植物脱毒和快速繁殖技术
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
第七章 植物脱毒和快速繁殖技术
组员：贺秀娟 叶研春 韩婷花 韩秀丽 白秉元 马延梅
第一节 植物脱毒的原理
一 热处理脱毒
1.高温短时处理法
这种方法是利用病毒与植物耐热能力的不同，将木 苗、接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一 段时间，将其体内的病原杀死或钝化，失去侵染能 力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。 该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于 类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的 热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的 脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料 内的黄龙病类细菌。
１２０天两个浓度的处理均全部脱除病毒，对照则仍１００ ％带毒。２５.０对苹果茎尖有一定的要害，而１２.５处理无 明显药害。据分析，抗病毒醚不是直接作用于病毒，而是作 用于寄主的代谢，从而阻止病毒的增殖，使新梢逐渐脱除病 毒。因此，认为在果树植株生长期间定期喷布抗病毒醚，有 可能在苗木顶端部分扩大无病毒区域，进而可增加茎尖培养 的脱毒效率。除抗病毒醚以外，还有报道证明一些其他药剂 也具有同样的作用。
茎尖培养之所以能脱除病毒，是因为感染病毒的植株的幼 嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点（约 0.1~1.5mm区域）则几乎不含病毒或含病毒很少。
植物茎尖等分生组织中不含或很少含有病毒的原因： （1）植物茎尖分生组织中胞间连丝发育不完全或
太细，使病毒在细胞之间的扩散作用受到抑制。 （2）病毒复制、运输速度与茎尖细胞生长速度不
三、其他脱毒方法
1.合并使用热处理、茎尖培养或微芽嫁接脱毒
这种脱毒方法是从经热处理后的新梢顶端切取一段嫩梢， 再嫁接到事先准备好的实生砧木上，如果用徒手嫁接，枝梢的 长度至少要达到1.0~1.5cm方可。若要使这样长的嫩梢无病毒， 对于苹果至少须热处理3~4周，而一些耐热性弱的品种，在热 处理期间，因高温伤害，大部分枯死，或嫁接后成活率很低。
应用热疗法消除病毒的一个主要限制在于，并非
所有的病毒都对热处理敏感，例如，在马铃薯应用 这项技术只能消除卷叶病毒。一般来说，对于病毒 等径的和线状的病毒，以及对于已知是由类菌原体 引起的病害，热处理是有效的。延长寄主植物的热 处理时间，也可能会钝化植物组织中的抗性因子， 因而和对照相比会降低处理效果。此外，在热处理 之后只有一小部分植株能够存活。
4、合并使用药剂
合并使用化学药剂和热处理有助于提高热处理脱 除病毒类病原的效果。
５、培育株心苗
大多数植物病毒不通过种子传播，由此可通过培育株心来 获得无病毒母株。例如大多数柑橘品种产生两种完全不同的 胚，即合子胚和株心胚。合子胚由受精卵细胞发育而来，常 称有性胚；株心胚由母本株心体细胞发育而来，常称无性胚 ，株心胚在胚囊中发育，并与合子胚共存。
3.其他外植体的组织培养方法脱毒
除茎尖培养外，还可从 花粉、花药、胚、胚珠及珠心等组织培养获 得无病毒的植株。这些器官或组织也是植株中含病毒较少的部位，但不 同病毒或不同寄主植物使他们带毒或不带毒的情况各不相同，采用这些 器官脱毒时，首先应弄清楚其带毒情况。
