从新鲜牛奶中提取_乳球蛋白
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从 脱 脂 乳 酪 蛋 白 等 电 点 沉 淀 物 SD S2 PA GE (图 1- 7) 可以看出蛋白条带 6 条, 其 中主要有两条, 分子量大约为 2. 5～ 3 万, 与 文献中报道的酪蛋白分子量相符[5], 表明该
5、8- 峰 3 6- 1 标准品
第 2 个洗脱峰 (图 3- 4、7) 主要只有 1 条 带, 与 1 标 准 品 的 位 置 一 致, 分 子 量 在 18000左右, 第 3 个洗脱峰 (图 3- 5、8) 主要 也只有 1 条带分子量在 14000 左右, 与文献 报道 Α2乳清蛋白的分子量一致。结果再一次 提示该介质对分离小分子蛋白质效果较好。
(S hang ha i Institu te of P ha rm aceu tica l Ind ustry , S hang ha i 200040)
ABSTRACT H um an p la sm inogen w a s p u rified from Cohn fract ion by affin ity ch rom a tog rap hy on L 2lysine2sub st itu ted Sep ha ro se 4B w ith 98% recovery and a sp ecific act ivity of 20 u m gp ro co rresponded to 3502fo ld p u rifica t ion. A p ho sp ha te buffer con ta in ing ep silon2am inocap ro ic acid w a s u sed a s the eluan t. SD S po lyacrylam ide gel elect rop ho resis show ed the m o lecu la r w eigh t of p la sm inogen w a s abou t 85000. A fter p la sm inogen w a s act iva ted w ith excessive st rep tok ina se, it s band d isapp ea red in the SD S2PA GE.
经 Sep hacryl S2200 柱色谱分离, 能得到 较纯的 1。
沉淀步骤起到除去酪蛋白的作用。 3. 3 乳清冻干粉 Sep hacryl S2200 柱色谱分 离结果
经 Sep hacFra Baidu bibliotekyl S2200 柱色谱分离, 可以完
参考文献
1 Ch iancone E, Gatton i M. B io techno l A pp l B iochem , 1993; 18 (11) ∶1
2. 2 凝胶过滤提纯 1
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
·52·
中国医药工业杂志 Ch inese Jou rnal of Pharm aceu ticals 1999, 30 (2)
[ 1998 年 2 月 13 日收稿 ]
氢化可的松分离工艺的改进
汤志刚 胡熙恩 朱永
(清华大学核能技术设计研究院, 北京 102201)
摘要 采用溶剂萃取法, 可克服工业上现有氢化可的松及其光学异构体表氢化可的松结晶分离工 艺的缺点。乙酸丁酯对其具有较好的萃取分离性能, 17℃时分离系数为 3. 6。氢化可的松粗品以乙 酸丁酯为萃取剂, 经分馏萃取分离可获得纯度为 98% 以上的精制品。 关键词 氢化可的松 萃取 分离 光学异构体 乙酸丁酯
A band of the p u rified p roduct on SD S2PA GE co rresponded w ith the loca t ion of standa rd Β2
lactog lobu lin. Key W ords Β2lactog lobu lin , p u rify, gel filt ra t ion
·53·
2 黄来发. 蛋白饮料加工工艺与配方, 北京: 中国轻工业出 版社, 1996∶17218
3 《乳品工业手册》编写组. 乳品工业手册. 北京: 轻工业出 版社, 1987∶2852287
4 B randfo rd MM. A nal B iochem , 1976; 72∶248 5 菲尼马 O R. 食品化学. 王 璋等译. 第 2 版, 北京: 中国
