微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
(2023)微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水中微生物实验报告实验概述•实验名称：水中微生物总数和大肠菌群的检测•实验时间：2023年•实验地点：实验室实验目的•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况•评估水质卫生状况，指导水资源管理和人群健康实验方法1.采集不同来源的水样。
2.将水样制成不同浓度的稀释液。
3.取一定量的水样稀释液注入培养皿中。
4.加入适当培养基，进行菌落计数和形态特征观察。
5.通过酶促法检测大肠杆菌。
实验结果•来源于自来水厂的水样中，微生物总数为100CFU/mL，大肠菌群未检测到。
•来源于河流的水样中，微生物总数为1000CFU/mL，大肠菌群为20CFU/100mL。
•来源于地下水的水样中，微生物总数为10CFU/mL，大肠菌群未检测到。
结论•来源于自来水厂的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
•来源于河流的水样水质较差，大肠菌群的检出说明存在污染，需进行水质治理。
•来源于地下水的水样水质较好，不存在大肠菌群的污染。
实验意义•检测水中微生物总数和大肠菌群的存在情况，有利于保障人类健康和水资源的可持续利用。
•提供科学依据和技术支持，指导水资源管理和水质卫生监测。
实验注意事项•实验过程需严格遵守无菌操作规范，防止样本污染。
•实验前需对实验设备、培养基等进行消毒处理，确保实验环境洁净。
•实验结束后，需妥善处理实验产生的废液、废料等。
实验展望•未来可进一步开展对水中其他微生物种类的检测，深入了解水生态系统的生物多样性。
•结合近年来人类活动和气候变化的影响，对水质卫生进行长期监测，及时掌握水质变化趋势。
•根据实验结果，制定针对性的水资源管理和水质卫生治理措施。
结语该实验通过检测水中微生物总数和大肠菌群，评估了水质的卫生状况。
实验结果表明，水质卫生状况与水源的来源密切相关。
希望通过类似的实验，加强对水质卫生状况的监测和管理，确保水资源的可持续利用，保障人们的用水安全和健康。
微生物实验报告：水中细菌总数和大肠菌群的检测
2，EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？
EMB培养基主要包含以下几种物质：蛋白胨，乳糖，蔗糖，磷酸二氢钾，伊红Y，美蓝，蒸馏水。EMB培养基的机制就是靠微生物在发酵过程中，使培养基发生分解，产生大量的氢离子，从而改变培养基的PH，由于提前添加的指示剂，在PH值的改变下，就会发生颜色的变化，从而鉴定生长的菌种。在检测大肠菌群的时候，蛋白胨提供了氮源，磷酸二氢钾提供了磷元素和钾元素，
-3-5
变，诸如在在10，设置4个重复，而10时候，可以设置8个重复，这样可以在追求最简工作量的时候，获得最简的实验结果。
微生物实验10水中大肠菌群数的测定
实验九水中大肠菌群数的测定一、目的要求学习大肠菌群数的检测原理和方法。
二、实验材料1.样品：水样2. 培养基：乳糖胆盐发酵管(单料及双料)，伊红美兰琼脂(EMB)平板，乳糖发酵管。
3. 其他：显微镜，酒精灯，无菌吸管(10m1、1m1)，接种环，载玻片等三、基本原理水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便。
由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在是非常困难的专业化工作。
由于大肠菌群在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，且检验方法比较简便，因此一般采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。
如果水中大肠菌群的菌数超过一定的数量，则说明此水已被粪便污染，并有可能含有病原菌。
大肠菌群的定义是指一群好氧和兼性厌氧、革染氏阴性、无芽孢的杆状细菌，并能在乳糖培养基中，经37℃24~48h培养能产酸产气。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得超过3个。
检测大肠菌群的方法有稀释培养法和膜滤法两种，其中稀释培养法是标准分析法，为我国大多数卫生单位和水厂所使用。
它包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。
四、方法与步骤1.采样：取100ml磨口带塞玻璃瓶，包扎后，干热灭菌备用。
取自来水样时，至少应先放水5min，以冲去龙头口所带的微生物，获得主流管中有代表性的水样。
取样时，用右手握瓶，左手启开瓶塞，用覆盖瓶口的纸托住瓶塞，收集样品后，连同覆盖纸一起将瓶口塞好，并用线绳在原处扎好。
注意手指不得触及瓶口内部。
在静水中取样时，先用右手揭去塞子，瓶口朝下浸入水下约30cm处，然后将瓶子反转过来，待水注满后，取出塞好瓶口。
如果水在流动，瓶口必须迎着水流，以免手上的细菌被水冲进瓶子。
2.水样放置过程中，内含的细菌数目和类型会发生变化，所以要求水样品应于6~10℃贮存，并不超过6h。
3.初发酵试验：吸取待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，10ml接种量采用双料发酵管，而lml及lml以下接种量采用单料管。
实验 水中细菌总数的测定 水中大肠杆菌的测定
