药敏试验方法简介ppt

钙镁离子含量、锌离子含量 （用27853氨基糖苷类和亚胺
– 苛养菌放普通环境生长 不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 培养时间
菌悬液
– 粘液性铜绿需48小时
浓度高抑菌环缩小（假耐药）• 测量方法
浓度低则扩大（假敏感）
稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培 养基进行一系列不同倍数稀释（通常为双 倍稀释），培养16～24h后，通过观察细 菌生长现象来测得药物对受试菌的最低抑 菌浓度（MIC）。
MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC
R
I
S
耐药
中介 敏感
d1 d2 抑菌圈直径（mm)
1. 准备抗菌药物纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基；
2. 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐 水管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；
3. 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余 菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次 旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周；
阿米卡星、氨曲南、头孢吡肟、环丙 沙星、亚安培南、哌拉西林+他唑巴 坦
C组
U组
氧氟沙星
不动杆菌属的抗菌药物药敏试验推荐分组
不动杆菌属 A组
B组
抗菌药物
氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶、 亚胺培南、环丙沙星、庆大霉 素
阿米卡星、哌拉西林+他唑巴 坦、头孢吡肟、头孢噻肟、复 方新诺明、哌拉西林、四环素
肠球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
4. 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化 的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；
5. 35℃孵育16～24小时，量 取抑菌圈直径；
6. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
CLSI对K-B法的标准化规定 纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、
平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、 质控方法等；常规测试、报告的抗生素。
肠球菌属
A组 B组 C组
抗菌药物
氨苄西林、青霉素 万古霉素、利奈唑胺 庆大霉素(120μg)、 链霉素 (300μg)
U组
环丙沙星、四环素、呋喃妥因
肺炎链球菌抗菌药物药敏试验推荐分组
肺炎链球菌 A组
B组
C组
抗菌药物 青霉素、苯唑西林(1μg)、 红霉素、复方新诺明 万古霉素、克林霉素、四环 素、氧氟沙星
氯霉素、利奈唑胺
药敏试验的折点亦遵照每年最新公布的 CLSI标准进行，分为敏感（S）、耐药（R） 和中介（I）。
敏感：分离菌株能被测试药物使用推荐剂 量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓 度所抑制
耐药：分离菌株不能被测试药物常规剂量 可达到的药物浓度所抑制；分离菌株可能 存在某些特定的耐药机制；治疗研究显示 药物对分离菌株的临床疗效不可靠
药敏试验方法简介
耐药菌问题日益严重
“目前药物失去作用的速度与科学家发 现新药物的速度差不多。”
摘自WHO报告
抗微生物治疗面临的困境
•抗药性问题始终存在 •细菌不断获得新的耐药机制 •以往对付耐药性的策略收效不显
一、 抗菌药物敏感试验（AST）
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，指导合
抗菌药物 氨苄西林、头孢唑林、庆大霉素
B组
阿米卡星、奥格门丁、哌拉西林+他唑巴
坦、头孢呋新、头孢吡肟、头孢西丁、
环丙沙星、亚安培南、哌拉西林、复方
新诺明
C组
头孢他啶、氯霉素、氨曲南、四环素
U组
羧苄西林、氧氟沙星、呋喃妥因
假单胞菌属的抗菌药物药物敏感推荐分组
假单胞菌 A组 B组
抗菌药物
头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林
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稀释法（MIC法）
MIC法：分为常量法和微量法
常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
微量法：微量肉汤稀释法
简化双浓度折点法 ATB药敏
简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
肉汤稀释法
不生长 = 抗生素抑制细菌生长 生长 = 抗生素无法抑制细菌生长
葡萄球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
葡萄球菌属 A组
B组
抗菌药物
苯唑西林（头孢西丁纸片）、克林 霉素、青霉素、红霉素、复方新诺 明、
四环素、万古霉素、利奈唑胺
C组
环丙沙星、庆大霉素、氯霉素、奎
奴普汀/达福普汀
U组
氧氟沙星、呋喃妥因、磺胺异恶唑、
甲氧苄啶
肠杆菌科抗菌药物敏感试验推荐分组
肠杆菌属 A组
Increasing Antibiotic Conc.
MIC = 8
.25
0.5
1
2
4
8
16
源自文库32
MIC (最小抑菌浓度) = 抗生素可抑制细菌生长 的最小浓度。
常量稀释法
药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
不同的药判定标准不同；不同的菌判定标 准也不同。
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扩散法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值7.2-7.4
• 气体环境
营养程度（肠球菌能生长）
– 普通细菌放CO2时由于
厚度
碳酸的影响，药物活性
抗生素拮抗剂含量（用29212 监控）
受到影响，形成假敏感 或假耐药
理用药，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌
握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防 耐药菌感染的发生和流行。
（1）抗菌药物的选择 在我国主要遵循临床实验室标准化委员会
（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物选择原则 A组：对特定菌群常规测试并报告的药物 B组：可常规测试、选择性报告的药物 C组：替代性或补充性药物 U组：仅用于泌尿道感染的抗菌药物
耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效
二、抗菌药物的种类及作用机制
三、药敏试验方法学
1.手工试验
• 纸片扩散法（K-B法） • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法 • E-test法
2.自动仪器药敏系统
纸片扩散法（K-B法）
原理：抑菌圈的大小反映受试菌对测定药 物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈 负相关。