哺乳动物细胞全蛋白提取试剂盒说明书
总蛋白提取方法
Fish & Shellfish Immunology
2012
（IF=3.322）
● Pin Huan et al.
Comparative proteomic analysis of challenged Zhikong scallop (Chlamys
farreri): A new insight into the anti-Vibrio immune response of marine bivalves
分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即得到总蛋白。
5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
参考文献：
● Pin Huan, Hongxia Wang et al.
Identification of differentially expressed proteins involved
有效期： 一年。
产品简介： 贝博总蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织，如脑、脊髓、
神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等哺乳动物组织 中提取总蛋白。提取过程简单方便，可在 1 小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合 物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配 方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电 泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
Fish & Shellfish Immunology
2011 Volume 31, Issue 6 , Pages 1186-1192 （IF=3.322）
● Liu Tao, Chen Suhua et al.
膜-胞浆蛋白提取方法
膜-胞浆蛋白提取方法膜-胞浆蛋白提取方法膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒产品组成：产品组成规格试剂 A 试剂 B 试剂 C蛋白酶抑制剂混合物蛋白稳定剂BB-3111-150T 10ml 20ml 10ml 250μl 100ulBB-3111-2 100T 20ml 40ml 20ml 500μl 200ul储存条件：蛋白酶抑制剂、蛋白稳定剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。
产品简介：哺乳动物跨膜蛋白承当各种生物功能，在疾病的发生、开展过程中扮演重要角色。
膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析^p 及质谱分析^p 等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。
传统制备膜蛋白样品的方法是使用去污剂和外表活性剂增溶。
去污剂处理睬使膜蛋白丧失其天然构造，因此阻碍了膜蛋白的功能研究。
贝博膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒是一种基于化学而非去污剂方法的高产膜蛋白提取试剂盒。
本试剂盒提供配套试剂，适用于从细胞和动物组织提取膜蛋白和胞浆蛋白。
提取过程简单方便，可在1小时内完成。
提取的膜蛋白不仅纯度高，保持天然活性，而且绝少穿插污染。
提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析^p 、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
应用实例：1 4 4图片说明：用膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒提取细胞样本的'SDA-PAGE的电泳考染照片和Western照片。
图1泳道中1、4分别为Marker、膜蛋白样本。
图2为以上样品的EGFR的WB结果照片。
使用方法：A．细胞蛋白提取①1. 取5-10×106个以上细胞，在4℃，500g条件下离心2-3分钟，小心汲取培养基，尽可能吸干，搜集细胞。
2. 用冷PBS洗涤细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
3. 细胞样品中参加200μl冷的试剂 A，2ul蛋白酶抑制剂混合物，2ul蛋白稳定剂，高速涡旋振荡15秒，置冰上10-15分钟。
【免费下载】蛋白纯化试剂盒说明书
变性剂 洗涤剂 其他添加剂
缓冲液
10 mmol/L 还原型谷胱甘肽
8 mol/L尿素 6 mol/L 盐酸胍
