流式细胞仪操作规程-SOP

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流式细胞仪操作规程

流式细胞仪操作规程流式细胞仪是一种用于单个细胞分析的高通量仪器，广泛应用于生物医学研究、药物开发和临床诊断等领域。

为了确保流式细胞仪的正常运行和准确结果的获取，需要制定一套规范的操作规程。

以下是流式细胞仪操作规程的一些基本要点：一、实验前准备：1.确保流式细胞仪处于稳定状态，并将其连接到电源并打开电源。

2.检查仪器的液氮箱和压力容器，确保液氮和气源充足。

3.准备实验所需的标本样品和相应试剂。

4.检查流束对齐和测量准备：校准激光、确定流速、检查流束质量控制。

二、流式细胞仪样品制备：1.使用无菌技术制备样品，并严格遵循相关操作规范。

2.样品的准备应考虑到细胞的数量和稳定性，避免细胞聚集、损伤或死亡。

3.样品的制备应注意避免氧化和污染的发生，以确保结果的准确性。

三、样品装载和分析：1.使用无菌技术将样品加载到流式细胞仪中，并确保样品注射器和管道清洁和无气泡。

2.对于多个样本的分析，应注意正确的样品顺序和识别，以避免混淆。

3.设置合适的仪器参数和测量条件，例如流速、激发和发射光源、滤光片设置和增益调节等。

4.开始样品分析之前，应进行负空白检测和仪器的系统背景校正。

5.开始实验后，密切观察结果窗口，并根据需要进行相应的数据记录和保存。

四、实验后操作：1.实验结束后，关闭流式细胞仪和相关辅助设备，并进行正常关机程序。

2.将仪器和试剂的残留物清洁干净，并按照相关操作规范进行废弃物的处理。

3.维护仪器的常规保养，例如清洁仪器表面、更换滤光片、标定仪器等。

4.及时记录和整理实验数据，并进行必要的数据分析和结果解释。

五、安全注意事项：1.在操作过程中，应遵守相关的生物安全和化学安全规范，例如穿戴好实验室服装、戴手套、戴眼镜等。

2.对于辐射性或有毒性样品的操作，应采取额外的防护措施，例如使用密封容器、穿戴防护服等。

3.在使用激光和其他高能源光源时，注意防护眼睛和暴露部位，避免直接观察激光光源。

总结：流式细胞仪是一种复杂的仪器，需要严格的操作规范来确保实验结果的准确性和数据的可靠性。

流式日常操作SOP

流式日常操作SOP标本处理1（kappa/lambda ckappa/clambda cIgM）育：加入2mlPBS，37°孵育5min，离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。

重复两次。

标本处理2（CD61 CD41a CD42b CD9 CD36）洗：加入2mlPBS，离心1050rpm （1300-1500）5min，弃上清，混匀细胞，重复两次。

细胞计数1 取2%冰醋酸190ul冰醋酸和10ul血在塑料管中混匀。

取10ul在计数板上。

2 计数时数上不数下，数左不数右。

3 加血量=1000*5/细胞计数（平时最大加160ul血）。

胞膜表面标记操作1 加样本2 加入3-5ul不同散射光谱荧光素标记的抗体，加PBS 0.5ml,充分混匀，置室温避光15min。

3 充分混匀细胞。

每管细胞中加入溶血素（1溶血素：9注射用水）2ml，（适量加，若加入后比较红则多加点，若液体比较清凉则少加点）置室温，避光10min。

4 离心1050（1300-1500）rpm 5min，弃上清，混匀细胞。

5 加入PBS 2ml ，离心1050rpm （1300-1500）5min ，弃上清，加0.5ml PBS后混匀，上机检测。

（如不太干净则过滤一下后再加3-5滴PBS以后上机）。

胞浆标记操作：BD破膜剂（AB液）（适用：KI-67 CyclinD1 TdT MPO c CD3 bcl-2 ZAP-70 c CD68 c IgM）1 按上述方法加膜标记抗体，孵育15min。

2 加100ul破膜剂A，室温避光孵育5min。

3充分混匀细胞，每管细胞中加入1*溶血素2ml，置室温，避光10min，离心1050（1300-1500）rpm，弃上清。

混匀细胞。

4 加入50ul破膜剂B，胞浆抗体，室温避光孵育15min。

5 充分混匀细胞，加2ml PBS 混匀，离心1050rpm（1300-1500）5min，弃上清，加0.5mlPBS 后混匀，待上机。

流式细胞仪操作流程(单标)

流式细胞仪操作流程(单标)一、开机(务必按照此顺序开机)1、打开下面的小门，推上电源2、打开插线板电源开关3、开电脑4、打开流式细胞仪开关二、软件准备1、打开软件2、点击菜单栏的Cytometer，待流式细胞仪与电脑自动连接后会自动出现startup 和shutdown选项，点击startup，系统提示按确定。

