光合细菌的培养方法

光合细菌的培养及应用方法

光合细菌(简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌在水产养殖上的应用主要有以下五个方面：作为养殖水质净化剂；作为饲料添加剂；用于鱼、虾、贝幼体的培育；作为动物性生物饵料的饵料；防治鱼病。

一、培养工具的消毒方法

1．加热消毒法：利用高温杀死微生物的方法。

（1）直接灼烧：此法可直接把微生物烧死，灭菌彻底，但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。

（2）煮沸消毒：一般煮沸5～10分钟，适用于小型容器、工具的消毒。

（3）烘干箱消毒：亦称为恒温干燥箱消毒法。

2．化学药品消毒法：适用在批量培养中，大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。

（1）酒精：浓度为70％的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分钟后，用消毒水冲洗两次即可。

（2）高锰酸钾：按300ppm配成高锰酸钾溶液，把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5分钟，取出，再用消毒水冲洗2次～3次即可。

二、光合细菌的培养条件

1、营养条件

光合细菌细胞体构成元素主要有：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钠、镁、钙、硫和一些微量元素等，它们也是所有生物细胞构成的主要物质。一般情况下，比重：水占80％-90％、无机盐1％-1.5％、蛋白质7％-10％、脂肪1％-2％、糖类和其它有机物1％-1.5％。其中干细胞含碳45％-55％、氢5％-10％、氧20％-30％、氮5％-13％、磷3％-5％、其它矿物元素3％-5％。光合细菌的细胞膜具有半透性，能选择性地让营养成分按一定需要进细胞内，在酶的作用下合成自己的细胞组分并促进分裂新的个体。

营养元素的全面合理的搭配,是培养高产光合细菌的关键。根据这一要求,郑州@@@@生物材料公司选用多种光合细菌生长必需的原料，科学配方，经特殊加工而成的"光合细菌发生剂（培养基）"，

基本符合光合细菌生长繁殖所需的营养要求，无毒无副作用，使用安全，固状结晶体便于包装和运输，而且有2年的保质期。

光合细菌培养基是光合细菌生长繁殖所需各种营养元素的复合体。每种原料都能得以充分利用，最大限度地生产高浓度的菌液，因此，单位效价的光合细菌菌液生产成本低、质量好，这无论是对于用户、经销商还是厂家都有很大的益处，对在工农业生产中的推广和普及将产生深远的影响。

2.环境条件

有了营养全面的光合细菌培养基，只是满足了其生长的内在条件，并不能培养出光合细菌菌液。还需有适宜光合细菌生长的环境条件，才能培养出优质的菌液。环境条件具体有以下几个方面：（1）.培养介质：含菌量低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水。从经济、实用的角度考虑，地下水含菌量低，为最佳水源；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调pH值至偏碱后使用；蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高，可用于提纯菌种。

（2）.酸碱度（pH）值：7.5-8.5最佳（适应范围6-10）。

（3）.水硬度：pH值中性时10度以下。即调节pH值至8.0左右时，培养介质中的乳白色沉淀物不宜过多。

（4）.温度：25℃-34℃最佳（适应范围15℃-40℃）。

（5）.光照强度:3000LX-4000LX最佳。即每25千克菌液需用60瓦左右的电灯泡进行光照，当然，太阳光最好且无需成本。

（6）.透气性：密闭、敞口皆可培养，密闭效果更好。

（7）.容器：透明或白色容器；大规模培养可用土池、水泥池等，菌液深度30厘米以下为

佳。

三、接种

培养基配制好后，应立即进行接种。光合细菌生产性培养的接种量比较高，一般为20％～50％，即菌种母液量和新配培养量之比为1：4（20％）～1：1（50％），且不应低于20％，尤其微气培养接种总量应高些，否则，光合细菌在培养液中很难占绝对优势。

四、光合细菌的生产工艺

1、培养液的配制

将光合细菌培养基取一小包（0.5公斤），放入一个干净的容器中，加入100公斤水，搅拌均匀，直到培养基溶化为止。

注意事项：水源一定要选择好，含菌量较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水。从经济、实

用的角度考虑，地下水（井水）含菌量低，为最佳水源，另外，若当地自来水含氯较低，也可用，效果很好；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调pH值至偏碱后使用。

容器：少量生产可用透明度较高的白色或透明塑料桶、玻璃容器。大量生产可用水泥池、水泥船，也可临时开挖土池，垫上双层塑料膜防漏防浑浊，培养液的深度为30厘米最佳。

2、培养方式有以下二种：

（1）做小规模培养

①容器为：1.25升的饮料瓶，即小规模生产方法，由于饮料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培养环境好，需要的接种量也少，比较简单。

②设备为：光照箱，用一个大的纸箱，放1个40瓦的白炽灯悬挂在箱子的顶部？（注意防火），纸箱内壁四周，摆装好了培养液并接了种的饮料瓶，这样，既达到了保温到25—40度的效果，又达到了光照的效果。较大的箱子要用60瓦的白炽灯，一般一个箱子，可放这种饮料瓶8个以上，即一次可生产约10公斤/箱。灯泡与瓶子的距离不超过20厘米。夏天，可撤去纸箱，以防温度过高，并在纸箱四周钻孔以散热。

③操作规程如下：

配料：培养液和液体菌种4：1

培养：在箱子内，打开白炽灯，照几天即可，一般可达到温度在35度，控制在30--40度之内，第一次培养可能需要5天以上，每天早晚摇晃两次，一般只需要2天即可长成深红色。

成熟标准：以培养液长成深红色为准，这时一般成品的光合细菌浓度可达到30--50亿/毫升。（2）大规模培养：利用太阳能大规模培养（以培养2吨菌液为例）：

选择阳光充足的地方，开挖一土池（长5米、宽1.8米、深0.4米），垫上塑料薄膜，然后再铺上桶状塑料薄膜，并将其一端密封，从另一端加入1.8吨配制好的培养液，和0.2吨的菌种，一共2吨，排尽薄膜中空气后，再将该端密封。保持适当的温度，冬天如果温度过低，搭建透明塑料薄膜棚增温。5天后，菌液培养成熟。

五、培养管理

光合细菌的培养日常管理包括测试、观察和分析处理等三个方面。

1.测试

（1）搅拌：光合细菌培养过程中必须搅拌或充气，其作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照，保持菌细胞的良好生长，每天至少摇动3次，定时进行。