细胞培养的基本条件
细胞培养所需的条件
细胞培养所需的条件1. 细胞培养得有个合适的温度呀，就像人得待在舒服的环境里一样。
你想想，要是把你放在极冷或极热的地方，你能好受吗？细胞也是一样的呀！比如培养箱的温度就得设置好。
2. 培养基那可是细胞的“美食”呀，这可太重要了！你吃饭得吃合口味有营养的吧，细胞也需要特定的培养基呀！像给细胞提供了它们最爱的“大餐”。
3. 无菌环境那是必须的呀，这就好比我们生活在干净整洁的家里。
要是周围脏兮兮的，到处都是细菌，细胞还能好好生长吗？比如说在操作细胞时得严格无菌操作。
4. 细胞也需要“呼吸”的呀，气体环境很关键呢！这不就跟我们需要新鲜空气一样嘛。
像二氧化碳的浓度就得控制好呀。
5. 细胞培养还得有合适的容器呀，总不能让它们“流离失所”吧！就像人得有个安稳的住所一样。
比如各种培养瓶、培养皿就得选对。
6. 细胞也怕“孤单”呀，合适的细胞密度很重要呢！你一个人太孤单了也会不开心吧，细胞也是呀！像接种细胞时就得注意密度哦。
7. 酸碱度对细胞来说也很关键呀，这就好像我们洗澡水的温度，不合适就难受呀！比如要时刻监测培养基的酸碱度呢。
8. 细胞培养还得经常观察呀，就像你关心你的朋友一样。
要是不看着点，出了问题都不知道呢！像每天都得去看看细胞的状态。
9. 稳定的环境也不能少呀，不能一会儿这样一会儿那样的。
这跟我们需要稳定的生活是一个道理呀！比如说不能随意改变细胞培养的条件。
10. 耐心和细心那是必须的呀，培养细胞可不是件容易的事呢！这就像照顾小宝宝一样，得用心呀！比如在整个过程中都得认真对待。
我的观点结论：细胞培养需要多方面的条件配合，每个条件都至关重要，只有用心去做好每一个细节，才能让细胞健康生长。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1. 细胞培养呀，那环境可太重要啦！就好比人得住在舒服的房子里一样，细胞也需要一个适宜的“家”。
比如说培养箱，温度、湿度都得恰到好处，不然细胞怎么能茁壮成长呢？2. 培养基啊，这可是细胞的“食物”呀！你想想看，要是我们吃的东西不好，能有精神吗？细胞也一样啊！优质的培养基能让细胞活力满满。
就像给宝宝喝最好的奶粉一样重要呢！3. 细胞培养还得注意无菌操作呢！这可不能马虎，就像我们要保持家里干净整洁，不能有细菌滋生。
要是不小心污染了，那可就糟糕啦，细胞可能就全军覆没喽！4. 血清也是很关键的呀！它就像是细胞的“补品”。
你看那些身体虚弱的人需要补一补，细胞也需要血清来补充营养呀。
没有合适的血清，细胞怎么能好好生长呢？5. 传代培养也很有讲究呢！不能随便乱来。
这就好比我们要定期整理房间，把东西归置好。
细胞也需要适时地进行传代，不然它们会太拥挤啦。
6. 培养容器也不能选错呀！这就好像给细胞准备不同大小的碗碟，得合适才行。
合适的培养容器能让细胞舒舒服服地待着。
7. 细胞培养的过程中要经常观察呀！就像妈妈时刻关注宝宝的状态一样。
看看细胞长得怎么样，有没有什么问题，及时发现才能及时解决嘛！8. 培养的时间也得把握好哦！不能太短也不能太长。
这就跟做饭似的，火候掌握不好，饭菜就不好吃。
细胞培养也是这个道理呀。
9. 细胞培养的人得细心又耐心呀！这可不是个简单的活儿。
就像照顾花花草草一样，得精心呵护，它们才能绽放美丽。
细胞也是需要我们用心对待的哟！10. 总之，细胞培养的基本条件一个都不能少！这就像是搭积木，每一块都很重要，少了哪一块都不行。
只有把这些条件都做好了，细胞才能健康生长呀！我的观点结论：细胞培养需要各个方面的精心照料，只有满足了基本条件，细胞才能顺利培养成功。
细胞培养注意事项大全
细胞培养注意事项大全一、细胞培养实验室的基本要求细胞培养实验室必须具备以下设施和基本条件，以确保实验的准确性和可靠性，同时为研究人员提供一个安全、舒适的工作环境。
1.实验室布局：实验室应合理布局，功能明确，便于清洁和消毒。
室内布局包括细胞培养区、仪器设备区、试剂储存区、清洗区、办公区等。
各区域应相对独立，避免交叉污染。
2.实验室温度和湿度：实验室应保持恒定的温度和湿度，通常温度为20-26℃，湿度为40%-60%。
3.空气洁净度：细胞培养对空气洁净度要求较高，建议配备高效空气过滤器（HEPA），确保室内空气洁净。
4.光照和空气流通：实验室应有良好的自然光照或人工照明，同时具备良好的空气流通性。
5.电源和插座：实验室应提供稳定的电源和充足的插座，以满足各种仪器设备的需要。
6.实验台和储存柜：实验台应具备防震、防腐、防火等功能，储存柜应具备防潮、防尘、防霉等功能。
7.清洁和消毒设施：实验室应配备适当的清洁和消毒设施，如紫外线灯、酒精灯、灭菌器等。
8.防护设备：实验员应佩戴防护设备，如实验服、一次性手套、口罩等，以防止细胞培养过程中的污染和交叉污染。
二、细胞培养的基本操作细胞培养是一项技术性很强的工作，需要掌握各种基本操作技能，以保证实验的准确性和可靠性。
以下是细胞培养的一些基本操作。
1.细胞复苏：将冷冻保存的细胞从液氮中取出，迅速放入37℃水浴中融化，然后离心洗涤、消化，最后加入新鲜的细胞培养基中。
2.细胞传代：当细胞密度达到一定程度时，将细胞从培养瓶中取出，消化成单个细胞，然后分种到新的培养瓶中继续培养。