关于一些植物种胚中不携带病毒的原因有两种观点：一种观点认为 病毒不能进入胚中，植物子房中胚与其他母体细胞之间缺少维管束组织 和胞间连丝的关系；另一种是认为病毒能进入胚，但进入后为寄主所消 灭。有这样一种现象，种子在未成熟时带有病毒，到成熟时，病毒就消 失了，这就说明，即使没有胞间连丝，病毒还可以通过其他途径进入胚 中，但是有些植物的种子中存在着一种抑制病毒的物质。此外，还有人 认为是有些种胚中缺少病毒增值所需要的重要物质。而使病毒不能复制
与单独采用热疗法相比，茎尖培养具有更广泛
的适应性。很多不能由单独的热处理消除病毒，可 以通过茎尖培养和热处理相结合，或单独的茎尖培 养而将其消除。
二、通过茎尖培养消除病毒
1、茎尖培养术语
国内外用来描述茎尖培养这一技术的术语很多，在使用上也比较混乱， 其中有尖芽培养、副芽培养、苗端培养、苗尖培养、分生组织培养、顶端培 养等。但严格地讲，上述这些术语均不能确切地反映出用于组织培养的外植 体的性质，因为仅仅依靠分生组织的生长锥、完整的顶芽或副芽，通常是不 能培育出植株的。有人曾做过试验，从菊花上切取的1500个生长锥经培养 ，仅有3个长成完整的植株，而作者认为这3个生长锥在切取时可能带有一 枚叶原基而未被发现。多数试验表明，要想获得成功，外植体就必须包括分 生组织的生长锥及1至数枚叶原基，因此建议使用一个折衷的词即茎尖（或 顶端）分生组织培养。
2 低热长时处理法
低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能 使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生 的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进 行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及 不同植物种类的脱毒率差异很大。
二、组织培养脱毒
1.茎尖培养脱毒
2.冷处理结合茎尖培养
有些作物对高温非常敏感，可用冷处理代替热处 理并结合茎尖培养来脱毒。如三叶草的脱毒，将准 备切去茎尖的母株在取茎尖之前，放在10℃中经过 2~4个月，以代替热处理，可以部分去除病毒。这种 方法也有人用于从马铃薯上消除梭状块茎类病毒。
3、化学处理结合茎尖培养
目前尚无一种抗病毒药剂能从整 株 植 株 消毒 病 毒 ，但某些 病毒抑制 剂或钝化剂加到组织培养的培养基中却能消除培养 组织中的病毒。Ribavirin（抗病毒醚）是一种对DNA病毒或 RNA病毒具有广谱作用的人工合成物质。Hansen等将其喷布 在昆诺阿藜上，然后接种CLSV、SGV等８种病毒，结果对 CLSV的增值有很强的抑制效果，但对SGV、桃坏死环斑病毒 、葡萄扇叶病毒、李矮化病毒无效。在一年生苹果生长期间， 每隔7天喷布1次5*10-4抗病毒醚溶液，第二年春仍从苹果苗中 检出了CLSV。若在培养基中加入抗病毒醚进行苹果茎尖培养 ，可脱除ＣＬＳＶ。山家弘土用含抗病毒醚１２．５、25.0的 培养基培养用热处理、茎尖培养未能脱除SGV的试管苗茎尖， 处理时间为４０、８０、１２０天。在各处理区增殖的新梢中 任选一株，切取顶端部分长１.５，每隔４０天更换１次新的 培养基进行继代培养，最后继代到无药剂的培养基上培养，２ ４０天后检测病毒。４０天处理的部分脱除了SGV，而８０、
2、方法
进行脱毒时，大小合乎脱毒需要的理想的外植体实际上是 太小了，很难靠肉眼进行制备，因而需要一台带有适当光源 的解剖镜（8~40*）。解剖时必须注意防止由于超净台的气
