济宁市土壤放线菌资源调查研究
放线菌资源开发与研究利用现状
放线菌资源开发与研究利用现状【摘要】放线菌是具有重大实用价值的一类微生物。
自从1943年Waksman 首先从链霉菌中发现链霉素以来，放线菌生物学的研究及抗生素的开发随之蓬勃展开，发现了大量的新属，继而推动了放线菌资源的研究。
我国的放线菌分类始于50年代初，半个世纪以来，分类研究工作取得了许多重要的进展。
【关键词】放线菌；多样性；抗生素；生物固氮；极端一、放线菌种群的多样性随着人类认识放线菌的能力和手段不断提高，越来越多的放线菌种类被发现和描述。
在历次出版的《伯杰氏细菌鉴定手册》中，放线菌属的数量增加了近两倍。
迄今有效描述的菌种约达2000个，其中链霉菌属的种500多个，占了很大比例。
因此链霉菌也被称为常见放线菌，常规检出率占放线菌95%左右，而其他种类放线菌的常规检出率仅占5%左右，被统称为稀有放线菌。
据统计，目前分离到的自然界中放线菌的种类仅为实际存在种类的0.1%-1%。
二、次生代谢生物活性产物放线菌所产生的生物活性代谢产物中，抗生素最引人注目。
自从20世纪40年代初Waksman用链霉菌进行系统筛选新抗生素以来，放线菌已被认为是新抗生素产生菌的主要来源。
其中许多具有重要医用价值的抗生素已用于临床，如氨基糖苷类、蒽环类、氯霉素类、-内酰胺类、大环内酯类等。
放线菌中又以链霉菌产生的抗生素种类最多，占总数的52%，其他稀有放线菌，如小单孢菌属、游动放线菌属、链孢囊菌属等，产生的抗生素种类占总数的15%。
放线菌也产生除抗生素外的其他多种生物活性物质，如酶及酶抑制剂、有机酸、氨基酸、维生素、甾体、生物碱、免疫调节剂等，其中链霉菌来源的占31%，稀有放线菌来源的占9%，这表明稀有放线菌作为新的生物活性物质的重要来源可能具有潜力。
三、生物固氮人们很早就发现了能与根瘤细菌共生固氮的豆科植物。
1866年，Waranin首先发现了一些非豆科植物结瘤的存在，并使用显微镜观察了赤杨根瘤的切片，认为是微生物刺激植物根部形成根瘤。
土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验报告
土壤中放线菌的采集、分离、培养、发酵及提取实验目的：1、从土壤中分离产抗生素的放线菌2、放线菌的培养3、放线菌的发酵产生活性物质4、放线菌产生的活性物质提取。
实验原理：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖。
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约80%是各种放线菌所产生的。
许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。
采用选择培养基可分离土壤中的放线菌。
产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌，并对其进一步培养，繁殖，发酵，最终提取我们所需的抗生素。
实验器材：1、土壤2、培养基：高氏一号培养基、种子培养基、发酵培养基3、其他：重铬酸钾、培养皿、牛津杯、接种环、酒精灯，无菌涂棒、三角锥瓶、高压蒸汽灭菌锅、天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、试管、牛皮纸、线绳等。
实验步骤：一、土壤放线菌株的采集采集样品：选定取样点（最好是有机质含量高的菜地），按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等。
样品（土壤）处理：室温风干二、土壤中放线菌的分离、培养1、配制淀粉培养基淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉2g；硝酸钾0.1g；磷酸氢二钾0.05g；氯化钠0.05g；硫酸镁0.05g；硫酸亚铁0.001g；琼脂2g；水100ml.先把淀粉放在烧杯里，用5ml水调成糊状后，倒入95ml水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。
加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。
调整PH到7.2-7.4，分装后灭菌，备用。
2、土壤悬液梯度稀释①将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。
②用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。
③按1：:1稀释至10-3、10-4、10-5，将3块灭菌平板分别标记10-3、10-4、10-5 ，稀释过程应在无菌条件下进行。
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集1 目的1.1 了解微生物分离和纯化的原理1.2 掌握常用的分离纯化微生物的方法2 原理从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。
3 材料3.1 培养基淀粉琼脂培养基(高氏I号培养基)，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。
3.2 仪器或其它用具取样铲、塑料袋、记号笔、1．布点：按照土壤类型和作物种植品种分布，按土壤肥力高、中、低分别采样。
一般150-300亩（不同地区可根据情况确定）采取一个耕层混合样，采样点以锯齿型或蛇型分布，要做到尽量均匀和随机。
应用土壤底图确定采样地块和采样点，并在图上标出，确定调查采样路线和方案。
2．采样部位和深度：用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样0.5-1kg，在采样过程中，采取的混合样一般都大于该重量，所以要去掉部分样品，将所有采样点的样品摊在塑料布上，除去动植物残体、石砾等杂质，将大块的样品整碎，混匀，摊成园形，中间划十字分成四份，然后对角线去掉两份，若样品还多，将样品再混合均匀，再反复进行四分法，直至样品最终重量要求0.5-1公斤（试验用的样品2公斤）为止。
如下示意图。
一用取土器或锄头直接挖入耕层取样。
每个点切取的土块宽度、厚度应基本一致。
装入事先准备好的塑料袋内扎好。
北方土壤干燥，可在10～30cm处取样。
3．采样方法、数量：1)面积小，地势平坦，肥力均匀的田块，采用对角采样法。
土壤菌株筛选实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握土壤中微生物的分离与纯化方法。
