血液及骨髓标本的细菌学检验

血液及骨髓标本的细菌学检验

一、标本采集

（一）操作方法

1．将患者拟采血部位放平，扎以止血带，选好静脉穿刺点，以皮点为中心用2．5 ％～3 ％碘酊从内向外周擦拭，待干后再以同法用75 ％乙醇脱碘。消毒范围不得过小。2．以无菌手续由静脉取血5 ml ，立即注入适当的液体增菌培养基内，迅速轻摇，使充分混合，以防止凝固。

（二）注意事项

1．血液标本应在病人发热1 ～2 天内或发热高峰采集培养为宜，此时阳性率较高。2．培养基与血液的比例为10∶1 。

3．培养一般细菌用普通肉汤或酚红葡萄糖肉汤，培养对营养要求较高的细菌用肝浸液或胰胨肉汤等。

4．采血和接种时应严格注意无菌操作，避免污染杂菌。

5．磺胺和抗生素可影响细菌检出的结果。故在采集标本时应力争在抗菌药物治疗之前。如果病人曾服用磺胺类药物，应在每100 ml 培养基内加对氨苯甲酸5 mg ，以防止磺胺类药物对细菌的抑制作用。如果病人已用青霉素治疗，应在培养基中加入青霉素酶100 U／50 ml （青霉素酶不耐热，应在临用时加入）。若病人已用其他抗生素治疗时，可用硫酸镁肉汤增菌。

6．标本的采取应以提高阳性检出率为目的。

二、检验程序

血液标本的细菌学检验程序见下图。

三、检验方法及报告方式

（一）一般细菌的检验

1．标本接种于肉汤培养基后，立即置35 ±1 ℃温箱内孵育，每天取出一次观察有无细菌生长，应特别注意观察肉汤内有无混浊、沉淀、菌膜、色素、血液变色、指示剂变色等现象，并记录之。如有细菌生长，肉汤可呈现各种不同的生长现象，若发生混浊，大多可疑为革兰阴性杆菌；若均匀混浊有绿色荧光，则可疑为绿脓杆菌；上面澄清，下面有沉淀，可疑为链球菌；若见自下而上的溶血现象，可疑为溶血性链球菌；若呈现肉冻样凝固现象，疑为葡萄球菌；若表面有灰白菌膜，疑为枯草杆菌或类白喉杆菌。

2．当疑有细菌生长时，应以无菌操作挑取培养物涂片进行革兰染色镜检。一旦见有细菌生长，并能排除污染，应及时转种于血平板或其他培养基进行药物敏感试验或

分离培养。根据菌落特征及菌体染色镜检形态，可得出初步印象，并需继续培养，按各种属细菌加以鉴定。报告：“有X X X 菌生长”。

3．如不见细菌生长，应继续培养至第7 天，取出后接种于血平板，经培养仍无细菌生长时，可报告为：“经7 天培养无细菌生长。”对于亚急性心内膜炎病人标本，应培养一个月，才能作出结论。

（二）布氏杆菌的检验

将可疑为布氏杆菌的血液标本接种于肝浸液2 支，分别置于10 ％二氧化碳环境中及普通环境中35 ±1 ℃培养，每天观察一次，每隔5 天移种一次血平板。培养1 周后，若肝浸液有此菌生长时，出现肉眼可见的轻度混浊，久之可出现菌膜并有粘稠性沉淀物。此时应作涂片染色镜检，并立即移种于2 份肝浸液平板或血平板，分别置于10 ％二氧化碳及普通环境下培养。如菌落及涂片染色镜检形态典型，再作布氏杆菌血清凝集试验，如为阳性，可报告为：“培养出布氏杆菌”。必要时，可将分离的菌株进一步鉴定及分型。若培养3 ～4 周后仍无细菌生长者，则可报告：“经X 周培养无细菌生长。”

（三）脑膜炎奈瑟菌培养

首先将胰胨肉汤或含2g／L 葡萄糖的肝浸液（或肉浸液）预温至35 ℃，然后再将病人的血液标本注入培养基瓶中，摇匀后培养于10 ％二氧化碳环境中，每天观察一次。如疑有细菌生长，再移种于经35 ℃预温的巧克力色血平板或血平板进行划线分离，然后于35 ±1 ℃、5 ％～10 ％二氧化碳环境中培养18 ～48 小时，如发现平板上有光滑、湿润、透明、粘性的菌落且中等大小，经革兰染色为阴性双球菌者，可做出初步报告：“有脑膜炎奈瑟菌生长。”同时挑取菌落接种于预温的巧克力色或血平板同上法行纯培养。经涂片染色镜检确定后，作糖发酵、氧化酶、