（等待5～6min startup 完成后再继续）2、在出现的Browser栏中依次选择new folder——new experiment——new specimen——new tubes，按照实验组数给new specimen编号，按照每一组实验试管数给new tubes 编号。

3、在右边显示屏中拽出Global sheet，点击Dot Plot绘制散点图，点击Histogram绘制直方图。

以FITC单标抗体为例，首先绘制FSC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图1），然后绘制以FITC-A为横坐标、SSC-A为纵坐标的散点图（图2），最后绘制以FITC-A为横坐标、count为纵坐标的直方图（图3）。

4、点击菜单栏中的populations，选择create statistics view。

三、上机操作1、将试管放置在流式细胞仪上，在左侧显示屏的Acquisition Dashboard中点击acquire data，此时流式细胞仪开始工作。

2、根据图1中细胞的位置，在Cytometer FACScanto 栏中的parameters标签中调节FSC和SSC的电压大小，使主群细胞在图1上处于居中的位置。

3、点击右侧显示屏的Polygon Gate按钮，在图1中选择要求测量的主群细胞，可见图1中出现P1，并且其中的细胞变成红色。

4、选择图2、图3，分别在左侧显示屏的Inspector-Dot Plot栏中点击P1的复选框，可见图2、3中的图象均变成红色，即要求细胞仪检测选定的细胞P1。

流式细胞仪操作规程SOP

流式细胞仪操作规程目录１:淋巴细胞亚群测定及绝对计数２:活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T得检测3:HLA-B２7测定4:CD55／CD5９测定5:干细胞检测与绝对计数６:白血病免疫分型测定7:淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFＮ—γ/IL－４测定8:细胞周期分析９:活化血小板检测１０:血小板抗体测定11:红细胞抗体测定１2:粒细胞抗体测定淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号:200 年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期: 年月日复审人:规程编写者:审批者:批准日期: 年月日文件分发部门与／或个人院档案室保管者:检验科主任:检验科实验室:淋巴细胞亚群测定方案(Protocｏl) １.选参数4色点击点击3色点击(命名,点击save) 2、画图结果此图为ＣD45圈门如果做绝对计数,则填写Flow-Count得浓度选中cｅｌl/ｕl即可方法流式细胞仪(BｅckmaｎCoulteｒ,贝克曼库尔特)原理:双／三色直接免疫荧光法、荧光素标记得各种单克隆抗体加入到全血中,与白细胞膜上相应得抗原结合,经过溶血、洗涤(与固定)等步骤后,在流式细胞仪上进行分析,从而得到相应各亚群得百分数。

活化淋巴细胞表面抗原为ＣD3+/CD25+与CD3＋/ＨLA—ＤR+、CD3+／CD45RＯ+就是记忆型Ｔ细胞、CD3+/CD45RA+就是纯真型T细胞、HLＡ-B２7测定点击点击键入文件名,点击Ｓavｅ2.画图结果１、positｉvｅ(+)X－Ｍean=１７、1 2.nｅgａｔｉve(—)X—Meaｎ=1.２X－Ｍeａｎ=５、8CＤ55/CD５9测定方案(Protｏcol)(同ＨLA—B2７)结果１、RBC: normal2。

ＲＢC: aｂnｏｒｍaｌ３。

WBC干细胞检测与绝对计数方案(Prｏtocol)同淋巴细胞亚群检测结果(Resｕlt)白血病免疫分型测定Ｔ细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL－4检测正常参考值Thｌ(IFN—γ):17、３9±5。

