高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量

高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量

摘要目的：建立高效液相色谱法测定阿奇霉素干混悬剂含量。方法：采用Xbridge C18柱（150mm×2.1mm，5μm），以0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55）为流动相，流速为0.35mL·min-1，柱温为30℃，检测长为215nm。结果：线性范围为467.70-1434.51µg·mL-1，r =0.999758，平均回收率（n=15）为99.9%（RSD=1.1%）；本方法重复性和精密度良好（RSD＜2.0%）。结论：本方法简便、准确、重复性好，可用于阿奇霉素干混悬剂的含量测定。

关键词：阿奇霉素干混悬剂;高效液相色谱法;含量测定

Determination of azithromycin for suspension by HPLC

Abstract Objective To establish a high-performance liquid chromatography(HPLC) method for quantitative determination of Azithromycin for suspension.Methods:The column was Waters Xbridge C18（150mm×2.1mm,5μm）.The mobile phase composed of0.025 mol·L-1

Na2HP04(pH9.0)-acetonitrile(45：55).The flow rate was 0.35 mL·min-1 , and the column temperature was 30℃.The detection wavelength was 215nm. Results: The linear relationship of azithromycin was good in the range of 467.70-1434.51µg·mL-1,The average recovery(n=15) was 99.9% and RSD(n=15) was 1.1%;RSD of repeated experiment(n=15) was 0.6%;The repeatability and precision of the method were good （RSD＜2.0%）.Conclusion:This method is simple and believable with good repeatability.It can be effectively used for the quality control of azithromycin for suspension.

Key words:Azithromycin for suspension;HPLC;Quantitative Determination

阿奇霉素(azithromycin)是一种15元氮环内酯类抗生素［１］，其抗菌谱与红霉素相似但抗菌作用更强,突出的优点是对碱稳定，半衰期长，有较高的生物利用度［２］，因此具有服药方便，疗程短，用药量少，疗效肯定等优点，其制剂阿奇霉素干混悬剂在国内外临床已广泛使用，本文参考有关文献［４］、［5］、［6］，采用高效液相色谱法测定其含量，方法简便准确、重复性好，可作为阿奇霉素干混悬剂含量测定的方法之一。

1仪器与试剂

海能LC7000液相色谱仪（LC7011 泵及LC7050自动进样器，LC7020紫外检测器）；；梅特勒XS105电子天平；色谱柱Xbridge C18柱（150mm×2.1mm，5μm）。

阿奇霉素工作对照品（含量946μg·mg-1，批号：0601，齐鲁制药有限公司）；阿奇霉素杂质A工作对照品（含量95.4%，批号：aza060801，齐鲁制药有限公司）；阿奇霉素干混悬剂(规格为100mg，批号：063070521、063070301、063070302，齐鲁制药有限公司)；乙睛为色谱纯，美国moker公司产品；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

2色谱条件

色谱柱：Waters XbridgeC18柱（150mm×2.1mm，5μm）；流动相：0.025mol·L-1的磷酸氢二钠（pH 9.0）-乙腈（45：55）；流速：0.35m L·min-1；柱温：30℃；检测波长：215nm；进样体积：20μL。

3 溶液制备

3.1对照品溶液的制备精密称定阿奇霉素对照品25mg和阿奇霉素杂质A对照品5mg，置同一25m L量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

3.2供试品溶液的制备取阿奇霉素干混悬剂，求出平均装量，将装量差异项下的内容物混匀，精密称取适量（约相当于阿奇霉素25mg），置25m L容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

4 系统适用性试验

按上述色谱条件,进样对照品溶液20μL，结果理论塔板数按阿奇霉素峰计算不小于1500；阿奇霉素峰与阿奇霉素杂质A峰分离度大于5.0；阿奇霉素峰的托尾因子不大于2.0，对照品溶液重复进样主峰面积的RSD<2.0%(n=5)

5线性关系试验

按对照品溶液阿奇霉素浓度的50-150%制定5个不同浓度梯度，分别是50%、80%、100%、120%、150%，每个浓度梯度平行制备3份样品溶液，共15份样品溶液，每份样品都加入处方量辅料，用流动相溶解并定量稀释制成规定浓度，即得系列供试品溶液。按上述色谱条件，分别进样20μL，记录阿奇霉素峰面积，以浓度（μg·mL-1）为横坐标，以相应的阿奇霉素峰面积为纵坐标进行回归，得回归方程：Y=3.21e+003X - 5.36e+004 r=0.999758

结果表明：在467.70-1434.51µg·mL-1范围内，阿奇霉素浓度与峰面积呈良好线性关系。

6 回收率试验

溶液制备同线性关系试验供试品溶液，按外标法以峰面积计算供试品中阿奇霉素（C38H72N2O12）的含量，根据含量结果计算回收率，结果5种浓度回收率（ｎ＝3）分别为99.2%( RSD=0.5%),98.6%( RSD=0.9%),100.0%( RSD=0.3%), 101.2%( RSD=0.7%),100.7%( RSD=0.3%)；平均回收率（ｎ＝15）为99.9%( RSD=1.1%)。说明此方法得到的测定结果准确可靠。

7精密度试验

7.1 重复性取同一批(063070521)阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下方法制备所需溶液，平行测定6次的含量结果，RSD值为0.8%。

7.2 中间精密度取3批阿奇霉素干混悬剂，在不同时间，由不同的化验员，按“3”项下方法制备所需溶液分别测定，二人测定的同批含量结果的相对平均偏差

063070521为0.8%，063070301为0.6%，063070302为1.6%。

8 稳定性试验

按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液（批号：063070521），每间隔1小时，精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，重复进样13次，量取主峰面积，计算几次进样结果峰面积的RSD值。对照品溶液RSD为0.9%，样品溶液RSD为0.8%，表明对照品溶液和样品溶液至少在12h内稳定。

9 样品测定

取3批阿奇霉素干混悬剂，按“3”项下配制对照品溶液和样品溶液，在上述色谱条件下分别进样20μL，按外标法计算含量，结果与抗生素微生物法比较见下表