2. 了解不同微生物的形态特征和生理特性。
3. 筛选具有特定生理功能的菌株。
二、实验原理土壤中存在着大量的微生物，包括细菌、真菌、放线菌等。
通过选择合适的培养基和分离方法，可以从土壤中分离出具有特定生理功能的菌株。
本实验采用平板划线法、涂布分离法等方法，对土壤样品进行分离纯化，并对筛选出的菌株进行鉴定。
三、实验材料与仪器1. 材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌平板、无菌试管、接种环、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、电子天平、显微镜等。
四、实验步骤1. 样品处理：取一定量的土壤样品，用无菌水进行稀释，制成10^-3、10^-5、10^-7等不同浓度的土壤悬液。
2. 分离纯化：（1）平板划线法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用接种环进行划线分离，培养24小时后观察菌落形态。
（2）涂布分离法：将不同浓度的土壤悬液涂布于牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，用无菌玻璃棒轻轻涂布，培养24小时后观察菌落形态。
3. 菌落鉴定：（1）形态特征观察：观察菌落的大小、形状、颜色、边缘、表面等特征，记录下来。
（2）生理生化试验：对筛选出的疑似菌株进行生理生化试验，如革兰氏染色、氧化酶试验、过氧化氢酶试验等，以确定菌株的属种。
4. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，对筛选出的菌株进行鉴定，并统计不同生理功能菌株的筛选数量。
五、实验结果与分析1. 菌落形态特征观察：在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上，观察到不同形态的菌落，如圆形、卵圆形、长条形等，颜色有白色、黄色、红色等。
2. 生理生化试验结果：（1）革兰氏染色：部分菌株为革兰氏阳性菌，部分菌株为革兰氏阴性菌。
（2）氧化酶试验：部分菌株产生氧化酶，部分菌株不产生氧化酶。
（3）过氧化氢酶试验：部分菌株产生过氧化氢酶，部分菌株不产生过氧化氢酶。
3. 结果分析：根据形态特征和生理生化试验结果，筛选出以下具有特定生理功能的菌株：（1）革兰氏阳性菌：可能为葡萄球菌、链球菌等。
放线菌资源及其活性物质研究概述
放线菌资源及其活性物质研究概述杨勇;李昆太【摘要】放线菌是一类(G+C)含量高的革兰氏阳性细菌,以丰富的次级代谢产物出名,在医药、农林业等方面具有重要利用价值.简要概述了放线菌的资源分布、分类方法及其代谢产物生物学功能,讨论了目前放线菌开发领域存在的问题及解决办法,以期为放线菌的开发应用研究提供参考.【期刊名称】《生物灾害科学》【年(卷),期】2019(042)001【总页数】8页(P7-14)【关键词】放线菌;次级代谢产物;资源分布;分类方法;生物学功能【作者】杨勇;李昆太【作者单位】江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室,江西南昌 330045;江西农业大学生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室,江西南昌 330045【正文语种】中文【中图分类】S476.1我国是一个人口资源众多的农业大国，农业发展具有十分重要的经济基础地位，关系着国计民生与社会稳定[1]。
然而，随着植物病害的频发，农作物生长受阻、产量和品质降低，再加上人口资源不断增加，可耕地面积急剧减少，导致全世界粮食的供给问题日益突出。
植物病害主要包括细菌、真菌和病毒性病害3种，其中真菌性病害占主导地位[2]，是影响世界农作物产量的重要因素。
随着工业科学的进步，化学农药对农业生产带来巨大经济效益的同时，却也导致了诸多问题，如：环境污染、人类健康日益恶化、病虫耐药性增强和破坏生态平衡等。
这些危害的恶性循环，不仅增加了农业生产成本，破坏环境生态系统，还给病虫害防治带来了极大的困难。
微生物农药是指利用微生物及其代谢物和基因产物作为防治病虫草等有害生物、促进植物生长的生物制剂，利用其进行植物病害生防具有高效、无污染、无残留等优点，且不易产生抗性，是生物防治的重要手段[3]。
放线菌是一类（G+C）含量高的生防菌，广泛分布于自然界中，具有复杂的次级代谢系统，能产生诸多结构新颖、生物活性显著的代谢产物，是新医药和新农药研制的源头，在植物病害生防中具有重要意义。
放线菌实验报告
放线菌实验报告放线菌实验报告一、引言放线菌是一类广泛存在于土壤和水体中的微生物，其具有重要的生物学意义和应用价值。
本次实验旨在通过对放线菌的培养、鉴定和抗菌活性测试，了解放线菌的特性和应用前景。
二、材料与方法1. 放线菌培养基的制备：将葡萄糖、酵母粉、肉膏粉、胰蛋白胨等按一定比例溶解于蒸馏水中，加热煮沸，倒入培养瓶中，待冷却后加入抗生素。
2. 放线菌的采集：在适宜的环境中采集土壤或水样，并将样品分装于离心管中。
3. 放线菌的分离：取适量样品并加入适量的生理盐水，摇匀后进行稀释，取适量稀释液分别均匀涂布于放线菌培养基上。
4. 放线菌的纯化：从培养基上挑选出单菌落，进行连续传代，直至获得纯种放线菌。
5. 放线菌的鉴定：通过形态特征、生理生化特性和分子生物学方法对放线菌进行鉴定。
6. 抗菌活性测试：采用平板扩散法或孔隙扩散法，将放线菌菌液或提取物涂布于琼脂平板上，观察抑菌圈的形成情况。
三、结果与分析经过培养和分离，我们成功获得了多个放线菌菌株。
在鉴定过程中，我们观察到这些放线菌菌株形态各异，有的呈现棕黄色，有的呈现淡黄色，有的呈现灰白色。
此外，通过生理生化特性的检测，我们发现这些放线菌菌株对某些碳源和氮源具有不同的利用能力。
进一步的分子生物学分析结果显示，这些放线菌菌株属于不同的物种。
在抗菌活性测试中，我们选取了几个放线菌菌株进行了评估。
结果显示，这些放线菌菌株对多种细菌具有一定的抑制作用。
其中，某一放线菌菌株对金黄色葡萄球菌表现出了较强的抗菌活性，形成了较大的抑菌圈。
这表明该放线菌菌株可能具有潜在的抗生素生产能力。
四、讨论与展望通过本次实验，我们成功地获得了多个放线菌菌株，并对其进行了鉴定和抗菌活性测试。
然而，由于时间和设备的限制，我们并未对放线菌的抗生素产物进行深入研究。
因此，未来可以进一步探索这些放线菌菌株的抗生素产物，并对其进行分离、纯化和结构鉴定，以期发现新的抗生素。
此外，放线菌不仅具有抗菌活性，还具有其他生物活性物质的合成能力，如抗肿瘤物质、抗病毒物质等。