流式细胞术操作规程

流式细胞术操作规程流式细胞术是一种常用的细胞分析技术，它可以用来检测和分析细胞表面标记物、细胞数量、细胞分布等信息。

以下是一份流式细胞术操作规程，详细介绍了该技术的操作步骤和注意事项。

一、实验前准备1. 准备所需的实验材料，包括流式细胞仪、标记抗体、孵育培养基、样本组织、显微镜片等。

2. 检查流式细胞仪的功能是否正常，确认仪器能够正常运行。

3. 清洁实验台面，确保操作环境干净整洁。

4. 准备所需的试剂和溶液，如PBS缓冲液、抗体染色溶液等。

二、样本处理1. 准备样本组织，将其转移到离心管中，并添加适量的孵育培养基使其完全浸泡。

2. 使用离心机将样本离心，去除上清液。

3. 重悬样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。

4. 重复洗涤过程，直到样本完全洗净。

三、标记抗体染色1. 取出经过洗涤的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的标记抗体溶液。

2. 在黑暗条件下孵育样本，使其与标记抗体充分结合。

3. 静置反应15-30分钟，确保充分染色。

4. 在光线和温度适宜的条件下冰冻样本，避免抗体的结合。

5. 根据实验需求，可以选择单标记或多标记抗体。

四、样本准备1. 取出经过标记抗体染色的样本，将其转移到离心管中，并加入足够的PBS缓冲液进行洗涤。

2. 将样本离心并去除上清液。

3. 重悬样本，并根据实验需要加入适量的PBS缓冲液进行稀释。

4. 检查样本的细胞数目和活性是否符合实验要求，如有必要，可以使用显微镜进行观察和计数。

五、流式分析1. 打开流式细胞仪，并确认仪器的设置和参数是否符合实验要求。

2. 调整仪器的流速和灵敏度，使其适应样本的特性。

3. 将样本转移至流式细胞仪的样本管中。

4. 开始流式细胞分析，记录并保存实验数据。

5. 根据实验需要，可以进行不同的数据分析和处理，包括细胞分布、细胞数量、表面标记物的表达等。

六、实验后处理1. 关闭仪器，清洁工作台和操作区域。

2. 处理和储存实验数据，可以使用相应的图像科学软件进行数据处理和结果分析。

临床检验中心流式细胞仪实验室标准操作程序概要

临床检验中心流式细胞仪实验室标准操作程序概要简介本标准操作程序适用于临床检验中心流式细胞仪实验室，主要目的是规范操作流程，确保实验结果准确可靠。

实验前准备- 实验人员应先进行必要的文献调研并了解免疫荧光染色的原理和基本方法。

- 接受过正规培训的人员方可进行实验操作。

- 实验前，必须对仪器进行全面检查，确保仪器正常工作。

实验步骤1. 细胞样本制备- 取样前应先向患者或其家属进行必要的告知，并取得其同意。

- 根据实验设计和要求，采集适当数量、质量的细胞样本，并根据实验要求进行必要的处理。

- 对细胞样本进行细胞计数、质量检测等操作。

2. 细胞染色- 根据实验要求，选取适当的细胞染色试剂。

- 按照试剂说明书和操作要求进行操作。

3. 流式细胞仪实验操作- 操作人员应事先熟悉细胞仪的基本原理和操作步骤。

- 检测前，确定细胞浓度和待测指标。

- 按照细胞仪的设置要求进行操作，包括仪器开机、样本放置、参数设置、数据采集等。

- 操作完成后，关机并对细胞仪进行必要的维护和清洁操作。

数据分析和结果处理- 根据实验设计，选择适当的统计学方法进行数据分析。

- 结合实验结果和文献调研，得出结论。

- 保存实验结果和数据记录，并按要求撰写实验报告。

实验安全注意事项- 操作过程中必须戴手套、口罩等防护用品。

- 细胞样本和染色试剂应正确处理和存储，避免产生污染和交叉感染。

- 遵守实验室安全规定，保证操作安全。

结论本标准操作程序是临床检验中心流式细胞仪实验室实验操作的指导，规范操作流程和操作安全，是实验室科研工作中的重要保障。

流式细胞仪使用规范

流式细胞仪使用规范流式细胞仪（Flow Cytometer）是一种常用的细胞分析仪器，广泛应用于细胞学、免疫学、生物学、医学等领域。

流式细胞仪可以对细胞进行快速、准确的多参数分析，能够检测和分离不同细胞类型、测定细胞数量、评估细胞活性以及研究细胞表面标记物等。

为了保证流式细胞仪的正常使用，以下是一些流式细胞仪的使用规范和注意事项。

1.准备工作：a.检查仪器：确认仪器的状态，包括是否通电、通气、光源是否正常工作等。

b.清洁样品室：使用无菌纯水或适当的清洁剂擦拭样品室，确保没有杂物或污染物。

c.校准仪器：根据仪器规定进行标定和校准，确保仪器的准确性和稳定性。

2.样品准备：a.细胞处理：合理处理样品，保证单细胞悬浮状态。

可以通过胰酶消化、筛选等方法获取单细胞悬浮液。

b.细胞计数：使用合适的细胞计数仪进行细胞计数，计算出所需的细胞悬浮液浓度。

c.细胞染色：根据实验需求对样品进行适当的荧光染色或抗体标记，以便在流式细胞仪中检测和分析。

3.流式细胞仪操作：a.设置参数：根据实验设计和研究目的，设置合适的仪器参数，包括激光器选择、激发波长、检测波长、门控设置等。

