八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系

文章编号:1000-5641(2002)01-0090-06

八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系

陈季武,　朱振勤,　杭　凯,　杨晓宁

(华东师范大学生命科学学院,上海　200062)

摘要:采用H 2O 2-CTMAB -Luminol 化学发光体系和Fe 2+诱发脂蛋白PU FA 过氧化比色体系,研究了八种高纯度的天然黄酮类化合物清除H 2O 2、LO ・和LOO ・的构效关系。结果表明,这八种天然黄酮类化合物都能有效地清除H 2O 2、LO ・和LOO ・。根据其清除作用和化学结构分析,得出如下结论:B 环上羟基是清除H 2O 2、LO ・和LOO ・的主要活性基团,A 环上羟基是清除H 2O 2、LO ・和LOO ・的重要基团,并且B 环上羟基相邻清除作用就大大增强;糖甙对清除

H 2O 2、LO ・和LOO ・也有贡献。

关键词:黄酮类化合物;　抗氧化;　构效关系中图分类号:Q505 文献标识码:A

黄酮类化合物是泛指两个芳环(A 与B )通过三碳链相互连接构成的一系列化合物。大多数以植物为原料的中药都含有黄酮类化合物。现已发现黄酮类化合物具有众多生理功能

和药用价值,如保护心脑血管、抗菌消炎、抗辐射和抗肿瘤等[[1-4],其中引人注目的是其抗氧化作用,使该研究成为热门课题之一。由于极高纯度的黄酮类化合物来源及技术等限制,对黄酮类化合物抗氧化的研究主要集中于效用上,对其构效关系进行研究甚少。鉴于黄酮类化合物在药学、保健品、食品和化妆品等方面已有的和潜在的应用前景,有必要对其构效关系进行研究。为此,采用H 2O 2-CTMAB -Luminol 发光体系和Fe 2+诱发的脂蛋白PU 2FA 过氧化的比色体系,研究了八种纯度高达97%以上的天然黄酮类化合物清除H 2O 2、LO ・

和LOO ・的构效关系。

1　材料与方法

1.1材料1.1.1　试剂

鲁米诺系Sigma 产品,十六烷基三甲基溴化铵(CTMAB )系B IB 进口分装,其余试剂均系国产分析纯。1.1.2　药物

槲皮素系Fluka 产品,纯度为99%;金丝桃甙、泽漆新甙、芸香甙、山奈素和橙皮甙均由中科院上海药物研究所朱大元教授惠赠,纯度达98%以上;茶多酚购自浙江农业大学茶叶系;黄芩甙由上海中药一厂提供,纯度高达97%以上。

　收稿日期:2001-02

　作者简介:(1956-),男,副教授.

　第1期2002年3月

华东师范大学学报(自然科学版)

Journal of East China Normal University (Natural Science )

No.1　Mar.2002

1.2　实验方法

1.2.1　H 2O 2的化学发光体系

按文献[5]报道,采用H 2O 2-CTMAB -Luminol 发光体系:在测试管中依次加入100μl

10mmol/L H 2O 2(现配)、300μl 0.2mol/L 碳酸盐缓冲液(p H10.77)和100μl 不同浓度的药物

(对照管以100μl 碳酸盐缓冲液代替),置于发光仪中,再加入5mmol/L luminol 和10mmol/

L CTMAB 等量混合液500μl ,启动反应,延迟15秒后测定10秒积分发光强度,连续测3次,

取平均值。药物作用以清除率(%)表示。

清除率(%)=(对照管发光值-样品管发光值)/对照管发光值×100%1.2.2　Fe 2+诱发脂蛋白PU FA 过氧化比色体系　按文献[6]报道,采用以Fe 2+诱发卵黄磷脂C -2位上的极低密度脂蛋白(VLDL )和低密度脂蛋白(LDL )过不饱和脂肪酸(PU FA )

的过氧化模型:在测试管中依次加入0.2ml 卵黄悬液(临用前用p H7.45　0.1mol/L PBS 稀释卵黄30倍,并搅拌10min )、0.1ml 不同浓度的药物、0.2ml 25mmol/L FeSO 4(现配)和1.5ml PBS (药物管)。对照管除不加药液外其他试剂同前并提前加入20%三氯乙酸(TCA )溶液0.5ml 。实验开始将上述两种试管同时置于水浴中震荡15min ,取出后,药物管加入TCA 0.5ml ,静置10min 后,与对照管一起于3500rpm 离心10min ,取2.0ml 上清液,分别加入1.0ml 0.8%的硫代巴比妥酸溶液,加塞于100℃水浴15min ,取出冷却,以空白管(以2.0ml PBS 代替)调零,751型紫外可见分光光度计测A 532值。样品AOA 用对卵黄脂蛋白L PO 的抑制率(%)表示。

AOA (%)=(对照管A 532值-样品管A 532值)/对照管A 532值×100%

2　结 果

2.1　八种天然黄酮类化合物对H 2O 2的清除作用

如表1所示,槲皮素、茶多酚、金丝桃甙、泽漆新甙、芸香甙、山奈素、橙皮甙和黄芩甙对H 2O 2-CTMAB -Luminol 体系所引起的化学发光,均呈明显的抑制作用,其抑制作用均随浓度的增大而增强,量效关系显著,其发光抑制率50%的浓度(IC 50)分别为0.65

μg/ml 、0.82μg/ml 、0.87μg/ml 、1.8μg/ml 、8.5μg/ml 、11.5μg/ml 、37μg/ml 、70

μg/ml 。表1　八种天然黄酮类化合物对H 2O 2的清除作用

Tab.1　Scavenging effects of eight natural flavonoids on H 2O 2,(n =3, x ±SD )

品　名含量(

μg/ml )化学发光强度

发光抑制%

IC 50(

μg/ml )对照0382104±995520槲皮素

0.10

298423±1462321.9

0.25249896±774634.60.50220091±506342.40.65

1.569160±248981.9

2.543559±104788.6茶多酚

0.25288871±953224.40.50234612±961933.51.0175385±508654.10.82

1.5132590±474165.33.5

17195±481

95.5

1

9第1期陈季武,等:八种天然黄酮类化合物的抗氧化构效关系