土壤功能地理实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的本次实验旨在通过对土壤功能的野外调查和室内分析，了解土壤在地理环境中的功能及其对生态环境和农业生产的影响。
通过本次实验，使学生掌握土壤功能地理的基本调查方法和分析技术，提高学生对土壤地理学知识的理解和应用能力。
二、实验内容1. 实验地点：XX地区2. 实验时间：2021年X月X日-2021年X月X日3. 实验分组：将学生分为若干小组，每组4-5人。
4. 实验器材：土壤取样器、GPS定位仪、记录本、相机、土样袋、烘箱、天平、pH计、电导率仪等。
三、实验步骤1. 野外调查（1）选择实验地点：根据土壤类型、地形地貌、植被覆盖等因素，选择具有代表性的土壤类型进行野外调查。
（2）确定调查点：利用GPS定位仪确定调查点的经纬度坐标，记录相关信息。
（3）采集土壤样品：使用土壤取样器采集不同土层（0-20cm、20-40cm、40-60cm）的土壤样品，并记录样品的采集深度、土壤类型、植被覆盖等信息。
（4）观察土壤剖面：观察土壤剖面结构，记录土壤颜色、质地、结构、湿度等特征。
（5）植被调查：调查植被类型、生长状况、覆盖率等。
2. 室内分析（1）土壤基本理化性质分析：测定土壤pH值、有机质含量、全氮、全磷、全钾、速效氮、速效磷、速效钾等指标。
（2）土壤微生物活性分析：测定土壤酶活性、土壤微生物数量等指标。
（3）土壤水分分析：测定土壤含水量、土壤孔隙度等指标。
（4）土壤养分有效性分析：测定土壤中氮、磷、钾等养分的有效性。
四、实验结果与分析1. 土壤基本理化性质分析根据实验结果，本地区土壤pH值范围为5.5-7.5，有机质含量在1.0-2.0%之间，全氮、全磷、全钾含量分别为0.1-0.3%、0.1-0.3%、1.0-2.0%。
土壤质地以沙壤土为主，土壤结构较好，水分含量适中。
2. 土壤微生物活性分析实验结果表明，本地区土壤酶活性较高，其中蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性分别为0.5-1.5U/g、0.5-1.5U/g、0.5-1.5U/g。
探究土壤的成分实验报告(3篇)
一、实验背景土壤作为地球上最重要的自然资源之一，不仅为植物生长提供了必要的养分，也是人类生产生活的重要基础。
为了深入了解土壤的成分，本实验旨在通过观察和实验，分析土壤中包含的各种物质，从而认识土壤的组成结构。
二、实验目的1. 了解土壤的组成成分。
2. 掌握土壤中无机物和有机物的识别方法。
3. 理解土壤成分对植物生长的影响。
三、实验材料1. 新鲜土壤样本2. 干燥土壤样本3. 放大镜4. 烧杯5. 药匙6. 玻璃棒7. 水8. 牙签9. 酒精灯10. 三脚架11. 铁片12. 玻璃片13. 试管夹14. 滴管四、实验步骤1. 观察与分类：观察新鲜土壤样本和干燥土壤样本，分别进行颗粒大小、颜色、质地等方面的分类。
2. 溶解与分离：将新鲜土壤样本放入烧杯中，加入适量的水，用玻璃棒搅拌，静置一段时间后，观察土壤成分的溶解和分离现象。
3. 物质识别：利用放大镜观察土壤中不同成分的形态，如沙粒、黏土、腐殖质等。
4. 燃烧试验：取少量干燥土壤样本，用牙签挑起，放入酒精灯火焰中灼烧，观察燃烧现象，并闻其气味。
5. 数据分析：根据观察和实验结果，对土壤成分进行分析和总结。
五、实验结果与分析1. 观察与分类：新鲜土壤样本和干燥土壤样本在颗粒大小、颜色、质地等方面存在一定差异。
新鲜土壤样本颗粒较细，颜色较深，质地较湿润；干燥土壤样本颗粒较粗，颜色较浅，质地较干燥。
2. 溶解与分离：在加入水后，土壤样本中的沙粒、黏土、腐殖质等成分逐渐溶解并分离。
沙粒沉降到底部，黏土沉淀在中间层，腐殖质漂浮在水面上。
3. 物质识别：通过放大镜观察，我们发现土壤样本中存在沙粒、黏土、腐殖质、有机物残渣等成分。
沙粒呈圆形或椭圆形，质地坚硬；黏土呈片状，质地细腻；腐殖质呈黑色，质地柔软。
4. 燃烧试验：在灼烧过程中，干燥土壤样本出现燃烧现象，并有明显的焦糊气味。
这表明土壤中存在有机物残渣，如植物根系、动物尸体等。
5. 数据分析：根据实验结果，我们可以得出以下结论：- 土壤主要由无机物（如沙粒、黏土）和有机物（如腐殖质、有机物残渣）组成。
土壤中放线菌的分离和纯化实验(精选5篇)精选全文完整版
可编辑修改精选全文完整版土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。
2、掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。
4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。
7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。
二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。
2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
放线菌的实验报告
一、实验目的1. 掌握土壤中放线菌的采集、分离和纯化方法。
2. 学习放线菌的培养技术，观察其生长特征。
3. 提取放线菌产生的活性物质，并对其活性进行初步鉴定。
二、实验原理放线菌是一类呈菌丝状生长的微生物，广泛分布于土壤、空气和水中。
放线菌与人类的生产和生活关系密切，许多临床应用的抗生素均由放线菌产生。
本实验通过土壤中放线菌的分离、培养和活性物质提取，旨在了解放线菌的生长特征及其产生的活性物质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- 高氏一号培养基- 种子培养基- 发酵培养基- 试剂：重铬酸钾、无菌水、酒精等2. 实验仪器：- 培养皿- 牛津杯- 接种环- 酒精灯- 无菌涂棒- 三角锥瓶- 高压蒸汽灭菌锅- 天平- 药匙- 烧杯- 量筒- 玻璃棒- 试管- 牛皮纸- 线绳四、实验步骤1. 土壤放线菌株的采集（1）选择取样点：选择有机质含量高的土壤，如菜地、林地等。
（2）采集样品：按对角交叉（五点法）取样，先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
（3）将5点样品混合均匀，用无菌水稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍。
2. 放线菌的分离与纯化（1）制备高氏一号培养基平板：将高氏一号培养基加热溶解后，倒入培养皿中，待凝固后备用。
（2）将稀释后的土壤样品涂布于高氏一号培养基平板上。
