 0.2500g 于硅胶干燥器中干燥 24h 的亚硝酸钠，加水溶解移入 500ml 容量瓶中，加 100ml 氯化铵缓冲液，加水稀释至刻度，混匀，在 4 ℃避光保存，此溶液每亳升相当于 500ug 的亚硝酸钠，作准备液。
8. 亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液 1.0ml 置于 100ml 容量瓶中，加水稀至刻度，此溶液每毫升相当于 5.0ug 亚硝酸钠。
（三）仪器：小型绞肉机，匀浆器，分光光度计。
（四）操作方法1. 样品处理：称取约 10.0g （粮食取 5g ）经绞碎混匀的样品，置于匀浆器中，加 70ml 水和 12ml 的氢氧化钠溶液，混匀，用氢氧化钠溶液调样品 pH=8 ，定量转移至 250ml 容量瓶中，加 10ml 硫酸锌溶液，混匀，如不产生白色沉淀，再补加 2-5ml 氢氧化钠，混匀，置 60 ℃水浴中加热 10min ，取出后冷至室温，加水至刻度，混匀。
熏肉制品中亚硝酸盐的检测(分光光度法)
2011-2012仪器分析综合设计性实验报告熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定熏肉制品中亚硝酸盐的含量测定【摘要】亚硝酸和硝酸的钠盐和钾盐常被加入用于腌肉的混合物中，用来产生和保持色泽、抑制微生物和产生特殊的风味。
此外，亚硝酸盐（150-200mg/kg）可抑制罐装碎肉和腌肉中的梭状芽孢杆菌。
本实验就是利用紫外分光光度法对熏肉制品中的亚硝酸盐进行定量测定。
本实验法对亚硝酸盐有很好的选择性，测量的灵敏度高。
【关键词】紫外分光光度法，熏肉制品，亚硝酸盐含量【引言】分光光度法同时测定多组分体系具有不需进行化学分离和引入过多试剂以及操作简便等优点而日益受到关注，用各种化学计量学方法和借助导数输出等方式解析重叠光谱是目前发展最快的领域之一。
用光度法测定肉制品中硝酸根及亚硝酸根，文献报道的有：紫外检测－离子色谱法、标准加入—偏最小二乘导数分光光度法、一阶导数分光光度法、比光谱导数法等。
【实验部分】一、方法原理：（α-萘胺法）自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下：N H 2SO 3HN+N SO 3HNO 2-H +OH 2+++NSO 3HNNH 2N+NSO 3H+NH 2肉制品中亚硝酸盐含量==50150020100010001⨯⨯⨯⨯m X （mg/kg ）式中：X 为由测得的吸光度什在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL ）；m 为样品质量（g ）。
也就是样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，用分光光度计测量含量。
二、主要试剂及仪器（1） 亚铁氰化钾溶液：称取10.6克亚铁氰化钾[K 4Fe(CN)6·3H 2O]溶于水，并稀释至100mL 。
（2） 乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH 3COO)2·2H 2O]，加3mL 冰醋酸溶于水，并稀释至100mL 。
综合分析实验：实验4 肉制品中亚硝酸含量的测定
《综合分析化学实验》 2016年 月 日实验四 肉制品中亚硝酸含量的测定化学化工学院应用化学专业__班 姓名_______________________ 教师评定_______亚硝酸盐是良好的发色剂与防腐剂，价廉易得，常被加入肉制品中保持和增强肉的红色，并起着防腐、增味的作用。
但过多摄入亚硝酸盐会引起正常血红蛋白（二价铁）转变成高铁血红蛋白（三价铁）而失去携氧功能，导致组织缺氧使人患高铁血红蛋白症；还可在体内与摄入的仲胺等结合，转化形成强致癌物——亚硝酸铵，从而诱发消化系统癌变。
我国食品添加剂使用卫生标准（GB 2760-2007）规定在酱卤肉制品、肉灌肠类等食品加工中亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的最大使用限量为150 mg/kg ，加工后残留量不超过30 mg/kg 。
测定亚硝酸盐的方法有多种，本实验采用国家标准GB 5009.33-2010：食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定中所规定的分光光度法和离子色谱法测定肉制品中的亚硝酸盐含量。
