_海参肽对小鼠抗疲劳作用的研究
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与对照组相比, 实验组的小白鼠负重游 泳和转棒时间明 显延长。经过 t检验得出, 各个剂量组和对照组比较差异显著 ( P < 0. 05或 P< 0. 01)。其 中中剂量组 的游泳时间 和低剂量 组的转棒时间 比对照组提 高了一倍 以上。以 上结果表 明: 海 参肽能明显延长受试小白鼠的负重游泳时间和转棒时间。
本试验通过海参肽 对小鼠负重游泳和转 棒时间、运动后 小鼠血尿素氮和肝 糖原含 量等 抗疲劳 指标 综合 分析了 其抗 疲劳作用, 为进一步开发抗疲劳功能显著 的功能食品 奠定理 论基础。
1 材料与方法
1. 1 材 料及仪器 昆明种: 雄雌小 鼠 各半 , 体重 18~ 22 g, 由只 楚 药业 提
100 mg与 300 L 的碱液 [按样本重 ( mg ) 碱液体积 ( L ) = 1 3] 一起加入试管中, 用保鲜膜将各试 管口扎起, 并在膜上 扎一小孔 ( 保鲜膜防止水 分蒸发, 扎 孔以便气 体热胀 冷缩 ), 放入沸水浴中煮 20 m in后流 水冷却。 将肝糖 原水解 液进一 步制备成糖原检 测液。按 肝糖 原测定 试剂 盒说 明在各 试管 中加入各试 剂。混匀 后置沸 水中 煮 5 m in, 冷 却后 于 620 nm 波长处用半自动生化仪 测得吸光度, 计算出肝糖原含量。 1. 3 数 据统计与分析
数据用 SPSS软件统计, 用独立样本的 t检验进行差异显 著性检验, 数据用 SD 表示 [ 7]。
2 结果与讨论
2. 1 海 参肽对小鼠状态的影响 据 4个星期的 观察: 小鼠 在实验 过程 中精 神状 态、饮食
情况、毛发状态、大小便等状况 均无异常。在 实验初始阶 段, 偶有小鼠死亡, 是由于灌胃时操作不当 导致。在初期 有死亡 小鼠的组别用新的小鼠补齐, 因为小鼠死 亡是在实验 开始阶 段, 所以补齐小鼠对实验结果影响不大。 2. 2 海 参肽对小鼠体重的影响
供, 实验动物生产许可证号: SCXK (鲁 ) 20030007; 海参肽: 烟台大学食品所自制, 分子量小于 10 000; TH - 86- 340- LA 天寒超低温冰箱: 北京德天佑 科技发
展有限公司产; BT224半自动生化仪: 上海康人医 学仪器 设备有 限公司
产; YL S- 4C 转棒疲劳仪: 山东省医学科学院设 备站; XM TW - 4100游泳箱: 北京硕林苑科技有限公司产; AR 2140分析天平: 梅特勒托 利多仪器公司产; 血尿素氮测定试剂 盒: 南京建成生物工程研究所; 肝糖原测定试剂盒 : 南京建成生物工程研究所; 其它检验试剂: 均为 AR 级。
WAN G H ong tao1 YIN H ua xian1 JIN H ai zhu1 H A Jongm yung2
( 1. 烟台大学食品科学与工程研究所, 山东 烟台 264005; 2. 韩国新罗大学校 生命工学科, 韩国 釜山 ( 1. Institute of Food Science& Eng ineering, Yantai University, Yantai, Shangdong 264005, Ch ina; 2. D epartm ent of B ioscience& B iotechnology, S illa U niver sity Busan, K orea, 617736, K orea)
89
提取与活性
2007年第 3期