（3）将平板置于37℃恒温培养箱中培养3～5天，观察菌落生长情况。
（4）挑取单菌落进行纯化，重复上述步骤，直至获得纯放线菌。
3. 放线菌的培养（1）将纯化后的放线菌接种于种子培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（2）将种子液按一定比例接种于发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中发酵。
4. 活性物质提取（1）将发酵液离心分离，收集上清液。
（2）用重铬酸钾对上清液进行氧化反应，观察颜色变化，以初步鉴定活性物质。
五、实验结果与分析1. 放线菌分离与纯化：成功分离纯化出放线菌，菌落呈菌丝状，颜色多样。
选择性分离放线菌的土壤处理方法研究
法研 究 了土壤 分散 和预 处理 对放 线 菌 的 作 用 ， 果 表 明 采 集 的 土样 在 ２ ℃ 下 风 干 １ｄ后 ， １ 结 ８ ０ 用 ％胆 酸钠 、 ａ Ｎ 离
子交换树脂和 Ｐ Ｇ作为化学分散 剂制备土壤悬液 （０ ） 在 ４ ℃下 ， ６ Ｅ １ ， ０ 加 ％酵母 膏 ＋ ．５ Ｓ Ｓ ５ ｍ ｌＬ磷 ００％ Ｄ （ｍ ｏ ／
的 ＿ ． 目前 对 采 用 何 种 分 散 方 法 最佳 效 果 研 究 还 很 少 ． ８ 但 ｊ 此 外 ， 于放 线 菌 分 离 时 杂 菌 抑 制方 法 姜 成 林 等 已进 行 了 关 许 多研 究 Ｊ但 对 激 活 孢 子 和加 热 除 杂 菌 的研 究 报 道 不 多 ，
．
采用涂布平板稀释法¨ ２ ％培养 ７ ． ，８ ｄ １２ ２培养基制备 ．．
基金项目： 山东 省 中 青 年科 学 家 科 研 奖 励基 金 （０ ７ Ｓ２ ２ ２ ０ Ｂ ０ ０４）
一
４ — ４
表 １ 物 理 预 处 理 土样 的 处 理 方 法
选 择 性 分 离放 线 菌的 土壤 处 理 方 法研 究
江 翠翠 ， 云峰 ， 美茹 赵 司
（ 曲阜 师范 大学生命科 学学院 ， 东 曲阜 ２ ３ ６ ） 山 ７ １５
摘 要 ： 了提 高从 土 壤 中分 离放 线 茵 的 效率 ， 决 土壤 中 杂 茵对 放 线 茵 分 离的 污 染 问题 ．采 用 涂 布 平 板 为 解
制剂 的产 生 菌 具 有 重 大 的 经 济 意 义 ， 报 道 的 ８０ 已 ００多 种 生物 活性 物 质 ７ ％ 左 右 来 自放 线 菌 ０ ．但 目前 人 们 分 ．在 绝
１ １材 料 ．
Ｉ 材 料 与 方 法
应用富集系数法和地累积指数法研究济宁南部区域土壤重金属污染特征及生态风险评价
应用富集系数法和地累积指数法研究济宁南部区域土壤重金属污染特征及生态风险评价赵庆令;李清彩;谢江坤;李元仲;姬永红;庞成宝;万淼【摘要】评价土壤中重金属污染的方法有单因子指数法、内梅罗综合指数法、地累积指数法、潜在生态危害指数法等,但迄今尚没有成熟的、统一的标准.本文以济宁城区南部农田为研究区域,采集77件土壤样品进行调查,光谱、质谱等技术分析结果表明土壤环境中8种重金属(As、Cd、Cr、Cu、Hg、Ni、Pb、Zn)平均含量分别为16.7、0.270、88.4、33.0、0.050、40.4、29.3、89.1 mg/kg,与黄淮海平原土壤生态地球化学基准值相比,Hg、Cd分别高于基准值的1.50倍、1.39倍,其他重金属高于基准值的0.26 ～ 0.52倍.Hg与As、Cr、F、pH、Cu、Ni、TFe2O3呈显著负相关,表明土壤受到了Hg的不同程度人为污染.用富集系数法和地累积指数法分析区内8种重金属元素的污染(富集)程度,均表明土壤环境中Hg、Cd为轻微污染(富集)程度,其他6种元素均为无污染.将该区域重金属含量与其生物毒性系数、生态效应、环境效应相结合,运用潜在生态危害指数法对重金属污染进行生态风险评价.结果显示,8种重金属的潜在生态危害由强至弱依次为:Hg ＞Cd ＞As ＞Cu ＞Pb＞ Ni ＞Cr ＞Zn,与污染(富集)程度排序差异明显;尽管Hg、Cd在研究区内仅仅为轻微(富集)程度,但都具有较高的毒性响应系数,两元素对土壤综合潜在生态危害的贡献率之和达到了81.26％.借助MapGIS绘制研究区潜在生态风险程度评价图,表明区内土壤环境总体上处于“中度”潜在生态风险,约6.83％的面积呈“强”和“很强”潜在生态风险,其中复兴河、姚楼河、京杭运河3条河流交汇处的局部区域(占研究区面积的0.50％)达到了“很强”潜在生态风险.通过调查可疑人为污染源发现,“强”和“很强”潜在生态风险区域的布局恰好与区内煤矿生产开采活动相关.本文提出,应当注重对煤矿开采矿井周边区域土地复垦及污染防治工作,尤其是加强土壤中Cd、Hg的物理化学改良及生物治理修复工作,防止Hg、Cd进一步污染扩散.【期刊名称】《岩矿测试》【年(卷),期】2015(034)001【总页数】9页(P129-137)【关键词】土壤;重金属污染特征;富集系数;地累积指数;生态风险评价;济宁【作者】赵庆令;李清彩;谢江坤;李元仲;姬永红;庞成宝;万淼【作者单位】山东省鲁南地质工程勘察院,山东兖州272100;中国地质大学(武汉)环境学院,湖北武汉430074;山东省鲁南地质工程勘察院,山东兖州272100;中国地质大学(武汉)环境学院,湖北武汉430074;中建中环工程有限公司,江苏南京210008;山东省鲁南地质工程勘察院,山东兖州272100;山东省鲁南地质工程勘察院,山东兖州272100;山东省鲁南地质工程勘察院,山东兖州272100;山东省物化探勘察院,山东济南250013【正文语种】中文【中图分类】S151.93土壤是人类赖以生存的自然环境和农业生产的重要资源，随着国民经济的迅速发展，土壤污染尤其是重金属污染越来越突出。
土壤放线菌分离方法的初步研究
土壤放线菌分离方法的初步研究摘要：为了提高从土壤中分离放线菌的效率，解决土壤中的细菌对放线菌分离培养中的污染问题，研究了自然风干、重铬酸钾、青霉素和干热处理4种方法对细菌及放线菌的作用，并对其细菌和放线菌菌落数进行统计。
结果表明: 土样放置6 d和21d适合放线菌的分离；用加50 mg/L的重铬酸钾或1 mg/L的青霉素的培养基，可以选择性地从土壤中分离放线菌；土样在80℃下干热处理也可提高放线菌的分离效率。