参考文献[ 4 ]方法, 根据分离图谱的 3 个 蛋白峰, 分别合并, 进行 SD S2聚丙烯酰胺凝 胶电泳, 然后用考马斯亮蓝法染色。 3 结果与讨论 3. 1 乳清冻干粉的主要蛋白成分
从乳清冻干粉 SD S2PA GE (图 1- 5、6) 可以看出共有蛋白条带 8 条: 其中主要有 5 条蛋白带 (2、4、6、7、8) , 第 2、4 条带的分子量 大约为 7 万和 5 万, 第 6 条为 2. 5 万, 第 7、8 条在 1. 6 万左右。 第 7 条带与 1 标准品带位 置一致。
图 3 具 280 nm 吸收的 3 个洗脱峰的
SD S-聚丙烯酰胺凝胶电泳
1- M ark 2- 乳清冻干粉 3- 峰 1 4、7- 峰 2
图 1 乳清冻干粉 SD S-聚丙烯酰胺凝胶电泳 1、2- M ark 3、4- 1 标准品 5、6- 乳清冻干粉
7- 酪蛋白等电点沉淀物
3. 2 脱脂乳酪蛋白等电点沉淀物的主要蛋 白成分
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
中国医药工业杂志 Ch inese Jou rnal of Pharm aceu ticals 1999, 30 (2)
上述工艺, 共萃取过程中使用萃取罐, 间歇操 1. 2 实验及分析方法
作, 萃取效率低; 结晶分离过程周期长, 能耗
过量 1 加去离子水, 微热, 电磁搅拌 0. 5
大, 操作繁复, 收率低。 本文提出一种低能耗 ～ 1 h 使尽量溶解。 冷却后过滤可得到室温
和操作简便的溶剂萃取分离法, 可克服上述 下 1 的饱和水溶液。 将有机溶剂与 1 的饱和
Key W ords hum an p la sm inogen, p u rifica t ion, affin ity ch rom a tog rap hy
[ 1997 年 12 月 19 日收稿 ]
从新鲜牛奶中提取 Β-乳球蛋白
张 睿 袁敏伟 史炳照
(上海医药工业研究院, 上海 200040)
色 谱分离柱 (上海锦华实验器械厂) , 高速离心机
(Beckm an 公 司) , 蛋 白 核 酸 检 测 仪 ( 华 阳 生 物 仪 器 厂) , V 162夹心式垂直电泳槽 (上海精益有机玻璃制品仪器厂)。
Sep hacryl S2200 (Pharm acia 公司) ,M ark 和 1 标准品 (Sigm a 公司) , 其他试剂均为分析纯。
ABSTRACT Β2L actog lobu lin w a s p u rified from lyop h ilized w hey w ith Sep hacryl S2200
gel filt ra t ion after ca sein rem oved from sk imm ed m ilk by ad ju st ing pH to it s isoelect ric po in t.
摘要 用调 pH 至等电点的方法将脱脂牛乳中的酪蛋白除去, 乳清用 Sep hacryl S2200 凝胶过滤, 得到较纯的 Β2乳球蛋白。 SD S2聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条带, 并与 Β2乳球蛋白标准品的位置一 致。 关键词 Β2乳球蛋白 提纯 凝胶过滤
牛奶在婴儿食谱中是最普遍、最富营养 的饮品, 但据报道近 0. 5%～ 7. 5% 的婴儿会 发生对牛乳的过敏反应, 如湿疹、腹泻等。 不 但直接饮用牛奶的婴儿有可能产生此类过敏 反应, 即使是母乳喂养的婴儿, 如果母亲饮用 牛奶, 也有一定的发生比率。这种存在于牛乳 中的主要过敏原是 Β2乳球蛋白 (1)。为诊断对 1 过敏的病例, 必须先将 1 提纯。已有从乳清 中分离 1 的方法[1], 但本文仅用一步凝胶过 滤进行分离纯化, 有其独特的优点。 1 材料与试剂
中国医药工业杂志 Ch inese Jou rnal of Pharm aceu ticals 1999, 30 (2)
·51·
PU R IF ICA T ION O F HUM AN PLA SM INO GEN B Y A F F IN IT Y CHROM A TO GRA PH Y
J IN Can2H uang, FAN Zheng, ZHAO Fang, DU P ing2Zhong, SH I B ing2Zhao
Sep hacryl S2200 400 g, 溶涨后装柱 (2. 6 ×100 cm )。 蒸馏水过洗, 再用缓冲液 (0. 02 m o l L PB S+ 0. 08 m o l L N aC l) 平衡。 乳清 冻干粉 0. 5 g 溶于上述缓冲液 1 m l, 上样, 缓 冲液洗脱。用蛋白核酸仪在 280 nm 检测, 按 所得图谱分步收集洗脱液。 2. 3 SD S2聚丙烯酰胺凝胶电泳