2% TritonX-100(非离子物质) 2% Tween 20（非离子物质） 2% NP-40 (非离子物质) 2% 胆酸盐 1% CHAPS（两性离子）
20% 乙醇 50% 甘油 100 mmol/L Na2SO4 1.5 mol/L NaCl 1 mmol/L EDTA 60 mmol/L柠檬酸盐 100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4
洗脱液 唑，pH 8.0
20 mmol/L Tris-HCl，8 mol/L 尿素，500 mmol/L NaCl，500 mmol/L 咪
注意：样品和缓冲液中适当浓度的咪唑对获得最大的纯化是必需的，而且产量因蛋白 而不尽相同。自然条件下，20-40 mmol/L 的咪唑的几盒缓冲液对许多蛋白已经足够。洗脱 液中500 mmol/L 咪唑绝大多数情况下完全可洗下目的蛋白。
含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等
20%乙醇
4或30℃
5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇) 5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)
20 mmol/L β-巯基乙醇 5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)
对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料电试力卷保相护互装作置用调与试相技互术关，系电，力根通保据过护生管高产线中工敷资艺设料高技试中术卷资，配料不置试仅技卷可术要以是求解指，决机对吊组电顶在气层进设配行备置继进不电行规保空范护载高与中带资负料荷试下卷高问总中题体资，配料而置试且时卷可，调保需控障要试各在验类最；管大对路限设习度备题内进到来行位确调。保整在机使管组其路高在敷中正设资常过料工程试况中卷下，安与要全过加，度强并工看且作护尽下关可都于能可管地以路缩正高小常中故工资障作料高；试中对卷资于连料继接试电管卷保口破护处坏进理范行高围整中，核资或对料者定试对值卷某，弯些审扁异核度常与固高校定中对盒资图位料纸置试，.卷保编工护写况层复进防杂行腐设自跨备动接与处地装理线置，弯高尤曲中其半资要径料避标试免高卷错等调误，试高要方中求案资技，料术编试交写5、卷底重电保。要气护管设设装线备备置敷4高、调动设中电试作技资气高，术料课中并3中试、件资且包卷管中料拒含试路调试绝线验敷试卷动槽方设技作、案技术，管以术来架及避等系免多统不项启必方动要式方高，案中为；资解对料决整试高套卷中启突语动然文过停电程机气中。课高因件中此中资，管料电壁试力薄卷高、电中接气资口设料不备试严进卷等行保问调护题试装，工置合作调理并试利且技用进术管行，线过要敷关求设运电技行力术高保。中护线资装缆料置敷试做设卷到原技准则术确：指灵在导活分。。线对对盒于于处调差，试动当过保不程护同中装电高置压中高回资中路料资交试料叉卷试时技卷，术调应问试采题技用，术金作是属为指隔调发板试电进人机行员一隔，变开需压处要器理在组；事在同前发一掌生线握内槽图部内 纸故，资障强料时电、，回设需路备要须制进同造行时厂外切家部断出电习具源题高高电中中源资资，料料线试试缆卷卷敷试切设验除完报从毕告而，与采要相用进关高行技中检术资查资料和料试检，卷测并主处且要理了保。解护现装场置设。备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。
BeyoLytic
BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 产品编号产品名称 包装 P0013M-100ml BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂 100ml产品简介：碧云天生产的BeyoLytic™哺乳动物活性蛋白抽提试剂(BeyoLytic™ Mammalian Active Protein Extraction Reagent)，也称BeyoLytic™ Mammalian Native Protein Extraction Reagent ，是一种用于快速、高质量、高产量、高活性提取哺乳动物细胞或组织的细胞浆蛋白、细胞核蛋白以及膜蛋白的活性蛋白抽提试剂。
本产品与Thermo 的M-PER ® Mammalian Protein Extraction Reagent 以及Sigma 的CelLytic™ M mammalian cell lysis/extraction reagent 非常相近，使用效果和用途也非常相近，很多时候可以考虑相互替代。
本产品是一种含有特定的经过精心筛选以确保蛋白抽提效果良好的比较温和的非变性去垢剂(detergent)的缓冲液(pH7.6)，既确保了蛋白能被高效抽提，抽提效果和碧云天生产的P0013 Western 及IP 细胞裂解液或P0013B RIPA 裂解液(强)相近，又能确保提取获得的蛋白样品中蛋白或酶的活性能被很好地保留，便于进行后续的蛋白活性分析检测。