流和解剖镜上碘钨灯散发的热而使茎尖变干，因此茎尖暴露 的时间应当越短越好。使用冷光源灯（荧光灯）或玻璃纤维 灯则更为理想，若在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行解 剖，也有助于防止这类小外植体变干。
与其他类型的组织培养一样，在进行茎尖培养时，首先
的一步是获得表面不带病原菌的外植体。一般来说，茎尖分 生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖 ，无须表面消毒就应当得到无菌的外植体。如有可能，应把 供试植株种在无菌的盆土中，并放在温室中进行栽培。在浇 水时，水要直接浇在土壤上，而不要浇在叶片上。此外，还 要给植株定期喷施内吸性杀菌剂。Wang和Hu（1980）所 用的杀菌剂混合液ห้องสมุดไป่ตู้有杀真菌药剂苯菌灵（0.1%）和抗生 素链霉素（0.1%）。使用这种杀菌剂混合液，对于田间种
用茎尖培养脱毒，需要用很小的茎尖才能脱除病毒，通常采 用的茎尖大小为0.1~0.2mm，因茎尖太小往往成活率很低。对 于茎尖嫁接也有类似情况，茎尖太小往往不能成活。因此，茎 尖培养、茎尖嫁接不仅很难操作，而且一些病毒不能脱去，如 单纯的茎尖嫁接不能脱除柑橘碎叶病毒。
合并使用热处理、茎尖培养或茎尖嫁接能克服两种方法各自 的缺点。不仅可完全脱除病毒，同时茎尖成活率也得到提高， 由此可大幅度延长热处理时间，增大用于培养的茎尖长度。目 前国内外葡萄、苹果的脱毒多采用热处理茎尖培养方法；柑橘 则都采用热处理与茎尖嫁接相结合的办法。两种组合均提高了 获得无病毒苗木的可能性
热处理时，最初几天空气温度应逐步增高，直至达到要求的温度为止 。若钝化病毒所需的连续高温处理会伤害寄主组织，则应当试验高低温 交替的效果。在热处理期间应当保持适当的湿度和光照。根据Baker和 Kinnaman（1973）的试验，在对香石竹进行脱毒热处理时，相对湿度 必须保持在85%~95%之间，准备接受热处理的植株必须具有丰富的碳水 化合物储备。为达到这个目的，事先应对植物进行回缩。Holings(1965) 报道，回缩能够增加植物忍受热处理的能力。
在应用组织培养方法以获得无病原菌植株时，所用的外植体可以是茎 尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指最幼龄叶原基 上方的一部分，最大直径约为100，最长长度为250.茎尖则是由顶端分生组 织及下方的1~3个幼叶原基一起构成的。虽然通过顶端分生培养基消除病毒 的机会较高，但在大多数研究中，无病毒植物都是通过培养100~1000长的 外植体得到的，即通过茎尖培养得到。
第二节 植物脱毒操作技术
一、通过热处理消除病毒的操作技术
再茎尖培养法建立以前，热疗法一直是从各种植物的受侵染的个体得 到无病毒植株的有效方法。热处理可通过热水或热空气进行。热水处理 对休眠芽效果较好，热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除 病毒，又能使寄主植物有较高的存活机会。热空气处理比较容易进行： 把旺盛生长的植物移入到一个热疗室中，在35~40下处理一定时间即可 ，处理时间的长短，可由几分钟到数周不等。然而，马铃薯病毒X（PVX ）则要求在35下处理几个月才能得到一些无病毒茎尖，热处理之后要立 即把茎尖切下来嫁接到无病毒的砧木上去。
由于株心胚是由母本体细胞发育而来，未经减数分裂，因 此除个别体细胞突变外，株心胚长出的实生苗遗传上与母株 完全相同。因此由株心胚获得的株心苗大多数病毒被脱除而 遗传特征与母株完全相同。选择这种类型的 株心苗，可应 用标记花粉控制授粉，然后选出典型的实生苗。例如，枳的 花粉可用作标记花粉，因为所有枳的杂种实生苗都具有三叶 特征，很容易辨认和排除。培育株心系以获得无病毒苗有以 下优点：（１）可以肯定植株不带毒；（２）花时间少：（ ３）成本低：（４）方法便于掌握：（５）株心苗长势强。 但株心系童期长，且易出现一些返祖性状。
