人乳头瘤病毒

阴道镜下“活检”组织的采集
• 通过阴道镜观察宫颈表面血管的病变，并 用宫颈活检钳或宫颈管刮勺从宫颈上提取 可疑组织，装入有保存液的洗脱管中，旋 紧管盖，做好标识
疣体样本的采集• 用棉拭子疣体表面剐蹭4-6遍，也可 以把通过手术切除下来的疣体直接作 为检测样本。
专用的宫颈脱落细胞采集器
步骤1.标本采集
HPV基因分型芯片技术特点
• HPV基因芯片分型检测，利用L区相对保守 区的引物对待测样品中可能HPV亚型进行 广谱扩增，再将产物与固定在膜芯片上的 亚型特异性探针进行杂交，显色并判读结 果。此技术灵敏、准确、高效、快速，并 确定具体亚型。
GC-HPV检测实验流程
HPV检测目标物：
• 宫颈脱落细胞、疣体组织、组织切片、 活体组织
51℃洗脱15min
步骤五 显色与结果判读
• POD孵育 • POD洗涤 • 显色前准备 • 配制显色液,显色
检测结果：
• 膜条显色直接提示感染的HPV亚 型，包括高危及低危亚型。
HPV6 HPV11 HPV16 HPV18 HPV31 HPV33 HPV35 HPV39 HPV42 HPV43 HPV45 HPV51 HPV52 HPV53 HPV56 HPV58 HPV44 HPV59 HPV66 HPV68 HPV73 HPV83 HPVM PC
• HPV感染与宫颈炎的发生有密切关系。
• HPV病毒也可引起宫颈糜烂。
宫颈癌筛查方案
• 1.基本筛查方案
醋酸或碘染色后肉眼 观察
阳性
阴性
阴道镜 活检+ 病理检
查
相应治疗
定期随访
• 2.一般筛查方案
HPV检测+传统巴氏涂片
HPV（-） Cyto≤ASC-US
HPV（+） Cyto≤ASC-US
HPV（-）
HPV基因 分型检测
阴性
常规筛查
低危
无症状
一年后复查
阳性
疣体组织
相应治疗（冷冻、激光）
高危
液基细胞学检查（TCT）
正常
一年后复查HPV 和TCT
≤AS-
≥ASC-H
CUS
一年后复查HPV
阴道镜活检/多点活检+ECC
和TCT或阴道镜检 查
（-）
（+）
6个月后复查
相应治疗
HPV 和TCT
标本收集时间及结果报告
• 标本可于每天规定工作时间（8：00AM~5：00PM） 送检验科，未及时送检的可于4℃冰箱保存。
• 在临床送检的标本量满足每天检测前提下， 当日8：30后送检的标本，次日下午发出报 告，若标本量较少，则集中在每周三、五 进行检测。
HPV感染后的教育信息
• HPV检测阳性只说明一种病毒感染，而不是疾病。 感染是常见的，癌变是少见的。
60％－70％的人仅是HPV阳性而未见宫颈病变，提示虽然 发生HPV感染但并没有导致宫颈病变或宫颈癌，只需每年 进行一次HPV病毒筛查及相关其它检查即可。
• HPV-DNA阴性： 如果30岁以上的女性HPV检测结果为阴性，同时细胞学检 查提示没有发生任何病变，3－5年内都无需再做类似检查。
HPV检测后的处理
100℃加热10分钟
13000rpm离心10分钟， 保留上清待用
步骤三：PCR扩增
• 50℃ • 95℃ • 94℃ • 42℃ • 72℃
• 72℃
15min 10min 30s 90s 30s 5min
40 cycles
步骤四：杂交与洗脱
PCR产物加入杂交缓冲液 中,沸水浴变性10min
设定杂交仪的温度，无需 看守，于51℃杂交1小时
• 60-70%的妇女一生中曾会感染到HPV，其中绝 大部分个体将会自身清除HPV。
• 专家建议：对于只有HPV感染，没有宫颈病变的 女性，可不予治疗。