关键词：土壤放线菌；分离；风干时间；重铬酸钾；青霉素；干热处理Preliminary Studies on the Isolation Methods of Actinomycetes from Soil Abstract：In order to improve the efficiency of isolating actionmycetes from soil and solve the problem of contamination by bacteria when actionmycetes were isolated and cultivated, the effect of natural air-dry time, potassium dichromate(K2Cr2O7), penicillin and heat treatment of fabrics on bacteria and actionmycetes was studied in this article, and the number of bacteria and actinomycetes colonies separated f rom soil samples.The result showed tha:6 or 21 days of air-dry is optimal for actionmycetes separation from soil sample; The numder of actionmycetes can be selectively isolated by using a special medium contanting 50 mg/L potassium dichromate or 1 mg/L penicillin; Treating the soil samples with at 80℃ can also promote the efficiency of isolating actinomycetes. Keywords: soilactinomyeetes; isolation; air-drytime; potassiumdichromate(K2Cr2O7); penicillin;heat treatment of fabrics引言土壤放线菌是具有巨大应用价值的微生物类群。
济宁市土壤放线菌资源调查研究
具 有很高 的经 济 价 值 ¨２。据 知 ， ． Ｊ 目前 世 界 上 报 道 的上 万 种 抗 生 素 中 ，０ 以 上 是 放 线 菌 产 生 ７％ 的【 ， 临床上 使用 的抗 生 素有 三 分之 一 来 自放 ３且 Ｊ
线 菌 ＿ 。放线 菌还 可 以合 成 淀 粉酶 、 维 素 酶等 ４ Ｊ 纤 代谢 产物 。此外 ， 线菌 的数 量 、 放 种类 与土 壤肥力 有 着 极 密 切 的 关 系 ， 土 壤 肥 力 高 低 的标 志之 是
Ｓ ｉ—ｒ Ｓ Ｔａ Ｌ ＩＭｅ ｕ， Ｕ ｏ， Ｉ Ｇｕｉ ｈｉ —ｚ
（ ｏｅｅ ｆ Ｃｌｇ ｌ ｏ
Ｓｉ ｃ ， Ｎ ｒａ ｎ ｅ ／ ， ｕｕ ７ １５ Ｃ ｉ ） ｃ ｎｅ Ｑ ｅ ｏｍ ／Ｕ ｉ ｒｔ Ｑｆ ２ ３ ６ ，ｈｎ ｖ ｓｙ ａ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｓ ｉ ｓｍｐｅ ｅｅｃ ｌ ｃｅ ｒｍ ｉｉｇｃｔ． ｈ ｃｉｏ ｃ ｔｓ ｒ ｏａｅ ｎ ｄ ｎ ｆ ｄｂ ｓ ｃ ｏｌ ａ ｌｓｗ ｒ ｏｌ ｔｄ ｆ ｒ ｅ ｏ Ｊ ｎ ｉ Ｔ ｅａ ｔ ｍｙ ｅｅ ｅｉ ｌｔｄａ ｄｉｅ ｔ ｅ ｙ ｎ ｙ ｎ ｗｅ ｓ ｉ ｉ
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一
特 的土壤生态 环境 和该地 区土壤 放线菌 资源 的独
特性 。 因此 ， 研究 该 地 区 土壤 放线 菌类 群 组成 及 生态 分布规律 ， 步摸 清土壤放 线菌资源状 况 ， 初 以 期为 该地 区放线 菌资源 的开发 提供依据 。
土壤中放线菌的分离与应用
土壤中放线菌的分离与应用作者：詹庆曹雅丽来源：《现代园艺·综合版》2017年第02期摘要：放线菌是一类具有发展前景的新微生物资源，放线菌的产物除了常用的抗生素除青霉素和头孢霉素类外，绝大多数都是它的产物。
筛选的放线菌的代谢产物分类方式有很多，但按功能分类，大致可分为抑菌、杀虫、植物生长调节、抗肿瘤活性及其他多种重要的活性类型。
本文主要从放线菌的分离，应用两大方面进行研究，从而筛选出优质、纯种、功效强的放线茵。
关键词：放线菌；筛选；分离；应用放线菌是广泛分布于土壤中的优势微生物类群，其分枝状的菌丝体能够产生各种胞外水解酶，降解土壤中的各种不溶性有机物质，以获得细胞代谢所需的各种营养，对有机物的矿化有着重要作用，从而参与自然界物质循环，净化环境，改良土壤。
而现如今，人们对放线菌的应用远不及此，放线菌更多地被应用到医学治疗，减少农产品病虫害等各个领域中。
1放线菌在农业当中的应用近年来，随着人们对食品和环境中化学农药安全性的普遍关注，对一些危险性化学农药使用的谈虎色变情况，促使人们寻求其它安全有效的植物病害控制新途径。
而近年来微生物发展迅速，让人们去除植物病虫害的途径逐渐从化学农药的使用向微生物方法转变，利用有益微生物防治植物病害。
它既可以改善，维持植物自然生态系统，又可通过微生物之间的相互作用达到防病之目的。
自20世纪60年代Umezawa研究微生物产生的酶抑制剂以来，对由微生物产生的非抗生素的生物活性物质研究逐步拓宽，此类物质在控制人类非感染性疾病方面发挥了很大的作用。
这些活性物质有70%～80%是由放线菌产生的，这说明放线菌作为药物产生者具有巨大价值。
1.1抗生素的使用放线菌与人类关系极为密切，绝大部分属有益菌，放线菌的产品多种多样，特别突出的是抗生素，对人类健康作出重要贡献。
至今已报道通过的近10000种抗生素中，约70%有放线菌产生，如链霉菌、土霉素、多黏霉素、庆大霉素、井冈霉素等。
土壤拮抗放线菌的分离与筛选效果研究
孔器 等 。
１ ． ２ 试 验 方 法
采 集土 样一 预 处理一 放 线 菌 的分 离一 菌株 纯 化一 琼 脂 块法 初 筛一杯 碟 法复 筛一 选取抑 菌性 菌株 。 １ ． ２ ． １ 土壤样品预处理 。 取 土 壤 表层 以下 ５ ～ １ ０ ｃ ｍ 处 的土 样。 进行预处理 ， 自然 条件 下 风 干 ７ ｄ 。 再 用 ３种 不 同的 物 理、 化 学等 方法 对样 品进 行预 处 理 。
ＬＩ Ｕ Ｂｉ ｎ ｇ － ｙ ｕ ａ ｎ ＺＨｏＵ Ｊ ｉ Ｉ ｌ ｇ’