实验2 水中大肠菌群数的测定一、目的要求1．了解大肠菌群数量在引用水中的重要性2．学习掌握多管发酵法和滤膜法测定大肠菌群数二、原理若水源被粪便污染，则有可能也被肠道病原菌污染，然而肠道病原菌在水中容易死亡与变异，因此数量较少，要从中特别是自来水中分离出病原菌常较困难与费时，这样就要找到一个合适的指示菌，此指示菌要求是大量出现在粪便中的非病原菌，并且和水源病原菌相比是较易检出的。
若指示菌在水中不存在或数量很少，则大多数情况也保证没有病原菌。
最广泛应用的指示菌是大肠菌群，它的定义是：一群好氧和兼性厌氧、革兰氏阴性、无芽胞的杆状细菌，并在乳糖培养基中，经37ºC、24～48h培养能产酸产气，根据水中大肠菌群的数目来判断水源是否被粪便所污染，并间接推测水源受肠道病原菌污染的可能性。
我国规定每升自来水中大肠菌群不得检出；若只经过加氯消毒即供作生活饮用水的水源水，大肠菌群数平均每升不得超过1000个；经过净化处理及加氯消毒后供作生活饮用水的水源水，其大肠菌群数平均每升不得超过10000个。
检查大肠菌群的方法有多管发酵法与滤膜法两种。
多管发酵法使用历史较久，又称水的标准分析方法，为我国大多数卫生单位与水厂所采用；滤膜法是一种快速的替代方法，而且结果重复性好，又能测定大体积的水样，目前国内已有很多大城市的水厂采用此法。
三、实验仪器和材料1．锥形瓶（500 ml）、试管（18 mm×180 mm）、大试管（容积150 ml）、移液管1 ml 及10ml、培养皿（直径90 mm）、接种环、试管架1个。
2．革兰氏染色液一套：草酸铵结晶紫、革氏碘液、95％乙醇、蕃红染液3．显微镜4．自来水（或受粪便污染的河、湖水）400ml5．蛋白胨、乳糖、磷酸氢二钾、琼脂、无水亚硫酸钠、牛肉膏、氯化钠、1.6％溴甲酚紫乙醇溶液、5％碱性品红乙醇溶液、2％伊红水溶液、0.5％美蓝水溶液。
6．10％NaOH、10％HCl、精密pH试纸6.4～8.4。
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测(一)水是一种重要的自然资源，因此水的质量非常重要。
水的污染问题已经引起了越来越多的人关注。
而微生物是水中的主要污染物之一，尤其是细菌总数和大肠菌群，这些污染物对人体的影响是非常大的。
在这篇报告中，我们将介绍我们对这两种污染物的检测结果。
1. 实验材料我们使用了以下材料进行实验：- 水样：我们选择了来自自来水厂和自然水源（例如河流和湖泊）的样本。
- 培养基：我们使用了通用富营养基和多氯芬酸钠培养基进行实验。
2. 实验方法我们使用了以下步骤来检测水中的微生物：- 取样：我们使用无菌技术取样。
具体而言，我们先用消毒过的杯子收集水样，然后用无菌注射器将水转移到无菌容器中。
- 稀释：我们用无菌盘子将水样稀释至适当的浓度。
- 培养：我们将每个稀释后的水样盛放于培养基中，然后将培养皿放入孵化箱，控制温度在30℃，进行孵化48小时。
- 计数：我们使用显微镜和计数计数室对每个水样中的细菌进行计数。
3. 实验结果我们进行了3次独立的实验，每次实验都使用了来自不同水源的样本。
下面是我们的检测结果。
- 细菌总数我们使用通用富营养基在每个水样中进行了细菌总数的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源细菌总数（CFU/mL）自来水厂8 × 104 5 × 104湖泊2 × 105 3 × 105河流5 × 105 6 × 105-大肠菌群我们使用多氯芬酸钠培养基进行了大肠菌群的检测，并且使用了10-4和10-5的稀释度，数值末一位为CFU/mL。
下表列出了我们的实验结果。
水源大肠菌群（CFU/mL）自来水厂不可检测不可检测湖泊1 × 103 1 × 103河流2 × 103 2 × 1034. 结论我们的实验结果表明，不同来源的水样中细菌总数和大肠菌群的数量有很大的不同。
实验十一 水中细菌总数和大肠菌群数的检测
3、结果计算
根据阳性管数查表得大肠菌群数。
五、思考题
1、记录每组样品中所测得的细菌总数和大肠菌群数。 2、典型的大肠杆菌群菌落特征是什么？
实验十一
水中细菌总数和大肠菌群 数的检测
一、实验目的
1、学习并掌握水体细菌学的检验 2、学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法
二、实验原理
1、细菌总数的测定：采用稀释平板法（混合平板法）
2、大肠菌群数的测定：采用多管发酵法（MPN法） 大肠菌群以大肠杆菌为主，能在37℃48h内发酵乳糖产酸、
产气。大肠菌群数可作为判断水源或食品污染的指标。
Байду номын сангаас（最好在30~300个之间）
（二）水中大肠菌群数的测定
1、初发酵实验
在3倍浓缩乳糖培养基中加入3个梯度样品各10ml（5个重
复），混匀37 ℃培养24h。
2、平板分离
不产酸不产气和不变浑浊 阴性
产酸产气或仅产酸
阳性
划线接种 于伊红美 兰平板， 37 ℃培养
24h
菌落为深紫黑色，具 金属光泽或紫黑色不 带金属光泽或淡紫红 色中心较深
最大概率数法：对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算 取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管 的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为 阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。