b.样品加载：将样品注入流式细胞仪样品室，避免气泡的产生，并确保样品完整进入样品室。

c.数据采集：开始数据采集前，进行流式细胞仪的标定、峰位校正和峰间校正，以保证数据的准确性和可靠性。

d.数据分析：对采集到的数据进行分析和解读，根据实验要求选取合适的分析策略和软件进行数据处理。

4.清洁和保养：a.实验后清洁：实验结束后，及时清洁仪器，避免样品残留和交叉污染。

b.仪器维护：定期检查仪器的部件和附件，保证其正常工作。

如需要更换部件或常规维护，请按照厂家指南进行操作。

c.长时间停用：如果流式细胞仪长时间不使用，应按照厂家指南进行仪器的合理关闭和长期存储。

5.安全注意事项：a.避免直接接触激光线：在进行样品加载和设置参数时，避免接触激光线以避免损伤眼睛。

b.使用无菌操作：在样品加载和处理过程中，使用无菌操作和材料，避免细菌污染和交叉感染。

流式细胞仪使用规程

流式细胞仪使用程序1.目的规范流式细胞仪的相关使用操作、以及维护操作。

2.适用范围适用于本实验室使用流式细胞仪。

3.职责操作人员应熟练掌握并自觉遵守本标准操作程序。

如需获得更多信息，请参阅该仪器用户手册。

4.支持性文件流式细胞仪使用说明书。

5.操作规程5.1仪器开/关机程序5.1.1开机程序5.1.1.1 检查仪器鞘液桶和废液桶。

5.1.1.2 打开流式细胞仪。

5.1.1.3 气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

5.1.1.4 打开电脑。

5.1.1.5 等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

5.1.2关机程序5.1.2.1 用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

5.1.2.2 将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

5.1.2.3 将样品换成蒸馏水重复1-2步。

5.1.2.4 放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

5.1.2.5 选择Standby模式10分钟。

5.1.2.6 关闭电脑，再关掉仪器。

5.2仪器校验和分析参数设置程序（FACSComp操作程序）5.2.1CaliBRITE Beads 的准备5.2.1.1 在装有1ml鞘液的FALCON管加一滴充分混匀CaliBRITE Beads，并标上unlabeled；若配有双激光做四色，则须在unlabeled管中再加一滴APC-beads；5.2.1.2 在另一装有3ml鞘液的FALCON管加入unlabeled-、FITC-、PE-、PerCP-、和APC-beads（若做四色）各一滴，混匀，在管壁上标上mixed（PerCP不很稳定，最好在上机前加入）；5.2.1.3 避光放置，准备上机。

5.2.2软件环境的设置5.2.2.1 从苹果菜单进入，选择FACSComp软件；5.2.2.2 在Sign In视窗中填入下列信息：操作者、机构、实验室主任（操作者是必须填入的，计算机将保存这些信息），点击Accept；5.2.2.3 进入Set Up视窗，在Assay Selection中，选择你需要的Assay：Lyse/Wash、Lyse/No Wash或HLA-B27 Calib；在CaliBRITE Beads Lot Ids中，根据每一种beads所对应的编码输入Lot ID；在Automatic Saving Options中，你可以选择自动保存或不保存Summary Report，你可以通过单击Location来更改文件名以及保存的位置；最后在Set Up视窗的右下角点击Run。

流式细胞仪操作规程

流式仪操作规程
1. 首次操作时务必在负责人的指导下进行。

2. 操作前需检查所有瓶中的液体，鞘液桶补满超纯水（2L），废液桶倒空，清洗液和消毒液不是空的。

3. 清洗液和消毒液配置方法：清洗液为1% BD FACS Cleaning solution(原液为10%，即稀释十倍使用)，消毒液为BD detergent solution concentrate。

4. 开机前，确保样品支架上放置的EP管内至少装500uL ddH2O。

5. 仪器启动期间，软件界面上仪器当前状态会显示黄色的灯，该过程中仪器会用鞘液冲洗液流管路，持续大约13分钟，直到显示绿灯表示仪器和软件连接完成。

6. 根据实验设计选择软件选项，进行上样。

7. 上样完毕后，用SIP程序清洗进样针，根据提示先上2ml 1% FACS Clean，再上2ml ddH2O。

8. 保证清洗液和消毒液的量，在进样针上放2ml ddH2O，轻触（不能超过3秒）仪器上电源键，仪器自动运行13min cleaning the fluidics程序后自动关机。

