高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量
HPLC法测定注射用阿奇霉素的含量
HPLC法测定注射用阿奇霉素的含量李传响;汪玉萍【摘要】Objective To establish a method for determination of azithromycin for injection by HPLC.Methods Inertsil ODS-SP(4.6 mm ×250 mm,5 μm)C18 column was used with 0.1 mol·L-1 ammonium acetate solution(the ammonia solution adjusted to pH 8.6)-acetonitrile-methanol(50∶30∶20)as mobile phase.The flow rate was set at 1.0 mL·min-1.The wavelength used for detection was 218 nm.The column temperature was 60℃.Results The linear range was 100~2 000 mg·L-1 (r=0.999 8).The average recovery(n=9)was 98.8%(RSD=0.6%).Conclusions The method is rapid,simple and accurate.%目的：建立反相高效液相法测定注射用阿奇霉素含量的方法。
方法采用Inertsil ODS柱（4．6 mm ×250 mm，5μm），以0．1 mol·L－1乙酸铵（用氨水调节pH值至8．6）—乙腈—甲醇（50∶30∶20）为流动相，流速1．0 mL·min－1，检测波长218 nm，柱温60℃。
结果阿奇霉素的线性范围为100～2000 mg·L－1，r＝0．9998，平均回收率98．8％，RSD＝0．6％（n＝9）。
高效液相色谱法测定阿奇霉素口服溶液的有关物质
宁康健 何 胜利 冯 惠平 ， ，
（． １ 安徽科技学院， 安徽 摘 凤阳 ２３０ ； ． ３ １０ ２ 天津药业集团新郑股份有限公司， 河南 新郑 ４ １５ ） ５ ０ １
要： 采用高效液相 色谱法测定 阿奇霉素 口服液 （ ｚｈｏ ｙｉ Ｏａ Ｓｌ ｏ ） Ａ ｉｒ ｃ ｒ ｏ ｔｎ 的有关物质。方法： ｔ ｍ ｎ ｌ ｕ ｉ 采用
口服液 中的有关 物质 含量进 行测定 ， 旨在 对阿奇 霉素 口服液 的质量 、 稳定性 和工 艺的可行 性进一 步考察 。
１ 仪 器 与试 剂
美国 Ｓ ＩＣ０ ０型高效液相色谱仪 （ ｒ ａ ｌ Ｄ 色谱柱， ＳＰ ３０ Ｋｏ ｓ Ｓ ｍ ｉＯ 紫外检测器 ）分析之星色谱工作站 ； ； 普析 通用 Ｔ １０ Ｓ Ｃ紫外分光光度仪（ Ｕ一 ８０ Ｐ 北京普析通用仪器有限责任公 司） 乙腈 （ ； 色谱纯 ， 上海试一化学试
ｌ ｈｄ ｉ ｅ ．Ｍｅ ｏ ｓ ｎＫ ｏ ａｉＯ Ｓ（５ ｍ × ． ｍ ５ ｓ ｈ ｔ ｄ ：Ａ ｒｍ ｓ Ｄ ２ ０ ｍ ４ ６ ｍ， ｍ）ｃｌｍ ａ ｓｄｗ ｔ ｔｅｍ ｂ ｅｐ ａｅｏ ｏ ｓ ｌ ｏｕ ｎｗ ｓ ｅ ｉ ｏ ｉ ｈ ｓ ｆ ｔ － ｕ ｈｈ ｌ Ｐ ａ ｓ ｍ ｐ ｏｐ ａ ｏ ｏａｉ（ Ｈ ． ， 、 ７ ｌ・ ） 一 ａｅ ｎ ｒｅ（ １ ａ ｔｅｄ ｔ ｔ ｎｗ ｖｌｎｔ ｆ ２ ｉ ｈｓｈ ｔ ｍ ｎｂ ｓ ｐ ４ ０ ０ ０ ｍｏ Ｌ ｕ ｅ ｃ ｃｔ ｉｉ ２： ）ｔ ｈ ｅ ｃ ｏ ａｅ ｇ ｏ ２ ８ ｏ ｔｌ ｅｉ ｅ ｈ
HPLC-ELSD法测定注射用阿奇霉素含量及有关物质
阿奇霉素一种半合成的十五元环大环内酯类的抗生素， 呈白色粉末或者晶体，具有吸收效果好，生物利用高、副作 用低、抗菌范围广等效果。在食入时无异味，偏苦，有轻微 的引湿性。在临床上主要用于治疗呼吸道、支气管炎、皮肤 软组织感染以及尿道炎等等。根据相关资料显示：注射阿奇 霉素可以有效抑制细菌的转肽，抑制蛋白质的合成，抗菌效 果好。不同的药物搭配阿奇霉素有不同的治疗效果，若使 用药物超标导致出现不良反应应及时根据患者的病情采取有 效的治疗措施。根据有关注射用阿奇霉素用量分析等相关知 识，按照《国家药品标准》测定其含量等，影响因素较多、
⑵专属性实验 在准确的精密度下选取适量的阿奇霉素对照品，将样品
分为4份。取1份样品加入，5ml稀释液溶解，加入lmol/L的 盐酸，在室内放60min后加入lmol/L的氢氧化钠混合稀释、摇 匀后稀释到25ml,作为酸降解产物；5ml稀释液溶解，加入 lmol/L氢氧化钠，在水浴内放置20min后，取出冷却。后加 入lmol/L的盐酸，稀释到25ml后作为碱降解产物；5ml稀释液 溶解，加入30%的过氧化氢，在室内放60min加入稀释液稀释 到25ml后作为氧化降解产物；在1309的高温破坏60min。液 稀释到25ml后作为高温破坏降解产物。根据实验结果表明：
品储备液中的5ml,将以上放置在与20ml的容器内，使用加
上稀释液溶解、稀释、摇匀均匀即可図。
② 在准确精密度下选取适量的阿奇霉素，放于100ml的
容器内，采用超声进行溶解，选取适当数量稀释液，后使用
阿奇霉素的高效液相色谱法测定
阿奇霉素的高效液相色谱法测定摘要】阿奇霉素是一种具有较强药效的药品，在临床诊疗中受到了广泛的关注和使用。
阿奇霉素的发现和利用提升了部分疾病的诊疗效果，改善了临床治疗的成效，降低了部分疾病患者的死亡率，增强了医疗卫生研究的相关效果。