自凝现象，血清玻片凝集等试验，以与其他奈瑟菌区别。如各项检查均符合此菌者，必要时再用分群血清作玻片凝集进行分群作出最后鉴定。

（四）伤寒沙门菌及其它沙门菌培养

将病人的血液接种于葡萄糖胆汁肉汤或胆盐肉汤中，经增菌培养后，如疑有细菌生长，再移种到选择性平板（如SS 琼脂平板，中国蓝平板等）上作划线分离，置35 ±1 ℃培养16 ～24 小时后，挑取可疑菌落接种于双糖或三糖铁高层斜面培养基，观察其生化反应。根据生化反应，可初步区别细菌类属。再与多价诊断血清作凝集试验，即可作出初检报告。必要时，用纯培养物进一步作生化反应和选用适当的因子血清作凝集试验，加以鉴定，即可确诊。若无细菌生长，培养至第7 天即可报告：“培养7 天无细菌生长”。

（五）厌氧菌培养

将血液标本接种于肝浸汤培养基中，然后置厌氧环境中培养。如有细菌生长，移种两个血平板或K V A 血平板（或LK V 、苯乙醇血平板）上，分别作厌氧培养和普通培养，经35 ±1 ℃48 ～72 小时培养后，观察结果。如在普通环境中培养不生长，而在厌氧环境中生长，观察其生长情况，并作涂片进行革兰染色镜检。根据形态，得出初步印象，然后对分离出的厌氧菌进行最后鉴定。并作出报告：“厌氧培养有X X 菌生长。”如仅在普通环境中生长或者两者均生长，则按一般细菌进行鉴定。如无细菌生长，应继续培养7天，仍无细菌生长时，即可报告：“厌氧培养7 天无细菌生长”。

四、临床意义及常见病原菌

目前，血液培养仍然是菌血症和败血症的细菌学检验的基本方法，并且广泛地应用于伤寒、副伤寒及其他革兰阴性杆菌和各种化脓性细菌引起的败血症的诊断。

菌血症系病原菌只一时性或间断地由局部进入血流，但并不在血中繁殖者，无血液受染的明显临床征象。常可发生在病灶感染或牙齿感染，尤以拔牙、扁桃体切除及脊髓炎手术后等多见。

败血症是指病原菌侵入血流，并在其中大量生长繁殖，造成身体的严重损害，引起显著的全身症状（如不规则高热与全身中毒等症状）。例如化脓链球菌和葡萄球菌所致的手术后败血症，常可造成某处组织器官的败血性栓塞而形成局部感染性病变。败血症有时也可见于继发于组织器官感染，当机体抵抗力减弱时，虽然微小甚至隐蔽的病灶亦能引起败血症。从理论意义看任何病原菌都可引起败血症。在临床实践中，首先与地区性流行病、原发病灶和细菌的侵入途径有关。例如疖、脓肿、痈和胃肠道粘膜炎及尿路感染等。其次当机体免疫功能低下、广谱抗生素和激素的应用及烧伤等都可有不同的菌类的感染。一般说，最常见者有葡萄球菌、肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、链球菌、伤寒和副伤寒沙门菌等。大肠杆菌、粪产碱杆菌、肺炎克雷伯菌及粘球菌属等其它革兰阴性杆菌，以及炭疽杆菌和厌氧杆菌亦可见到。另外，绿脓杆菌和真菌性败血症日益增加，这与抗生素广泛应用有关，其原发病变多见于皮肤感染（包括烧伤）、尿路感染、消化系感染、血液病及麻疹肺炎等。

目前L 型菌感染败血症亦有报告，主要是由于使用抑制菌细胞壁合成的抗菌药物（青霉素G 、氨基苄青霉素、苯唑青霉素、先锋霉素、万古霉素和环丝霉素等）治疗过程中，失去细胞壁的菌体继续繁殖感染所致。

血培养中常见病原菌见下表。