9. 清理桌面，写好仪器使用记录。

10.将房间卫生整顿好，垃圾带出实验室，负责人检查后方可离开。

流式细胞仪使用方法说明书

流式细胞仪使用方法说明书1. 概述流式细胞仪是一种用于细胞分析和排序的先进仪器。

本方法说明书旨在向用户介绍如何正确操作流式细胞仪以及最佳的使用方法。

请用户在使用前仔细阅读本说明书并遵循相关的安全操作规程。

2. 仪器组成流式细胞仪主要由以下几个组成部分构成：- 流体传送系统：用于将样本引入仪器并排除废弃物。

- 激光系统：产生激光束以激发样本中的荧光染料。

- 光学系统：收集样本产生的荧光信号并进行检测。

- 数据分析系统：用于解析和分析收集到的数据。

3. 使用准备在进行流式细胞仪实验之前，请确保以下几个步骤已经完成：- 仪器校准：根据仪器的使用手册进行仪器校准，确保仪器工作在最佳状态。

- 样本准备：按照实验需求，对待测样本进行合适的处理，例如细胞培养、染色等。

- 试剂准备：准备好所需的荧光染料、缓冲液等试剂。

4. 仪器操作以下是流式细胞仪的一般操作步骤：- 打开仪器电源，并等待仪器启动完成。

- 将样本装入合适的样本管，并在样本管中加入适量的荧光染料或其他试剂。

- 将样本管放入仪器中的样本槽，并调整流速和其他参数。

- 启动激光系统，并调整激光强度和波长以适应实验需求。

- 开始数据采集，根据仪器界面指示收集所需数据。

- 数据分析：根据实验需要，使用相应的数据分析软件对采集到的数据进行解析和处理。

5. 安全注意事项在使用流式细胞仪时，务必注意以下安全事项：- 佩戴个人防护装备，包括实验手套和护目镜。

- 遵循实验室的生物安全规程，确保样本处理符合相关的安全要求。

- 避免直接暴露于激光束下，以免损伤眼睛和皮肤。

- 在清洁仪器时使用合适的溶剂，并按照仪器清洁的标准程序进行操作。

6. 故障排除在实际操作中，有时可能会遇到仪器故障或其他问题。

以下是一些常见问题及其排除方法：- 仪器无法启动: 检查电源连接是否正常，重启仪器。

- 数据质量差: 检查样本制备和染色的质量，调整参数和仪器校准。

- 清洗困难: 检查是否有阻塞，按照清洁程序进行清洗。

流式细胞仪操作规程-SOP

WORD格式流式细胞仪操作规程目录1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测3：HLA-B27测定4：CD55／CD59测定5：干细胞检测和绝对计数6：白血病免疫分型测定7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析9：活化血小板检测10：血小板抗体测定11：红细胞抗体测定12：粒细胞抗体测定WORD格式淋巴细胞亚群测定(流式细胞仪)医院检验科操作规程文件号：200年月日起实施第1版(共3页)本规程每2年复审一次复审日期：年月日复审人：规程编写者：审批者：批准日期：年月日文件分发部门和／或个人院档案室保管者：检验科主任：检验科实验室：淋巴细胞亚群测定方法流式细胞仪(BeckmanCoulter，贝克曼库尔特)原理：双/三色/四色直接免疫荧光法。

荧光素标记的各种单克隆抗体加入到全血中，与白细胞膜上相应的抗原结合，经过溶血、洗涤（和固定）等步骤后，在流式细胞仪上进行分析，从而得到淋巴细胞亚群的百分数，加入Flow-Count即可得出绝对计数。

淋巴细胞表面抗原分布如下：T淋巴细胞：CD3+；B淋巴细胞：CD3-，CDl9+；辅助性T淋巴细胞：CD3+CD4；+抑制性T淋巴细胞：CD3+CD8；+NK细胞：CD3-CDl6+56+等。

根据淋巴细胞膜上CD分子表达的不同，流式细胞仪可以分辨出淋巴细胞及其各种不同的亚群，利用计算机软件计算出淋巴细胞亚群的百分数，加入Flow-Count组会自动得出绝对计数。

标本采集与处理受检者的准备检查对象生活饮食处于日常状态。

采集部位静脉采血抗凝剂EDTA或肝素抗凝血要求1．样本量1ml。

2．样本应在采集后6小时内处理，冷冻或溶血的标本不能用。

3．样本白细胞计数应在4.0-10.0×109/L之间。

若>10.0×109/L，样本需要稀释，用PBS稀释；若<4.0×109/L，应分离单个核细胞。

流式细胞仪安全操作及保养规程

流式细胞仪安全操作及保养规程1. 前言流式细胞仪是一种高端的生命分析仪器，广泛应用于医学、化学、生物学等领域，已经成为现代实验室不可或缺的仪器之一。

然而，流式细胞仪的操作较为复杂，使用过程中需要注意许多安全问题，否则会对自身和实验室环境造成潜在的危害。

为了确保流式细胞仪的正常、安全使用，特制定以下操作及保养规程。

2. 流式细胞仪操作规程2.1 准备工作在使用流式细胞仪前，应注意以下准备工作：2.1.1 带上个人防护装备在使用流式细胞仪时，需要带上一定的个人防护装备，如实验手套、口罩、眼镜等，以防范样本物质对自身的伤害。

2.1.2 样品制备精确地制备样品是获得准确、可重复的流式细胞仪数据的关键。

在制备样品时，需要注意以下事项：•样品应洁净，纯度高；•样品应稀释至适合的浓度；•样品需要避免暴露在光线下。

2.1.3 流式细胞仪清洁使用流式细胞仪前，应将设备清洗并按照操作手册正确设置。

注意声音警报器和信号灯的功效。

2.2 实验操作2.2.1 启动流式细胞仪启动流式细胞仪的前提条件是样品审核通过、清洁完毕并符合清洁过程中设定的安全警戒线。

按照以下操作步骤进行启动：1.将流式细胞仪插头插入电源插座；2.打开流式细胞仪前面板上的电源开关；3.检查设备是否能够正常通电；4.检查设备上的液晶屏是否正常显示。