3.细胞冻存：将处于对数生长期的细胞消化成单个细胞，然后与冷冻保护剂混合后放入低温冰箱中冷冻保存。
4.细胞观察：定期观察细胞的生长状况，包括生长速度、形态、颜色等方面。
5.细胞计数：通过显微镜或细胞计数仪对细胞数量进行计数，以评估细胞的生长速度和密度。
6.细胞分离：根据细胞的密度、大小、表面电荷等特性，通过离心、过滤等方法将不同细胞分离出来。
动物细胞的培养条件和培养基
• 2、合成培养基：优点是成分明确，组分稳定，可 大量生产供应。动物细胞培养中常用的有BME、 MEM、DMEM、HAM F12、RPMI 1640以及 ISOCOV、199和McCoy等。
• 缺点：无法替代一些未知成分。 • 解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补
的胎牛血清。
• 血清的作用机制可能为：（1）提供有利于细胞生 长增殖所需要的各种生长因子和激素；（2）提供 有利于细胞贴壁所需要的贴附因子和伸展因子； （3）提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结 合蛋白；（4）提供细胞生长所必须的脂肪酸和微 量元素。
• 3、无血清培养基
• 无血清培养基的优点如下：①提高了细胞培养的可 重复性，避免，避免了由于血清批之间差异的影响； ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生 物污染的危险；③供应充足、稳定；
动物细胞的培养条件和培养基
• 为了使细胞培养在体外培养成功，需要一些 基本条件：
（1）绝对无菌操作； （2）足够的营养供应，排除有害物质包括极其
微量的离子掺入； （3）适量氧气供应；
（4）随时清除细胞代谢中产生的有害产物； （5）有良好的适于生存外界环境，包括pH、渗透
压和离子浓度等； （6）及时分种，保持合适的细胞密度。
6、空气
二、动物细胞培养基的 种类和组成
• 细胞种系不同对培养基的要求亦有差异，主要 有三类：天然培养基、合成培养基和无血清培 养基。 1、天然培养基：在细胞培养的早期阶段使用的 培养基，主要为来自天然的材料如血浆凝块、 血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
• 优点：营养价值高 • 缺点：成分复杂、来源有限、成本较高
细胞培养技术培训ppt课件版
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
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严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
见的是贴附于平面支持物细胞。在一般光镜下 生存中的细胞是均质而透明的，结构不明显。
细胞在生长期常有1-2个核仁，在细胞机能 状态不良时，细胞轮廓会增强，反差增大。
若胞质中时而出现颗粒、脱滴和腔泡等， 表明细胞代谢不良。
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
倒 置 显 微 镜
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
液 氮 罐
back
严格执行突发事件上报制度、校外活 动报批 制度等 相关规 章制度 。做到 及时发 现、制 止、汇 报并处 理各类 违纪行 为或突 发事件 。
21.细胞培养的基本条件
移液器
顯微鏡
酶标仪
微孔板震荡器
高速离心机
液氮罐
实验室安全
层流净化细胞培养室管理规则 一级生物安全防护实验室 二级生物安全防护实验室 三级生物安全防护实验室 四级生物安全防护实验室ຫໍສະໝຸດ 层流净化细胞培养室管理规则
我院层流净化细胞培养室设计标准为万级，专供 细胞培养、冻存以及细胞治疗用。层流净化细胞培养 室的总体要求：经济、有序、高效、安全。初步制定 相关制度如下：
成无菌环境。
II级A型生物安全柜:
一种既能使操作造成无菌、 无尘的局部空气环境，保证检验、 检测不受污染，又能保证被研究 的对象（如病菌、细菌等）不外 溢，保护周围环境及操作人员的 安全隔离设备。
该设备可广泛应用于低、中 等危险度（病原体1--3，DNA重 组P1--P3）的临床细菌学，病毒 学、微生物学、组织培养、生物 学及生命科学的研究，加工、检 验部门。
高效过滤器:
高效过滤器是用超细玻璃纤维纸 作滤料，胶板纸作分隔板，可与铝合 金框、木框及镀锌钢板框组合而成。
特点：具有低阻高效、轻质、容尘 量大等特点，层高的要求，缩小净化 设备静压箱体积等优点。
适用于常温常压常湿条件下环境空 气的净化，尤其适用于需要高效空气 过滤器覆盖率高的净化厂房。
洁净层流罩:
1、准入制度：
1）必须取得实验室相关实验技能考试合格方可进入层流净化室； 2）在本室工作的实验人员应严格遵守本室工作守则，外来人员在进 入净化室工作之前，必须接受培训； 3）没有经过培训的人员不得单独进入净化室工作； 4）进入净化室后要保持安静，不得大声喧哗。
2、安全制度：