但是，阿奇霉素药物具有一定的过敏情况，因此在使用的过程中应当注重药物的选择和患者的临床表现，科学使用阿奇霉素。
【关键词】阿奇霉素；色谱检测；研究阿奇霉素是一种具有较强药效的药品，并且在临床诊疗中已经得到了广泛的使用。
阿奇霉素的研究成功标志着临床诊疗水平具有显著的发展，能够带动抗生素药品的研发和使用，帮助临床诊疗中解决了大量患者的治疗问题。
但是现阶段对阿奇霉素的使用仍旧具有不明确的现象，影响临床诊疗的完善和发展。
1.高效液相色谱法概述色谱检测法指的是将不同的细菌混合物在特定的环境中进行相互溶解、解析、吸附、脱附，在以上的环境中进行多次的操作之后能够得到物质的分离现象，并且随之使用不同的检测形式进行细菌内部的检验，能够将细菌甄别到属、种甚至株。
使用这种形式进行检验的过程中能够保证较高的分辨率和较为准确的检验结果，并且分析的速度较快，能够在检验的过程中分析出较为稳定的指标。
在分析中不会收到细菌年龄、生长条件等客观因素的影响，对于细菌的鉴别具有十分重要的作用。
2.方法与结果 2.1确定检测波长在色谱检测形式中应当首先明确阿奇霉素那一波段的检测中能够出现较为明显的变化和波动，并且在进行检测的过程中加以注意。
根据相关的文献研究表明，在280nm的阶段中，色谱检测中对于阿奇霉素的吸收值最大，但是影响效果较小。
只有在210nm的环境下，才能够保证检测效果的有效性，灵敏度也较为理想。
2.2确定色谱条件利用紫外末端进行吸收检测，为了防止本底抬高和基线噪音增加，要合理控制流动相中甲醇和乙腈的混合比例，并将其保持在20%以下。
色谱条件如下。
色谱柱：150mm6.0mm，5m；柱温：40℃；流速：1mL/min 2.3制备溶液制备供试品溶液精密量取25mg阿奇霉素标准品置于25mL的量瓶中，流动相溶解之后，稀释至刻度备用。
HPLC测定阿奇霉素干混悬剂的含量
３ １ 对照品溶液的制备 ．
精 密 称 定 阿 奇霉 素对 照 品２ ｇ ５ｍ
含量 ， 方法 简便 准确 、 重复性 好 ， 作为 阿奇霉素干 混悬剂 可
含 量 测 定 的方 法 之 一 。 １ 仪 器 与 试 剂
和 阿 奇 霉 素 杂 质 Ａ对 照 品５ｍ ， 同一 ２ Ｌ 瓶 中 ， 流 ｇ置 ５ｍ 量 用 动 相 溶 解 并 稀 释 至 刻 度 ， 匀 ， 为对 照 品溶 液 。 摇 作 ３２ 供 试 品溶 液 的 制 备 取 阿 奇 霉 素 干 混 悬 剂 ， 出 平 均 ． 求 装 量 ， 装量 差 异项 下 的 内容 物 混 匀 ， 密 称 取 适 量 （ 相 将 精 约
柱 Ｗａ ｒ Ｘ ｒ ｇ １ ｔ ｓ ｂ ｉ ｅＣ ８柱 （ ５ Ｉ ｅ ｄ １０ ｍ Ｂ×２ １ｈ ５ Ｉ 。 ． ｉ ｍ） ｍ， ｘ
当于阿奇霉素２ ｇ ， ５ｍ 容量瓶 中 ， 流动相溶解并 ５ｍ ） 置２ Ｌ 用 稀 释 至 刻 度 ， 匀 ， 过 ， 为供 试 品溶 液 。 摇 滤 作
鹤 岗 １４０ ） ５ １０
摘要 目的 ： 建立 高效液相 色谱法测定 阿奇霉素 干混 悬剂含 量。方法 ： 用 Ｗａｅ ｂｉｇ １ 采 ｔ ｓＸ ｒ ｅＣ ８柱 （５ ｍ ｒ ｄ １０ｍ × ． ２ １ｍｍ， ｍ） 以０ ０ ５ｔ ｌ Ｌ 的磷 酸 氢 二钠 （ Ｈ ９ ０ ５ｔ ， ． ２ ｏ ・ ｘ ｏ ｐ ． ）一 乙腈 （ ５ ５ ） 流 动 相 ， 速 为０ ３ ４ ：５ 为 流 ． ５ｍＬ・ ｉ～ ， ｍｎ
文 献标 识 码 ：Ｂ
阿 奇 霉 素 （ ｚｈｏ ｅｎ 是 一 种 ｌ 氮 环 内 酯 类 抗 生 ａｉ ｒｍｙｉ） ｔ ５元 素＿ ， 】 其抗 菌谱与红 霉素 相似但 抗 菌作 用更强 ， 出的优 Ｊ 突 点是 对 碱 稳定 ， 衰 期 长 ， 较 高 的 生 物 利 用 度 ， 半 有 因此 具 有 服 药 方 便 ， 程 短 ， 药 量 少 ， 效 肯 定 等 优 点 ， 制 剂 疗 用 疗 其 阿 奇 霉 素 干 混 悬 剂 在 国 内 外 临 床 已 广 泛 使 用 ， 国药 典 中 ２ ０ 二 部 采 用 抗 生 素微 生物 检定 法 测 定 其 含 量 ， 方 ０ ５版 其 法 费 时 繁 琐 。 本 文 参 考 有 关 文 献 Ｊ 采 用 高 效 液 相 色 谱 ，
HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂的有关物质
DGU-20A 全自动高效液相色谱仪 ： 配备 CBM-20A 检测 器、 SIL-20A 自动进样器及 LC-SOLUTION 化学工作站 （日本 岛津公司） ； BS 110S 型电子分析天平 （德国 Sartorius 公司） 。 阿奇霉素干混悬剂 （空军总医院药学部制剂研究室自制， 规格 ： 100 mg， 批号 ： 20100401、 20100402、 20100403） ； 乙腈为 色谱纯 ， 磷酸氢二钾 、 磷酸 、 盐酸 、 过氧化氢均为分析纯 ， 氢氧 化钠为化学纯， 水为重蒸水。