算 得 高、中、低 剂 量 组 每 天 的 灌 胃 剂 量 分 别 为: 2. 703 mg 0. 5 mL /20 g 体重、5. 406 m g /0. 5 mL /20 g 体 重、 6. 758 mg /0. 5 mL /20 g体重; 对照组 给予同体积的双蒸水, 每 周称一次体重。 每天观 察小 鼠的饮 食、精神、毛发 和大 小便 等状况。连续给予受试物 28 d后, 测定各项指标。 1. 2. 2 小 鼠体重的 测定 小 鼠在给药前 、给药 1周、给药 2 周、给药 3周、给药 4周分别称重, 算出每次称重 的各组平均 值, 作记录。 1. 2. 3 负重游泳 实验 [5] 在末次 给予 受试物 30 m in 后, 给 小鼠尾部绑 上其 体重 5% 重 量 的铅 丝, 将 小鼠 放于 水 深为 30 cm, 水温为 25 1 的游泳 池内 游泳。记 录自 游泳 开始 至头部全部沉入 水中 8 s 不能 浮出 水面 的时 间作 为游 泳时 间。 1. 2. 4 转棒实验 在转 速为 36 r/m in, 时间 为 30 m in 的条 件下训练 2 d。第 3 d在 给予受 试物 30 m in 后, 将小鼠 放在 转棒仪的棒上, 按 (转速: 36 r /m in, 时间: 45 m in)进 行转棒实 验。转棒仪将自动 记录小 鼠从 开始到 从棒 上跌 落下来 的时 间, 即作为转棒时间。 1. 2. 5 血尿素氮含量的 测定 [ 5]
从对照组和实验组 小白鼠受试 28 d体重 增长情 况可以 看出, 对照组和实验组 的小 鼠体重 总体 上都 呈增长 趋势, 增 长情况略有差异。经过 t检验, 低剂 量、中 剂量、高剂 量和对 照组之间无显著性 差异 ( P > 0. 05)。以上 结果表 明: 海 参肽 对小鼠体重无显著影响 。 2. 3 海 参肽对小鼠游泳和转棒时间的影响
原理: 在加热和强 酸条件 下, 尿素 氮与二 乙酰缩合 合成 红色的联吖嗪即 F earon反应, 根据色泽的深浅可 以计算出尿 素氮的含量。
方法: 末 次 给 予受 试 物 30 m in 后, 将 小 鼠放 于 水深 为 30 cm, 水温为 25 1 的游泳箱 内游泳 90 m in, 休 息 60 m in 后眼底取血 0. 5 mL 与 150 L 的抗凝血剂 (二水合 柠檬酸三 钠溶液 )一起加入到 1 mL 的微型管中, 按血尿素氮测试盒说 明书将各试剂加入到各个试管 中。加完后混 匀, 置 沸水中准 确水浴 15 m in, 立 即用 自来水 冷却。在 波长 为 520 nm 处用 半自动生化仪测得吸 光度, 计算出血中尿素氮的含量。 1. 2. 6 肝糖原含量的测 定 [ 6]
61 773 6 )
摘要: 通过采用不同浓 度的 海参 肽灌胃, 研 究海 参肽对 小鼠 的抗疲劳作用。 结果发 现, 海参 肽对小 鼠体 重无显 著影 响, 能明显延长小鼠的负重游泳时 间和转棒时间, 显著 降低运动 后小鼠的血尿 素氮 含量, 提高 了肝 糖原含 量。研究 表明: 海 参肽具有明显的抗疲 劳功效。 关键词: 海参肽; 抗疲劳; 肝糖原; 血尿素 氮 A bs tract: The an ti fatigue effects of sea cu cum ber polypept ide on m ice w as stud ied at d ifferent dose. Th e resu lt show ed that sea cu cumber poly pep tid e h ave no obvious effect on body w eigh t in m ice, s ign if ican tly p ro long the t im e of loaded sw imm ing and roll ing stick, strongly degrade th e conten t of b lood u rea n itrogen and increase th e conten t of hepatic g lycogen of post exercise m ice. Th e study ind icates that sea cucumb er polypep tid e has s ign if ican t ant i fatigue effect. K eywords: Sea cu cum ber polyp ept ide; A n ti fat igu e; H epatic g lycogen; B lood u rea n itrogen
