胡腊英 全自动化学发光免疫分析仪运行原理

快速反应二步法 (i System)1
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• 在位置47快速反应针加样品到RV杯中. • 在位置48试剂R2针加微粒子和吖啶酯标记的连接物试剂. • 在位置49振动混合样品和试剂. • 在位置50-63孵育4分钟.
快速反应二步法 (i System) 2
• • 在位置64 - 67清洗站1#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
化学发光的分类
化学发光反应参与的免疫测定分为二种类型：
• 第一种是以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过发 光反应增强测定的敏感性。
– 如：化学发光酶免疫测定（CLEIA，与酶标ELISA法类似， 即最后一步酶反应所用底物为发光剂 ）
• 第二种是以发光剂作为抗体或抗原的标记物，直接 通过发光反应检测标本中抗原或抗体的含量。
二步法 (i System) 5
• • 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA 光学系统速率读数. • • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
i系统光学测量
• 光wenku.baidu.com测量元件
1. 光学倍增管 (PMT) 2. CMIA 读数 器 3. 光路管 4. 激发液 (Trigger)喷头 5. RV杯 6. 磁体 7. CMIA 遮光 组件
测量顺序
• • 闭合遮光组件挡住室内光 • • 打开PMT高压,读空白值(预激发液(Pre-trigger)已注入), 数据 传到CPU . • • 将激发液(Trigger)注入RV杯. • • 用光管收集激发光线射到CMIA读数器光学倍增管PMT上 • • 如图光学器件处理收集激发光 • • 将读树传给CPU • • 计算单位时间信号RLU(相关光单位) • • 关闭PMT高压 • • 打开遮光组件
快速反应一步法
(i System)3
• • 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA 光学系统速率读数. • • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
②14分钟预先处理
• 在位置1加样品到RV杯中. • 在位置24样品针将预先处理样品吸到在 位置1上新RV杯上.
• 在位置2试剂针R1加预先处理试剂.
• 在位置2试剂针R1加预先处理试剂.
• 在位置3振动混合样品和试剂.
• 在位置3振动混合样品和试剂.
• 在位置4 - 24孵育7分钟. • 在位置24样品针将预先处理样品吸到在 位置1上新RV杯上. • 按一步法和二步法分析样品.
项目运行方法类型
• 一步法
一步法分析需要29分钟处理时间,其中包括25分钟孵育
• 二步法
二步法分析需要29分钟处理时间,其中包括22分钟孵育
• 预先处理法
预先处理法需要对样品自动预先处理再按一步法和二步法分析样品
• 快速反应一步法
快速反应一步法需要18分钟处理时间,其中包括11分钟孵育
• 快速反应二步法
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• 在位置87 - 90 清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
一步法 (i System) 3
• • 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA 光学系统速率读数. • • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
• • 在位置94加入预激发液(Pre-trigger), 然后振动混合. • • 在位置98 CMIA光学系统读空白值, 然后加入激发液(Trigger), 再测CMIA 光学系统速率读数. • • 在位置100液体从RV杯中废液吸走. • • 在位置109退出RV杯装置(UL)推出RV杯道废物盒.
• • 在位置64 - 67清洗站1#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
二步法 (i System) 3
• • 在位置71试剂针R2吖啶酯标记的连接物试剂. • • 在位置72振动混合样品和试剂. • • 在位置73 – 86 孵育4分钟.
二步法 (i System)4
• • 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
– 如：化学发光标记免疫测定亦称化学发光免疫测定（ CLIA）、电化学发光免疫测定（ECLI）
ABBOTT i 2000SR检测原理
• Architect I系统采用化学发光微粒子免疫分析技术（ Chemiluminesent Microparticle ImmunoAssay, CMIA）检测样 品中的抗原，抗体和分析物。
A + B = C + D*（激发态分子） D*→D + hv（激发态分子D*的光辐射）
化学发光的反应条件
• （1）能快速地释放出足够的能量 （化学 发光反应多为氧化还原反应，激发能与反 应能相当，DE=170～300 kJ/mol）；发光 位于可见光区； • （2）化学反应的能量至少能被一种物质 所接受并使之生成激发态； • （3）激发态分子能够以辐射跃迁的方式 返回基态。
• 3．加吖啶酯标记的连接物 反应复合物在反应杯中与吖啶酯标记的连接物 反应结合，反应结束后，反应复合物被清洗 去除未结合的物质。
• 4． 预激发液（H2O2）被加入进行本底读数 预激发液具有以下功能： ①建立一个酸性环境，防止能量的过早释放（光发射） ②防止微粒子的凝集 ③将吖啶酯从反应复合物中脱离下来，为吖啶酯的下步反应做准备
快速反应二步法需要18分钟处理时间,其中包括8分钟孵育
一步法 (i System) 1
• • 在位置1加样品到RV杯中. • • 在位置2试剂针R1加微粒子试剂和吖啶酯标记的连接物试剂 . • • 在位置3振动混合样品和试剂. • • 在位置4-86孵育25分钟.
一步法 (i System) 2
• 在位置4 - 24孵育7分钟.