同，病毒向上运输速度慢，而而分生组织细胞繁殖 快，结果使茎尖区域部分的细胞没有病毒。
（3）植物生长点细胞中缺少病毒增值的感受点， 因而复制过程不能进行。
（4）茎尖等分生组织中存在抑制、钝化病毒的物 质
（5）茎尖或其他组织在培养过程中病毒被钝化或 抑制
2.茎尖微芽嫁接脱毒
茎尖微芽嫁接脱毒是组织培养与嫁接相结合，用以获得 无病毒苗木的一种新技术。他将0.1~0.3mm的茎尖作为接 穗，嫁接到由试管中培养出来的无毒实生砧木上，继而进 行试管培养，愈合成为完整植株的脱毒方法。它可消除用 热处理不能除去的一些病毒，如衰退病毒、木质陷孔病毒、 黄脉病毒等。茎尖微芽嫁接脱毒可以解决一些果树茎尖培 养成苗难，特别是生根困难的问题。有些果树种类或品种， 如格瑞弗斯苹果通过茎尖组织培养，可以获得无病毒新梢， 但不能生根，只有通过茎尖微芽嫁接脱毒才能获得完整植 株。
Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离 出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花 实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去 病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖 培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、 类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除 的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖 生长获得植株，很少有变异，能很好地保持品种的特性。
对于一些果树植物要获得与亲本一致的无性 系无病材料，可以从胚囊败育的子房中在胚囊 败育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。
花药或花粉培养也可以作为一种脱毒方法， 这种方法可结合单倍体育种进行，用花药培养 进行草莓脱毒，脱毒率可达100%。花药培养 获得的无毒材料多为高产优质的类型。
植物的感染病组织中不是所有细胞都含有 病毒。因此，也有人从感病植株分离原生质体、 愈伤细胞或其他细胞，继而培养获得植株，然 后通过鉴定病毒从中选择无病的材料
组员：贺秀娟 叶研春 韩婷花 韩秀丽 白秉元 马延梅
第一节 植物脱毒的原理
一 热处理脱毒
1.高温短时处理法
这种方法是利用病毒与植物耐热能力的不同，将木 苗、接穗或种子等繁殖材料在一定的高温下处理一 段时间，将其体内的病原杀死或钝化，失去侵染能 力，而保持其本身的生活力，从而达到脱毒的目的。 该法尤其适用于类菌原体、类细菌的脱毒，而对于 类病毒的脱毒效果较差，因为类病毒通常有较强的 热稳定性。这种处理方法与1921年首先用于甘蔗的 脱毒，国内用这种方法处理柑橘，可脱除柑橘材料 内的黄龙病类细菌。
１２０天两个浓度的处理均全部脱除病毒，对照则仍１００ ％带毒。２５.０对苹果茎尖有一定的要害，而１２.５处理无 明显药害。据分析，抗病毒醚不是直接作用于病毒，而是作 用于寄主的代谢，从而阻止病毒的增殖，使新梢逐渐脱除病 毒。因此，认为在果树植株生长期间定期喷布抗病毒醚，有 可能在苗木顶端部分扩大无病毒区域，进而可增加茎尖培养 的脱毒效率。除抗病毒醚以外，还有报道证明一些其他药剂 也具有同样的作用。