运动耐力的提高是 抗疲劳能力加强最直 接、最客 观的指 标 [ 8] , 游泳 时间和转棒时间的长短可以反应动物运动 疲劳的 程度且装置简单 并能 客观反 映机 体的体 能。运 动实验 涉及 的因素很多。游泳实验中负重物要 适中, 缠得太紧时 鼠尾血 液循环不畅, 影响实验结果, 太松则 容易脱落; 有的小 鼠容易 漂浮在水面, 要使它们 保持 不停的 运动 状态; 水 的温度 和游 泳的空 间 也相 当 重 要。转 棒 实 验中 得 按 一 定 的转 速 训 练 2 d, 每天 45 m in, 这样可 使它们习惯于这项运动。
原理: 糖原在浓硫 酸的作 用下 可脱 水生成 糠醛 衍生 物, 后者再与蒽酮 ( C4H10 O ) 作 用形 成蓝 色化 合物, 与 同法 处理 的标准葡萄糖溶 液比 色定量。 糖原在 浓硫 酸溶 液中非 常稳 定, 故在显色之前先将组织放入浓硫酸中 加热以破 坏其他成 分而保留糖原。
方法: 末次给 予 受 试物 30 m in 后, 将小 鼠 放 于 水深 为 30 cm、水温 25 1 的 游泳 箱内游 泳 90 m in。立 即用 脱颈 椎 法 [ 6] 处 死小 鼠取 出肝 脏, 生理 盐水 漂洗 后滤 纸吸 干。称
海参干燥体壁的 有机成分中蛋白质接近 90% , 脂质约占 4% , 多糖在 6% 左右, 另含有少量核酸。无机成分中含 钙、镁 盐及铁、锰、锌、铜、钼、硒等微 量元素 [ 1] , 海参 蛋白质 中含有 18种以上的氨基酸, 而且氨基 酸的构 成比例 较好 [ 2] , 其中必 需氨 基酸 的比 例很 高, 是典 型的 高 蛋白、低 脂肪、极 低 胆固 醇、富含矿物质和维生素的优质食品。海 参作为重 要的食物 资源和药物资源, 人类 很早 就把 其利用 到养 生、保健和 治疗 上。明代出版的 食物本草 一 书中作 者姚可 成就指出 海参 有主补元 气、滋 益五 脏六 腑 和祛 虚 损的 养生 功 能 [ 3]。 清代 本草从新 、 本 草纲目 拾遗 等 中药 典籍则 将海 参列 为补 益药物 [ 4] 。
海参肽系指海 参经蛋 白酶 水解并 精制 后得 到的以 小分
基金项目: 中韩国际合作课题 ( 项目编号: HY 04H Z- 2 ) 作者简介: 王洪涛 ( 1982- ) , 男, 烟台大学生物化工专业在读研 究生。
E m ai:l wh t1211@ sina. com 通讯作者: 金海珠 收稿日期: 2006 - 12- 25
表 1 海参肽对小鼠体重的影 响 ( X SD, n = 10)
组别
给药前
1周后
2 周后
3周后
4 周后
1. 2 实 验方法 1. 2. 1 动物分组和灌胃剂 量的设计 将 小鼠按体重 随机分 为 4组, 每组 10只, 雌雄 各半, 分 为对 照组、低 剂量 组、中剂 量组和高剂量 组。适应 性饲养 7 d后灌胃。采用人体推荐用 量的 10, 20, 25 倍分别 作为 低、中、高 剂量 组的 灌胃 剂量, 计
子肽为主、多种功效成 分共 存的蛋 白质 水解 产物, 具有 降血 压、抗疲劳、提高免疫力、延缓衰老等诸 多生理功 能。与海参
相比, 海参多肽具有良好的溶解性、稳定性、低黏度性 等特殊 的理化性质, 因此经酶 解制 得的海 参肽 具有 易消化 吸收, 生 物效价高、无抗原性, 食用安全等优 点, 比 普通海参制 品有更 高的生物效价。
第 23卷第 3期 2 0 0 7 年 5月
V o l. 23, N o. 3 M ay , 2 0 0 7
海参肽对小鼠抗疲劳作用的研究