2.2.2 样品操作样品操作是流式细胞仪的核心，需要遵循以下步骤：1.打开样品架门；2.将样品检测管放在样品架上，注意是否正确安装；3.关上样品架门，并设置喷雾器；4.按下样品检测管的开关，将样品进入流式细胞仪；5.启动流式细胞仪，进行检测。

2.2.3 关闭流式细胞仪实验室操作完毕后，需要及时关闭流式细胞仪，避免发生紧急事故。

按照以下步骤进行：1.关闭流式细胞仪喷雾器；2.将样品架门打开，取出检测管；3.关闭前面板的电源开关；4.拔出插头，关闭电源。

2.3 安全注意事项在实验操作中，需要注意以下安全事项：•在操作流式细胞仪前，应认真阅读使用说明书和操作手册。

《流式细胞术操作规程》

《流式细胞术操作规程》一、操作准备1.准备所需材料和试剂：包括流式细胞仪、标记抗体、细胞悬液、PBS缓冲液、显微镜玻片、培养基等。

2.检查仪器：确保流式细胞仪各项功能正常，包括激光、光电倍增管等。

3.样本处理：根据实验需要，选择适当的细胞处理方法，如细胞孵育、酶解消化等，确保获取到高质量的细胞悬液。

二、细胞标记1.标记抗体的选择：根据实验需求，选择适当的标记抗体，包括单抗、荧光染料、生物素等。

2.细胞标记试剂的制备：根据实验方案，将标记抗体按照要求的浓度进行稀释，制备成相应的标记试剂。

3.细胞标记操作：将所需细胞悬液分散在适量的PBS缓冲液中，加入标记试剂，轻轻摇晃混合，静置于室温下孵育一段时间，使标记抗体与细胞表面结合。

三、流式细胞术操作1.调整流式细胞仪参数：根据实验需求，设置细胞悬液的流速、激光功率、波长和光电倍增管放大倍数等参数。

2.流式细胞术管套的准备：取一个净化过的管套，用流式细胞术管套清洁剂反复洗涤，然后用蒸馏水清洗，最后用细胞稀释液冲洗一遍。

3.样本装入：将已标记好的细胞悬液加入清洗过的流式细胞术管套中，再用细胞稀释液冲洗一下，确保样本进入流式细胞仪前不会发生凝集或沉淀。

4.样本检测：将样本放入流式细胞仪中，启动仪器开始检测。

通过选择适当的波长和参数，记录并分析细胞的标记情况，如荧光强度、细胞计数、细胞大小等。

5.数据分析：根据实验需求，使用相关软件对所得的数据进行处理和分析，生成数据图表和归纳、总结实验结果。

四、实验结束与清洁1.实验结束：在完成实验后，将仪器设置恢复到初始状态，关闭仪器和电源，清理工作台和废弃物。

2.仪器清洁：使用适当的清洗剂和纯水，清洁仪器内部和外部的各个部分，如样品流路、流式细胞仪的探头等，确保仪器干净整洁。

3.数据保存：将实验所得数据保存到与实验相关的记录文件夹中，以备后续数据分析和验证。

以上是流式细胞术的操作规程。

在进行实验前，要确保仪器的正常运行和合适的细胞标记试剂的选择，严格按照操作规程进行操作，保证实验的顺利进行和数据的准确性。

流式细胞仪的日常操作规范

流式细胞仪的日常操作规范
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流式细胞仪的日常操作规范
一、仪器开/关机程序
1、开机程序
检查仪器鞘液桶和废液桶。

打开流式细胞仪。

气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

打开电脑。

等待机器预热5—10分钟后可开始实验。

2、关机程序
用4ml10%漂白剂作样品，将样品支撑架置于旁位，以外管吸入2ml。

将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml。

将样品换成蒸馏水重复1-2步。

放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

选择Standby模式10分钟。

关闭电脑，再关掉仪器。

二、维护保养
1、每日保养
用蒸馏水作样品，将样品支架支撑置于旁路，以外管吸入2ml
将样品支撑架置于中位，以HI RUN 5分钟，使内管吸入2ml.
选择Standby模式10分钟。

关闭电脑，再关掉仪器。

2、每月保养
将10%漂白剂装入鞘液桶。

旁路鞘液过滤器,以防损害。

将盛有3ml10%漂白剂的试管置于样品支架上,以HI RUN 20-30分钟。

将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤。

流式细胞仪标准操作规程

流式细胞仪标准操作规程××医院检验科临床免疫室作业指导书文件编号：××-JYK-MY-×××版本：生效日期：共页第页1.目的建立规范标准的××型流式细胞仪操作程序确保流式细胞检测结果准确可靠2.仪器名称及型号××（品牌）××（型号）流式细胞仪。