茎尖培养之所以能脱除病毒，是因为感染病毒的植株的幼 嫩及未成熟的组织和器官中病毒含量较低，生长点（约 0.1~1.5mm区域）则几乎不含病毒或含病毒很少。
植物茎尖等分生组织中不含或很少含有病毒的原因： （1）植物茎尖分生组织中胞间连丝发育不完全或
太细，使病毒在细胞之间的扩散作用受到抑制。 （2）病毒复制、运输速度与茎尖细胞生长速度不
三、其他脱毒方法
1.合并使用热处理、茎尖培养或微芽嫁接脱毒
这种脱毒方法是从经热处理后的新梢顶端切取一段嫩梢， 再嫁接到事先准备好的实生砧木上，如果用徒手嫁接，枝梢的 长度至少要达到1.0~1.5cm方可。若要使这样长的嫩梢无病毒， 对于苹果至少须热处理3~4周，而一些耐热性弱的品种，在热 处理期间，因高温伤害，大部分枯死，或嫁接后成活率很低。
应用热疗法消除病毒的一个主要限制在于，并非
所有的病毒都对热处理敏感，例如，在马铃薯应用 这项技术只能消除卷叶病毒。一般来说，对于病毒 等径的和线状的病毒，以及对于已知是由类菌原体 引起的病害，热处理是有效的。延长寄主植物的热 处理时间，也可能会钝化植物组织中的抗性因子， 因而和对照相比会降低处理效果。此外，在热处理 之后只有一小部分植株能够存活。
4、合并使用药剂
合并使用化学药剂和热处理有助于提高热处理脱 除病毒类病原的效果。
５、培育株心苗
大多数植物病毒不通过种子传播，由此可通过培育株心来 获得无病毒母株。例如大多数柑橘品种产生两种完全不同的 胚，即合子胚和株心胚。合子胚由受精卵细胞发育而来，常 称有性胚；株心胚由母本株心体细胞发育而来，常称无性胚 ，株心胚在胚囊中发育，并与合子胚共存。
3.其他外植体的组织培养方法脱毒
除茎尖培养外，还可从 花粉、花药、胚、胚珠及珠心等组织培养获 得无病毒的植株。这些器官或组织也是植株中含病毒较少的部位，但不 同病毒或不同寄主植物使他们带毒或不带毒的情况各不相同，采用这些 器官脱毒时，首先应弄清楚其带毒情况。
关于一些植物种胚中不携带病毒的原因有两种观点：一种观点认为 病毒不能进入胚中，植物子房中胚与其他母体细胞之间缺少维管束组织 和胞间连丝的关系；另一种是认为病毒能进入胚，但进入后为寄主所消 灭。有这样一种现象，种子在未成熟时带有病毒，到成熟时，病毒就消 失了，这就说明，即使没有胞间连丝，病毒还可以通过其他途径进入胚 中，但是有些植物的种子中存在着一种抑制病毒的物质。此外，还有人 认为是有些种胚中缺少病毒增值所需要的重要物质。而使病毒不能复制
与单独采用热疗法相比，茎尖培养具有更广泛
的适应性。很多不能由单独的热处理消除病毒，可 以通过茎尖培养和热处理相结合，或单独的茎尖培 养而将其消除。
二、通过茎尖培养消除病毒
1、茎尖培养术语
国内外用来描述茎尖培养这一技术的术语很多，在使用上也比较混乱， 其中有尖芽培养、副芽培养、苗端培养、苗尖培养、分生组织培养、顶端培 养等。但严格地讲，上述这些术语均不能确切地反映出用于组织培养的外植 体的性质，因为仅仅依靠分生组织的生长锥、完整的顶芽或副芽，通常是不 能培育出植株的。有人曾做过试验，从菊花上切取的1500个生长锥经培养 ，仅有3个长成完整的植株，而作者认为这3个生长锥在切取时可能带有一 枚叶原基而未被发现。多数试验表明，要想获得成功，外植体就必须包括分 生组织的生长锥及1至数枚叶原基，因此建议使用一个折衷的词即茎尖（或 顶端）分生组织培养。
2 低热长时处理法
低热长时处理一般不能使整株植株脱毒，而只能 使个别器官脱毒，大多是使在热处理过程中长出的 茎尖无病毒。因此，处理的最后步骤是要取新产生 的茎尖嫁接到无毒实生碊木上或将新产生的茎尖进 行扦插繁殖，以获得脱病毒植株。但对不同病毒及 不同植物种类的脱毒率差异很大。