1）层流净化室内必须注意安全用电； 2）谨慎使用酒精灯，不能在有明火的情况下加、换酒精； 3）实验人员自觉维护室内设备的安全使用，对室内的仪器如CO2孵 箱等要经常注意机器运转情况，发现问题及时检修或报告请人检修； 4) 离开层流净化室必须断开必要的仪器电源； 5）对不符合层流净化室安全规定的行为主动报告主管老师。
培养细胞的生存条件
培养细胞的生存条件1. 细胞也需要一个舒适的“家”呀！就像我们喜欢住在干净整洁、温度适宜的房子里一样。
比如，培养细胞时，适宜的温度就是关键呢，过高或过低都会让它们“难受”。
你想想，要是你一会儿在冰天雪地，一会儿又在酷热难耐的地方，能好受吗？2. 营养对细胞来说那可是超级重要的！这就好比我们每天要吃饭获取能量一样。
在培养细胞时，得给它们提供充足的养分，不然它们怎么能茁壮成长呢？就像我们没饭吃会饿肚子一样，细胞没了营养可不行啊！3. 细胞的“生存空间”也得合适呀！不能太拥挤也不能太空旷。
就好像我们住的房间，太小了会觉得压抑，太大了又会感觉空荡荡的。
比如培养皿的大小就要恰到好处，这样细胞才能开心地生活呢！4. 细胞也怕“脏东西”呢！环境得干干净净的。
这和我们希望生活在一个卫生的环境里不是一样的道理吗？要是周围都是脏污，细胞也会“生病”的呀，你说是不是？5. 酸碱度对细胞来讲可太重要啦！这就像我们喜欢喝不酸不碱正合适的水一样。
培养细胞时，要把酸碱度调节好，不然它们可会“抗议”的哦！6. 细胞也需要“伙伴”呢！不能让它们孤零零的。
就像我们喜欢和朋友在一起一样，细胞之间也有相互作用。
比如一些细胞需要和其他细胞一起，才能更好地发挥功能呀！7. 氧气对细胞来说那可是“活命的宝贝”！我们人需要呼吸氧气，细胞也一样呀。
要是没有足够的氧气，细胞就会“喘不过气”来呢，你能想象那有多糟糕吗？8. 细胞也有自己的“作息时间”呢！不能一直打扰它们。
就像我们需要休息一样，给细胞一定的时间来恢复和生长，这样它们才能更健康呀，对吧？9. 稳定的环境对细胞太重要啦！一会儿风一会儿雨的可不行。
就像我们希望生活平稳，没有大起大落一样，细胞也需要一个安稳的“家”呀！10. 细胞的“小世界”也得精心呵护呢！我们要用心对待它们。
只有这样，细胞才能好好生存，为我们的研究和医学做出贡献呀！这不就是我们培养细胞的意义所在吗？。
动物细胞培养的基本条件
动物细胞培养的基本条件
1. 培养基，动物细胞培养需要使用含有营养物质的培养基，如DMEM（Dulbecco's Modified Eagle's Medium）或RPMI 1640等。
培养基中通常含有氨基酸、糖类、维生素、无机盐、生长因子和血清等成分，以支持细胞的生长和增殖。
2. 温度，动物细胞通常在37摄氏度的温度下培养，这是因为这个温度符合动物体内的生理条件，有利于细胞的正常生长和代谢活动。
3. pH值，培养基的pH值通常在7.2-7.4之间，这个范围有利于细胞的生长和代谢，维持细胞内外环境的稳定性。
4. 湿度，细胞培养需要在恒定的湿度下进行，通常采用5%二氧化碳培养箱来维持适当的湿度和CO2浓度，以维持培养环境的稳定。
5. 无菌条件，动物细胞培养需要在严格的无菌条件下进行，以避免细胞受到外源微生物的污染，通常在无菌工作台或生物安全柜中进行操作。
6. 细胞密度，在培养过程中，需要控制细胞的密度，避免细胞
过度增殖或过度稀释，通常通过离心和重新悬浮来调节细胞密度。
总的来说，动物细胞培养的基本条件包括适当的培养基、温度、pH值、湿度、无菌条件和细胞密度等因素，这些条件的合理控制对
于维持细胞的生长和稳定的培养环境至关重要。
通过严格控制这些
基本条件，可以有效地进行动物细胞培养实验，为细胞生物学和生
物医学研究提供可靠的实验基础。
第一讲 细胞培养的基本要求
① 天然培养基
天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离
提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡
胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养
细胞都是利用天然培养基。
但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异
大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使
用的天然培养基是血清。
血清(serum)
血清种类:主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血
培养基的配制
RPMI-1640/DMEM培养粉 碳酸氢钠 1袋 2.0 g
青、链霉素
加三蒸水 至 1000ml，4℃过夜
各100单位／毫升
过滤除菌。
调节pH值至7.2
加血清（终浓度 10％）
完全培养基的组成
体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养
基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、 渗透压、pH等诸多方面的要求。
基础培养基(1640或DMEM) 血清
80％一95％ 5％一20％
NaHCO3
P.