1. 1 材料与仪器
药用 1 (含量> 98% )、药用 2 (含量> 97% ) 及 1 粗品均 由国内某厂家提供。 1 粗品中 1 与 2 含量之比为 3. 5～ 4∶ 1, 此外尚含有少量其它甾体杂质[2 ]。
本工作中所用液相色谱为 Gilson2715H PL C 系统, 色 谱柱为 Zo rbax C8 反相色谱柱 (4 mm ×15 cm ) , 流动相为 70% 甲醇水溶液, 流速为 1. 0 m l m in, 检测波长为 241 nm。
全分开成具有 280 nm 吸收的 3 个峰 (图 2) , 这 3 个峰分离的效果满意。
图 2 Sephacryl S-200 280 nm 处洗脱图谱
以这 3 个洗脱峰分别进行 SD S2PA GE (图 3) , 第 1 个洗脱峰 (图 3- 3) 有 5 条主带, 分子量分布在 7、6、5、4 和 2. 5 万, 相当于乳 清冻干粉电泳 (图 3- 2) 的第 1、3、4、5、6 条 带。 它们分子量相差比较大, 但在 Sep hacryl S2200 色谱分离柱上不能分开, 是否可以认 为该色谱分离介质对分离 2. 5 万以上分子量 的蛋白质的效果较差。
2 方法与步骤 2. 1 乳清的获得[2, 3 ]
采购当天新鲜的全脂牛奶, 经适当加热 (30～ 45℃) , 高速离心除去上层奶油。脱脂乳 在温热条件下, 用 8 倍稀释浓盐酸调 pH 至 酪蛋白的等电点 (pH 4. 6) , 静置, 高速离心分 离酪蛋白沉淀, 得上清液, 即为乳清。 乳清经 硫酸铵沉淀、脱盐、冻干得乳清冻干粉。
氢化可的松 (1) 工业上多采用半生物合 1 实验部分
成法生产, 即由薯蓣皂素等天然原料先合成 化合物 S 的醋酸酯, 再利用梨头霉菌氧化; 氧 化产物经乙酸丁酯 5 次错流萃取得到 1 粗 品。由于氧化反应的选择性较差, 粗品中尚含 有其旋光异构体——表氢化可的松 (2) , 需再 用结晶分离提纯[1]。 国内生产厂家现多采用
轻工业出版社, 1991∶6722673
PU R IF ICA T ION O F Β2LA CTO GLOBU L IN FROM FR ESH M IL K
ZHAN G R u i, YU AN M in2W ei, SH I B ing2Zhao
(S hang ha i Institu te of P ha rm aceu tica l Ind ustry , S hang ha i 200040)
5、8- 峰 3 6- 1 标准品
第 2 个洗脱峰 (图 3- 4、7) 主要只有 1 条 带, 与 1 标 准 品 的 位 置 一 致, 分 子 量 在 18000左右, 第 3 个洗脱峰 (图 3- 5、8) 主要 也只有 1 条带分子量在 14000 左右, 与文献 报道 Α2乳清蛋白的分子量一致。结果再一次 提示该介质对分离小分子蛋白质效果较好。
(S hang ha i Institu te of P ha rm aceu tica l Ind ustry , S hang ha i 200040)
ABSTRACT H um an p la sm inogen w a s p u rified from Cohn fract ion by affin ity ch rom a tog rap hy on L 2lysine2sub st itu ted Sep ha ro se 4B w ith 98% recovery and a sp ecific act ivity of 20 u m gp ro co rresponded to 3502fo ld p u rifica t ion. A p ho sp ha te buffer con ta in ing ep silon2am inocap ro ic acid w a s u sed a s the eluan t. SD S po lyacrylam ide gel elect rop ho resis show ed the m o lecu la r w eigh t of p la sm inogen w a s abou t 85000. A fter p la sm inogen w a s act iva ted w ith excessive st rep tok ina se, it s band d isapp ea red in the SD S2PA GE.