三、实验材料
1、水样 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、3倍浓缩乳糖蛋白胨培养
基（带指形管）、伊红美兰固体培养基
四、实验方法
（一）水中细菌总数的测定（混合平板法） 1、样品采集和稀释
自来水、纯净水、饮料作原样、 10-1 、10-2三个稀释度 污水作10-1 、10-2 、10-3三个稀释度 2、取3个稀释度样品各1ml于平皿中，再倒入50℃左右牛肉 膏蛋白胨培养基约15ml，轻轻转动混合均匀。凝固后37 ℃倒置培养。每个稀释度作3个重复。 细菌总数＝同一稀释度平板上菌落平均数×稀释倍数
实验八九水中细菌总数与大肠菌群数的测定
例次
不同稀释度的平均菌落数
10-1
10-2
10-3
仅有一个稀释度在此范围： 1365
164
20
菌落数×稀释倍数 有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比<2，取平均值
2760
295
46
有两个稀释度在30-300之间 菌落数之比>2，选较小值
3890
271
60
所有稀释度均>300 取稀释倍数最大者
入装有10ml普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取10ml原水样 ，注入装有5ml 3倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中。混匀，37 ℃培 养24h，24h未产气继续培养至48h。
普通浓度发酵管中参加20%乳糖0.55ml，3倍浓缩发酵管中参 加乳糖0.75ml
实验方法
多管发酵法测定水中总大肠菌群
3.平板别离： 〔1〕制备伊红美蓝平板： 45 ℃，无菌，倾注15ml 〔2〕选产酸产气的发酵管，接种至伊红美蓝平板〔分区划线
无法计数 1650 513
所有稀释度均<30 取稀释倍数最小者
27
11
5
没有任何稀释度在30-300之间 无法计数 305
12
选最接近该范围者
两个稀释度 菌落之比
菌落总பைடு நூலகம் （CFU/ml）
——
1.6×104
1.6
3.8×104
2.2
2.7×104
—— —— ——
5.1×105 2.7×102 3.1×104
实验八-九 水中细菌总数与大肠菌群数 的测定及计数
目的要求
1、学习检测水中细菌总数和大肠菌群数的方法 2、掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数 的方法 3、学习使用大肠菌群检索表
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测.docx
水中细菌总数的测定和大肠菌群的检测（1）录入时间 :2010-9-25 11:17:29来源：生物信息网（一 ) 实验目的(1)了解和学习水中细菌总数和大肠菌群的测定原理和测定意义。
(2)学习和掌握用稀释平板计数法测定水中细菌总数的方法。
(3)学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。
（二 ) 实验原理水是微生物广泛分布的天然环境。
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物( 如光合藻类 ) 、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。
水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。
国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过 3 个，细菌总数每mL不超过100 个。
所谓细菌总数是指算的是平板上形成的菌落1mL或 1g 检样中所含细菌菌落的总数，所用的方法是稀释平板计数法，由于计(colony-forming unit，cfu)数，故其单位应是cfu/g(mL)。
它反映的是检样中活菌的数量。
所谓大肠菌群，是指在 37℃24h 内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。
在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。
这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。
目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。
因而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。
水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。
多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。
细菌总数与大肠菌群数测定
3〕假设所有稀释度的平均菌落数均大于 300，那么应按稀释度最高的平均菌落数 乘以稀释倍数报告之。
4〕假设所有稀释度的平均菌落数均小于 30，那么应以按稀释度最低的平均菌落数 乘以稀释倍数报告之。
5〕假设所有稀释度的平均菌落数均不在 30~300之间，那么应以最接近30或300 的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
1〕首先选择平均菌落数在30~300之间 者进行计算，假设只有一个稀释度的平均 菌落数符合此范围时，那么将该菌落数乘 以稀释倍数报告之