2.0 －3.7 g/L
各100单位／毫升
S.
HEPES
2.0 －5.98 g/L
血清抑制胰蛋白酶
培养基
细胞的生长需要一定的营养环境，用于维持细胞
生长的营养基质称为培养基，即指所有用于各种 目的的体外培养、保存细胞用的物质，就其本意 上讲为人工模拟体内生长的营养环境，使细胞在 此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞营 养和促进细胞生长增殖的物质基础。
无毒、无污染
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没
液变绿应重新配制。
或干热（160度2小时）
◆ 冲洗 洗涤装置与手工烘干、包装、高压（15磅20分钟）
人免疫细胞培养条件
人免疫细胞培养条件一、人免疫细胞培养的基本条件1. 培养基- 一般使用专门的细胞培养基，如RPMI - 1640培养基、DMEM培养基等。
这些培养基包含多种营养成分，如氨基酸、维生素、无机盐等。
- 为了满足免疫细胞的特殊需求，还需要添加血清。
常用的是胎牛血清（FBS），其含有多种生长因子、激素、黏附因子等，能促进免疫细胞的生长和增殖。
血清的添加比例通常为10% - 20%，但在某些特殊的免疫细胞培养中可能会有所调整。
2. 温度- 人免疫细胞培养的适宜温度一般为37°C，这与人体的生理温度相同。
在这个温度下，细胞内的酶促反应能够正常进行，细胞的代谢活动处于最佳状态。
3. 气体环境- 细胞培养需要特定的气体环境，通常为5% CO₂、95%空气的混合气体。
CO₂的作用主要是维持培养基的pH值，因为CO₂会与培养基中的缓冲体系发生反应，使pH值稳定在7.2 - 7.4之间，这一pH范围适合大多数人免疫细胞的生长。
4. 湿度- 细胞培养箱内的湿度一般保持在95%左右，以防止培养基的蒸发过快，避免细胞因渗透压的改变而受到损伤。
二、不同类型人免疫细胞的特殊培养条件1. T淋巴细胞- 除了基本的培养条件外，T淋巴细胞的激活和增殖往往需要特定的刺激因子。
例如，植物血凝素（PHA）或抗CD3/CD28抗体可以刺激T淋巴细胞的活化和增殖。
- 在某些研究中，为了维持T淋巴细胞的特定功能状态，可能会添加白细胞介素 - 2（IL - 2），IL - 2是一种重要的细胞因子，能够促进T淋巴细胞的生长、分化和存活。
2. B淋巴细胞- B淋巴细胞的培养可能需要添加特定的细胞因子，如白细胞介素 - 4（IL - 4）和白细胞介素 - 5（IL - 5），这些细胞因子有助于B淋巴细胞的增殖、分化和抗体分泌。
- 在研究B淋巴细胞的抗体产生功能时，可能需要与其他细胞（如树突状细胞或T淋巴细胞）共培养，以模拟体内的免疫应答环境。
细胞培养设施和基本条件
细胞培养设施和基本条件1、试验室设计: 细胞培育是一种无菌操作技术,要求工作环境和条件必需保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响.细胞培育室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响,要求工作环境清洁、空气清爽,干燥和无烟尘.细胞培育工作包括:工作液配制、无菌操作(采样)、温育、无菌处理,细胞和用品贮存等.细胞培育室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧,常规操作和封闭培育于一室,而洗刷消毒在另一室.2、常用设施及设备:(1)超净工作台:也称净化工作台,分为侧流式、直流式和外流式三大类.(2)无菌操作间:一般由更衣间、缓部间和操作间三部分组成.操作间放置净化工作台及二氧化碳培育箱、离心机、倒置显微镜等.缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等.(3)操作间:一般培育箱、离心机、水浴锅、定时钟、一般天平及日常分析处理物品.(4)洗刷消毒间:烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等.(5)分析间:显微镜、计算机及打印机等.3、培育器皿:细胞培育以玻璃器皿为主,常预备最需是使用最的三倍.器皿应选择透亮度好、无毒、中性硬度玻璃制品.常用的玻璃器皿有下面几种.(1)液体储存瓶:用于储存各种配制好的培育液、血清等液体,常以500ml、250ml、100ml生理盐水瓶或血浆瓶代替.(2)培育瓶:依据培育细胞种类要求不同培育瓶的形态各异,用于细胞传代培育的细胞要求瓶壁厚簿匀称,便于细胞贴壁生长和观看,瓶口要大小全都,口径一般不小于1cm,允许吸管伸入瓶内任何部位,规格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml等几种.用于外周血培育的常用10ml一般圆瓶.两种培育瓶均要求选用优质玻璃制成.(3)培育皿:用于开放式培育及其它用途.分直径30mm、60mm、120mm等几种.(4)吸管:常用的有长吸管和短吸管两类,长吸管也称刻度吸管.其改良后管上部有球型刻度称改良吸管,刻度吸管用于移动液体.常用1ml和10ml两种.短吸管也叫滴管,分弯头和直头两种.(5)离心管:离心管是细胞培育中使用最广泛的器皿,依据用途不同形态各样,常用于细胞培育的离心管有大腹式尖底离心管和一般尖底离心管两类.前者分别为50ml、30ml、15ml;后者则多为10ml和5ml.(6)其它:如三角烧瓶、烧杯、量筒、漏斗、注射器等.。
