微生物实验培训课件
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微生物实验培训课件
一、人员资质及培训要求
• 从事医疗器械微生物检验工作的人员应具备微生物学或相 近专业知识的教育背景。检验人员应依据所在岗位和职责 接受相应的培训，在确认它们可以承担某一检验前，他们 不能独立从事该项微生物检验。应保证所有人员在上岗前 接受胜任工作所必须的设备操作、微生物检验技术和实验 室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗，同时， 实验室应制定所有级别试验人员的继续教育计划。
备以及培养基促生长实验、阳性对照、微生物方法验证、 消毒剂和防腐剂的效力测定和对环境中分离菌的鉴别等， 这些实验过程中都在处理活的微生物，处理不当会造成实 验室环境污染，影响其他实验结果，因此，该室必须与其 他实验室严格分开；必要时，应按实验室性质的需要保持 对相邻实验室的相对压差；需采取必要的消毒方式确保实 验室洁净条件合格（如臭氧，乳酸熏蒸等），以净化层流 台作为局部100级的控制措施，最好是使用生物安全柜， 所有的与活毒菌种相关的活动都应在层流台或生物安全柜 中进行。每次实验结束后要对层流台或生物安全柜及整个 实验室环境进行消毒。所有与菌种相关的实验废物均应经 过灭菌处理后方可丢弃。
净化空调系统正常运行不少于10min后开始。 • 1.2对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间
，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。 • 2.采样方法 • 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养
基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 • 2.2.培养 • 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在
洁净度等级划分 • ISO 14644-4:2019 洁净室及相关受控环境 第4部分：设计
、施工、运行 • ISO 14644-7:2019 洁净室及相关受控环境 第7部分：分离
的设备
无菌室环境控制设备
微粒计数仪
无菌室环境控制设备
浮游菌采样仪
无菌室环境控制设备
洁净室沉降菌测试方法
• 1.测试时间 • 1.1对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在
二、实验室环境控制
【要求】 • 4、培养室及其他功能间
培养室用于放置培养细菌和真菌的培养箱 。准备区即试液及培养基配制/灭菌区域、 实验器皿洗涤、烘干、灭菌、实验用品及 易耗品储藏等没有特殊要求的功能间，可 为一般清洁环境。
微生物环境控制相关标准
• GB/T 16292:2019，医药工业洁净室(区)悬浮粒子测试方法 • GB/T 16293:2019，医药工业洁净室(区)浮游菌测试方法 • GB/T 16294:2019，医药工业洁净室(区)沉降菌测试方法 • GB50073-2019洁净厂房设计规范 • ISO 14644-1:2019 洁净室及相关受控环境 第1部分：空气
菌落计数。 • 4.注意事项 • 4.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 • 4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。 • 4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 • 4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背
面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌 菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 • 4.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染 的应剔除。
30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。每批培养基 应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3 只培养皿作对照培养。
洁净室沉降菌测试方法
• 3.菌落计数 • 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大
镜检查，有否遗漏。 • 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上
• 检验人员必须熟悉相关监测方法、程序、检验目的和结果 评价。微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与 他们的职责范围相符，如：管理技能、实验室安全、检验 安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调 查、技术报告书写等。
二、实验室环境控制
• 【原则】实验室布局设计的基本原则是既要最大 可能防止微生物的污染，又要防止检验过程对环 境和人员造成危害。通常，实验室应划分成洁净 或无菌区域和活菌操作区域，同时应根据试验目 的，在时间或空间上有效分隔不相容的试验活动 ，将交叉污染的风险降低到最低。
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洁净室沉降菌测试方法
• 5.测试规则 • 5.1.测试状态 • 5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到
规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规 定值内。 • 5.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 • 5.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符 合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 • 5.2.测试人员 • 5.2.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 • 5.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于二人。
二、实验室环境控制
【要求】 • 2、微生物限度检查的全过程，均应遵守无
菌操作，严防再污染。因此，微生物限度 检查宜在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内进行；限度检 查实验室应配有相应的人流和物流缓冲间 ，并定期作环境监测。
二、实验室环境控制
【要求】
• 3、菌种处理、微生物鉴别和阳性对照室 • 菌种的处理包括的内容比较多，如菌种的传代、保藏、制
• 一般情况下，医疗器械微生物检验的实验室应具 有开展无菌检查、微生物限度检查等检测活动的 、独立设置的洁净室（区）或隔离系统，并为上 述检验配备相应的细菌（真菌）等实验室、培养 室、文档处理区等辅助区域，同时，应对上述区 域明确标识。
二、实验室环境控制