方法一：分光光度法原理：将样品中的蛋白和脂肪去除后，在弱酸介质中，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色物质。
该物质在波长538 nm 有最大吸收，吸光度与溶液中亚硝酸盐含量成正比，据此可实现定量分析。
相关反应如下：H 2O2HCl 2+NaNO 2SO 3HH 2N+SO 3H N NCl+NaCl ++SO 3N NClSO 3H H 2NH 2CH 2CHNHCl 2.SO 3H H 2NH 2CH 2CHNN N HCl 2.+HCl3004005006007008000.000.050.100.150.200.25A/nm图1 亚硝酸根偶合产物的UV-Vis 光谱实验试剂：硼砂饱和溶液；硫酸锌溶液（300g/L）；对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）；盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）；亚硝酸钠标准工作溶液（5 mg/L）实验步骤：1. 样品处理（平行处理2份）：准确称取2 g（精确至0.01 g）粉碎后的肉制品试样于100 mL 烧杯中，加入10 mL饱和硼砂溶液搅拌数分钟，用约60 mL水洗入100 mL 容量瓶中，置于90︒C恒温水浴中加热15 min（不要塞住瓶塞！容量瓶一定要放稳，以免滑到水浴中！）。
实验八 肉制品中发色剂亚硝酸盐含量的测定
实验三 肉制品中发色剂亚硝酸盐含量的测定一、实验目的1.掌握测定亚硝酸钠含量的盐酸萘乙二胺比色法的基本原理与操作方法；2.了解可见光分光光度计的结构及使用方法；3.了解肉制品中发色剂亚硝酸钠的含量。
二、实验原理样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合生成紫红色的重氮染料(λmax =550nm )，其颜色深浅与亚硝酸盐含量成正比，故可以比色法测定吸光度并与标准比较定量。
反应式如下：酸化：重氮化：偶合：紫红色偶氮染料(λmax =540nm )三、主要试剂和仪器 1.试剂—①蛋白质沉淀剂： 乙酸锌溶液 亚铁氰化钾溶液 饱和硼砂溶液②0.4％对氨基苯磺酸溶液 ③0.2％盐酸萘乙二胺溶液 ④亚硝酸钠标准溶液(200 μg/ml)2HCl +NaNO 22NaCl +HNO 2HNO 2+SO 3HNH 2NaClSO 3H N N +H 2ONH CH 2CH 2N H 2偶合显色SO 3HN N +NHCH 2CH 2N H 2SO 3HNN⑤亚硝酸钠标准使用液(5 μg/ml)2.仪器①可见光分光度计，722型②小型绞肉机③具塞比色管，25ml，9只四、测定方法1.样品处理①称取5.0g经绞碎混匀的肉类样品(如火腿肠)，置于500ml烧杯中，加入12.5ml 饱和硼砂溶液，用玻璃棒搅拌均匀。
②加入70℃左右的蒸馏水300ml，置于沸水浴中加热15min。
③取出冷却至室温，加入5ml亚铁氰化钾溶液，混匀；再加入5ml乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，充分摇匀。
然后转移至500ml容量瓶中，蒸馏水定容、混匀，静置30min。
④撇去上层脂肪，清液用滤纸过滤(弃去初始滤液30ml)，滤液备用。
2. 最大吸收波长测定（λmax）选择标准曲线的4号溶液测定吸收曲线，确定λmax。
3.标准曲线制备①精确吸取NaNO2标液(5μg/ml)0.0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0, 1.2ml(含NaNO20, 1, 2, 3, 4,5, 6μg)分别置于7支25ml比色管中。
亚硝酸试验实验报告
一、实验目的1. 了解亚硝酸盐的检测原理和方法。
2. 掌握利用比色法检测食品中亚硝酸盐含量的操作步骤。
3. 学会分析实验结果，判断食品中亚硝酸盐的污染程度。
二、实验原理亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成的重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成紫红色偶氮化合物。
该化合物在540nm波长处有最大吸收，通过测定吸光度值，可以计算出食品中亚硝酸盐的含量。
三、实验材料与仪器1. 材料：亚硝酸钠标准溶液、对氨基苯磺酸、N-1-萘基乙二胺盐酸盐、盐酸、乙酸、样品（如腌肉、鱼制品等）。
