Taka逆转录试剂盒

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【使用器具】 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前按下列方法进行处理。 （1）用 0.1% DEPC（焦碳酸二乙酯）水溶液在 37℃下处理 12 小时。 （2）然后在 120℃下高压灭菌 30 分钟以除去残留的 DEPC。 RNA 实验用的器具建议专门使用，不要用于其它实验。
【试剂配制】 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60 min）或用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后 的玻璃容器盛装（也可使用 RNA 实验用的一次性塑料容器），使用的无菌水须用 0.1%的 DEPC 处理 后进行高温高压灭菌。 RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。
●保 存： -20℃。
●RNA 样品制备
本试剂盒是将 RNA 合成 cDNA 的试剂盒。RNA 的纯度会影响 cDNA 的合成量，而制备 RNA 的关键是 要抑制细胞中的 RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的 RNA 分解酶的污染。因此，在实验中必须采取 以下措施：戴一次性干净手套；使用 RNA 操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法 可以防止实验者的汗液、唾液中的 RNA 分解酶的污染。
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*2 ① Total RNA的使用量小于 5 μg；Poly(A)+ RNA的使用量小于 1 μg。 ② Real Time RT-PCR 反应时，Total RNA 的最大使用量为 1 μg。
② 在 PCR 仪上进行下列条件的变性、退火反应：
65℃ 5 min ↓ 冰上急冷
③ 在上述 Microtube 管中配制下列反转录反应液。
电 话： 0411-87641681 87641683 传 真： 0411-87619946 87621675 E.mail： service@ 网 址：
V2010.03
本制品仅供研究用。请勿用于人体及动物的医疗、临床诊断或作为食品、化妆品、家庭用品的添加剂
SYBR® Premix Ex TaqTM II（Perfect Real Time） SYBR® Premix DimerEraserTM TaqMan探针方法检测试剂：Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）
●实验操作方法
① 在 Microtube 中配制下列混合液。
高扩增效率：TaKaRa Ex Taq ®、TaKaRa Ex Taq ® HS 长链DNA扩增：TaKaRa LA Taq ®、TaKaRa LA Taq ® HS 高保真PCR扩增：PrimeSTAR ® HS DNA Polymerase
2．Real Time PCR 相关试剂。 SYBR Green I方法检测试剂：SYBR® Premix Ex TaqTM（Perfect Real Time）
●制品内容（50 次量）
1. PrimeScript® RTase（200 U/ μl） 2. 5×PrimeScript® Buffer 3. RNase Inhibitor（40 U/μl） 4. dNTP Mixture（10 mM each） 5. Oligo dT Primer（50 μM） 6. Random 6 mers（50 μM） 7. RNase free H2O
0411-87641685，87641686 8008909508，4006518769
宝生物工程（大连）有限公司
TaKaRa Biotechnology (Dalian) Co., Ltd.
辽宁省大连经济技术开发区东北二街 19 号（116600）
No.19 Dongbei 2nd Street, Development Zone, Dalian, China
【制备方法】 使用简单的 RNA 纯化方法即可获得满足于 RT-PCR 反应的 RNA（只需少量的 RNA 便可进行 RT-PCR 反应）。但为了保证实验的成功率，建议使用 GTC 法（异硫氰酸胍法）制备的高纯度 RNA。 从培养细胞、组织中提取时，使用 RNAiso Plus（TaKaRa Code: D9108）。 从血液中提取RNA时，建议使用Catrimox-14® RNA Isolation Kit Ver.2.11（TaKaRa Code: DWA005），可在短时间内制备高纯度的RNA。
TaKaRa Code：D6110A
PrimeScript® 1st Strand cDNA Synthesis Kit （50 次量）
说明书
宝生物工程(大连)有限公司
目录
内容 ● 制品说明 ● 制品内容 ●保 存 ● RNA 样品制备 ● RT-PCR 及 Real Time RT-PCR 反应相关试剂 ● 实验操作方法
●RT-PCR 及 Real Time RT-PCR 反应相关试剂
1st Strand cDNA 合成反应液可以作为 PCR、Real Time PCR 反应用的模板。1st Strand cDNA 合成 反应液的添加量不要超过 PCR 反应体系的 1/10（V/V）。
1．PCR 相关 DNA Polymerase。
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●制品说明
本制品是使用PrimeScript® RTase从Total RNA或Poly(A)+ RNA合成 1st Strand cDNA的试剂盒，含有 1st Strand cDNA合成所需的全部试剂。 PrimeScript® Reverse Transcriptase是TaKaRa公司独自开发的一种新型RNase H-型反转录酶。本酶 具有极强的延伸能力，能够有效合成长达 12 kbp的 1st Strand cDNA，即使对具有复杂二级结构的RNA， 在 42℃条件下也能得到良好的反转录效果，无需进行高温反转录反应（高温反转录反应会导致RNA的降 解）。 合成的 1st Strand cDNA 可广泛应用于 2nd Strand 合成、杂交、PCR 扩增、Real Time PCR 反应等。
【本 Kit 以外需准备的主要试剂及仪器】 1. PCR 扩增仪。
TaKaRa PCR Thermal Cycler Dice® Gradient（TaKaRa Code: TP600）等。 2. 电泳用凝胶。
Agarose Regular（TaKaRa Code: D601）等。 3. 微量离心机。 4. 微量移液器。
上述变性、退火后反应液 5×PrimeScript® Buffer RNase Inhibitor（40 U/μl） PrimeScript® RTase（200 U/μl） RNase Free dH2O Total
10 μl 4 μl
0.5 μl 1 μl
4.5 μl 20 μl
④ 在 PCR 仪上按下列条件进行反转录反应：
（30℃
10 min）*3
↓
42℃（50℃） 30-60 min *4
↓
95℃
5 min *5 （酶失活）处理后，冰上放置。
*3 以 Random Primers 作为反转录引物时，应先进行 30℃，10 分钟反应。 *4 PrimeScript® Reverse Transcriptase延伸能力强，通常情况下，即使模板RNA具有复杂的二级
结构，也可以在 42℃下进行反转录反应。但当反转录引物使用PCR的下游引物时，由于引物错配 的原因等易发生非特异性扩增，这时可以将反转录温度设为 50℃。 *5 长片段扩增时，为了保证 1st strand cDNA 完整性，请使用 70℃ 15 min 失活处理。
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MEMO
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技术咨询热线：
Oligo dT Primer（50 μM）[or Random 6 mers（50 μM）]
dNTP Mixture（10 mM each） Total RNA（or Poly(A)+ RNA） RNase free dH2OБайду номын сангаас
l μl*1 1 μl X μg*2 up to 10 μl
*1 ① 2 kb 以上的长片段 cDNA 合成时，Random 6 mers 引物的使用量为 0.4 μ（l 20 pmol）。 ② Real Time PCR 反应时，Random 6 mers 引物使用 2 μl（100 pmol）可以得到较好的 实验结果。 ③ 也可以使用 Gene Specific Primer，此时 Primer 终浓度为 0.1 μM。
50 μl 200 μl
25 μl 50 μl 50 μl 100 μl
1 ml
【引物序列】
引物名称 Random 6 mers Oligo dT Primer
引物序列 pd(N)6 TaKaRa 独自开发的 dT 区域的序列*
* 该序列和 TaKaRa RNA PCR Kit（AMV）Ver.3.0（TaKaRa Code: DRR019A） 的 Oligo dT Adaptor Primer 不同，不含有 M13 Primer M4 对应序列。