3.应用范围适用于免疫组经授权的检验技术人员。

4.仪器简介和测试原理流式细胞仪可同时进行多参数测量，信息主要来自特异性荧光信号及非荧光散射信号，工作在测量区进行。

所谓测量区就是照射激光束和喷出喷孔的液流束垂直相交点。

液流中央的单个细胞通过测量区时，受到激光照射会向立体角为2x的整个空间散射光线，散射光的波长和入射光的波长相同。

散射光的强度及其空间分布与细胞的大小、形态、质膜和细胞内部结构密切相关，因为这些生物学参数又和细胞对光线的反射、折射等光学特性有关。

未遭受任何损坏的细胞对光线都具有特征性的散射，因此可利用不同的散射光信号对不经染色活细胞进行分析和分选。

经过固定的和染色处理的细胞由于光学性质的改变，其散射光信号当然不同于活细胞。

散射光不仅与作为散射中心的细胞的参数相关，还跟散射角及收集散射光线的立体角等非生物因素有关。

因此流式细胞仪综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、细胞化学等各门学科。

5.开展项目包括：常规免疫功能检测、细胞周期检测、细胞凋亡检测、免疫细胞分型、造血干细胞检6.仪器环境要求无尘、通风良好的环境，无直接日照。

温度：18～25℃，温度的改变应该<2℃/h。

室内湿度：30%～80%。

7.操作规程7.1·设备每日开机程序：开启稳压电源、变压器，打开流式细胞仪电源。

开启其他周边配备电源，如打印机，开启计算机。

确认鞘液筒有八分满，废液桶近似空的，桶盖是旋紧的；所有管线及管路装置连接通畅，无扭曲、折叠。

流式细胞仪操作规程-SOP

流式细胞仪操作规程目录
1：淋巴细胞亚群测定及绝对计数
2：活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的检测
3：HLA-B27测定
4：CD55／CD59测定
5：干细胞检测和绝对计数
6：白血病免疫分型测定
7：淋巴细胞T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4测定8：细胞周期分析
9：活化血小板检测
10：血小板抗体测定
11：红细胞抗体测定
12：粒细胞抗体测定
淋巴细胞亚群测定
(流式细胞仪)
医院检验科
操作规程文件号：
200 年月日起实施
第1版
(共3页)
本规程每2年复审一次
复审日期：年月日
复审人：
规程编写者：
审批者：
批准日期：年月日
文件分发部门和／或个人
院档案室保管者：
检验科主任：
检验科实验室：
淋巴细胞亚群测定
点击
点击
3色
点击
（命名，点击save）画图
此图为CD45圈门
填写Flow-Count的浓度
活化淋巴细胞亚群、记忆T及纯真T的测定
HLA-B27测定
点击
点击
X-Mean=17.1 negative(-)
X-Mean=1.2 X-Mean=5.8
CD55/CD59测定
2.RBC: abnormal
干细胞检测和绝对计数
白血病免疫分型测定
T细胞亚群细胞内因子IFN-γ/IL-4检测
细胞周期分析
2.画图
血小板膜表面抗体测定
红细胞膜蛋白结构测定（红细胞抗体）
粒细胞抗体测定。

流式细胞仪SOP

一. 流式细胞术概述流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。

它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。

在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。

国内使用的流式细胞仪主要由美国BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)两个厂家生产。

流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。

BECKMAN-COULTER 公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL,BD公司最新产品为FACS Vantage 和FACS Calibur。

EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能,•多用于科学研究。

二.流式细胞仪主要技术指标1．流式细胞仪的分析速度：一般流式细胞仪每秒检测1000～5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。

2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。

3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到～0.5μm。

4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。

5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。

BDFACSCalibur流式细胞术标准操作规程

BD FACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序目的：规范BDFACSCalibur流式细胞仪操作与维护程序，正确使用设备，保证实验顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。

适用范围：本规程适用于BD FACSCalibur流式细胞仪的使用操作。

责任者：操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。

保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。

科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。

内容：1.每日开机程序1.1在气压阀减压的状态下检查鞘液桶，确认：1.1.1鞘液充满状态，约3L1.1.2盖紧盖子1.1.3安上金属挡板1.1.4管路畅通，无扭曲1.2.检查废液桶，确认：1.2.1废液桶充满400ml漂白剂1.2.2管路畅通，无扭曲1.3打开流式细胞仪。