• HPV感染主要是通过性传播，但不排除其他途径， 应加强随访。
• HPV感染不能作为性生活复杂、混乱的指征。
•宫颈病变及宫颈癌的筛查，通过分型检测对 患者个体化评估，预测宫颈病变发生的风 险度, 决定筛查的间隔、治疗方案的制定。
•未明确诊断意义的非典型鳞状细胞和腺细胞 （AS-CUS/AGUS）和宫颈上皮内低度病变 （LSIL）的分流，提高诊断的可信度，降低 漏疹风险。
•宫颈病变治疗后的追综和随访
• HPV阳性还可提示生殖器赘生物为尖锐湿 疣的可能性。
目前有100余种型别HPV,约35种型别与生殖 道感染有关，大约20种型别与癌症相关。
• 与宫颈癌相关的高危型HPV有13种：16， 18，31，33，35，39，45，51，52，56， 58， 59，68。
• 与宫颈癌相关的低危型别有：6，11，40， 42，43，44。
HPV基因分型检测的意义
M4
适用人群：
• 三年以上性行为或21岁以上有性行为的女 性
• 宫颈病变及宫颈癌患者治疗后的随访 • 尖锐湿疣患者 • 咽喉部HPV感染导致的疣体增生的婴幼儿
受检前须知：
• 月经来潮后10-18天为最佳检查时间 • 检查前三天内不要用避孕药膏等阴道内用
药物及阴道冲洗 • 检查前24小时最好不要有性生活
扩阴器暴露宫颈口， 用棉拭子将分泌物 擦去
将宫颈刷伸入宫颈 口，单向轻柔转动 4-5周
将其放入有保存液 的洗脱管中
旋紧管盖，做好标 识
将宫颈刷折断，刷 头留在管中
步骤二：提取HPV DNA
将 标 本 转 移 到 1.5mL 微量离心管中
13000rpm10分钟，弃上清
加50L 裂解液充分 悬浮沉淀
Cyto≥ASC-H
HPV（+）
Cyto≥ASC-H
随访（次/35年
随访（次/ 年
（-）
阴道镜检查/多 点活检+ECC
（+）
相应治疗
• 3.最佳筛查方案
HPV（-） Cyto≤ASC-US
HPV检测+液基细胞学检 查
HPV（+） Cyto≤ASC-US
HPV（-）
Cyto≥ASC-H
HPV（+）
Cyto≥ASC-H
随访（次/35年
随访（次/ 年
（-）
阴道镜检查/多 点活检+ECC
（+）
相应治疗
HPV基因分型检测的方法
• 我科目前采用分子生物学前沿技术—多重 PCR（聚合酶链式反应）先进技术，通过对 HPV-DNA基因分型，可快速、准确地检测 常见的23种HPV亚型，包括5种低危型 （HPV6，11，42，43，44）和18种高危 型（HPV16，18，31，33，52等），覆盖 了现有已知的与人生殖道感染有关的绝大 部分HPV亚型。
HPV检验报告单
• 将分为高危及低危两组报告结果，并注明 两组中具体的阳性亚型，未注明的表示为 阴性。
例：
HPV-DNA分型报告单
高危组 阳性（+） 16，33
低危组 阴性（-）
结果分析
• HPV-DNA阳性： 20％－30％的HPV病毒感染会引起疾病，如果HPVDNA阳性，并伴随宫颈病变，应采取进一步医学检查， 以明确病变性质。
人乳头瘤病毒（HPV）基因分 型检测
湖北省肿瘤医院 雷旦生
人乳头瘤病毒（HPV）
• HPV(人类乳头瘤病毒)是以人类为唯一宿主 的一种DNA病毒，现在已经明确，HPV与 宫颈癌的发生高度相关。医学数据表明， 60％～70％的女性感染过HPV病毒，99.8 ％的宫颈癌患者中可以检测到HPV，而 HPV阴性者几乎不会发生宫颈癌。除此之 外，98％以上的宫颈疾病患者体内也存在 HPV。