经 Sep hacryl S2200 柱色谱分离, 能得到 较纯的 1。
沉淀步骤起到除去酪蛋白的作用。 3. 3 乳清冻干粉 Sep hacryl S2200 柱色谱分 离结果
经 Sep hacFra Baidu bibliotekyl S2200 柱色谱分离, 可以完
参考文献
1 Ch iancone E, Gatton i M. B io techno l A pp l B iochem , 1993; 18 (11) ∶1
2. 2 凝胶过滤提纯 1
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中国医药工业杂志 Ch inese Jou rnal of Pharm aceu ticals 1999, 30 (2)
[ 1998 年 2 月 13 日收稿 ]
氢化可的松分离工艺的改进
汤志刚 胡熙恩 朱永
(清华大学核能技术设计研究院, 北京 102201)
摘要 采用溶剂萃取法, 可克服工业上现有氢化可的松及其光学异构体表氢化可的松结晶分离工 艺的缺点。乙酸丁酯对其具有较好的萃取分离性能, 17℃时分离系数为 3. 6。氢化可的松粗品以乙 酸丁酯为萃取剂, 经分馏萃取分离可获得纯度为 98% 以上的精制品。 关键词 氢化可的松 萃取 分离 光学异构体 乙酸丁酯
A band of the p u rified p roduct on SD S2PA GE co rresponded w ith the loca t ion of standa rd Β2
lactog lobu lin. Key W ords Β2lactog lobu lin , p u rify, gel filt ra t ion
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2 黄来发. 蛋白饮料加工工艺与配方, 北京: 中国轻工业出 版社, 1996∶17218
3 《乳品工业手册》编写组. 乳品工业手册. 北京: 轻工业出 版社, 1987∶2852287
4 B randfo rd MM. A nal B iochem , 1976; 72∶248 5 菲尼马 O R. 食品化学. 王 璋等译. 第 2 版, 北京: 中国
参考文献[ 4 ]方法, 根据分离图谱的 3 个 蛋白峰, 分别合并, 进行 SD S2聚丙烯酰胺凝 胶电泳, 然后用考马斯亮蓝法染色。 3 结果与讨论 3. 1 乳清冻干粉的主要蛋白成分
从乳清冻干粉 SD S2PA GE (图 1- 5、6) 可以看出共有蛋白条带 8 条: 其中主要有 5 条蛋白带 (2、4、6、7、8) , 第 2、4 条带的分子量 大约为 7 万和 5 万, 第 6 条为 2. 5 万, 第 7、8 条在 1. 6 万左右。 第 7 条带与 1 标准品带位 置一致。
图 3 具 280 nm 吸收的 3 个洗脱峰的
SD S-聚丙烯酰胺凝胶电泳
1- M ark 2- 乳清冻干粉 3- 峰 1 4、7- 峰 2
图 1 乳清冻干粉 SD S-聚丙烯酰胺凝胶电泳 1、2- M ark 3、4- 1 标准品 5、6- 乳清冻干粉
7- 酪蛋白等电点沉淀物
3. 2 脱脂乳酪蛋白等电点沉淀物的主要蛋 白成分
© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
中国医药工业杂志 Ch inese Jou rnal of Pharm aceu ticals 1999, 30 (2)
上述工艺, 共萃取过程中使用萃取罐, 间歇操 1. 2 实验及分析方法
作, 萃取效率低; 结晶分离过程周期长, 能耗
过量 1 加去离子水, 微热, 电磁搅拌 0. 5
大, 操作繁复, 收率低。 本文提出一种低能耗 ～ 1 h 使尽量溶解。 冷却后过滤可得到室温
和操作简便的溶剂萃取分离法, 可克服上述 下 1 的饱和水溶液。 将有机溶剂与 1 的饱和
Key W ords hum an p la sm inogen, p u rifica t ion, affin ity ch rom a tog rap hy
[ 1997 年 12 月 19 日收稿 ]
从新鲜牛奶中提取 Β-乳球蛋白
张 睿 袁敏伟 史炳照
(上海医药工业研究院, 上海 200040)
色 谱分离柱 (上海锦华实验器械厂) , 高速离心机
(Beckm an 公 司) , 蛋 白 核 酸 检 测 仪 ( 华 阳 生 物 仪 器 厂) , V 162夹心式垂直电泳槽 (上海精益有机玻璃制品仪器厂)。
Sep hacryl S2200 (Pharm acia 公司) ,M ark 和 1 标准品 (Sigm a 公司) , 其他试剂均为分析纯。
ABSTRACT Β2L actog lobu lin w a s p u rified from lyop h ilized w hey w ith Sep hacryl S2200
gel filt ra t ion after ca sein rem oved from sk imm ed m ilk by ad ju st ing pH to it s isoelect ric po in t.
