多糖的超声波提取

1多糖的超声波提取
将干燥过的豆粉碎过40目筛，用滤纸包成圆柱形，中加入3倍体积的石油醚，用索氏抽提装置脱脂4h ， 干燥后加入3倍体积分数为9 5 ％乙醇浸泡2天，每天换2次乙醇。

抽滤，以除去生物碱、低聚糖、挥发油等小分子物质。

自然（冷冻）干燥后备用。

称取5.0g 预处理过的豆粉，水复溶后按试验设定的条件进行超声波提取，将提取液离心(3000r/min,15min)，沉淀物按照同样的提取条件重复提取2次，合并上清液进行旋转蒸发浓缩。

向浓缩液加入Sevag 试剂去蛋白后加入3倍体积的95％乙醇，于4℃冷藏柜中静置过夜，离心(4000r/min,10min)得沉淀，依次用乙醇、丙酮，乙醚反复洗涤3次，真空冷冻干燥，得多糖粗提物。

2葡萄糖标准曲线的绘制
精确称取经105℃干燥至质量恒定的葡萄糖标准样品50.15mg ，用蒸馏水溶解并定溶于50mL 容量瓶，配制成质量浓度为1.003mg ／mL 的葡萄糖标准溶液。

依次吸取0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0mL 葡萄糖标准液于100mL 容量瓶中并加蒸馏水定容摇匀备用。

然后精确移取上述各溶液2mL 置于具塞刻度试管中，各加入5％苯酚溶液1.0mL 和浓硫酸5mL ，充分混匀，室温静置30min ，于波长490nm 处测定吸光度。

0号管为空白对照，以葡萄糖质量浓度为纵坐标，吸光度为横坐标绘制标准曲线。

3多糖得率计算
将粗多糖溶解并稀释至适当质量浓度，移取1.0mL 粗多糖样品液按2方法操作，于490nm 处测定其吸光度，重复3次，取平均值。

按以下公式计算多糖得率。

100n %/0⨯⨯⨯⨯=V m V C 状元豆多糖得率
式中：C 为提取的样品液多糖的质量浓度（mg ／mL ）；V 0 为样品液的总体积/mL ；n 为稀释倍数；V 为样品测定液的体积/mL ；m 为称取的预处理豆粉的质量/g 。