The study o f anti fatigue effects of sea cucumber polypeptide on m ice
王洪涛 1
尹花仙1 金海珠 1 河锺明2
本试验通过海参肽 对小鼠负重游泳和转 棒时间、运动后 小鼠血尿素氮和肝 糖原含 量等 抗疲劳 指标 综合 分析了 其抗 疲劳作用, 为进一步开发抗疲劳功能显著 的功能食品 奠定理 论基础。
1 材料与方法
1. 1 材 料及仪器 昆明种: 雄雌小 鼠 各半 , 体重 18~ 22 g, 由只 楚 药业 提
100 mg与 300 L 的碱液 [按样本重 ( mg ) 碱液体积 ( L ) = 1 3] 一起加入试管中, 用保鲜膜将各试 管口扎起, 并在膜上 扎一小孔 ( 保鲜膜防止水 分蒸发, 扎 孔以便气 体热胀 冷缩 ), 放入沸水浴中煮 20 m in后流 水冷却。 将肝糖 原水解 液进一 步制备成糖原检 测液。按 肝糖 原测定 试剂 盒说 明在各 试管 中加入各试 剂。混匀 后置沸 水中 煮 5 m in, 冷 却后 于 620 nm 波长处用半自动生化仪 测得吸光度, 计算出肝糖原含量。 1. 3 数 据统计与分析
数据用 SPSS软件统计, 用独立样本的 t检验进行差异显 著性检验, 数据用 SD 表示 [ 7]。
2 结果与讨论
2. 1 海 参肽对小鼠状态的影响 据 4个星期的 观察: 小鼠 在实验 过程 中精 神状 态、饮食
情况、毛发状态、大小便等状况 均无异常。在 实验初始阶 段, 偶有小鼠死亡, 是由于灌胃时操作不当 导致。在初期 有死亡 小鼠的组别用新的小鼠补齐, 因为小鼠死 亡是在实验 开始阶 段, 所以补齐小鼠对实验结果影响不大。 2. 2 海 参肽对小鼠体重的影响
供, 实验动物生产许可证号: SCXK (鲁 ) 20030007; 海参肽: 烟台大学食品所自制, 分子量小于 10 000; TH - 86- 340- LA 天寒超低温冰箱: 北京德天佑 科技发
展有限公司产; BT224半自动生化仪: 上海康人医 学仪器 设备有 限公司
产; YL S- 4C 转棒疲劳仪: 山东省医学科学院设 备站; XM TW - 4100游泳箱: 北京硕林苑科技有限公司产; AR 2140分析天平: 梅特勒托 利多仪器公司产; 血尿素氮测定试剂 盒: 南京建成生物工程研究所; 肝糖原测定试剂盒 : 南京建成生物工程研究所; 其它检验试剂: 均为 AR 级。
WAN G H ong tao1 YIN H ua xian1 JIN H ai zhu1 H A Jongm yung2
( 1. 烟台大学食品科学与工程研究所, 山东 烟台 264005; 2. 韩国新罗大学校 生命工学科, 韩国 釜山 ( 1. Institute of Food Science& Eng ineering, Yantai University, Yantai, Shangdong 264005, Ch ina; 2. D epartm ent of B ioscience& B iotechnology, S illa U niver sity Busan, K orea, 617736, K orea)
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提取与活性
2007年第 3期