二、组织培养脱毒
1.茎尖培养脱毒
2.冷处理结合茎尖培养
有些作物对高温非常敏感，可用冷处理代替热处 理并结合茎尖培养来脱毒。如三叶草的脱毒，将准 备切去茎尖的母株在取茎尖之前，放在10℃中经过 2~4个月，以代替热处理，可以部分去除病毒。这种 方法也有人用于从马铃薯上消除梭状块茎类病毒。
3、化学处理结合茎尖培养
目前尚无一种抗病毒药剂能从整 株 植 株 消毒 病 毒 ，但某些 病毒抑制 剂或钝化剂加到组织培养的培养基中却能消除培养 组织中的病毒。Ribavirin（抗病毒醚）是一种对DNA病毒或 RNA病毒具有广谱作用的人工合成物质。Hansen等将其喷布 在昆诺阿藜上，然后接种CLSV、SGV等８种病毒，结果对 CLSV的增值有很强的抑制效果，但对SGV、桃坏死环斑病毒 、葡萄扇叶病毒、李矮化病毒无效。在一年生苹果生长期间， 每隔7天喷布1次5*10-4抗病毒醚溶液，第二年春仍从苹果苗中 检出了CLSV。若在培养基中加入抗病毒醚进行苹果茎尖培养 ，可脱除ＣＬＳＶ。山家弘土用含抗病毒醚１２．５、25.0的 培养基培养用热处理、茎尖培养未能脱除SGV的试管苗茎尖， 处理时间为４０、８０、１２０天。在各处理区增殖的新梢中 任选一株，切取顶端部分长１.５，每隔４０天更换１次新的 培养基进行继代培养，最后继代到无药剂的培养基上培养，２ ４０天后检测病毒。４０天处理的部分脱除了SGV，而８０、
2、方法
进行脱毒时，大小合乎脱毒需要的理想的外植体实际上是 太小了，很难靠肉眼进行制备，因而需要一台带有适当光源 的解剖镜（8~40*）。解剖时必须注意防止由于超净台的气
流和解剖镜上碘钨灯散发的热而使茎尖变干，因此茎尖暴露 的时间应当越短越好。使用冷光源灯（荧光灯）或玻璃纤维 灯则更为理想，若在一个衬有无菌湿滤纸的培养皿内进行解 剖，也有助于防止这类小外植体变干。
与其他类型的组织培养一样，在进行茎尖培养时，首先
的一步是获得表面不带病原菌的外植体。一般来说，茎尖分 生组织由于有彼此重叠的叶原基的严密保护，只要仔细解剖 ，无须表面消毒就应当得到无菌的外植体。如有可能，应把 供试植株种在无菌的盆土中，并放在温室中进行栽培。在浇 水时，水要直接浇在土壤上，而不要浇在叶片上。此外，还 要给植株定期喷施内吸性杀菌剂。Wang和Hu（1980）所 用的杀菌剂混合液ห้องสมุดไป่ตู้有杀真菌药剂苯菌灵（0.1%）和抗生 素链霉素（0.1%）。使用这种杀菌剂混合液，对于田间种
用茎尖培养脱毒，需要用很小的茎尖才能脱除病毒，通常采 用的茎尖大小为0.1~0.2mm，因茎尖太小往往成活率很低。对 于茎尖嫁接也有类似情况，茎尖太小往往不能成活。因此，茎 尖培养、茎尖嫁接不仅很难操作，而且一些病毒不能脱去，如 单纯的茎尖嫁接不能脱除柑橘碎叶病毒。
合并使用热处理、茎尖培养或茎尖嫁接能克服两种方法各自 的缺点。不仅可完全脱除病毒，同时茎尖成活率也得到提高， 由此可大幅度延长热处理时间，增大用于培养的茎尖长度。目 前国内外葡萄、苹果的脱毒多采用热处理茎尖培养方法；柑橘 则都采用热处理与茎尖嫁接相结合的办法。两种组合均提高了 获得无病毒苗木的可能性
热处理时，最初几天空气温度应逐步增高，直至达到要求的温度为止 。若钝化病毒所需的连续高温处理会伤害寄主组织，则应当试验高低温 交替的效果。在热处理期间应当保持适当的湿度和光照。根据Baker和 Kinnaman（1973）的试验，在对香石竹进行脱毒热处理时，相对湿度 必须保持在85%~95%之间，准备接受热处理的植株必须具有丰富的碳水 化合物储备。为达到这个目的，事先应对植物进行回缩。Holings(1965) 报道，回缩能够增加植物忍受热处理的能力。