阿奇霉素是一种 15 元环含氮大环内酯类抗生素 ， 组织选 择性高、 半衰期长， 在酸性环境中稳定， 生物利用度高， 在重要 的机体组织和体液中比在血清中浓度高 ， 维持的时间长 。 其 抗菌谱广， 不仅对革兰阳性球菌、 厌氧菌、 支原体、 衣原体有作 用， 对一些革兰阴性菌 ， 包括流感嗜血杆菌 、 淋球菌等也有较 好的抗菌作用， 临床疗效显著。虽然利用薄层色谱 （TLC） 法可 以有效地控制阿奇霉素原料中的有关物质 [1] ， 但高效液相色 谱 （HPLC） 法 是 最 常 用 的 有 关 物 质 检 查 方 法 之 一 。 采 用 HPLC 法分析阿奇霉素有关物质存在以下难点： （1） 与其他大 环内酯类抗生素一样 ， 阿奇霉素在紫外区仅具有末端吸收 ， 限制了其检测灵敏度； （2） 阿奇霉素属碱性物质， 容易与色谱 柱的硅醇基相互作用 ， 导致色谱峰拖尾严重 。 另有文献 [2] 报 道， 即使采用偏碱性流动相， 阿奇霉素及其杂质在普通 C18 柱 或铝基质色谱柱 （USP 中的 L29 色谱柱）中仍拖尾严重 。 本试 验选用空军总医院药学部制剂研究室自制的阿奇霉素干混悬 剂为研究对象 ， 选用艾捷尔公司烷基硅烷键合硅胶 XBP （L） 柱， 在优化后的色谱条件下测定阿奇霉素干混悬剂的有关物 质， 保留时间适宜， 分离度达到要求， 取得了满意的结果。
高效液相色谱法测定阿奇霉素片中阿奇霉素含量
与临床 ， １ ９ ９ ８ ， １ ４ （ ５ ） ： ３ ２
参 考 文 献
１ 杨士友 ， 田军 ， 孙备 ． 夜 宁糖浆和 口服 液的药效学研 究［ Ｊ ］ ． 中药药 理 ２ 丁青龙 ， 过伟 ， 施建安 ， 等．夜宁胶囊和糖浆 的药效学研究 ［ Ｊ ］ ． 中国
（ 天津怀仁制药有限公司 ， 天津 ３ ０ ０ ３ ８ ５ ）
摘
要 目的 ： 建立阿奇霉素片含量测定 的 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ法 。方法 ： 采用 Ｔ ｈ ｅ ｒ ｍ ｏ Ｃ 。 （ ２ ５ ０ ｍｍ× ４ ． ６ ｍ ｍ， ５ ｍ） 色谱柱 ， 流动
相为磷酸盐缓 冲液 （ 取０ ． ０ ５ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ磷酸氢二钾溶液 ， 用２ ０ ％的磷酸溶液 调节 ｐ Ｈ至 ８ ． ２ ）一乙腈 （ ４ ５ ：５ ５ ） 为 流动相 ， 检测 波 长为 ２ １ ０ ｎ ｍ。结果 ： 阿奇霉素在 ０～１ ． ４ ｍｇ ／ ｍ ｌ 范 围内线性关系 良好 ， 平均 回收率 ９ ９ ． ６ ％， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ５ ６ 。结论 ： 本方法准 确可靠 ， 灵敏度高 ， 重现性好 ， 可用于阿奇霉素片含量测定 。 关键 词 高效 液相 色谱 法 ， 阿奇霉素片 ， 含量测 定
［ Ｊ ］ ．中国药业 ， ２ ０ ０ ７ ， １ ６ （ ２ １ ） ： １ ７ ４ 瞿发林 ， 谈 丽娜 ， 赵勇 ， 等．复方夜灵胶囊 中大黄素的含量测定 ［Ｊ ］ ．
中国药师 ， ２ ０ ０ ６， ９ （ １ ２） ： １ １ ２ ７ ５ 中国药典 ［ ｓ ］ ． 一部 ． ２ ０ １ ０： ２ ４ ８
紫红色 ， 木部猩红色或紫红色的首乌藤 中大黄素含量 偏低。 ３ ． ２ 监 测药 材含 量 通 过测 定 首 乌藤 中大 黄 素 的含 量， 能客 观评 价 药 材 的 质量 。结 合 性 状 鉴 别 能 有 效 控
高效液相法测定阿奇霉素的含量
（ 搏 药业有 限责任公 司 黑龙 江 友
阿奇霉素 （ｚｈｏ ｙｉ） ａｉ ｒｍ ｃｎ 是具有 １ 元 的氮杂内酯（ ｚａ— ｔ ５ ａａｃ
ｔ ｅ 环 的半合成大环 内酯类 抗生素… 。化学结 构上系在 红 ｏ ） ｎ
牡 丹 江
１７ １ ） ５０ １
霉素 Ａ内酯环的 ９ 位 内插一个 含有 取代 甲基的原 子 ， ａ 经修 饰后成 为新一代 的大环 内酯类抗 生素 。其 作用机 理与红 霉 素相似 ， 通过抑制细菌蛋白质的合 成而起作用 。阿 奇霉 素抗 ． 菌谱较红霉 素广 ， 并且 在酸性 环境 中有较高 的稳定性 ， 有 具
・８ ・ ３
２ ８ 样 品 的测 定 ．
精密称 量样 品适量 ， 然后 按上 述 ２ ３供 ．
两 种 浓 度 的 样 品供 试 溶 液 ， 种 浓 度 进 样 ６次 ， 出 平 均 浓 每 求
试品溶液 的制 备项 下 操作 ， 配成 含 阿 奇霉 素 ６ Ｏ ８０ ｍ ／ Ｏ ，０ ｇ Ｌ
维普资讯
牡丹江医学 院学报
・
２０ ０ ８年
第２ ９卷
第 ２期
８ ・ ２
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＭＵＤＡＮＪＡＮＧ ＭＥＤＩ Ｉ ＣＡＬ Ｃ ＯＬＬ ＥＧＥ Ｖ １２ ＮＯ． ２ ０ ｏ． ９ ２ ０８
高效 液相 法 测定 阿奇 霉 素 的含 量
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牡丹 江医学院学报 ２ ０ 年 第 ２ 卷 第 ２ ０８ ９ 期 ＪＵ Ｎ Ｌ Ｆ Ｏ Ｒ Ａ Ｏ ＭＵ Ａ ＪＡ Ｇ ＭＥ ＩＡ Ｃ Ｌ Ｅ Ｅ ｏ． ９ Ｎ ２ ０ ８ Ｄ ＮＩＮ ＤＣ Ｌ Ｏ Ｌ Ｇ Ｖ １２ Ｏ． ２ ０
可用于测定阿奇霉素的含量。 １ 仪器 及 试 剂
HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂的溶出度
