电化学发光原理及仪器优秀课件

C O N C E N T R A T IO N
T P A T R IP R O P Y L A M IN E
Competitive Principle
竞争法
small molecular weight antigens are measured
indirectly proportional measurement, means: high signal = low concentration low signal = high concentration
缺点 半衰期短，试剂货架期不长。 标记物不断变化，试剂批间、批内变化大，标准曲线不能保存。 反应时间长，操作步骤很难自动化。 使用放射性核素，对人体有一定的危害性。 分析的限度为 10 mol/ml 或 10 g/ml。
在一定时期内曾被采用，正在被逐步取代。
酶免疫测定法
1971年Engvall和Perlman建立了固相酶免疫测定方法（ELISA），这种非放 射标记免疫测定在临床检验，特别是感染性疾病的诊断中取得了广泛应用。
竞争法
C O M P E T IT IV E P R IN C IP L E
F IR S T R E A C T IO N
S E C O N D R E A C T IO N
L IG H T R E A C T IO N
S IG N A L (L IG H T )
TPA EC L
M A G N E T IC F O R C E & E L E C T R IC A L P O T E N T IA L
在电极阳极表面，以上两种电化学活性物质同时失去电子发生氧 化反应，2价的[Ru(bpy)2+3] 标记物被氧化成3价的[Ru(bpy)3+3] 的标 记物，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+* ， TPA+* 很不稳定，自发地失 去一个质子而形成自由基TPA* ，其为强还原剂，将一个电子给3价的 [Ru(bpy)3+3] ，使其成为激发态的Ru(bpy)2+3 ，而TPA自身被氧化成氧 化产物。激发态的Ru(bpy)2+3衰减时发射一个波长620nm的光子，重新 形成基态的Ru(bpy)2+3 。这一过程在电极表面周而复始进行，产生许 多光子。使得光信号增强。
采用标记催化酶（如辣根过氧化物酶）或化学发光分子（如鲁米诺）的方 法，其化学反应一般不稳定，为间断的、闪烁性发光，而且在反应过程中 易发生裂变，导致反应结果不稳定。 检测时需对结合相与游离相进行分离，操作步骤多。 反应原理相对落后。
电化学发光免疫技术
电化学发光免疫测定法（ECLIA）发展于 1996年，它在 发光反应中加入了电化学反应，是继放射免疫、酶免疫、 化学发光免疫测定之后的新一代标记免疫测定技术，是 电化学和免疫测定相结合的产物。
电化学发光原理及仪器
Elecsys 原理及仪器
• 免疫检测技术的发展 • 电化学发光系统及其原理 • 电化学发光仪器性能特点 • 电化学发光技术的优势 • 电化学发光检测项目
• 免疫检测技术的发展 • 电化学发光系统及其原理 • 电化学发光仪器性能特点 • 电化学发光技术的优势 • 电化学发光检测项目
双抗夹心法 & 桥联免疫法
Sandwich Principle
双抗夹心法
large molecular weight antigens are measured
directly proportional measurement, means: low signal = low concentration high signal = high concentration e.g. TSH, CA 15-3 II – assays
A N T IG E N
B IO T IN Y L A T E D A N T IG E N
R U T H E N IU M L A B E L L E D A N T IB O D Y
S T R E P T A V ID IN -C O A T E D M IC R O P A R T IC L E
世界公认的百度文库最先进 的临床免疫检测技术
• 免疫检测技术的发展 • 电化学发光系统及其原理 • 电化学发光仪器性能特点 • 电化学发光技术的优势 • 电化学发光检测项目
Elecsys系列全自动免疫分析仪
1996年德国宝灵曼公司推出Elecsys 2010系统 世界上第一台 应用电化学发光技术的全自动免疫分析仪 1998年罗氏公司收购宝灵曼公司 2001年罗氏推出电化学发光免疫模块E 170 罗氏是全球唯一 应用电化学发光免疫技术制造仪器的厂商 2006年罗氏推出电化学发光免疫模块e601 2007年罗氏推出电化学发光免疫模块e411
技术创新领先的免疫检测新技术－ECL
电化学发光
放免
酶免 荧光免疫 化学发光
1960‘S 1970~80‘S
2000‘S
1，抗体技术的革命，从使用多克隆抗体向使用单克隆抗体转变 2，从手工操作向全自动分析仪的转变 3，从液相放射免疫技术向均相和固相免疫分析技术的转变
放射免疫测定法
1959年Berson和Yalow建立了放射免疫分析方法（RIA），大大提高了 免疫测定的敏感度，这种标记免疫测定开拓了医学检验的新领域 。
Elecsys系列全自动免疫分析仪
e601
e411 disk
e411 rack
E170
ECL 2010 disk
ECL 2010 rack
电化学发光反应的原理
三联吡啶钌和三丙胺在电极表面发生的电化学发光反应
电化学发光原理
底物：三联吡啶钌[Ru(bpy)2+3] N羟基琥珀酰胺酯(NHS) 三丙胺(TPA)
缺点 试剂制备困难。 操作步骤复杂，耗时长。 影响因素多，质量控制难以保证。 最后测定的是颜色的光密度，其精密度和敏感性不如发光免疫技术。
各实验室操作不规范，质量难以保证。有学者认为ELISA 技术已逐步走向退化，可能会逐步退出临床实验室。
化学发光免疫测定法
化学发光免疫测定法出现于20世纪90年代初。由于最后测定的是光子的量， 不但对检测者无害，其敏感度和精密度均优于RIA，而且试剂较稳定，并可 进行全自动分析。 缺点