摘要 用调 pH 至等电点的方法将脱脂牛乳中的酪蛋白除去, 乳清用 Sep hacryl S2200 凝胶过滤, 得到较纯的 Β2乳球蛋白。 SD S2聚丙烯酰胺凝胶电泳显示一条带, 并与 Β2乳球蛋白标准品的位置一 致。 关键词 Β2乳球蛋白 提纯 凝胶过滤
牛奶在婴儿食谱中是最普遍、最富营养 的饮品, 但据报道近 0. 5%～ 7. 5% 的婴儿会 发生对牛乳的过敏反应, 如湿疹、腹泻等。 不 但直接饮用牛奶的婴儿有可能产生此类过敏 反应, 即使是母乳喂养的婴儿, 如果母亲饮用 牛奶, 也有一定的发生比率。这种存在于牛乳 中的主要过敏原是 Β2乳球蛋白 (1)。为诊断对 1 过敏的病例, 必须先将 1 提纯。已有从乳清 中分离 1 的方法[1], 但本文仅用一步凝胶过 滤进行分离纯化, 有其独特的优点。 1 材料与试剂
中国医药工业杂志 Ch inese Jou rnal of Pharm aceu ticals 1999, 30 (2)
·51·
PU R IF ICA T ION O F HUM AN PLA SM INO GEN B Y A F F IN IT Y CHROM A TO GRA PH Y
J IN Can2H uang, FAN Zheng, ZHAO Fang, DU P ing2Zhong, SH I B ing2Zhao
Sep hacryl S2200 400 g, 溶涨后装柱 (2. 6 ×100 cm )。 蒸馏水过洗, 再用缓冲液 (0. 02 m o l L PB S+ 0. 08 m o l L N aC l) 平衡。 乳清 冻干粉 0. 5 g 溶于上述缓冲液 1 m l, 上样, 缓 冲液洗脱。用蛋白核酸仪在 280 nm 检测, 按 所得图谱分步收集洗脱液。 2. 3 SD S2聚丙烯酰胺凝胶电泳
1. 1 材料与仪器
药用 1 (含量> 98% )、药用 2 (含量> 97% ) 及 1 粗品均 由国内某厂家提供。 1 粗品中 1 与 2 含量之比为 3. 5～ 4∶ 1, 此外尚含有少量其它甾体杂质[2 ]。
本工作中所用液相色谱为 Gilson2715H PL C 系统, 色 谱柱为 Zo rbax C8 反相色谱柱 (4 mm ×15 cm ) , 流动相为 70% 甲醇水溶液, 流速为 1. 0 m l m in, 检测波长为 241 nm。
全分开成具有 280 nm 吸收的 3 个峰 (图 2) , 这 3 个峰分离的效果满意。
图 2 Sephacryl S-200 280 nm 处洗脱图谱
以这 3 个洗脱峰分别进行 SD S2PA GE (图 3) , 第 1 个洗脱峰 (图 3- 3) 有 5 条主带, 分子量分布在 7、6、5、4 和 2. 5 万, 相当于乳 清冻干粉电泳 (图 3- 2) 的第 1、3、4、5、6 条 带。 它们分子量相差比较大, 但在 Sep hacryl S2200 色谱分离柱上不能分开, 是否可以认 为该色谱分离介质对分离 2. 5 万以上分子量 的蛋白质的效果较差。
2 方法与步骤 2. 1 乳清的获得[2, 3 ]
采购当天新鲜的全脂牛奶, 经适当加热 (30～ 45℃) , 高速离心除去上层奶油。脱脂乳 在温热条件下, 用 8 倍稀释浓盐酸调 pH 至 酪蛋白的等电点 (pH 4. 6) , 静置, 高速离心分 离酪蛋白沉淀, 得上清液, 即为乳清。 乳清经 硫酸铵沉淀、脱盐、冻干得乳清冻干粉。
氢化可的松 (1) 工业上多采用半生物合 1 实验部分
成法生产, 即由薯蓣皂素等天然原料先合成 化合物 S 的醋酸酯, 再利用梨头霉菌氧化; 氧 化产物经乙酸丁酯 5 次错流萃取得到 1 粗 品。由于氧化反应的选择性较差, 粗品中尚含 有其旋光异构体——表氢化可的松 (2) , 需再 用结晶分离提纯[1]。 国内生产厂家现多采用
轻工业出版社, 1991∶6722673
PU R IF ICA T ION O F Β2LA CTO GLOBU L IN FROM FR ESH M IL K
ZHAN G R u i, YU AN M in2W ei, SH I B ing2Zhao
(S hang ha i Institu te of P ha rm aceu tica l Ind ustry , S hang ha i 200040)