HPLC法测定阿奇霉素干混悬剂的溶出度程红杰;张晔【摘要】目的建立阿奇霉素干混悬剂的溶出度测定方法.方法采用桨法,以磷酸盐缓冲液(pH6.0)(0.1mol·L-1磷酸二氢钠溶液3000mL,加盐酸约20mL,调节pH值至6.0±0.05)500mL为溶出介质,转速为50r·min-1,溶出时间为30min,用HPLC 法进行测定.结果本方法线性关系良好,平均回收率为100.5%,RSD=1.4%(n=9).结论本方法简便、准确,可为阿奇霉素干混悬剂溶出度的测定提供依据.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2010(029)005【总页数】3页(P280-282)【关键词】阿奇霉素干混悬剂;溶出度;高效液相色谱法【作者】程红杰;张晔【作者单位】安阳市食品药品检验所,河南,安阳,455000;安阳市食品药品检验所,河南,安阳,455000【正文语种】中文【中图分类】R927.11阿奇霉素(Azithromycin)为15元环大环内酯类抗生素,抗菌谱与红霉素类似,对化脓性链球菌、肺炎链球菌以及流感杆菌有杀菌作用,对部分葡萄球菌属具有抑菌作用,临床主要用于呼吸道、皮肤软组织感染和沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎等感染性疾病的治疗[1]。
阿奇霉素有较强的疏水性,制剂的类型及工艺可影响其溶出和体内吸收。
刚发布的《中国药典》2010版对阿奇霉素干混悬剂仍未规定溶出度检查[2]。
本文通过对阿奇霉素干混悬剂溶出行为的考察,建立了阿奇霉素干混悬剂的溶出度测定方法,可为制定阿奇霉素干混悬剂溶出度检查法提供依据。
1 仪器与试药1.1 仪器 Waters高效液相色谱仪系统;AUW-220D电子天平(日本岛津);ZRS-8C智能溶出试验仪(天津大学无线电厂)。
1.2 试剂和药品阿奇霉素标准品(批号:130352-200405中国药品生物制品检定所);阿奇霉素干混悬剂(0.1g):市售品,A厂批号20090828,20091020;B厂091012;盐酸、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠均为分析纯,乙腈为色谱纯。
高效液相色谱法测定阿奇霉素颗粒的含量
率。 结果 (见表 1)。
表 1 阿奇霉素回收率试验 (n= 9)
称量 (g)
013367 013336 013255 013284 013302 013355 013225 013323 013269
含量 (m g)
19191 19173 19125 19142 19153 19184 19107 19165 19133
作者简介: 黄健浩, 女 (196813- )。 毕业于福州大学化工系, 职称: 主 管药师。 联系电话: 0591- 88030310
法对阿奇霉素颗粒的含量测定进行了初步研究, 并 与微生物效价法进行了比较, 结果表明本法简便、快 速、准确、可靠。 1 仪器与实验 111 仪器 A gilan t1100 高效液相色谱系统 (VW D 检测器) ; 色谱柱: H ypersil C18 柱 (250mm ×4. 6mm , 5Λm )。 112 试药 阿奇霉素标准品 (中国药品生物制品检 定所, 批号: 130352- 200405 936Λ·m g- 1) , 阿奇霉
3 实验结果 311 在上述实验条件下, 阿奇霉素的保留时间约 512m in, 与相邻杂质峰的分离度分别大于 115, 理论 塔板数按阿奇霉素计大于 2500。 312 线性关系考察 精密量取对照品溶液 015mL、 1mL、2mL、3mL、4mL、5mL、6mL 分别于 10mL 容量 瓶中, 加流动相至刻度, 分别进样 20ΛL , 记录色谱 图, 以峰面积 (Y) 为纵坐标, 以浓度 (X ) 为横坐标绘 制标准曲线, 得回归方程 Y= 387. 32X - 3. 20, r= 0. 9999。 表 明 阿 奇 霉 素 在 012805m g · mL - 1 ～ 313660m g·mL - 1范围内具有良好的线性关系。 313 精密度实验 精密吸取阿奇霉素对照品溶液, 按上述方法操作, 连续进样 6 次, 测定峰面积, R SD = 012% (n= 6)。 314 重复性实验 取同一批号的样品, 按溶液制备 方法和色谱条件进行 6 次平行测定, R SD = 016% (n = 6) , 表明本法测定的重现性良好。
HPLC法测定注射用阿奇霉素的有关物质
HPLC法测定注射⽤阿奇霉素的有关物质论著?HPL C 法测定注射⽤阿奇霉素的有关物质作者简介:易秋艳(1972～),⼥,主管药师易秋艳1,范时根2,杨 梁1(1.四川省⾷品药品检验所,四川成都 610036; 2.四川百利药业有限责任公司,四川成都 610045)摘要 ⽬的:建⽴注射⽤阿奇霉素有关物质的新检测⽅法。
⽅法:采⽤⾼效液相⾊谱法(HPL C )检测注射⽤阿奇霉素中有关物质。
液相⾊谱条件为⾊谱柱:Waters XBridge TM Sheild RP18;流动相:⼄腈2磷酸盐缓冲液(取0.05mol/L 磷酸氢⼆钾溶液,⽤20%磷酸溶液调节p H 值⾄8.6),流动相(58∶42);流速:1ml ?min -1;检测波长为210nm ,柱温:30℃。
结果:⾼效液相⾊谱法阿奇霉素的检测限为4.6ng ,阿奇霉素主峰与杂质峰分离完全。
结论:⾼效液相⾊谱法灵敏度⾼,可量化,更适⽤于注射⽤阿奇霉素的有关物质检查。