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ０ ｆ Ｌ ｉ ｆ ｅ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｑ ｕ ｆ ｕ Ｎ ｏ ｒ ｍ ａ ｌ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｑ ｕ ｆ ｕ Ｓ ｈ ａ ｎ ｄ ｏ ｎ ｇ ２ ７ ３ １ ６ ５ ） Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ Ａ ｃ ｔ ｉ ｎ ｏ ｍ ｙ ｃ ｅ ｔ ｅ ｓ ｉ ｎ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｔ ｙ ｐ ｅ ｓ ｏ ｆ ｓ ｏ ｉ ｌ ｆ ｒ ｏ ｍ Ｑ ｉ ｎ ｇ ｈ ａ ｉ Ａ ｒ ｅ ａ ｗ ｅ ｒ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄ ｔ ｈ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｂ ｅ ｓ ｔ ｓ ｏ ｉ ｌ ｄ ｉ ｌ ｕ ｔ ｅ ｄ
ｒ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ａ ｎ ｃ ｅ ｏ ｎ ９ ｉ ｎ ｄ ｉ ｅ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｉ ｒ ａ ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ， ２ ６ ｓ ｔ ｒ ｉｎ ａ ｓ ｈ ａ ｄ ａ ｉ ｎ ｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｏ ｒ ｏ ｎ ｄ ｉ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｉ ｒ ａ ， ６ ｓ ｔ ｒ ｉｎ ａ ｓ ｈ ａ ｄ ａ ｎ ｔ ｉ ｂ ａ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｉ ｔ ｙ ｏ ｎ ｆ ｕ ｎ ｇ ｕ ｓ ． ｔ ｈ ｅ
几株放线菌发酵液抑菌活性成分的研究
几株放线菌发酵液抑菌活性成分的研究一、本文概述放线菌是一类具有独特生物活性的微生物，其在生物发酵领域具有广泛的应用前景。
本文旨在研究几株放线菌发酵液中的抑菌活性成分，探讨其抑菌机制，以期为新型生物农药和生物防腐剂的研发提供理论依据和实践指导。
本文首先对放线菌的分类、特性及其在发酵工程中的应用进行了简要介绍。
随后，通过筛选和鉴定几株具有抑菌活性的放线菌，采用发酵工艺优化技术，提高其发酵液中抑菌活性成分的产量。
在此基础上，运用现代分离纯化技术对抑菌活性成分进行提取和纯化，并运用多种现代仪器分析方法对其结构进行表征。
本文还将对抑菌活性成分的作用机制进行深入研究，包括其抗菌谱、最小抑菌浓度、抑菌动力学等方面。
还将探讨抑菌活性成分对植物病原菌的抑制效果，评估其在农业领域的应用潜力。
本文将对放线菌发酵液抑菌活性成分的研究进行总结，指出当前研究中存在的问题和不足之处，并展望未来的研究方向和应用前景。
通过本文的研究，有望为新型生物农药和生物防腐剂的研发提供新的思路和方法，促进放线菌在农业、食品工业等领域的应用和发展。
二、材料与方法1 放线菌菌株：本研究选用几株具有抑菌活性的放线菌，通过前期筛选和鉴定，确认其具有较强的发酵产物抑菌能力。
2 培养基：采用适合放线菌生长的培养基，包括营养丰富的液体培养基和固体培养基。
3 抑菌试验指示菌：选择常见的病原菌作为抑菌试验的指示菌，如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
5 化学试剂：甲醇、乙醇、氯仿等有机溶剂，用于提取发酵液中的抑菌活性成分。
1 放线菌发酵：将放线菌接种于液体培养基中，在恒温摇床中进行发酵培养，定期取样监测发酵过程。
2 发酵液处理：将发酵液进行离心分离，取上清液用有机溶剂进行萃取，得到抑菌活性成分的粗提物。
3 抑菌活性测定：采用纸片扩散法或液体稀释法，测定粗提物对指示菌的抑菌活性。
4 成分分析：通过薄层色谱（TLC）、高效液相色谱（HPLC）等分析方法，对粗提物中的抑菌活性成分进行分离和鉴定。
放线菌--微生物药物的重要资源
放线菌--微生物药物的重要资源
刘志恒
【期刊名称】《微生物学通报》
【年(卷),期】2005(32)6
【摘要】@@ 微生物早在38亿前已经在地球上发生,但人们真正认识它们的存在也只有300年.迄今,事实尽管说明微生物是地球生命体的主要组成者,维持着地球的生态平衡,并起着了解地球历史和地球生命健康以及开发所有应用生物技术潜能的关键作用;然而,我们对它们中的大多数仍然了解甚微.因此,微生物仍然是我们人类不断获得知识和发展生物技术的重要载体.
【总页数】3页(P143-145)
【作者】刘志恒
【作者单位】中国科学院微生物研究所,北京,100080
【正文语种】中文
【相关文献】
1.海洋放线菌——新活性代谢物的重要来源 [J], 姜怡;Jutta Wiese;徐丽
华;Johannes F. Imhoff;姜成林
2.微生物药物合成的放线菌底盘 [J], 池淏甜;王连荣
3.云南若干地区土壤放线菌区系及资源考察：Ⅷ.滇中高原的放线菌资源 [J], 徐丽华;杨宇容
4.海洋放线菌M1D14代谢产物对几种重要植物寄生线虫的抑制作用 [J], 田阳;李平;张莉;孙建华;高丙利
5.世界卫生组织依据抗微生物药物在人类医学中的重要性进行分级 [J], 丁百兴(摘译);王明贵(审校)
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第三组、土壤中提取放线菌
设计实验方案实验题目：土壤中放线菌的提取和分离1．土壤标本的采集放线菌属好气性微生物，主要生活在较干燥、透气性好、中性到微碱性、有机质丰富的土壤中，特别是在我国南方热带及亚热带地区肥沃的土壤中，防线菌种类丰富。
采集土壤标样时，应根据放线菌的生活特性，有针对性地进行采样。
宜选择菜地、茶园、果园等地采样。
选定采样地点后，先铲去表层土，挖取5～3Ocm 深的土壤数十克，装入牛皮纸信封，封好袋口；潮湿的土壤宜装入塑料袋或铝盒内，做好编号记录，带回实验室供分离用。
采回的土壤标本一般宜及时进行分离，如不能做到随采随分，宜将土壤放在阴凉、通风干燥处，使其风干，保藏备用，但保藏时间不宜过长。
2．分离培养基分离放线菌常用的培养基主要有：a．高氏1号培养基：可溶性淀粉2．0、KHP040．05、NaC10．05、KN040．1、MgS(~·7H( 0．05、FeSO40．001、琼脂1．5～2．0、pH7．2～7．4、在121℃(15磅)高温高压灭菌20min。
b．葡萄糖一天门冬素琼脂培养基：葡萄糖1．0、天门冬素0．05、牛肉膏0．2、KHP040．05、琼脂2．0、pH6．8或自然、8磅灭菌30rain。