3.细胞培养的基本条件-07资料
1）无菌室
◆
为无菌操作而设计的空间，包括操作间和缓冲间。
◆
操作间又可分为细胞室和感染室
缓冲间能保护无菌间的无菌环境，可兼有更换无 菌衣帽和进行一些简单操作（如放孵育箱、离心 等）的功能。
◆
◆
整个面积约10m2，通入经滤过的无菌空气，与周 围实验室比较应保持正压，常备紫外灯，室内其 他陈设尽量减少。
常用的消化液： 胰蛋白酶 依地酸二钠（disodium edetate,EDTA-2Na） 胶原酶
（1）胰蛋白酶
◆
胰蛋白酶作用于与赖氨酸或精氨酸相连接的肽
健，除去细胞间粘蛋白及糖蛋白，影响细胞骨 架，从而使细胞分离。
◆
胰蛋白酶液浓度越高，作用越强，但超过一定
限度会损伤细胞。 胰蛋白酶是一种黄白色粉末，用无 Ca2+ 、 Mg2+ 的PBS缓冲液配制常用的胰蛋白酶液浓度是0.25 ％ 。用滤器过滤除菌。
◆二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞生长繁
殖所需成分，它在细胞培养中的主要作用在于
维持培养基的PH值。
◆大多数细胞的适宜PH为7.2-7.4，偏离这一范
围对细胞培养将产生有害的影响。但细胞耐酸 性比耐碱性大一些，在偏酸环境中更利于细胞 生长。有资料显示，原代羊水细胞培养PH6.8 时最适。
3）抗菌素溶液：
素的影响
具体工作： 器皿洗刷 孵育 细胞传代
试剂和培养液的配 制
制备细胞
细胞的冻存、复苏和运 输
无菌观念
◆必须树立无菌观念，坚持一贯的无菌操作，进
行无菌处理。
◆实验室应分为无菌室、准备室和洗刷消毒室，
除洗刷消毒室须分隔开外，无菌室和准备室可 在同一房间内，但需划分出不同功能区，即无 菌操作区和培养、观察区。
细胞培养基本条件
细胞培养基本条件1、合适的细胞培养基合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的最重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质，而且还提供培养细胞生长和繁殖的生存环境。
2、优质血清目前，大多数合成培养基都需要添加血清。
血清是细胞培养液中最重要的成分之一，含有细胞生长所需的多种生长因子及其它营养成分。
3、无菌无毒细胞培养环境无菌无毒的操作环境和培养环境是保证细胞在体外培养成功的首要条件。
在体外培养的细胞由于缺乏对微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物质污染，或者自身代谢物质积累，可导致细胞中毒死亡。
因此，在体外培养细胞时，必须保持细胞生存环境无菌无毒，及时清除细胞代谢产物。
4、恒定的细胞生长温度维持培养细胞旺盛生长，必须有恒定适宜的温度。
5、合适的气体环境气体是哺乳动物细胞培养生存必需条件之一，所需气体主要有氧气和二氧化碳。
细胞培养基种类与基本成分细胞培养基的种类很多，按其来源分为合成培养基和天然培养基（目前使用的培养基绝大部分是合成培养基），按其物质状态分为干粉培养基和液体培养基两类。
干粉培养基需由实验者自己配制并灭菌，液体培养基由专业商家提供，用户可直接使用，非常方便。
1、合成培养基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、无机盐、维生素及其它辅助物质：氨基酸氨基酸是组成蛋白质的基本单位。
不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。
其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
因此，各种培养液中都有较大量的谷氨酰胺。
但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。
已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2 周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。
碳水化合物碳水化合物是细胞生长主要能量来源，其中有的是合成蛋白质和核酸的成分。
主要有葡萄糖、核糖、脱氧核糖、丙酮酸钠和醋酸等。
医学实验技术期末考试题及答案