2. 仪器：分光光度计、移液管、容量瓶、试管、烧杯、滴定管、玻璃棒等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）准确移取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL亚硝酸钠标准溶液于6只试管中，分别加入2.0mL盐酸，振荡混匀。
（2）加入0.5mL对氨基苯磺酸溶液，振荡混匀，放置10分钟。
（3）加入0.5mLN-1-萘基乙二胺盐酸盐溶液，振荡混匀，放置15分钟。
（4）以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度值。
（5）以吸光度值为纵坐标，亚硝酸钠浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 样品中亚硝酸盐含量的测定（1）准确称取样品2.0g，加入10mL蒸馏水，振荡混匀。
（2）准确移取5.0mL样品溶液于试管中，按照标准曲线绘制步骤进行操作。
（3）以空白试剂为参比，在540nm波长处测定吸光度值。
（4）根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以吸光度值为纵坐标，亚硝酸钠浓度为横坐标，绘制标准曲线。
计算线性回归方程：y = 0.0064x + 0.0011，R² = 0.9989。
2. 样品中亚硝酸盐含量的测定根据标准曲线，计算样品中亚硝酸盐含量。
假设样品中亚硝酸盐含量为x，代入线性回归方程得：x = (吸光度值 - 0.0011) / 0.0064六、实验结论通过本次实验，我们掌握了亚硝酸盐的检测原理和操作步骤，能够准确测定食品中亚硝酸盐的含量。
肉制品中亚硝酸盐测定实验
实验一 亚硝酸盐含量的测定一. 目的了解肉制品中亚硝酸盐测定方法和原理。
二. 原理亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮反应，生成重氮化合物，再与萘基盐酸二氨基乙烯偶联成紫红色的偶氮染料，颜色的深浅与亚硝酸根含量成正比关系，可直接比色测定。
反应式如下：H 2N +2H ++NO 2_S O 3H N +N S O 3H +2H 2O N + N SO 3H +NHCH 2NH 3.2HCLHO 3S N N NHCH 2CH 2NH 3三. 操作方法1.亚硝酸钠标准曲线的绘制 以吸管分别精确吸取亚硝酸钠标准溶液(5ug/ml) 0.5、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0ml(分别含2.5、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0ug 亚硝酸钠)于一组50ml 容量瓶中，加入0.4%对氨基苯磺酸溶液2ml ，静置3~5min 后，加入0.2%萘基盐酸二氨基乙烯2ml ，并用重蒸水定容，摇匀。
静置15min 后，用分光光度计在540nm波长处测定光密度，以蒸馏水作同样的处理为空白。
以测得的各比色液的光密度与相应的亚硝酸浓度作曲线。
2.肉制品（红烤肉除外）中亚硝酸盐的抽提称取经搅拌混合均匀的试样10.00g 于50ml 的烧杯中，加入硼砂饱和溶液12.5ml, 用玻璃棒搅和，以70℃左右的重蒸水约150ml 将其洗入250ml 的容量瓶中，置沸水浴中加热15min ，取出，一边转动，一边滴加2.5ml 硫酸锌溶液，以沉淀蛋白质。
冷却到室温，用重蒸水定容，放置片刻，撇去上层脂肪，清液用滤纸过滤，滤液必须清澈，留作亚硝酸盐的测定。
3.亚硝酸盐的测定取40ml 试样滤液于50ml 容量瓶中，加入0.4%的对氨基苯磺酸溶液2ml ，静置3~5min后，加入0.2%的萘基盐酸二氨基乙烯溶液2ml，并用重蒸水定容，摇匀，静置15min。
并作对空白试验。
比色如前，记录光密度，从标准曲线上查得相应的亚硝酸钠的浓度(ug/ml)计算试样中亚硝酸盐的含量(以亚硝酸钠计)四.计算1C××10001000肉制品中亚硝酸盐含量(mg/kg)=40 1W××50250式中C------ (3)中测得的亚硝酸钠浓度(ug/ml)W ------试样重量(g)有实验可得，比色液的光密度与相应的亚硝酸浓度的标准曲线为：y=0.7341x+0.0126；实验测得样品光密度为0.045，所以实验样品中亚硝酸钠浓度为C=（0.045-0.0126）/0.7341=0.044(ug/ml)；所以肉制品中亚硝酸盐含量M=0.044/（10×0.8/250）=1.375(mg/kg).五结果分析1、根据添加剂使用标准GB2760-2007可知，在火腿肠中亚硝酸钠的残留量不得超过30mg/kg,本实验测得产品中亚硝酸钠含量为1.375(mg/kg).产品中亚硝酸盐的使用符合国家标准。