关键词 注射⽤阿奇霉素;⾼效液相⾊谱;有关物质检查中图分类号 R 927.1 ⽂献标识码 A ⽂章编号 100420188(2008)0520656203Determination of related compounds in azithromycin for injection by HPLCYI Qiu 2yan 1,FAN Shi 2gen 2,YAN G Liang 1 1.Bureau of Food and Drug Inspection of Sichuan Province ,Chengdu,610036,China ;2.Sichuan Bai 2Li Pharmaceutical Co.,Ltd ,Chengdu ,610045,China.Abstract Objective :To establish a new met hod to detect t he related compounds in azit hromycin for injection.Methods :The relatedcompounds in azit hromycin for injection were determined by high performance liquid chromatography (HPLC ).The isolation was executed by Waters XBridge TM Sheild RP18Column and t he mobile phase consisted of acetonitrile 2phosphate buffer.Detection was carried out at wave lengt h of 210nm ,flow rate of 1ml ?min -1and temperature of 30℃.R esults :The metered limit of azit hromycin was 4.6ng by HPL C.The main and impurity peak of azit hromycin for injection were divided completely.Conclusion :The HPLC is sensitive and can be used for t he determination of related compounds in azit hromycin for injection.K ey w ords :azit hromycin ;HPLC ;related compound ;measurement阿奇霉素是新⼀代⼤环内酯类抗⽣素,它通过抑制蛋⽩质的合成⽽起作⽤。
高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂的含量
高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂的含量Determination of Azithromycin for Suspension by HPLC作者：（单位：，海南邮编）【摘要】目的：用高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂的含量。
方法：采用C18柱，以乙腈－磷酸缓冲液（0.05mol/l磷酸氢二钾溶液，用20%磷酸调节pH值至8.2）（58：42）为流动相，流速：1ml/min，柱温：30℃，紫外检测波长:210 nm。
结果：阿奇霉素与其杂质能完全分离，称样量与峰面积线性关系良好，r=1。
阿奇霉素的平均回收率为100．3％，变异系数（RSD）为0.54％。
结论：本法简便、准确、专属性强、重现性好，可用于阿奇霉素干混悬剂的质量控制。
[关键词] 阿奇霉素干混悬剂；高效液相色谱法；含量测定【Abstract】Objective: T0 established a high performance liquid chromatography for determination of Azithromycin for Suspension．Method：A mobile phase was acetonitrile-0.05mol/l PBS(0.05mol / l K2HPO4 solution, with 20% phosphoric acid to adjust the pH value of 8.2) (58:42), a flow rate of 1mL/min,and column temperature at 30℃，UV detection at 210 nm。
Result: The linear range was 0.5～2.0mg/ml The average recovery of azithromycin was 100.3％with RSD of 0.54%。
Conclusion：The method is simple,sensitive and accurate for allyguaiacol and can be used for controlling the quality of Azithromycin for Suspension Sulfate.【Key words】Azithromycin for Suspension；HPLC；determination前言有关阿奇霉素的分析方法，中国药典采用微生物方法，美国药典采用反相氧化铝柱，安培电化学检测器的方法。
高效液相色谱法分析阿奇霉素的含量