医学实验技术期末考试题及答案一、选择题（每题2分，共20分）1. 以下哪项不是细胞培养的基本条件？A. 无菌环境B. 适宜的温度和pHC. 充足的氧气供应D. 持续的光照答案：D2. 细胞分裂周期中，哪个阶段染色体最为明显？A. G1期B. S期C. G2期D. M期答案：D3. 以下哪种细胞器主要负责蛋白质的合成？A. 核糖体B. 线粒体C. 高尔基体D. 内质网答案：A4. 以下哪项不是PCR技术的特点？A. 高效性B. 特异性C. 重复性D. 需要活细胞参与答案：D5. 基因工程中，常用的载体类型不包括以下哪项？A. 质粒B. 噬菌体C. 人工染色体D. 核糖体答案：D6. 以下哪种物质不属于细胞培养基的成分？A. 氨基酸B. 维生素C. 抗生素D. 细胞答案：D7. 以下哪种技术不涉及DNA的提取和纯化？A. 凝胶电泳B. DNA测序C. PCR扩增D. 核酸杂交答案：A8. 以下哪项不是免疫组化技术的应用？A. 疾病诊断B. 药物筛选C. 细胞定位D. 细胞功能研究答案：B9. 以下哪种细胞培养类型不涉及细胞的传代？A. 原代培养B. 传代培养C. 悬浮培养D. 贴壁培养答案：A10. 以下哪种方法不适用于蛋白质的定量分析？A. 考马斯亮蓝染色法B. BCA蛋白定量法C. SDS-PAGED. 酶联免疫吸附测定（ELISA）答案：C二、填空题（每空2分，共20分）1. 细胞培养中常用的CO2培养箱的CO2浓度一般维持在______%左右，以维持培养液的pH值稳定。
答案：52. 在PCR反应中，引物的作用是提供DNA合成的起始点，其长度一般为______个碱基。
答案：20-303. 免疫组化技术中，常用的显色剂有DAB（3,3'-二氨基联苯胺），它在氧化后呈现______色。
答案：棕4. 凝胶电泳中，DNA分子的迁移速度与其______成正比，与分子量成反比。
答案：电荷量5. 细胞周期中，G1期的主要功能是______。
细胞培养与细胞系的建立
细胞培养与细胞系的建立细胞培养是生命科学研究中必不可少的技术手段之一，它可以通过控制和维持细胞外环境，使细胞在体外生长和繁殖。
由于细胞培养技术可以在较短时间内得到大量的同种细胞，使得生物学和医学等领域的实验变得更加容易和方便。
而细胞系则是指由同一种细胞建立起来的一个细胞群体，是细胞生物学、分子生物学、药理学等领域里必不可少的研究对象。
一、细胞培养骨干技术1. 细胞培养的基本条件：细胞种类、培养基、培养条件（温度、CO2浓度、湿度、通气等）2. 细胞划分：原代细胞、细胞系、细胞株3. 细胞分离方法：酶消化、机械分离、胶质滤纸过滤、胶层分离、绒毛分离等4. 细胞凋亡与细胞健康状况监测：细胞膜容器渗透检测、Trypan蓝染色法、荧光染色等二、细胞系建立的过程1. 细胞培养条件的筛选：种类、培养基和培养条件2. 结合基因检测识别细胞：统一接种方法、培养期间生长速度的观察3. 细胞系的测定：细胞形态、DNA指纹技术、生物学/化学标记技术以及微镜下的观察三、细胞系的应用1. 细胞系的作用和意义：为生命科学研究提供常见、熟悉和稳定的实验平台2. 细胞系在生物学、分子科学、临床医学、肿瘤学、流行病学和毒理学等领域的应用3. 建立细胞系的意义：有效解决生命科学研究的问题，为人类健康提供保障细胞培养和细胞系建立是细胞生物学及其它相关工作的基础。
虽然细胞培养技术在不同领域的使用有着不同的需求和要求，但这种技术对生命科学的推进和人类健康的提高产生了极深的影响。
我们相信，随着科研工作的不断深化和发展，细胞培养和细胞系建立的技术也会不断地得到完善和发展，为人类的身体健康作出更大的贡献。
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紫外线辐射强度化学指示卡
【性能特点】 紫外线辐射强度化学指示卡是利用对波长 253.7nm的紫外线敏感 的化学物质和辅料配成印制油墨，印制在紫外线光敏纸上。将紫外线光敏纸粘贴 在卡片纸中央，在卡片纸的两端分别印上辐射照度为90μW/cm 2 和70μW/ cm 2 的标准色块。 【适用范围】 检测紫外线灯辐射照度（ 90μW/cm 2 和70μW/cm 2 ）是否达到 使用要求。用于紫外线辐照强度的日常监测，以便了解紫外线灯使用情况和及时 进行更换。 【使用方法】 测定时，打开紫外线灯管 5min待其稳定后，将指示卡置于距紫外 线灯管下方垂直1m中央处，将有图案一面朝向灯管，照射1分钟。紫外线灯照射 后，图案中的紫外线光敏纸色块由乳白色变成不同程度的淡紫色。将其与标准色 块相比，即可测知紫外线灯辐照强度值是否达到使用要求。指示卡上左右两个标 准色块，表示在规定测试条件下灯管的不同辐照强度值，一个为70μW/cm 2 ， 一个为90μW/cm 2 。若测试的30W新紫外线灯管辐射强度值≥90μW/cm 2 为合 格。使用中的旧灯管，辐射强度值≤70μW/cm 2 ，为不合格。紫外线灯的辐照 强度值≤70μW/ cm 2 时应更换成新灯管。 15
无菌条件
电热干燥箱： 干热消毒（160 ℃ ，2小时）, 主要用于玻璃器皿消毒 。
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无菌条件
滤 器
Zeiss滤器：过滤除菌：大多数培养用液，如 人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过 法除菌
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针头滤器
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无菌条件
大容量高压灭菌器
全自动手提式灭菌器
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无菌条件
实验室安全
层流净化细胞培养室管理规则 一级生物安全防护实验室 二级生物安全防护实验室 三级生物安全防护实验室 四级生物安全防护实验室