• 【要求】 1、无菌检查应在环境洁净度10000级下 的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离 系统中进行。用于无菌检查和微生物限度检查的 洁净操作室应配有属于“人流净化”的更衣室及属 于“物流净化”的缓冲间或传递窗（柜），使进入 洁净操作室的实验人员和实验物品分别经适当净 化后进入实验操作间。 无菌室分无菌操作室和缓 冲间。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流 空气装置。操作室或工作台应保持正压。应在压 差十分重要的相邻级别区之间安装压差表。
一、人员资质及培训要求
• 从事医疗器械微生物检验工作的人员应具备微生物学或相 近专业知识的教育背景。检验人员应依据所在岗位和职责 接受相应的培训，在确认它们可以承担某一检验前，他们 不能独立从事该项微生物检验。应保证所有人员在上岗前 接受胜任工作所必须的设备操作、微生物检验技术和实验 室生物安全等方面的培训，经考核合格后方可上岗，同时， 实验室应制定所有级别试验人员的继续教育计划。
备以及培养基促生长实验、阳性对照、微生物方法验证、 消毒剂和防腐剂的效力测定和对环境中分离菌的鉴别等， 这些实验过程中都在处理活的微生物，处理不当会造成实 验室环境污染，影响其他实验结果，因此，该室必须与其 他实验室严格分开；必要时，应按实验室性质的需要保持 对相邻实验室的相对压差；需采取必要的消毒方式确保实 验室洁净条件合格（如臭氧，乳酸熏蒸等），以净化层流 台作为局部100级的控制措施，最好是使用生物安全柜， 所有的与活毒菌种相关的活动都应在层流台或生物安全柜 中进行。每次实验结束后要对层流台或生物安全柜及整个 实验室环境进行消毒。所有与菌种相关的实验废物均应经 过灭菌处理后方可丢弃。
净化空调系统正常运行不少于10min后开始。 • 1.2对非单向流，如10000级、100000级以上的净化房间
，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。 • 2.采样方法 • 将已制备好的培养皿按要求放置，打开培养皿盖，使培养
基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。 • 2.2.培养 • 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。在
洁净度等级划分 • ISO 14644-4:2019 洁净室及相关受控环境 第4部分：设计
、施工、运行 • ISO 14644-7:2019 洁净室及相关受控环境 第7部分：分离
的设备
无菌室环境控制设备
微粒计数仪
无菌室环境控制设备
浮游菌采样仪
无菌室环境控制设备
洁净室沉降菌测试方法
• 1.测试时间 • 1.1对单向流，如100级净化房间及层流工作台，测试应在
二、实验室环境控制
【要求】 • 4、培养室及其他功能间
培养室用于放置培养细菌和真菌的培养箱 。准备区即试液及培养基配制/灭菌区域、 实验器皿洗涤、烘干、灭菌、实验用品及 易耗品储藏等没有特殊要求的功能间，可 为一般清洁环境。
微生物环境控制相关标准
• GB/T 16292:2019，医药工业洁净室(区)悬浮粒子测试方法 • GB/T 16293:2019，医药工业洁净室(区)浮游菌测试方法 • GB/T 16294:2019，医药工业洁净室(区)沉降菌测试方法 • GB50073-2019洁净厂房设计规范 • ISO 14644-1:2019 洁净室及相关受控环境 第1部分：空气
菌落计数。 • 4.注意事项 • 4.1测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 • 4.2采取一切措施防止人为对样本的污染。 • 4.3对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 • 4.4由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背
面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，并须注意细菌 菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。 • 4.5采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染 的应剔除。
30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。每批培养基 应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3 只培养皿作对照培养。
洁净室沉降菌测试方法
• 3.菌落计数 • 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大
镜检查，有否遗漏。 • 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上
• 检验人员必须熟悉相关监测方法、程序、检验目的和结果 评价。微生物实验室的管理者其专业技能和经验水平应与 他们的职责范围相符，如：管理技能、实验室安全、检验 安排、预算、实验研究、实验结果的评估和数据偏差的调 查、技术报告书写等。
二、实验室环境控制
• 【原则】实验室布局设计的基本原则是既要最大 可能防止微生物的污染，又要防止检验过程对环 境和人员造成危害。通常，实验室应划分成洁净 或无菌区域和活菌操作区域，同时应根据试验目 的，在时间或空间上有效分隔不相容的试验活动 ，将交叉污染的风险降低到最低。
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洁净室沉降菌测试方法
• 5.测试规则 • 5.1.测试状态 • 5.1.1沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到
规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规 定值内。 • 5.1.2沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。 • 5.1.3测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符 合生产的要求，并在报告中注明测试状态。 • 5.2.测试人员 • 5.2.1测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。 • 5.2.2静态测试时，室内测试人员不得多于二人。
二、实验室环境控制
【要求】 • 2、微生物限度检查的全过程，均应遵守无
菌操作，严防再污染。因此，微生物限度 检查宜在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内进行；限度检 查实验室应配有相应的人流和物流缓冲间 ，并定期作环境监测。
二、实验室环境控制
【要求】
• 3、菌种处理、微生物鉴别和阳性对照室 • 菌种的处理包括的内容比较多，如菌种的传代、保藏、制
• 一般情况下，医疗器械微生物检验的实验室应具 有开展无菌检查、微生物限度检查等检测活动的 、独立设置的洁净室（区）或隔离系统，并为上 述检验配备相应的细菌（真菌）等实验室、培养 室、文档处理区等辅助区域，同时，应对上述区 域明确标识。
二、实验室环境控制
• 【要求】 1、无菌检查应在环境洁净度10000级下 的局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离 系统中进行。用于无菌检查和微生物限度检查的 洁净操作室应配有属于“人流净化”的更衣室及属 于“物流净化”的缓冲间或传递窗（柜），使进入 洁净操作室的实验人员和实验物品分别经适当净 化后进入实验操作间。 无菌室分无菌操作室和缓 冲间。无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流 空气装置。操作室或工作台应保持正压。应在压 差十分重要的相邻级别区之间安装压差表。