在体小肠吸收实验

实验报告

课程名称：_______________________________指导老师：________________成绩：__________________ 实验名称：_______________________________实验类型：________________同组学生姓名：__________ 一、实验目的和要求（必填） 二、实验内容和原理（必填） 三、主要仪器设备（必填） 四、操作方法和实验步骤 五、实验数据记录和处理 六、实验结果与分析（必填） 七、讨论、心得

一、实验目的

1、掌握大鼠在体肠管泵循环法研究吸收的试验方法。

2、掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数（ka ）和吸收半衰期t 1/2 的方法。

二、实验原理

1、研究药物消化管吸收试验方法：体外试验法、在体试验法和体内试验法。

2、消化管吸收药物主要方式是被动扩散。 这种形式的吸收不消耗能量，其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示：

-dQ/dt=DKS(C-C b )/h （1） -dQ/dt=PSC/h=k’C （2）

dQ/ dt ：分子型药物的透过速度 D ：药物在膜内的扩散系数

k ：药物在膜/水溶液中的分散系数 C ：消化管内药物浓度 C b ：血液中的药物浓度 h ：膜的厚度

式（2）说明药物透过速度属于表观一级速度过程：以消化液中药物量的变化率dx/dt 表示透过速度，则：

-dX/dt=KaX lnX=lnX0-Kat

lnX 对取样时间t 作图，可得一直线，从直线的斜率可求得吸收速度常数k a ，其吸收半衰期t 1/2为：

t1/2 ＝ 0.693/Ka

小肠在吸收过程中，不仅吸收药物，也吸收水分，导致供试液体积减少，故不能用直接测定药物浓度的方法计算剩余的药量。酚红不被小肠吸收，因此向供试液中加入定量的酚红，在一定间隔时间测定酚红的浓度，就可以计算出不同时间供试液的体积，再根据测定的药物浓度，就可以得出不同时间小肠中剩余的药量或被吸收的药量。

三、实验仪器及试剂

仪器：蠕动泵

试剂：供试液（SD 浓度：20ug/ml 、酚红浓度：20ug/ml ）、酚红液（酚红浓度：20ug/ml ）、20%乌拉坦、生理盐水、0.1%NaNO2溶液、1mol/L 盐酸、0.2mol/L NaOH 、0.5%氨基磺酸铵(NH 2SO 3NH 4 )溶液、0.1%萘乙二胺溶液

四、实验步骤

姓名：________________

学号：________________ 日期：________________

地点：________________

1、循环试验的操作

（1）恒温水浴调节：将水浴温度调节为37±0.5℃。

（2）供试液的准备：量取75-80ml供试液加入循环装置的烧瓶中，置恒温水浴中预热至37±0.5℃。（3）生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃备用。

（4）蠕动泵流速的调节：调节流速为5ml/min和2.5ml/min。

（5）大鼠麻醉：取大鼠一只称重，按1.1g/kg体重腹腔注射乌拉坦（浓度为20%）麻醉，并固定于固定台上。

（6）小肠两端插管；沿大鼠腹部中线打开腹腔（约3cm），在12指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径为0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。

（7）肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗去肠管内容物至净。

（8）作成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接，作成回路，开动蠕动泵，其流速为5ml/min。（9）取样：以5ml/min流速循环10min后，将流速调节为2.5ml/min时，立即自供试液烧瓶中取样两份（1ml 和0.5ml各一份），分别作为SD和酚红零时间样品，另向烧瓶中补加酚红液2ml，其后每隔15min亦按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停止循环。

2、SD的测定

取样品1ml置10ml带塞试管中→加入1mol/LHCl 5ml，摇匀，→加0.1% NaNO2 1ml，摇匀，放置3min→加0.5% NH2SO3NH4 1ml，摇匀，放置3min→再加0.1%萘乙二胺2ml，摇匀，放置20min。在550nm的波长处测定吸收度。

比色空白液:取酚红液1ml代替样品，其余操作与样品处理一致。

3、酚红的测定

取样品0.5ml置10ml带塞试管中，加0.2mol/L NaOH 5ml，摇匀，在555nm的波长处测定吸收度。

比色空白液：0.2mol/LNaOH

五、实验数据记录和处理

1、标曲回归方程：

SD ：y=0.0210x-0.0332(R2=0.9981)

酚红：y=0.0153x+0.0082(R2=0.9973)

2、SD和酚红样品浓度计算

计算结果如下表：

表 1 大鼠在体小肠吸收量的计算

取样时间（h）

SD 酚红供试液体积

ml

剩余药量X

（ug）

lnX abs 浓度ug/ml abs 浓度ug/ml

循环前20 20 75 1500 7.313

0 0.387 20.010 0.326 20.771 72.22 1444.992 7.276

0.25 0.380 19.676 0.354 22.601 66.76 1343.579 7.203

0.5 0.366 19.010 0.359 22.928 66.07 1315.555 7.182

0.75 0.354 18.438 0.351 22.405 67.87 1339.359 7.200

1 0.344 17.96

2 0.355 22.667 67.37 1325.705 7.190

1.25 0.333 17.438 0.368 23.516 65.19 1279.366 7.154

1.5 0.322 16.914 0.368 23.516 65.39 1274.777 7.151

1.75 0.311 16.390 0.372 23.778 64.87 1257.372 7.137

2 0.300 15.867 0.362 23.124 66.89 1280.04

3 7.155 lnX～t作图，得一条直线，作图如下：

图 1 大鼠在体小肠吸收后剩余药量对时间的曲线