实验室纯水不仅要求在离子指标上有较高纯度，而且要求低浓度有机物和微生
超纯水在电阻率、有机物含量、颗粒和细菌含量方面接近理论上的纯度极限，通
过离子交换、RO膜或蒸馏手段预纯化，再经过核子级离子交换精纯化得到超纯水。 通常超纯水的电阻率可达18.2 MΩ-cm，TOC <10 ppb，滤除0.1 µm甚至更小的颗 粒，细菌含量低于1 CFU/ml。超纯水适合多种精密分析实验的需求，如高效液相色 谱(HPLC)、离子色谱(IC)和离子捕获-质谱(ICP-MS)。超纯水适用于象真核细胞培养 等生物应用，超滤技术通常用于去除大分子生物活性物，如热源(通常结果为<0.005 IU/ml)以及（无法检测到的）核酸酶和蛋白酶 34
流式细胞仪
0h PI
PE-Cy5-CD3
6h
12 h
Annexin V
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细胞检测条件
活细胞工作站
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细胞检测条件
酶标仪
微孔板震荡器
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细胞检测条件 高速离心机 超速离心机
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细胞生长条件 自动双重纯水蒸馏器 纯水仪
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纯水等级
纯水的纯化水平最低，通常电导率在1-50 µS/cm之间。它可经由单一弱碱性阴离 去离子水的电导率通常在1.0 - 0.1 µS/cm之间（电阻率在1.0 - 10.0 MΩ子交换树脂、反渗透或单次蒸馏制成。典型的纯水应用包括玻璃器皿的清洗和清洗机 用水。
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无菌条件
高效过滤器: 高效过滤器是用超细玻璃纤维纸 作滤料，胶板纸作分隔板，可与铝合 金框、木框及镀锌钢板框组合而成。 特点：具有低阻高效、轻质、容尘 量大等特点，层高的要求，缩小净化 设备静压箱体积等优点。 适用于常温常压常湿条件下环境空 气的净化，尤其适用于需要高效空气 过滤器覆盖率高的净化厂房。
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无菌条件 紫外灯 ：紫外线消毒。 主要用于培养室空气、操作台、塑料培养
皿和培养板等表面消毒
紫外灯大约分为3种，分别是 UVA、UVB和UVC。 UVC是目前工业上所应用的 紫外线杀菌灯(253.7nm)，是 最常见的一种。 高功率紫外线灯经8000小 时，一般紫外线灯则在3000 小时後功率会降至原来70 ％，这时就应该更换。 国内的标准是：30W新灯管 的辐射强度≥90uw/cm2为合 格；使用中辐射强度应 ≥70uw/cm2。少于此标准就 要更换。
细胞培养的基本条件
ustcwhm@
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细胞培养的基本条件
无菌条件：净化工作室，风淋室，传递窗，高效过滤器， 洁净层流罩，生物安全柜，超净工作台，紫外 灯，电热干燥箱，滤器，高压灭菌器，抗生素 细胞生长条件：纯水蒸馏器，纯水仪，培养板，培养瓶， CO2培养箱，培养基，血清 细胞检测条件：倒置显微镜，酶标仪 ，微孔板震荡器，高 速离心机，移液器 细胞保存条件：液氮罐 实验室安全：生物实验室安全，P1, P2, P3实验室安全
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无菌条件
传递窗: 该装置是一种洁净室的辅助设 备，主要用于洁净区与洁净区，洁 净区与非洁净区之间小件物品的传 递，以减少洁净室的开门次数，把 对洁净区的污染降低到最低程度。 PB系列传递窗按用途分为标准 型和生物洁净型两种。（后者带空 气自净装置）按门互锁形式分为机 械互锁和电子互锁两种外壳按材料 分为彩钢板型、薄钢板喷塑型和全 不锈钢型三种通用型尺寸如下表所 列，特殊规格按用户要求制作。
7Leabharlann 菌条件洁净层流罩:技术性能参数： (1)净化等级：100级(美国联邦标准209E) (2)平均风速：0.25～0.45m/s(可调) (3)噪音：≤62dB(A) (4)电源：220V/50HZ 层流罩是可提供局部高洁净环境的空气净化设备。它主要由箱体、风机。初效空气过滤器、 高效空气过滤器、阻尼层、灯具等组成，外壳为不锈钢或彩钢板。该产品既可悬挂，又可地面 支撑，结构紧凑，使用方便。可以单个使用，也可多个联接组成带状洁净区域，形成洁净隧道。 洁净层流罩是将空气经风机以一定的风压通过高效空气过滤器后，由阻尼层均压，使洁净 空气呈垂直层流型气流送入工作区，从而保证了工作区内达到工艺所需的高洁净度。
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无菌条件
A2型生物安全柜
• 100 fpm 吸风量
•
70%气体循环使用 .