• ARCHITECT维生素B12项目以一种包含样本自动预 处理的两步免疫检测法，测定人血清或血浆中的 维生素B12。将样本和预处理液1、2、3混合。然 后，吸取部分预处理的样本至新的反应杯（RV） 内。将预处理的样本和项目稀释液、内因子包被 的顺磁微粒子混合。样本中存在的B12结合到内因 子包被的微粒子上。冲洗后进入第二步，加入吖 啶酯标记的B12结合物。接着向反应混合物中加入 预激发液和激发液；测量产生的化学发光反应， 以相对发光单位（RLUs）表示。样本中的B12含量 与ARCHITECT i光学系统检测到的RLUs值之间成反 比。
化学发光分析法的特点
• 由于化学发光分析不使用任何光源，避免了背景光和杂散光 的干扰，降低了噪声，大大提高了信噪比，因而，化学发光 分析法一般都有很高的灵敏度，通常可测定纳克级或皮克级 的化学成分。——高灵敏度 • 测量化学发光强度，多采用光电转换装置，用函数记录仪或 数显装置，记录化学发光的相对强度。以最大发光强度(曲 线的峰高)定量被测组分的浓度。——光电转换 • 配备微机系统，自动进样，储存记录，打印结果，使化学发 光分析的速度更快。——全自动
• 即：磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或病毒颗粒） 特异的与被分析物中抗原、抗体结合形成抗原抗体复合物， 再与吖啶酯标记的连接物反应形成双抗体夹心抗原抗体复合 物。吖啶酯在过氧化氢的稀碱溶液中发生氧化还原反应生成 10-甲基吖啶酮，当它恢复到基态时发光，根据发光强度可 计算出分析物的浓度 。
CMIA分析成份
二步法 (i System) 1
共112个RV杯空位，每18秒 转一个空位，200T/h。常规 28Min/TEST
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• 在位置1加样品到RV杯中. • 在位置2试剂针R1加微粒子试剂. • 在位置3振动混合样品和试剂. • 在位置4 - 63孵育18分钟.
二步法 (i System)2
美国雅培i2000 化学发光免疫分析仪运行原理
-氨基末端脑钠肽前体
胡腊英 胡腊英
化学发光基本原理
• 反应体系中的某种物质的分子(反应物、产物、中间体或 荧光物质) 吸收了反应所释放的能量而由基态跃迁至激发 态，然后再从激发态返回基态，同时将能量以光辐射的形 式释放出来，产生化学发光。将化学发光反应应用于分析 化学，根据某一时刻的发光强度或反应的发光总量来确定 体系的相应组分含量的分析方法叫化学发光分析法。
• 然后系统在反应复合物中加入激发液（NaOH），吖啶酯在过氧化物和碱 性溶液中发生氧化反应，在碱性H2O2 溶液中，分子受到过氧化氢离子进 攻时，生成不稳定的二氧乙烷，此二氧乙烷分解为CO2 和电子激发态的N - 甲基吖啶酮，当其回到基态时发出最大发射波长为430nm 的光子。
• 5． 检测被分析物存在的量 要检测被分析物存在的量，CMIA光路系统通过 预先确定好的时间读取化学发光发射的量（ 活动读数），可计算分析物的浓度，或根据 Index（截断值）来定性进行判断。
R1试剂
R2试剂
CMIA分析步骤
• 1．样品与微粒子结合 在样品检测过程中，微粒子（磁性微粒子包被的捕捉 分子）与样品在反应杯中混合，在孵育过程中，样 品中的被分析物与微粒子上的捕捉抗原相互反应结 合，形成免疫复合物。
• 2．磁石将磁性微粒子吸附
孵育后，磁石将磁性微粒子（包括特异性的分 析物）吸附在反应杯的管壁上，反应复合物 被清洗去除未结合的物质，然后继续进行测 定。
快速反应一步法 (i System) 1
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• 在位置47快速反应针加样品到RV杯中. • 在位置48试剂R2针加微粒子和吖啶酯标记的连接物试剂. • 在位置49振动混合样品和试剂. • 在位置50-86孵育11分钟.
快速反应一步法 (i System)2
• • 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
预先处理法Pretreatment
• 预先处理法需要对样品自动预先处理再按一 步法和二步法分析样品,目前预先处理法如下: • ①7分钟预先处理
• ②14分钟预先处理
①7分钟预先处理
• • 在位置1加样品到RV杯中.
• • 在位置2试剂针R1加预先处理试剂.
• • 在位置3振动混合样品和试剂. • • 在位置4 - 24孵育7分钟. • • 在位置24样品针将预先处理样品吸到在位置1上新RV杯上. • • 按一步法和二步法分析样品.
• 磁性微粒子包被的捕捉分子（抗原，抗体或 病毒颗粒）用于特异性的检测被分析物。
• 吖啶酯标记的连接物 • 预激发液和激发液
ABBOTT i 2000SR试剂组成
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试剂组成 中圈（RI）：包被有 抗体的顺磁性微粒 子 内圈（R2）：吖啶 酯包被的抗体 外圈：样本稀释液 预激发液：1.32%的 过氧化氢 激发液：0.35mol./L 的氢氧化钠 清洗缓冲液：磷酸 盐缓冲液
数据计算
• 最终读数(RLU) = 有效读数– 空白
谢谢！
快速反应二步法 (i System) 3
• • 在位置71试剂针R2吖啶酯标记的连接物试剂. • • 在位置72振动混合样品和试剂. • • 在位置73 – 86 孵育4分钟.
快速反应二步法 (i System) 4
• • 在位置87 - 90清洗站2#清洗RV杯混合物吸走没结合物质.
快速反应二步法 (i System) 5