2〕假设有两个稀释度，其生长的菌落数 均在30~300之间，那么视二者之比值来 决定，假设其比值小于2应报告两者的平 均数。
假设大于2那么报告其中稀释度较小的菌 落总数。
Pi
Qi) 0
i1 eVix/V 1
5.解此方程，得x=MPN
6.该方程为超越方程，一般采用数值法求近似解
7.日常实验时采用查表法推算MPN值。
8.表格在教材第260-261页。
大肠菌群数测定
实验步骤
2.别离培养
〔1〕制备伊红美蓝平板：
45 ℃，无菌，倾注，15ml〔2〕选产酸产气的发酵管
〔3〕接种至伊红美蓝平板
分区划线法
〔4〕培养： 37℃，24h
别离培养
器材与试剂 初发酵结果、酒精灯、接种环、伊红美兰平板培养基
分区划线法
第一区划线 灭菌接种环 第二区划线 灭菌接种环 第三区划线 灭菌接种环
在求同稀释度的平均数时，假设其中一个 平皿有较大片状菌落生长时，那么不宜采 用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该 稀释度的平均菌落数。假设片状菌落不到 平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又 很均匀，那么可将此半皿计数后乘2以代 表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均 菌落数。
微生物实验报告水中细菌总数和大肠菌群的检测
实验六水中细菌总数与大肠菌群的检测摘要:本实验以测定公园河流水的细菌总数与大肠菌群的数量,来测定特定地点的水质情况。
初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标,判定水体的质量。
对该实验点的水源作出了定性的评价,以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。
关键字:河流水;细菌总数测定;大肠菌群;EMB培养前言各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关,因而就是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数就是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)],可用稀释平板计数法检测。
水中大肠菌群的数量可用来判断水源就是否被粪便污染,并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。
特征:G-无芽孢杆菌,兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。
多管发酵法初发酵:适当稀释样品,乳糖发酵培养,产酸产气;分离培养:伊红美蓝(EMB)平板上划线分离,出现紫色、粉红色特征性菌落;复发酵验证:挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。
材料与方法牛肉膏蛋白胨琼脂培养基:用于水中细菌总数测定牛肉膏5g,蛋白胨10g, NaCl 5.0 g,琼脂8g, 蒸馏水1000ml; pH 7、0乳糖胆盐蛋白胨培养基:用于初发酵1×:蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0、04%溴甲酚紫水溶液25mL(调pH值后加)、水1000mL、pH 7、2－7、4三倍浓缩液(3×):除水以外,其余成分取三倍用量分装:1×的培养基分装9ml/管, 3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶,均装上德汉氏小管。
灭菌条件:115℃,15min。
EMB培养基:用于大肠菌群菌落鉴定脱水培养基,按说明书操作,水用量为90%。
水源:紫竹院河水仪器:高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。
试剂:牛肉膏,蛋白胨,NaCl,琼脂粉,伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0、04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂具体实验步骤:1),相关器械的灭菌操作,以及前往紫竹院取少量的样品水。
水中总大肠菌群的测定
微生物综合实验：水中细菌总数和大肠菌群的测定一实验目的1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
3、学习检测水中大肠菌群的方法，了解大肠菌群数量与水质状况的关系。
二、实验原理水中细菌总数可作为判定被检水样被有机物污染程度的标志。
本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，它们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以一定的培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是一种近似值。
目前一般是采用普通肉膏蛋白胨琼脂培养基。
我国规定1ml自来水中细菌总数不得超过100个。
大肠菌群是一群需氧或兼性厌氧的、在37℃培养24~28h能发酵乳糖产酸与产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌，它们普遍存在于肠道中，且具有数量多，与多数肠道病原菌存活期相近，易于培养和观察等特点。