算 得 高、中、低 剂 量 组 每 天 的 灌 胃 剂 量 分 别 为: 2. 703 mg 0. 5 mL /20 g 体重、5. 406 m g /0. 5 mL /20 g 体 重、 6. 758 mg /0. 5 mL /20 g体重; 对照组 给予同体积的双蒸水, 每 周称一次体重。 每天观 察小 鼠的饮 食、精神、毛发 和大 小便 等状况。连续给予受试物 28 d后, 测定各项指标。 1. 2. 2 小 鼠体重的 测定 小 鼠在给药前 、给药 1周、给药 2 周、给药 3周、给药 4周分别称重, 算出每次称重 的各组平均 值, 作记录。 1. 2. 3 负重游泳 实验 [5] 在末次 给予 受试物 30 m in 后, 给 小鼠尾部绑 上其 体重 5% 重 量 的铅 丝, 将 小鼠 放于 水 深为 30 cm, 水温为 25 1 的游泳 池内 游泳。记 录自 游泳 开始 至头部全部沉入 水中 8 s 不能 浮出 水面 的时 间作 为游 泳时 间。 1. 2. 4 转棒实验 在转 速为 36 r/m in, 时间 为 30 m in 的条 件下训练 2 d。第 3 d在 给予受 试物 30 m in 后, 将小鼠 放在 转棒仪的棒上, 按 (转速: 36 r /m in, 时间: 45 m in)进 行转棒实 验。转棒仪将自动 记录小 鼠从 开始到 从棒 上跌 落下来 的时 间, 即作为转棒时间。 1. 2. 5 血尿素氮含量的 测定 [ 5]
从对照组和实验组 小白鼠受试 28 d体重 增长情 况可以 看出, 对照组和实验组 的小 鼠体重 总体 上都 呈增长 趋势, 增 长情况略有差异。经过 t检验, 低剂 量、中 剂量、高剂 量和对 照组之间无显著性 差异 ( P > 0. 05)。以上 结果表 明: 海 参肽 对小鼠体重无显著影响 。 2. 3 海 参肽对小鼠游泳和转棒时间的影响
原理: 在加热和强 酸条件 下, 尿素 氮与二 乙酰缩合 合成 红色的联吖嗪即 F earon反应, 根据色泽的深浅可 以计算出尿 素氮的含量。
方法: 末 次 给 予受 试 物 30 m in 后, 将 小 鼠放 于 水深 为 30 cm, 水温为 25 1 的游泳箱 内游泳 90 m in, 休 息 60 m in 后眼底取血 0. 5 mL 与 150 L 的抗凝血剂 (二水合 柠檬酸三 钠溶液 )一起加入到 1 mL 的微型管中, 按血尿素氮测试盒说 明书将各试剂加入到各个试管 中。加完后混 匀, 置 沸水中准 确水浴 15 m in, 立 即用 自来水 冷却。在 波长 为 520 nm 处用 半自动生化仪测得吸 光度, 计算出血中尿素氮的含量。 1. 2. 6 肝糖原含量的测 定 [ 6]
61 773 6 )
摘要: 通过采用不同浓 度的 海参 肽灌胃, 研 究海 参肽对 小鼠 的抗疲劳作用。 结果发 现, 海参 肽对小 鼠体 重无显 著影 响, 能明显延长小鼠的负重游泳时 间和转棒时间, 显著 降低运动 后小鼠的血尿 素氮 含量, 提高 了肝 糖原含 量。研究 表明: 海 参肽具有明显的抗疲 劳功效。 关键词: 海参肽; 抗疲劳; 肝糖原; 血尿素 氮 A bs tract: The an ti fatigue effects of sea cu cum ber polypept ide on m ice w as stud ied at d ifferent dose. Th e resu lt show ed that sea cu cumber poly pep tid e h ave no obvious effect on body w eigh t in m ice, s ign if ican tly p ro long the t im e of loaded sw imm ing and roll ing stick, strongly degrade th e conten t of b lood u rea n itrogen and increase th e conten t of hepatic g lycogen of post exercise m ice. Th e study ind icates that sea cucumb er polypep tid e has s ign if ican t ant i fatigue effect. K eywords: Sea cu cum ber polyp ept ide; A n ti fat igu e; H epatic g lycogen; B lood u rea n itrogen