30%气体排出，既可以接管道 外排，也可以不接管道直接排 放在实验室 环境空气 污染的空气 HEPA 过滤的空气 负压的污染空气
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无菌条件
B2 型生物安全柜
“全排” 100 fpm吸气量 0% 气体循环利用. 100% 气体外排，适用于 P3实验室 环境空气 污染的空气 HEPA 过滤的空气 負压的污染空气
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无菌条件
净化工作室
------ 我国药品生产洁净室（区）空气洁净度标准 ------洁净度级 别 100 10,000 100,000 300,000 尘粒最大允许数/立方米 ≥0.5um 3,500 350,000 3,500,000 10,500,000 ≥5um 0 2,000 20,000 60,000 尘粒最大允许数 浮游菌/立方 5 100 500 NA 沉降菌/皿 1 3 10 15
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无菌条件
层流净化细胞培养室管理规则
我院层流净化细胞培养室设计标准为万级，专供 细胞培养、冻存以及细胞治疗用。层流净化细胞培养 室的总体要求：经济、有序、高效、安全。初步制定 相关制度如下：
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无菌条件
1、准入制度： 1）必须取得实验室相关实验技能考试合格方可进入层流净化室； 2）在本室工作的实验人员应严格遵守本室工作守则，外来人员在 进入净化室工作之前，必须接受培训； 3）没有经过培训的人员不得单独进入净化室工作； 4）进入净化室后要保持安静，不得大声喧哗。
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无菌条件
3、卫生消毒制度： 1）一般情况下细胞间每日消毒一次（包括两个缓冲间），方法为紫外线 消毒（每次30分钟至1小时）一次，另外每周用10％乳酸在紧闭门窗下熏蒸30 分钟； 2）实验完毕应及时清理所用物品，注意台面整洁； 3）及时清洗所用隔离衣，并高压灭菌后存放于指定位置（每日一次）； 4）除实验必须的用品外，其它物品不得带入净化室； 5）层流净化室内所用仪器及附属设备均应在指定范围内使用，不得随意 转移地点，以便他人顺利使用； 6）层流净化室实施值日生负责制，值班人员负责检查室内是否保持清洁 整齐，督促违反规定者改正错误。
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无菌条件
生物安全柜的选择
适用性能 适用范围 超 净 + + I 级 + + + + + IIA A1 + + + + + + ± A2 + + + + + + ± + + + + + + ± IIB B1 B2 + + + + + + ± III 级 + + + + +
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保 护 对 象 实 验 室
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细胞检测条件
移液器
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细胞检测条件
倒置显微镜
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细胞检测条件
双光子原理图
结构图
普通荧光显微镜
Confocal
激光共聚焦显微镜
多重荧光标记的共聚焦图像
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细胞检测条件
分选后
CD56bright Deleted-CD56bright
分选前
PE-CD56
CD56dim
Deleted-CD56dim
人 环境 样品 I II III Ⅳ
无菌条件
超净工作台
超净工作台的工作
•
原理是利用鼓风机 驱动空气遁过高效 滤器除去空气中的 尘埃颗粒，使空气 得到净化。净化空 气徐徐通过工作台 面，使工作台内构 成无菌环境。
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无菌条件
II级A型生物安全柜: 一种既能使操作造成无菌、 无尘的局部空气环境，保证检验、 检测不受污染，又能保证被研究 的对象（如病菌、细菌等）不外 溢，保护周围环境及操作人员的 安全隔离设备。 该设备可广泛应用于低、中 等危险度（病原体1--3，DNA重 组P1--P3）的临床细菌学，病毒 学、微生物学、组织培养、生物 学及生命科学的研究，加工、检 验部门。