大肠菌群数是指每升水中含有的大肠菌群的近似值。
大肠菌群的检测方法有多管发酵法和滤膜法两种。
本实验采用多管发酵法，它被称为水的标准分析法，即将一定量的样品接种乳糖发酵管，根据发酵反应的结果，确证大肠菌群的阳性管数后在检索表中查出大肠菌群的近似值。
我国规定：每升自来水中大肠菌群数不得超过3个。
三、实验材料和用具：1、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，乳糖蛋白胨培养基，三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基，伊红美兰培养基（EMB培养基）。
2、试剂：无菌水、结晶紫染液、卢氏碘液、95%乙醇、番红染色液。
3、器皿：灭菌三角烧瓶，灭菌的带玻璃塞瓶，灭菌培养皿，灭菌吸管，灭菌试管，德汉氏小管，载玻片，无菌空瓶，移液管，接种环，酒精灯，注射器，显微镜等。
四、实验步骤第一周（2008-11-11）1、制备无菌水：取4支试管，向每支试管中加入9ml自来水。
2、配制：牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）乳糖蛋白胨培养基（蛋白胨10g，牛肉膏3g，乳糖5g，NaCl 5g，1．6%溴甲酚紫乙醇溶液1ml，蒸馏水1000ml，pH 7.2~7.4）三倍浓度浓缩乳糖蛋白胨培养基（将上述乳糖蛋白胨培养基浓缩3倍配制）3、将以上配制的无菌水和培养基全部进行灭菌处理。
水中细菌总数及大肠菌群的测定
实验日期：2017.11.22 实验班级：生物技术指导教师：张建丽
姓名：高熹学号：1120152430
水中细菌总数及大肠菌群的测定
一、实验目的
1、学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法。
2、了解水源水的平板菌落计数的原则。
二、实验原理
水中细菌总数可说明被有机物污染的程度。
细菌数越多，有机物质含量越大。
细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中，37℃经24小时培养后，所生长的菌落数。
我国规定自来水1ml的总菌数不得超过100个。
三、实验器材
1、实验仪器：培养箱
2、微生物材料：水样
3、培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂固体培养基
四、实验步骤
1、水样的采取
自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接取水样，备用。
2、平板的制作
（1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。
共做两个平皿。
（2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。
（3）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数。
五、实验结果及分析
实验组，观察到有16个菌落
对照组
六、实验反思
实验中水流时间不够，实验应做好提前准备做好规划。
水中细菌总数和总大肠菌群的测定
自来水中细菌总数的测定【摘要】水中细菌总数可说明被有机物污染的程度，细菌数越多，有机物含量越大。
本实验应用平板菌落记数技术测定水中细菌总数。
由于水中细菌种类繁多，他们对营养和其他生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，是水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的细菌总数仅是近似值。
本实验采用普通营养琼脂培养基，该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。
所谓细菌总数，指1毫升或1克检样中所含的细菌菌落的总数。
通过观测得到如下结果：在显微镜下可观察到众多的菌落且种类繁多，取其平均值得到，菌落数为每毫升自来水中21个细菌菌落。
【关键词】自来水普通营养琼脂培养基平板菌落计数技术细菌总数乳白色菌落【前言】微生物学指标是评价饮用水生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。
水是生命之源，人的生存离不开水环境，水质的好坏对人们生活起着至关重要的作用，而判断水质的标准，微生物在水中的数量、种类是必不可少的[1]。
各种天然水中常含一定数量的微生物。
水中微生物的主要来源是：水中的水生性微生物（如光合藻类）、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。
自来水指通过水处理厂净化、消毒后生产出来的符合国家饮用水标准的供人们生活、生产使用的水。
我国饮水卫生标准规定每毫升水样细菌总数37度培养24个小时不得大于100个。
微生物学指标是评价水中生物性污染的重要指标，是水质在流行病学上安全的保证。
近年来随着环境污染加重我国水质不断下降，给居民饮水安全带来隐患。
因此，我们想通过测定自来水中的细菌总数，了解水质情况，呼吁人们保护水资源。
本实验只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温的需氧的细菌菌落总数。
通过此实验我们能够计算出水中的细菌总数，从而判断自来水是否符合国家标准，是否受到污染[2]。