运动耐力的提高是 抗疲劳能力加强最直 接、最客 观的指 标 [ 8] , 游泳 时间和转棒时间的长短可以反应动物运动 疲劳的 程度且装置简单 并能 客观反 映机 体的体 能。运 动实验 涉及 的因素很多。游泳实验中负重物要 适中, 缠得太紧时 鼠尾血 液循环不畅, 影响实验结果, 太松则 容易脱落; 有的小 鼠容易 漂浮在水面, 要使它们 保持 不停的 运动 状态; 水 的温度 和游 泳的空 间 也相 当 重 要。转 棒 实 验中 得 按 一 定 的转 速 训 练 2 d, 每天 45 m in, 这样可 使它们习惯于这项运动。
原理: 糖原在浓硫 酸的作 用下 可脱 水生成 糠醛 衍生 物, 后者再与蒽酮 ( C4H10 O ) 作 用形 成蓝 色化 合物, 与 同法 处理 的标准葡萄糖溶 液比 色定量。 糖原在 浓硫 酸溶 液中非 常稳 定, 故在显色之前先将组织放入浓硫酸中 加热以破 坏其他成 分而保留糖原。
方法: 末次给 予 受 试物 30 m in 后, 将小 鼠 放 于 水深 为 30 cm、水温 25 1 的 游泳 箱内游 泳 90 m in。立 即用 脱颈 椎 法 [ 6] 处 死小 鼠取 出肝 脏, 生理 盐水 漂洗 后滤 纸吸 干。称
海参干燥体壁的 有机成分中蛋白质接近 90% , 脂质约占 4% , 多糖在 6% 左右, 另含有少量核酸。无机成分中含 钙、镁 盐及铁、锰、锌、铜、钼、硒等微 量元素 [ 1] , 海参 蛋白质 中含有 18种以上的氨基酸, 而且氨基 酸的构 成比例 较好 [ 2] , 其中必 需氨 基酸 的比 例很 高, 是典 型的 高 蛋白、低 脂肪、极 低 胆固 醇、富含矿物质和维生素的优质食品。海 参作为重 要的食物 资源和药物资源, 人类 很早 就把 其利用 到养 生、保健和 治疗 上。明代出版的 食物本草 一 书中作 者姚可 成就指出 海参 有主补元 气、滋 益五 脏六 腑 和祛 虚 损的 养生 功 能 [ 3]。 清代 本草从新 、 本 草纲目 拾遗 等 中药 典籍则 将海 参列 为补 益药物 [ 4] 。
海参肽系指海 参经蛋 白酶 水解并 精制 后得 到的以 小分
基金项目: 中韩国际合作课题 ( 项目编号: HY 04H Z- 2 ) 作者简介: 王洪涛 ( 1982- ) , 男, 烟台大学生物化工专业在读研 究生。
E m ai:l wh t1211@ sina. com 通讯作者: 金海珠 收稿日期: 2006 - 12- 25
表 1 海参肽对小鼠体重的影 响 ( X SD, n = 10)
组别
给药前
1周后
2 周后
3周后
4 周后
1. 2 实 验方法 1. 2. 1 动物分组和灌胃剂 量的设计 将 小鼠按体重 随机分 为 4组, 每组 10只, 雌雄 各半, 分 为对 照组、低 剂量 组、中剂 量组和高剂量 组。适应 性饲养 7 d后灌胃。采用人体推荐用 量的 10, 20, 25 倍分别 作为 低、中、高 剂量 组的 灌胃 剂量, 计
子肽为主、多种功效成 分共 存的蛋 白质 水解 产物, 具有 降血 压、抗疲劳、提高免疫力、延缓衰老等诸 多生理功 能。与海参
相比, 海参多肽具有良好的溶解性、稳定性、低黏度性 等特殊 的理化性质, 因此经酶 解制 得的海 参肽 具有 易消化 吸收, 生 物效价高、无抗原性, 食用安全等优 点, 比 普通海参制 品有更 高的生物效价。
第 23卷第 3期 2 0 0 7 年 5月
V o l. 23, N o. 3 M ay , 2 0 0 7
海参肽对小鼠抗疲劳作用的研究
The study o f anti fatigue effects of sea cucumber polypeptide on m ice
王洪涛 1
尹花仙1 金海珠 1 河锺明2