阿奇霉素是含氮 15 元环的大环内酯衍生物〔1〕, 其 制剂是目前临床中常用的抗生素,《中国药典》 2000 年版采用抗生素微生物检定法测定其含量〔2〕, 该方法周期长, 操作繁琐。本文采用高效液相色谱法 测定阿奇霉素含量, 以供参考。 1 仪器、试剂 111 仪器 A g ilen t L C1100 高效液相色谱仪 ( 包 括: 真空脱气机、四元梯度泵、自动进样器、紫外检测 器) ,W RO —70 超纯水机, 112 试药 磷酸氢二铵、三乙铵为分析纯, 乙腈为 色谱纯。 阿奇霉素对照品: 批号 130352—200304 由 中国药品生物制品检定所提供。 样品: 阿奇霉素片 ( 批号 040101, 宁波亚太生物技术有限公司; 批号 040206, 浙江亚太药业股份有限公司; 批号 040402, 上海现代浦东药厂有限公司)。 2 实验方法及结果 211 色谱条件 色谱柱: A g ilen t H yp ersil OD S C18 柱 (410mm ×250mm , 5Λm ) , 以 011m o l·L - 1 磷酸二 氢铵溶液 (三乙胺调节 pH 值为 615) 2乙腈 (70∶30) 为流动相, 检测波长 212nm , 流速: 1mL ·m in- 1。 212 溶液的配制 21211 对照品溶液 取阿奇霉素对照品适量, 精密 称定, 加流动相制成约含阿奇霉素 2m g·mL - 1的溶 液。 21212 供试品溶液 取供试品, 研细, 精密称取供 试品适量, 加流动相制成约含阿奇霉素 2m g·mL - 1 的溶液。
D e te rm ina tion of A z ith rom yc in by HPLC
YE L a n2fe ng (N a np ing ins titu te fo r D rug C on tro l, N a np ing 353000; C h ina )
阿奇霉素 测定 检测 HPLC 液相 色谱 谱图
阿奇霉素测试报告
●色谱条件：
色谱柱：月旭Ultimate® Polar-RP（4.6*250mm，5μm）
流动相：0.05mol/L磷酸二氢钾溶液用20%的磷酸溶液调节ph值至8.2-
乙腈=45:55
检测波长：210nm
柱温：30℃
流速：1ml/min
进样量：50μl
注意事项：
●流动相配置：
0.05mol/L磷酸二氢钾溶液用20%的磷酸溶液调节ph值至8.2-乙腈=45:55；
●样品处理方法：
称取本品0.1g置于10ml量瓶中加乙腈溶解稀释至刻度，混匀，制成10mg/ml的浓度，用0.45μm 滤膜过滤，即得；
备注：按药典要求，色谱图采集时间为主峰保留时间的2 倍，阿奇霉素B（相对保留时间约为1.53）阿奇霉素GX与红霉素A偕亚胺醚（相对保留时间约为0.61，0.27）色谱图如下。
谱图和数据：
1.含量测定供试品全图
2.有关物质供试品放大图。
高效液相色谱-质谱联用法测定人体内阿奇霉素血药浓度
：８ ， ｐ Ｈ调节 至 ６ ． ０ ） ， 流速 １ ｍ ｌ ／ ｍ ｉ ｎ， 控制柱温为 ４ ０ ￣ Ｃ， 检测 波长为 ２ １ ０ ｎ ｍ， 定量方法 为峰 面积外标 法。结 果 阿奇 霉
素血 药浓度 线性 范围在 ０ ． １ — ４ ． ０ ｔ Ｌ ｇ ／ ｍ ｌ ， ｒ＝ ０ ． ９ ９ ９ ８ ， 日内精 密度 １ ． ２ ５％ 一 ４ ． ４ １ ％， 日间精密度 ２ ． ７ ９ ％～ ６ ． ８ ３ ％ 。结论
ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ．Ｍｅ ￣ｏ ｄ ｓ Ａ ｍ ｏ ｂ ｉ ｌ ｅ ｐ ｈ ａ ｓ ｅ ｏ ｆ Ｃ Ｌ Ｃ—Ｃ Ｎ（ ２ ５ ０ ｍｍ × ４ ． ６ ｍ ｍ， ５ Ｉ ｘ ｍ） ， Ｎ ａ Ｈ ２ Ｐ ０ ４ ｍ ｅ ｔ ｈ ｙ ｌ ａ ｌ ｃ ｏ ｈ ｏ ｌ ａ ｃ ｅ ｔ ｏ ｎ ｉ ｔ ｒ ｉ ｌ ｅ（ ８ ５ ：７ ：８ ） ，Ｃ Ｌ Ｃ—Ｃ Ｎ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ（ １ ５ ０ ｍｍ ×６ １ ０ ｍｍ Ｉ Ｄ， ５ ｍ）ａ ｎ ｄ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ｔ ｅ ｍ ｐ ｅ ｒ ａ ｔ ｕ ｒ ｅ ａ ｔ ４ ０ ｏ Ｃ ｗ ｉ ｈ ｔ ｕ ｌ ｔ ｒ ａ ｖ ｉ ｏ ｌ ｅ ｔ ｄ ｅ ｔ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｗ ａ ｖ ｅ ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｏ ｆ ２ １ ０ ａ ｍ ａ ｎ ｄ ａ ｌ ｆ ｏ ｗ ｒ ａ ｔ ｅ ｏ ｆ １ ｍ ｌ ／ ｍｉ ｎ ｗ ｅ ｌ ＇ ￣ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｅ ｄ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｉ ｓ ｄ ｅ ｔ ｅ ｍｉ ｒ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ．Ａ ｚ ｉ ｈｒ ｔ ｏ ｍ ｙ ｃ ｉ ｎ ｉ ｎ ｓ ｅ ｒ ｕ ｍ ｗ ａ ｓ ｅ ｘ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｄ ｗ ｉ ｔ ｈ ｃ ｈ ｌ ｏ ｒ ｏ ｆ ｏ ｒ ｍ ２ １ ａ ２ ｈ ｅ ｘ ａ ｎ ｅ（ ３ ： ２）Ｒｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｓ Ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｎ ｅ ａ ｒ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｗ ａ ｓ