食品中亚硝酸盐测定(盐酸萘乙二胺法)实验
实验4 食品中亚硝酸盐测定（盐酸萘乙二胺法）一、实验原理制品中加入的亚硝酸盐产生的亚硝基与肌红蛋白反应，生产色泽鲜红的亚硝基肌红蛋白，使肉制品有美观的颜色。
同时亚硝酸盐也是一种防腐剂，可抑制微生物的增殖。
由于蛋白质代谢产物中仲胺基与亚硝酸反应能够生成具有很强毒性和致癌性的亚硝胺，因此，亚硝酸盐的使用量及在制品中的残留量均应按标准执行。
亚硝酸盐的测定方法主要是重氮偶合比色法，此外可与荧光胺偶合，测定其荧光吸收强度，或衍生后用气相色谱法测定。
自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下，与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与盐酸2—萘乙二胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样品种亚硝酸含量成正比，故可比色测定。
二、试剂和器材①饱和硼砂溶液：5g硼酸钠溶于100mL热的重蒸水中，冷却备用。
②亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并稀释至1000mL。
③乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌，加30mL冰醋酸溶于水，并稀释至1000mL。
④果蔬抽提液：溶解50g氯化汞和50g氯化钡于1000mL重蒸水中，用浓盐酸调整到pH值为1。
⑤氢氧化铝乳液：溶解125g硫酸铝于1000mL重蒸水中，滴加氨水使氢氧化铝全部沉淀。
用蒸馏水反复洗涤，真空抽滤，直至洗液分别用氯化钡溶液检验不发生浑浊。
取下沉淀物，加适量重蒸水使之呈薄糨糊状，捣拌均匀备用。
⑥0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100mL20%的盐酸溶液中，闭关保存。
⑦0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺，溶于100mL重蒸水中。
⑧亚硝酸钠标准溶液（5微克每毫升）：精确称取0.1000g亚硝酸铵，以重蒸水定容到500mL。
再吸取此溶液25mL，以重蒸水定容到1000mL，此工作液每毫升含亚硝酸钠5微克。
分光光度计，组织捣碎机。
三、试验步骤1、样品处理果蔬类样品用组织捣碎机打浆。
称取适量浆液（视式样中硝酸盐含量而定，如青刀豆取10g，桃子、菠萝取30g），置于500mL容量瓶中。
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定
熏肉制品中亚硝酸盐含量的测定由于肉制品生产企业在生产过程中乱加、 误加亚硝酸盐而引起食物中毒, 所以强制检验肉制品生产企业加入硝酸盐与亚硝酸盐的含量起到非常重要的作用。
肉类罐头与肉制品最大使用量不得超过 0.05克 /公斤。
除了肉类食品含有硝酸盐及亚硝酸盐, 果蔬制品、 酱腌菜中也含有亚硝酸盐。
：1.分光光度法在稀盐酸介质中，NO 2-与碱性品红发生重氮反应，用8—羟基喹啉作偶联剂，在弱碱性条件下，生成茶红色偶氮染料来定量测定NO 2-含量。
,最常用的方法是盐酸萘乙二胺法, 也就是用分光光度计测定样品吸光度, 分光光度法以其设备简单、操作快捷、灵敏度高、结果直观的优点,深受欢迎。
本实验研究了以α - 萘胺为显色剂, 利用紫外可见分光光度计测定肉制品中的亚硝酸盐的含量的方法。
结果证明, 此方法简单、快捷、准确, 是一种食品检测的好方法。
【实验原理】自样品中抽提分离出亚硝酸盐，亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应生成重氮盐，此重氮盐再与α-萘胺试剂发生偶合反应，生成紫红色偶氮化合物。
其颜色的深度与样液中亚硝酸含量成正比，可比色测定。
反应式如下：NH 23HN+NSO 3HNO 2-H+OH 2+++NSO 3HNNH 2N +NSO 3H +NH 2肉制品中亚硝酸盐含量==（mg/kg ）50150040100010001⨯⨯⨯⨯m X 式中：X 为由测得的吸光度在标准曲线上对应的亚硝酸钠质量浓度（μg/mL）；m 为样品质量（g ）。