1 材料与器具1.1实验试剂牛肉膏蛋白胨 NaCl 1moL/LNaOH 1moL/LHCL灭菌水1.2实验仪器高压蒸气灭菌锅培养皿三角烧瓶带玻璃塞瓶天平试管牛角匙 pH试纸（pH5.5-9.0）棉花记号笔纱布吸管麻绳牛皮纸量筒玻璃棒电热炉称量杯2 实验方法2.1 水样的采取先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再放开水龙头使水流5min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。
微生实验报告 2012.11.23 实验九、水中细菌总数、大肠菌群数测定结果观察
微生实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级生物技术学号：040312011032水中细菌总数,大肠菌群数的结果观察一、观察方法1、先计算相同稀释度的平均菌落数。
若其中一个平板有较大片状菌态生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。
若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。
2、首先选择平均菌落数在30～300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数。
3、若有两个希释度的平均菌落数均在30～300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。
若其比值小于2应采取两者的平均数；若大于2，则取其中较小的菌落总数。
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数。
5、若所有稀释反的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。
6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍效。
二、实验结果(1) 细菌总数实验结果(2)大肠菌群数实验结果10-310-410-5三、思考题1从水样的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？答：我国规定每1ml自来水中总菌数不得超过100个，否则即为不合格，从实验结果来看，总细菌数大大超过了100，因此不合乎饮用水标准。
2你所测的水源水的污秽程度如何？答：我测水源污秽程度严重。
3、假如水中有大量的致病菌——霍乱弧菌，用多管发酵技术检测大肠杆菌群，能否得到阴性结果？为什么？答：能，因为霍乱跟大肠培养条件有点相似，都是37℃，但是霍乱不耐酸，大肠可以产酸，培养条件不同可能会出现阴性。
大肠菌群实验报告
大肠菌群实验报告篇一：大肠杆菌检测实验报告国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数实验目的实验原理：国标法操作的原理实验器材：培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台实验药品：磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤：一：10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。
灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。
用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min二：1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。
2：用量筒量取125ml的蒸馏水加入该锥形瓶中，制成培养基。
3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。
4：灭完菌后放入超净台中备用。
三：1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。
3：取4只试管，编号1—44：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。
6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。
9：取4只平皿，编号1—410：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。
缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。
潏河水中细菌总数和大肠菌群的测定
微生物实验报告 2010年12月29日潏河水中细菌总数和大肠菌群的测定——潏河水质检测1、实验目的和原理目的：1．1学习并掌握水中细菌总数和大肠菌群的检测方法。
1．2了解国家水质评价的微生物学标准，学会水质检测的方法。
原理：水中细菌总数和大肠菌群数是水体是否符合国家水质健康标准常用的两个测定项目。
细菌总数是指1ml水样在普通琼脂培养基中，37℃经24h培养后，所生长的菌落数（我国规定自来水1ml细菌总数不得超过100个）。
由于水中细菌种类繁多，营养和生长条件的要求差别很大，不可能找到一种培养基在一种条件下，使水中所有的细菌均能生长繁殖，因此，以某种培养基平板上生长出来的菌落，计算出来的水中细菌总数仅是近似值。