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高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量摘要目的：建立高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量。
方法：采用Xbridge C18柱（150mm×2.1mm，5μm），以0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55）为流动相，流速为0.35mL·min-1，柱温为30℃，检测长为215nm。
结果：线性范围为467.70-1434.51µg·mL-1，r =0.999758，平均回收率（n=15）为99.9%（RSD=1.1%）；本方法重复性和精密度良好（RSD＜2.0%）。
结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于阿奇霉素干混悬剂的含量测定。
关键词：阿奇霉素干混悬剂;高效液相色谱法;含量测定Determination of azithromycin for suspension by HPLCAbstract Objective To establish a high-performance liquid chromatography(HPLC) method for quantitative determination of Azithromycin for suspension.Methods:The column was Waters Xbridge C18（150mm×2.1mm,5μm）.The mobile phase composed of0.025 mol·L-1Na2HP04(pH9.0)-acetonitrile(45：55).The flow rate was 0.35 mL·min-1 , and the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 215nm. Results: The linear relationship of azithromycin was good in the range of 467.70-1434.51µg·mL-1,The average recovery(n=15) was 99.9% and RSD(n=15) was 1.1%;RSD of repeated experiment(n=15) was 0.6%;The repeatability and precision of the method were good （RSD＜2.0%）.Conclusion:This method is simple and believable with good repeatability.It can be effectively used for the quality control of azithromycin for suspension.Key words:Azithromycin for suspension;HPLC;Quantitative Determination阿奇霉素(azithromycin)是一种15元氮环内酯类抗生素［１］，其抗菌谱与红霉素相似但抗菌作用更强,突出的优点是对碱稳定，半衰期长，有较高的生物利用度［２］，因此具有服药方便，疗程短，用药量少，疗效肯定等优点，其制剂阿奇霉素干混悬剂在国内外临床已广泛使用，本文参考有关文献［４］、［5］、［6］，采用高效液相色谱法测定其含量，方法简便准确、重复性好，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定的方法之一。
1仪器与试剂海能LC7000液相色谱仪（LC7011 泵及LC7050自动进样器，LC7020紫外检测器）；；梅特勒XS105电子天平；色谱柱Xbridge C18柱（150mm×2.1mm，5μm）。
阿奇霉素工作对照品（含量946μg·mg-1，批号：0601，齐鲁制药有限公司）；阿奇霉素杂质A工作对照品（含量95.4%，批号：aza060801，齐鲁制药有限公司）；阿奇霉素干混悬剂(规格为100mg，批号：063070521、063070301、063070302，齐鲁制药有限公司)；乙睛为色谱纯，美国moker公司产品；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。
2色谱条件色谱柱：Waters XbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）；流动相：0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55）；流速：0.35m L·min-1；柱温：30℃；检测波长：215nm；进样体积：20μL。
3 溶液制备3.1对照品溶液的制备精密称定阿奇霉素对照品25mg和阿奇霉素杂质A对照品5mg，置同一25m L量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
3.2供试品溶液的制备取阿奇霉素干混悬剂，求出平均装量，将装量差异项下的内容物混匀，精密称取适量（约相当于阿奇霉素25mg），置25m L容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。