在应用组织培养方法以获得无病原菌植株时，所用的外植体可以是茎 尖，也可以是茎的顶端分生组织。在这里，顶端分生组织是指最幼龄叶原基 上方的一部分，最大直径约为100，最长长度为250.茎尖则是由顶端分生组 织及下方的1~3个幼叶原基一起构成的。虽然通过顶端分生培养基消除病毒 的机会较高，但在大多数研究中，无病毒植物都是通过培养100~1000长的 外植体得到的，即通过茎尖培养得到。
第二节 植物脱毒操作技术
一、通过热处理消除病毒的操作技术
再茎尖培养法建立以前，热疗法一直是从各种植物的受侵染的个体得 到无病毒植株的有效方法。热处理可通过热水或热空气进行。热水处理 对休眠芽效果较好，热空气处理对活跃生长的茎尖效果较好，既能消除 病毒，又能使寄主植物有较高的存活机会。热空气处理比较容易进行： 把旺盛生长的植物移入到一个热疗室中，在35~40下处理一定时间即可 ，处理时间的长短，可由几分钟到数周不等。然而，马铃薯病毒X（PVX ）则要求在35下处理几个月才能得到一些无病毒茎尖，热处理之后要立 即把茎尖切下来嫁接到无病毒的砧木上去。
由于株心胚是由母本体细胞发育而来，未经减数分裂，因 此除个别体细胞突变外，株心胚长出的实生苗遗传上与母株 完全相同。因此由株心胚获得的株心苗大多数病毒被脱除而 遗传特征与母株完全相同。选择这种类型的 株心苗，可应 用标记花粉控制授粉，然后选出典型的实生苗。例如，枳的 花粉可用作标记花粉，因为所有枳的杂种实生苗都具有三叶 特征，很容易辨认和排除。培育株心系以获得无病毒苗有以 下优点：（１）可以肯定植株不带毒；（２）花时间少：（ ３）成本低：（４）方法便于掌握：（５）株心苗长势强。 但株心系童期长，且易出现一些返祖性状。
同，病毒向上运输速度慢，而而分生组织细胞繁殖 快，结果使茎尖区域部分的细胞没有病毒。
（3）植物生长点细胞中缺少病毒增值的感受点， 因而复制过程不能进行。
（4）茎尖等分生组织中存在抑制、钝化病毒的物 质
（5）茎尖或其他组织在培养过程中病毒被钝化或 抑制
2.茎尖微芽嫁接脱毒
茎尖微芽嫁接脱毒是组织培养与嫁接相结合，用以获得 无病毒苗木的一种新技术。他将0.1~0.3mm的茎尖作为接 穗，嫁接到由试管中培养出来的无毒实生砧木上，继而进 行试管培养，愈合成为完整植株的脱毒方法。它可消除用 热处理不能除去的一些病毒，如衰退病毒、木质陷孔病毒、 黄脉病毒等。茎尖微芽嫁接脱毒可以解决一些果树茎尖培 养成苗难，特别是生根困难的问题。有些果树种类或品种， 如格瑞弗斯苹果通过茎尖组织培养，可以获得无病毒新梢， 但不能生根，只有通过茎尖微芽嫁接脱毒才能获得完整植 株。
Morel等（1952）首先从感染有花叶病毒的大丽花上分离 出茎尖分生组织（0.25mm）培养得到植株，嫁接在大丽花 实生砧木上检验未无病毒植株。从此，茎尖培养就成为脱去 病毒的一个有效途径，并相继在马铃薯、菊花、兰花等茎尖 培养脱毒的研究中获得成功。茎尖培养脱毒可脱除多种病毒、 类病毒、类菌原体和类立克次体，很多不能通过热处理脱除 的病毒可以通过茎尖培养而脱掉。茎尖培养脱毒直接从茎尖 生长获得植株，很少有变异，能很好地保持品种的特性。
对于一些果树植物要获得与亲本一致的无性 系无病材料，可以从胚囊败育的子房中在胚囊 败育之前获取胚珠或珠心组织进行培养。
花药或花粉培养也可以作为一种脱毒方法， 这种方法可结合单倍体育种进行，用花药培养 进行草莓脱毒，脱毒率可达100%。花药培养 获得的无毒材料多为高产优质的类型。
植物的感染病组织中不是所有细胞都含有 病毒。因此，也有人从感病植株分离原生质体、 愈伤细胞或其他细胞，继而培养获得植株，然 后通过鉴定病毒从中选择无病的材料