目前一般是采用普通营养琼脂培养基（即牛肉膏蛋白胨琼脂培养基），该培养基营养丰富，能使大多数细菌生长。
大肠菌群，是以E. coli为代表的，能在37℃、24h~48h内能发酵乳糖产酸、产气的好氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌的总称。
主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。
这类菌是温血动物肠道中的正常菌群，常随动物的粪便污染水源。
它们与水中存在的肠道病原菌成正相关性，而病原菌在水中浓度很低，测定手续繁琐，因此，大肠菌群是一个合适的指示菌，能指示出病原菌存在在于水中的可能性大小（我国规定每升自来水中大肠菌群不超过3个）。
测定水中大肠菌群有多种方法，其中多管发酵法较为常用，测定步骤如下：1）初发酵试验：采用乳糖蛋白胨液体培养基，内倒置一德汉氏小套管。
大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气，37℃培养，24h内产酸产气和48h产酸产气的发酵管均需进行平板分离。
2）平板分离：采用伊红美兰琼脂平板（EMB培养基），划线接种，37℃培养，分离出带核心的、有金属光泽的、深紫色、紫色或淡紫色的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检，G- 无芽孢杆菌者进入复发酵试验。
3）复发酵试验：以上阳性菌落（发酵乳糖而产酸产气；G- 无芽孢杆菌），进入复发酵试验，原理与初发酵试验同。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测
摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。
初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。
对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。
关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养
前言
各种天然水中常含有一定数量的微生物。
水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。
细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。
水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。
特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。
多管发酵法
初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气；
分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落；
复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。
材料和方法
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定
牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml；pH 7.0
乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵
1×：蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2－7.4
三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量
分装：1×的培养基分装9ml/管，3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。
灭菌条件：115℃，15min。
EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定
脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。
水源：紫竹院河水
仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。
试剂：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂
具体实验步骤：
1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。
2），按照上述的配料，无菌操作配置培养基。
3），细菌总数的测定：取上述样品水，一次稀释10-1,10-2,10-3,3个浓度。
对于每个浓度，取1ml稀释液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。
将平皿倒置培养在37℃的温箱24h，计算平皿的细菌总数。
4），大肠菌群的测定：将样品水稀释成100,10-1,10-2,3个梯度。
实验结果与数据分析 1，细菌菌落总数
组别 稀释浓度及菌落数
平板菌落状况
报告方式选取 菌落总数（cfug , cfu/ml
10-1 10-2 10-3 1 12 0 0 均小于30
最低稀释度下菌落数 × 稀释倍数
8.0×10
2 4 0 0 平均
8
2,大肠菌群总数