由于本产品能确保提取的蛋白样品的活性，所含的去垢剂比较温和，虽然对于膜蛋白也有很好的抽提效果，但对于一些难溶性蛋白的抽提效率相对较低。
如果希望获得比较高的难溶性蛋白的得率，建议使用含有强去垢剂的适当抽提试剂。
对于使用本产品抽提获得的蛋白溶液，如果希望去除其中的去垢剂，可以通过透析或超滤方法去除。
本产品能够快速、温和、有效地抽提哺乳动物细胞或组织的总蛋白，抽提的蛋白能较好地保持其原有的空间结构和生物学活性，可用于多种生物化学和细胞生物学用途。
全蛋白提取试剂盒
全蛋白提取试剂盒Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit产品编号：C510003 包装规格：50 Assays 产品简介本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。
获得的全蛋白可用于Western Blot 、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down 和EMSA 等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以使用50次。
产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性 2. 整个操作过程只需要30分钟左右3. 即可以用于培养细胞（50x107个），有可以用于动物组织（50x200 mg ）蛋白质的提取 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性 5.不需要超速度离心，可以同时处理多个样品运输和保存条件常温运输，收到后请将磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和PMSF 于 -20℃保存，其余2-8℃保存，保质期一年。
试剂盒组成 成分 C510003 Lysis buffer 50 mL 蛋白酶抑制剂 50 μL 磷酸酶抑制剂 250 μL PMSF500 μL操作步骤A. 实体组织蛋白的提取 1. 在每1 mL 预冷的Lysis Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。
冰上保存数分钟待用。
2.将100-200 mg 固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 mm ×3 mm 左右的小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1 mL 上述配制好的预冷的Lysis Buffer ，4℃玻璃匀浆器上下手动匀浆15-30次。
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书
动植物总蛋白微量提取试剂盒说明书产品编号：BTN90707规格：50T产品及特点：本产品用于快速提取动植物总蛋白，用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析以及蛋白活性测定等。
本产品的其主要特点是：1.提取过程十分简便，匀浆离心即可，整个过程只需要十几分钟。
2.采用独特的温和裂解成分，蛋白保持天然活性。
3.适用于各种动植物组织材料，包括新鲜或冰冻的材料。
4.得到的提取物可以直接用于SDS-PAGE、2D电泳、Western印迹分析以及蛋白活性测定等下游实验。
5.一次可以处理100mg左右的样品，足够进行几十次SDS-PAGE mini胶电泳检测。
规格及成分：成分规格溶液A50ml5×SDS-PAGE上样液1ml说明书1份保存条件：常温运输，4℃保存，5×SDS-PAGE上样液短期4℃保存，长期可放-20℃保存，有效期一年。
使用方法：使用前，最好请在溶液A中加入自备的1M DTT溶液50μL。
一：匀浆法注意：对致密的实体组织（如肌肉），最好用Polytron式匀浆机匀浆处理。
1.称取动物或植物组织样品100mg，剪刀剪成黄豆大小，转移到10-15mL的塑料离心管中。
2.加入1ml溶液A，在冰上用Polytron式匀浆机匀浆，直到没有肉眼可见的组织块。
为了避免产热，可以分多次匀浆，其间放冰上让匀浆液冷却。
3.将匀浆液全部转移到1.5mL的塑料离心管中。
4.4℃12,000g离心10分钟，组织残渣碎片将形成沉淀。
5.将上清液转移至一新的1.5mL塑料离心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。
如果要测定蛋白浓度，请使用BCA方法，不要使用Bradford方法（如果要使用，也需要把样品稀释10倍后再测定，否则溶液A中的成分会影响浓度侧定）。
如果要进行SDS-PAGE电泳，可取部分到离心管中，加入5×SDS-PAGE上样缓冲液（终浓度为1×），在沸水中处理5分钟后立即上样电泳。