4 系统适用性试验按上述色谱条件,进样对照品溶液20μL，结果理论塔板数按阿奇霉素峰计算不小于1500；阿奇霉素峰与阿奇霉素杂质A峰分离度大于5.0；阿奇霉素峰的托尾因子不大于2.0，对照品溶液重复进样主峰面积的RSD<2.0%(n=5)5线性关系试验按对照品溶液阿奇霉素浓度的50-150%制定5个不同浓度梯度，分别是50%、80%、100%、120%、150%，每个浓度梯度平行制备3份样品溶液，共15份样品溶液，每份样品都加入处方量辅料，用流动相溶解并定量稀释制成规定浓度，即得系列供试品溶液。
按上述色谱条件，分别进样20μL，记录阿奇霉素峰面积，以浓度（μg·mL-1）为横坐标，以相应的阿奇霉素峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：Y=3.21e+003X - 5.36e+004 r=0.999758结果表明：在467.70-1434.51µg·mL-1范围内，阿奇霉素浓度与峰面积呈良好线性关系。
6 回收率试验溶液制备同线性关系试验供试品溶液，按外标法以峰面积计算供试品中阿奇霉素（C38H72N2O12）的含量，根据含量结果计算回收率，结果5种浓度回收率（ｎ＝3）分别为99.2%( RSD=0.5%),98.6%( RSD=0.9%),100.0%( RSD=0.3%), 101.2%( RSD=0.7%),100.7%( RSD=0.3%)；平均回收率（ｎ＝15）为99.9%( RSD=1.1%)。
说明此方法得到的测定结果准确可靠。
7精密度试验7.1 重复性取同一批(063070521)阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下方法制备所需溶液，平行测定6次的含量结果，RSD值为0.8%。
7.2 中间精密度取3批阿奇霉素干混悬剂，在不同时间，由不同的化验员，按“3”项下方法制备所需溶液分别测定，二人测定的同批含量结果的相对平均偏差063070521为0.8%，063070301为0.6%，063070302为1.6%。
8 稳定性试验按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液（批号：063070521），每间隔1小时，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样13次，量取主峰面积，计算几次进样结果峰面积的RSD值。
对照品溶液RSD为0.9%，样品溶液RSD为0.8%，表明对照品溶液和样品溶液至少在12h内稳定。
9 样品测定取3批阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下分别进样20μL，按外标法计算含量，结果与抗生素微生物法比较见下表批号本法药典法(标示量%) (标示量%)063070521 99.2 100.6063070301 108.2 108.4063070302 102.6 103.9从表结果可看出本法与药典采用的抗生素微生物效价法测定阿奇霉素干混悬剂的含量无显著性差异。
10 讨论10.1 本文参考有关文献［４］，对流动相的组成进行了探讨，发现采用本文的流动相即0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55），峰形稳定，分离较好。
10.2 溶剂的选择由于阿奇霉素干混悬剂的辅料较多，故溶剂选择比较困难。
本法采用流动相和乙腈试验对比，结果发现均可溶样，但因纯乙腈毒性较大且价格较贵，故最后溶剂定为流动相。
10.3 样品浓度选择采用阿奇霉素浓度为1mg·mL-1时峰形对称，和相邻杂质峰分离较好；浓度过大，峰拖尾严重且辅料量大而不好过滤；浓度过小，准确度受影响。
10.4干扰试验将溶剂和按处方工艺配制不含阿奇霉素的空白辅料，按“3”项下方法制备空白供试液，记录色谱图，结果显示空白溶剂和空白辅料对本法测定无干扰。
10.5 测定条件流动相的流速±0.05ml，柱温度±5℃，乙腈相比例±5%，缓冲盐pH±0.4等进行小的变动，系统适用性均能达到试验要求，说明此方法适用范围较广。
所以，我们认为本法简便、准确、重现性好，样品溶液稳定，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定方法之一。
参考文献［１］李荣凌，张先洲.阿奇霉素临床应用分析.中国医院药学杂志2006年第26卷第9期［２］张晔．高效液相色谱法测定阿奇霉素片的含量．中国药业2006年第15卷第17期［３］国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）[S].北京.化学工业出版社，2005：附录ⅪＡ［４］The United States Pharmacopeial P29-NF24 Page227［５］International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2A: Guideline on V alidation of Analytical Procedures:Definitions and Terminology [FDA, March 1, 1995 (60 FR 11259)]［６］International Conference on Harmonisation, ICH Harmonised Tripartite Guidelines, Q2B: Guideline on the V alidation of Analytical Procedures: Methodology [FDA, May 19, 1997 (62 FR 27463)].。