C．精氨酸一甘油琼脂培养基：精氨酸0．1、甘油1．25、KHPOa0．1、MgS()4·7H：O0．05、NaC10．1、ZnS04·7H2O0．0001、CuSO4·5H2O0．0001、(SO4)。
·6HO0．001、M~SO4·HO0．0001、琼脂2．O，pH9．0，8磅灭菌30min。
1．2．2平板培养基制备根据分离量多少，准备好消毒高氏一号培养基500mL或1000mL，灭菌的7cm或9cm 直径培养皿中倒入1O～2OmL培养基，制成平板备用。
3.放线菌的分离方法很多，这里主要介绍分离普通放线菌的弹土法和稀释画线法。
（1）放线菌的弹土分离法土壤准备与接种将土壤用研钵研细，6O目过筛，取一定量细土平铺于灭过菌的光滑硬纸板上，纸面积略大于培养皿的口径，将多余的土轻轻倾去，见纸板上有一层细土粒粘附着则较为理想。
野生植物内生放线菌的筛选研究的开题报告
野生植物内生放线菌的筛选研究的开题报告开题报告：野生植物内生放线菌的筛选研究一、选题背景放线菌是一类广泛存在于土壤中的细菌，以其生物活性代谢产物的多样性和数量性质而著名。
内生放线菌是在植物内生存的放线菌，存在于植物的根部、茎、叶等部位，并能够通过植物与微生物的相互作用来影响植物的生长和发育。
研究表明，内生放线菌可以合成多种生物活性物质，包括抗菌物质、抗癌物质等，因此引起了人们的广泛关注。
野生植物作为自然界中的生物资源之一，其内生放线菌总量和活性代谢产物含量均高于栽培品种。
因此，对野生植物内生放线菌的筛选可为有效开发新型生物农药、新型药物等提供范本。
本研究将从野生植物中选取定植菌株，分离纯化菌株并鉴定其生物学特性、产物代谢活性及抗菌、抗真菌活性等方面，以期筛选出优良的内生放线菌菌株。
二、研究目的1. 从野生植物中筛选出具有生物活性的内生放线菌。
2. 对筛选出的内生放线菌菌株鉴定其生物学特性和代谢产物。
3. 测定筛选出的内生放线菌菌株的抗菌、抗真菌活性。
三、研究内容1. 采集不同野生植物根际土样品，进行放线菌菌株筛选和分离鉴定。
2. 对分离鉴定出的放线菌进行特性分析和多角度研究。
3. 通过生化和分子方法鉴定筛选出的内生放线菌菌株。
4. 评价筛选出的内生放线菌的生物活性及抗菌、抗真菌活性。
四、研究意义本研究将采用一系列科学方法，通过筛选野生植物内生放线菌，寻找新型生物农药、新型药物等。
同时，对放线菌代谢产物的研究也有助于对于特殊环境中微生物在多样性生物体系中的调控机制和生物多样性的维持机制进行探讨。
五、研究方法1. 分离和鉴定放线菌菌株。
2. 对所有野生植物内生放线菌进行代谢产物分类和特性研究。
3. 采用常规、生化和分子方法鉴定放线菌菌种。
4. 对选出的放线菌菌株进行药效测试，优选表现良好的菌株。
六、实验步骤1. 采集不同野生植物生长在不同环境的样品。
2. 分离并筛选放线菌菌株。
3. 多角度对放线菌菌株进行特性分析和代谢产物研究。
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山东农业科学 2008,4:68～71,90Shandong Agricultural Sciences收稿日期:2007-10-12;修回日期:2007-12-14基金项目:曲阜师范大学科研启动基金作者简介:司美茹(1977-),女,汉,硕士,讲师,主要从事土壤微生物研究。
E -mail:si m eiru1016@1631com济宁市土壤放线菌资源调查研究司美茹,苏 涛,李桂芝(曲阜师范大学生命科学学院,山东曲阜 273165) 摘 要:从济宁市采集土样,采用高氏1号琼脂和淀粉铵琼脂两种培养基分离放线菌,按国内外通用方法进行鉴定,并对土壤放线菌主要属———链霉菌属的类群进行分析与鉴定。
结果表明:同一样品在高氏1号琼脂培养基上分离得到的放线菌要高于淀粉铵培养基上的。
放线菌组成中,链霉菌占绝大多数,达放线菌总数的70%以上,其次是小单孢菌属,马杜拉放线菌属和诺卡氏菌属;链霉菌类群的组成较复杂,主要为白孢类群和粉红孢类群。
关键词:放线菌;链霉菌属;土壤;济宁中图分类号:S154138+3 文献标识号:A 文章编号:1001-4942(2008)04-0068-05I nvesti gati on on Soil Acti n o mycetes i n Ji n i n g C itySIMei -ru,S U Tao,L I Gui -zhi(College of L ife Science,Q ufu N or m al U niversity,Q ufu 273165,China )Abstract Soil sa mp les were collected fr om J ining city 1The actinomycetes were is olated and identified by s p reading the sa mp les on Gao 1agar mediu m and starch tartar agar mediu m 1A t the sa me ti m e,the gr oup s of Strep t omyces were als o identified and analyzed 1The results showed that the is olated nu mber of actinomycetes on Gao 1agar mediu m was larger than that on starch tartar agarmedium 1I n the genus of actinomycetes,Strep 2t o myces accounted f or more than 70%of the t otal ,and the next oneswere M icr omonos pora,Actinos porangir m and Nocardia 1The main gr oup s of strep t omyces were A lbos porus and Roseos porus 1Key words Actinomycetes;Strep t omyces;Soil;J ining 放线菌能产生抗生素等多种有益代谢产物,具有很高的经济价值[1,2]。
据知,目前世界上报道的上万种抗生素中,70%以上是放线菌产生的[3],且临床上使用的抗生素有三分之一来自放线菌[4]。
放线菌还可以合成淀粉酶、纤维素酶等代谢产物。
此外,放线菌的数量、种类与土壤肥力有着极密切的关系,是土壤肥力高低的标志之一[5～7]。
因此,放线菌的研究具有十分重要的科学价值和实用价值。
但是,目前国内放线菌区系调查及其资源开发研究的较少。