实验结果 原溶液 10-1 10-2 ck 初发酵
产酸 + + + + + - 产气 + + + + + - EMB
紫黑色
+ + + + + - 粉红色
- 革兰
氏染
色
G -
+ + + +
+
-
- 结论 +
+ + +
+
0 阳性管数 5
3，EMB 数据值计算 查表可得，MPN=ml
ml
10样接种量最大的一管的水指数
MPN
接种量最大的管：1ml
每100ml 水样中菌数最大可能值：230
95%可信限值 上限：700 下限：70 水样的分析得出这样的结果：细菌总数：80个/mL
大肠菌群数：2300个/L
大肠菌群数占细菌总数：2.88%。
根据我国《生活饮用水卫生标准》GB5749-85规定 细菌总数不超过100个，已达标。
大肠菌群不得超过1000个，超标。
经过严格的消毒处理，大肠杆菌不超过10000个，水样达标。
结论：从上述的水样分析，我们可以得出此处的河流水污染不是很严重，作为景观水，已经达到了标准，但是此类水是不能作为饮用水的，可能存在一些粪便的污染，导致大肠菌群的数量过高，倘若经过严格的消毒灭菌，才能饮用。
实验讨论：
1，大肠菌群的定义是什么？、为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
而由于大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。
大量的调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，而且人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。
粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。
大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
所以大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工作中。
2，EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？
EMB培养基主要包含以下几种物质：蛋白胨，乳糖，蔗糖，磷酸二氢钾，伊红Y，美蓝，蒸馏水。
EMB培养基的机制就是靠微生物在发酵过程中，使培养基发生分解，产生大量的氢离子，从而改变培养基的PH，由于提前添加的指示剂，在PH值的改变下，就会发生颜色的变化，从而鉴定生长的菌种。
在检测大肠菌群的时候，蛋白胨提供了氮源，磷酸二氢钾提供了磷元素和钾元素，
实验应注意的问题以及改进：
1，样品的问题
由于本实验是一个检测的实验，存在一个严格灭菌的过程。
从采样，到最后的分析，整个过程不仅不能让其他杂菌污染，而且还得保证样品中本身细菌的总数基本不损失。
1），采样的器械必须是经过严格灭菌的，而且其本身的构造不会对微生物的生存造成威胁。
2），由于样品会处于密闭的过程，水中的含氧量会慢慢降低，所以对样品的处理应该尽快处理。
3），对于样品的稀释不应该用蒸馏水，而应该用灭菌的生理盐水，防止细菌吸水裂解死亡。
4），整个接种的操作必须正确，不能杀死细菌，或者引入其他杂菌。
2，关于梯度重复的问题
本实验设计到一个很关键的问题，那就是梯度重复。
对于一个梯度的实验量的统计和处理，我们常常采用重复，来解决其实验误差所造成的影响，但有些时候重复增加了大量的工作量，却没有根本提高实验的准确性，仅以本实验为例。
在对细菌数量测定时候，我们每
个梯度设置了2个重复，在事实上，第一个梯度的准确性很高，但是在最后一个梯度，可能存在很大的误差。
在对一个样品进行定量分析的时候，我们往往要考虑很多干扰它的因数。
假定我们所取的样品现在要进行一个梯度的稀释后取样，当前浓度为c ，取样的体积为v ，那么假定单位体积内只存在一个细菌，则可以建立如下的数学模型：
[]
cv
cv k p cv a p a x x cv x nx
x
x
w i a i i n
i
i
=
≤=-=-=
∑,,
从模型中，我们可以得到最终的表达式：[]()vc a nvc
vc k a w i n a i i
≤⎪
⎪⎭⎫ ⎝⎛=∑,，当取样体
积和梯度恒定的时候，我们不难发现，增大取样的重复数，可以提高实验的精确度，但是当c 足够大的时候，分子本身就会变得无限小，而分母的一次增量远不如多次的。
同理，当c 很小的时候，分子变得很大，分母变得很小，这个时候不增加次数，或者调解取样体积，会造成很高的实验误差，所以，本实验的三个精度变量就是梯度，取样体积，梯度重复数。
鉴于对本实验的最后分析，我们觉得，在后两个梯度有必要增加重复数，虽然增加了工作量，但是可以有效避免较大的实验误差带来的干扰。
同样，在对其他的实验样品处理过程中，原始浓度一般只需要2个重复，随着数量级的增加，其重复的次数也应该发生变化，不应该不变，诸如在在10-3，设置4个重复，而10-5时候，可以设置8个重复，这样可以在追求最简工作量的时候，获得最简的实验结果。
参考文献：
[1] 王玉兰. 环境微生物学实验方法与技术.北京，化学工业出版社. 2009,3. [2] 陈坚. 环境微生物实验技术. 北京：化学工业出版社，2008
[3] 钱存柔. 微生物学实验教程（第二版）.北京：北京大学出版社，2008 [4] 周德庆. 微生物学教程（第二版）. 北京：高等教育出版社，2002,5. [5] 沈萍. 微生物学. 北京：高等教育出版社，2000.
[6] 徐全智，杨晋浩. 数学建模（第二版）. 北京：高等教育出版社，2008.。