【实验部分】一、主要试剂及仪器（1）亚铁氰化钾溶液：称取10.619克亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H2O]溶于水，并稀释至100mL。
（2）乙酸锌溶液：称取22.0克乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O]，加3mL冰醋酸溶于水，并稀释至100mL。
（3）饱和硼砂溶液：5.0克硼酸钠（Na2BO4·10H2O）溶于100mL热水中，冷却备用。
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实验一 亚硝酸盐含量的测定
一. 目的
了解肉制品中亚硝酸盐测定方法和原理。
二. 原理
亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮反应，生成重氮化合物，再与萘基盐酸二氨
基乙烯偶联成紫红色的偶氮染料，颜色的深浅与亚硝酸根含量成正比关系，可直
接比色测定。
反应式如下：
H 2N +2H ++NO 2_S O 3H N +N S O 3H +2H 2O N + N SO 3H +NHCH 2NH 3.2HCL
HO 3S N N NHCH 2CH 2NH 3
三. 操作方法
1.亚硝酸钠标准曲线的绘制 以吸管分别精确吸取亚硝酸钠标准溶液(5ug/ml) 0.5、1.0、
2.0、4.0、6.0、
8.0ml(分别含2.5、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0ug 亚硝酸钠)于一组50ml 容量瓶
中，加入0.4%对氨基苯磺酸溶液2ml ，静置3~5min 后，加入0.2%萘基盐酸二氨
基乙烯2ml ，并用重蒸水定容，摇匀。
静置15min 后，用分光光度计在540nm
波长处测定光密度，以蒸馏水作同样的处理为空白。
以测得的各比色液的光密度
与相应的亚硝酸浓度作曲线。
2.肉制品（红烤肉除外）中亚硝酸盐的抽提
称取经搅拌混合均匀的试样10.00g 于50ml 的烧杯中，加入硼砂饱和溶液
12.5ml, 用玻璃棒搅和，以70℃左右的重蒸水约150ml 将其洗入250ml 的容量瓶
中，置沸水浴中加热15min ，取出，一边转动，一边滴加2.5ml 硫酸锌溶液，以
沉淀蛋白质。
冷却到室温，用重蒸水定容，放置片刻，撇去上层脂肪，清液用滤
纸过滤，滤液必须清澈，留作亚硝酸盐的测定。
3.亚硝酸盐的测定
取40ml 试样滤液于50ml 容量瓶中，加入0.4%的对氨基苯磺酸溶液2ml ，静
置3~5min后，加入0.2%的萘基盐酸二氨基乙烯溶液2ml，并用重蒸水定容，摇匀，静置15min。
并作对空白试验。
比色如前，记录光密度，从标准曲线上查得相应的亚硝酸钠的浓度(ug/ml)计算试样中亚硝酸盐的含量(以亚硝酸钠计)
四.计算
1
C××1000
1000
肉制品中亚硝酸盐含量(mg/kg)=
40 1
W××
50250
式中C------ (3)中测得的亚硝酸钠浓度(ug/ml)
W ------试样重量(g)
有实验可得，比色液的光密度与相应的亚硝酸浓度的标准曲线为：y=0.7341x+0.0126；实验测得样品光密度为0.045，所以实验样品中亚硝酸钠浓度为C=（0.045-0.0126）/0.7341=0.044(ug/ml)；
所以肉制品中亚硝酸盐含量M=0.044/（10×0.8/250）=1.375(mg/kg).
五结果分析
1、根据添加剂使用标准GB2760-2007可知，在火腿肠中亚硝酸钠的残留量不得超过30mg/kg,本实验测得产品中亚硝酸钠含量为1.375(mg/kg).产品中亚硝酸盐的使用符合国家标准。
2、标准曲线回归方程为y=0.7341x+0.0126，相关系数r=0.9987，线性关系好，当取样为10g时，浓度刚好在曲线范围内，当被测样品中亚硝酸钠含量较高时，可适当减少取样量。
六、讨论
1、样品自身颜色对实验结果的影响
当样品颜色较深时，将影响吸光值的测定，所以在可测范围内应尽可能的减少样品用量，以免样品自身的颜色影响测定结果。
2、样品研磨细度对实验结果的影响
样品研磨的越细小，蛋白质溶解越充分，加入硫酸锌后蛋白质沉淀越完全，测定的结果越精确。
反之，如样品研磨不充分，蛋白质不完全，溶液浑浊，将影响吸光度的测定。
3．移液与研磨的损失
在研磨之后，由于操作的不当在转移溶解液以及在研磨的过程中由于飞溅还有残留的原因，会造成结果的数据偏低的现象。