近年来,姜成林等对云南[8,9]、薛泉宏等对西藏[10～13]和蔡艳等[14]对青海高原有过详细报道,山东省报道较少。
山东省济宁市,北依泰山,南傍微山湖,暖温带季风性大陆气候,四季明显,降水较为充沛,常年降水量为89412mm ,境内平均太阳辐射量为503164kJ /k m 2,这些自然条件决定了济宁地区独特的土壤生态环境和该地区土壤放线菌资源的独特性。
因此,研究该地区土壤放线菌类群组成及生态分布规律,初步摸清土壤放线菌资源状况,以期为该地区放线菌资源的开发提供依据。
1 材料与方法111 土壤样品2005年4月从济宁地区采集土样,取2～20c m 深度的土壤,按覆盖植被类别采5个样品,每样品采集土样10份,带回实验室风干研磨备用。
112 方法11211 放线菌的分离与纯化 采用稀释平板涂抹法纯化[15],用高氏1号琼脂培养基培养。
分离时,为抑制真菌的生长添加少量重铬酸钾。
11212 鉴定培养基 高氏1号琼脂培养基,淀粉铵琼脂培养基,培养时间为7天。
11213 鉴定方法 用放线菌常规鉴定方法鉴定16]。
按1992年阎逊初放线菌分类系统进行归类[17]。
采用插片法培养,适时取片用光学显微镜观察形态特征[18]。
2 结果与分析211 土壤放线菌的数量从表1可看出,同一土样在两种培养基上的放线菌数量不同,高氏1号培养基分离到的放线菌数量(G)大多高于淀粉铵琼脂培养基的数量(N),G/N>1的土样占总数的80%。
不同土样之间放线菌数也存在很大差异,如2号冬青树下土壤放线菌的数量(×104)在高氏1号琼脂和淀粉铵琼脂培养基上分别为9514和10010,与5号小麦土壤的数量分别相差11倍和7倍。
大量研究结果表明,土壤中的微生物数量是水、热、植被等环境条件和土壤本身化学性质的综合反映,并且受上述条件影响[14]。
表1 济宁地区不同植被条件下土壤放线菌数量(×104个/g土)采样点植被土样号高氏1号琼脂培养基(G)淀粉铵琼脂培养基(N)G/N花园11311053102147冬青29514100100195苹果树367010*********蔬菜4122010520102153小麦5115010800101144212 土壤放线菌菌群21211 花园中土壤放线菌 从表2知,花园土壤放线菌在两种培养基上的分离数和总属数,高氏1号琼脂培养基皆高于淀粉铵琼脂培养基,这由表中的总属数和总数的G/N(1133和2147)可看出。
其中,链霉菌属、小单孢菌属、诺卡氏菌属在高氏1号琼脂培养基上分离数皆高于淀粉铵琼脂培养基上的,而马杜拉放线菌属则相反。
链霉菌属在两种培养基上的分离菌数皆最高。
在高氏1号琼脂培养基上,小单孢菌属和马杜拉放线菌属分离菌数大于淀粉铵琼脂培养基上的,在淀粉铵琼脂培养基上未分离到诺卡氏菌属。
从表2还可知,高氏1号培养基分离到的放线菌每个属的数量(G)大多数高于淀粉铵琼脂培养基上的数量(N),G/N>1的土样约占总数的84%,说明仅用高氏1号培养基就能较真实地反映土壤各属的状况。
表2 花园土壤的放线菌群(×104个/g土)属名分离菌数高氏1号琼脂(G)淀粉铵琼脂(N)G/N 链霉菌属Streptomyces1051034103109小单孢菌属M icromonospora10106101167马杜拉菌属Actinomadura14101310111诺卡氏菌属Nocardia2100∞总属数431133总数1311053102147 由表3知,在高氏1号琼脂培养基上的链霉菌类群总数和分离总数皆高于在淀粉铵琼脂培养基上的(G/N分别为1175和1198)。
其中,高氏1号琼脂培养基上的粉红孢类群、烬灰类群、金色类群的分离菌数皆高于淀粉铵琼脂培养基上的,而淡紫灰类群、蓝色类群、黄色类群在淀粉铵琼脂培养基上则没有。
在高氏1号琼脂培养基上粉红孢类群的分离菌数最高(4010),在淀粉铵琼脂培养基上白孢类群的分离菌数最高。
表3 花园土壤链霉菌各类群(×104个/g土)链霉菌属类群分离菌数高氏1号琼脂(G)淀粉铵琼脂(N)G/N粉红孢类群Roseos porus40103101313淡紫灰类群Lavendulae8100∞白孢类群A lbos porus151028100154蓝色类群Cyaneus3100∞烬灰类群Cinereus1610210810金色类群Aureus210110210黄色类群Mazis porus5100∞总类群数741175总数1051034101198 21212 冬青土壤放线菌 由表4可知,在高氏1号琼脂培养基上放线菌的分离菌总属数和总数高于淀粉铵琼脂培养基上的,其中,链霉菌属、小单孢菌属的分离菌数高于淀粉铵琼脂培养基上的,马杜拉放线菌属、诺卡氏菌属则相反。
放线单孢菌属和小多孢菌属在淀粉铵琼脂培养基上没有。
这由表中G/N值除马杜拉菌属和诺卡氏菌属小于1外,其余均大于1可看出。
由表5可知,在高氏1号琼脂培养基上的链霉菌类群总数和分离菌总数皆高于在淀粉铵琼脂培养基上的。
其中,在高氏1号琼脂培养基上的96 第4期 司美茹等:济宁市土壤放线菌资源调查研究烬灰类群、白孢类群、黄色类群、粉红孢类群分离菌数皆高于淀粉铵琼脂培养基上的,灰红紫类群、灰褐类群、蓝色类群、金色类群、青色类群只在高氏1号琼脂培养基上有,而绿色类群只在淀粉铵琼脂培养基上分离到。
这由表中G/N值除绿色类群小于1外,其余均大于1可看出。
表4 冬青下土壤放线菌群(×104个/g土)属名分离菌数高氏1号琼脂(G)淀粉铵琼脂(N)G/N链霉菌属Streptomyces7641053101414小单孢菌属M icromonospora60109107马杜拉菌属Actinomadura501015100133诺卡氏菌属Nocardia201023100109放线单孢菌属Actinomonospora20100∞小多孢菌属M icropolyspora40100∞总属数64115总数95410100109154 表5 冬青土壤链霉菌类群组成(×104个/g土)链霉菌属类群分离菌数高氏1号琼脂(G)淀粉铵琼脂(N)G/N灰红紫类群Griseorubr ovi olaceus260100∞灰褐类群Griseofuaeus60100∞烬灰类群Cinereus150818175白孢类群A lbosporus13016811蓝色类群Cyaneus500∞黄色类群Maizsporus50105粉红孢类群Roseosporus3014211金色类群Aureus200∞青色类群Cyans porus140∞绿色类群V iritis porus050总类群数95118总数76453141421213 苹果树下土壤放线菌 由表6可知,在高氏1号琼脂培养基上的放线菌的总分离数和总属数均高于在淀粉铵琼脂培养基上的,这由表中G/N值均大于或等于1可看出。