1.4打开电脑。

1.5气压阀置于加压位置，并排除管路中气泡。

1.6做Prime。

1.7等待机器预热5~10分钟后可开始试验。

2.每日关机程序2.1用3mlFACSCIean洗液加入样品管中上样，将样品支撑架置于旁位，以外套管吸入1ml。

2.2将样品支撑架置于中位，以HI RUN运行10分钟，使内管吸入约1ml。

2.3将样品管换成蒸馏水重复1-2步。

2.4放置盛有1ml蒸馏水的试管于样品支撑架上。

2.5选择Standby模式10分钟，将激光冷却后可关掉主机。

2.6退出所有应用软件，关闭电脑。

2.7将流式细胞仪的压力阀置于减压状态。

3.每月维护程序3.1将FACSClean洗液1~2L装入鞘液桶。

3.2旁路鞘液过滤器（过滤器上的快速接口从SANLINEFILTER端断开，将鞘液白色管路液路取下联到SANLINE FILTER 端口），以防伤害。

3.3将盛有3ml FACSClean 洗液的试管置于样品支架上，以HI RUN 30 分钟。

3.4将鞘液和样品换成蒸馏水重复步骤3，以HI RUN 60 分钟。

3.5将鞘液桶装满鞘液，恢复过滤器。

流式细胞仪操作规程

流式细胞仪操作规程一、开机程序1、检查稳压器电源，打开电源，稳定 5 分钟。

2、打开储液箱，倒掉废液, 并在废液桶中加入 400ml 漂白水原液。

打开压力阀，取出鞘液桶，将鞘液桶加至 4/5 满（一般可用超纯水，特殊情况需要用PBS），合上压力阀。

确实盖紧桶盖，检查所有管路是否妥善安置。

3、将 FACSCalibur 开关打开，此时仪器功能控制钮的显示应是 STANDBY，预热 5－10 分钟。

排出过滤器内的气泡。

4、如果需要打印，打开打印机电源。

5、打开电脑,等待屏幕显示出标准的苹果标志。

6、执行仪器 PRIME 功能一次，以排除 Flow cell 中的气泡。

7、分析样品时，先用 FACAFlow 或 PBS 进行 HIGH RUN 约 2 分钟，以去除可能的管路残片。

二．预设获取模式文件(Acquisition Template Files)1、从苹果标志中选择 CELLQuest，建一个新视窗，可利用此视窗编辑一个获取模式文件。

2、选取屏幕左列绘图工具中的 Dot plot，绘出一个或多个 Dot Plots（点图）。

从 Dot Plot 对话框中选取 Acquisition 作为图形资料来源，并确定适当的 x 轴和 y 轴参数。

3、选取屏幕左列绘图工具中的 Histogram，同上法可绘出 Histogram（直方图）。

4、将此视窗命名后储存于 FACStation G3\BD Applications \CELLQuest Folder\EXP 文件夹中（也可以自己取名，但每个实验人员只能建立一个文件夹），下次进行相同实验时可直接调用。

三．用 CELLQuest 进行仪器的设定和调整1、从苹果画面中选取 CELLQuest，进入 CELLQuest 后在 File 指令栏中打开合适的获取模式文件。

2、从屏幕上方 Acquire 指令栏中，选取 Connect to Cytometer（快捷键：＋B）进行电脑和仪器的连机。

流式细胞术标准操作规程,1200字

流式细胞术标准操作规程流式细胞术（Flow Cytometry）是一种常用的细胞学研究技术，广泛应用于细胞表型分析、细胞分选、免疫学研究等领域。

为了确保流式细胞术的准确性和可靠性，需要遵循一系列的标准操作规程。

1. 实验前准备- 确保流式细胞仪、计算机和相关设备正常工作，包括保证激光器、光学系统等的正常运行。

- 确保光谱校准及标定的准确性，包括日常监测仪器的性能、定期校准补偿参数等。

- 准备所需试剂和标记抗体，确保其质量良好并符合实验要求。

2. 样本处理- 根据实验目的选择合适的细胞来源和取样方式，并保持细胞的完整性及活性。

- 根据细胞类型和实验需要选择适当的预处理方法，如细胞固定、细胞膜穿透等。

- 对于固定样本，要避免过度固定和过度穿透，以免影响细胞染色和光学性能。

3. 样品标记- 预先优化标记抗体的浓度和反应时间，确保准确的抗原检测和最大的靶向效率。

- 避免标记抗体和细胞表面抗原的非特异性结合，应加入相应的负对照组和等位控制。

- 合理选择荧光染料和标记方法，避免光谱重叠和串扰，以确保标记物的准确检测。

4. 流式细胞仪调试及仪器设置- 根据样本类型和实验需求，选择适当的仪器设置，包括选择合适的激光器、滤光片和检测参数等。

- 对于多色染色，进行补偿设置以消除光谱重叠和仪器漂移带来的影响。

- 定期校准和检验仪器的参数，确保仪器性能和数据稳定性。

5. 流式细胞术操作- 严格控制实验要求的温度、湿度和光照等环境条件，避免对细胞和染料的影响。

- 合理设置流速和事件采集数目，以确保准确且充分的样本分析。

- 避免空管事件和双重事件的发生，及时清理堵塞和冲洗流式细胞仪采集管路。

- 对于稀有事件和低频事件，需要增加采集数目和合理的补偿设置，以提高检测敏感性。

- 及时保存数据和相应的控制实验数据，以备后续数据分析和结果验证。

6. 数据分析和结果解释- 使用专业的流式细胞术分析软件进行数据处理和结果分析。

- 对于多色染色，应进行合理的补偿和背景校正，确保数据的准确性和可靠性。