Abbkine动物细胞或组织总蛋白提取试剂盒的应用和组分
Abbkine动物细胞或组织总蛋白提取试剂盒的应用和组分动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒，由优化细胞裂解液和离心管柱及2.0ml 接收管组成，能够快速从动物细胞和组织（无脊椎动物和脊椎动物）中提取总蛋白，用于蛋白质分析和进一步纯化。
动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒同时提供天然和变性两种不同的裂解液，可供用户选择。
离心管柱技术提取蛋白质，样品量最小可处理20ul，最大可达500ul。
从细胞/组织中提取总蛋白质仅需1-8 分钟，得率可达2-8mg/ml。
左图：通过变性裂解缓冲液和来自不同制造商的天然缓冲液提取的小鼠肝脏蛋白质图谱。
提取的蛋白质在10%SDS-PAGE中分离，并用考马斯蓝染色。
1号车道，标记；车道2，制造商提供的本地缓冲区；3号车道，来自Abbkine的本地缓冲区；车道4，制造商提供的变性裂解缓冲液；通道5，B制造商提供的变性裂解缓冲液；车道6，C制造商提供的变性裂解缓冲液；通道7，Abbkine的变性裂解缓冲液；通道8，D制造商提供的变性裂解缓冲液。
右图：从293细胞和小鼠肝脏中提取总蛋白。
Lane 1，5μL蛋白质，通过B分析试剂盒提取；Lane 2，通过B分析试剂盒提取的2.5μL蛋白质；用Abbkine试剂盒提取的Lane 3，5μL蛋白质；通道4，通过Abbkine试剂盒提取的2.5μL蛋白质。
Abbkine/ExKine™动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒应用：可应用于SDS-PAGE, immunoblottings, IP, ELISA，酶检测及其他应用，蛋白质分析和小规模蛋白层析纯化Abbkine/ExKine™动物细胞/组织总蛋白提取试剂盒组成成分：1. 25ml 变性细胞裂解液（SD-001）2. 25ml 天然细胞裂解液（SN-002）3. 50 个离心管柱4. 50 个收集管5. 4 根塑料研磨棒储存：天然细胞裂解液（SN-002）储存于4℃，其他部分储存于常温注：所有实验步骤请在2-8°C下执行。
胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒使用说明
胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒使用说明产品编号：C7610包装规格：50Assays产品组成:胞质提取Buffer55mL线粒体溶解Buffer5mL蛋白酶抑制剂60μL磷酸酶抑制剂300μLDTT60μL产品简介胞质和线粒体蛋白质提取试剂盒提供独特的组份可以提取动物细胞及组织中的胞质蛋白和线粒体蛋白。
该方法先将完整的有活性的线粒体和胞质蛋白分离，再处理后获得高纯度的有活性胞质蛋白和变性的线粒体蛋白，不需要超速度离心，方法简单，可靠，快速。
可用于1D，2D电泳，Western Blot，Elisa等蛋白质实验。
提取的完整线粒体也可以经过活性溶解液处理，再用于免疫共沉淀，凋亡，细胞信号传导，能量代谢等生理学研究，或进行线粒体DNA提取，用于基因组学后续研究。
本试剂盒可以每次从1×107个培养细胞或200mg组织中提取所需要的蛋白质，可以使用50次。
产品特点1.整个实验过程大约只需要1小时左右。
2.可以从50×107个培养细胞或50×200mg组织中提取所需要的蛋白质或活性线粒体。
3.活性线粒体的提取量高，高效线粒体溶解Buffer提取的蛋白质，可以用于线粒体蛋白质组学研究。
4.不需要超速度离心，可以同时处理多个样品。
运输和保存条件常温下运输，收到后将线粒体溶解Buffer、DTT和蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂于-20℃保存，胞质提取Buffer于2-8℃保存，保质期1年。
操作步骤1.收集不少于1×107细胞，用冷PBS（pH7.4）洗涤细胞两次，每次3000rpm（800g）离心5min；组织样本（200mg）尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，于冰上剪碎，再用冷PBS（pH7.4）洗涤三次。
2.在上述细胞或组织样本中加入1mL胞质提取Buffer（使用前每mL胞质提取Buffer加入1μL蛋白酶抑制剂，5μL磷酸酶抑制剂和1μL DTT），置玻璃匀浆器冰上均质30～50次，置于冰上冷却。
牛α-乳白蛋白(α-LA)ELISA试剂盒使用说明书
牛α-乳白蛋白（α-LA）ELISA试剂盒使用说明书南京森贝伽现货供应，质量保证，价格优惠，试剂盒首选森贝伽。
本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中牛α-乳白蛋白（α-LA）的含量。
实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛α-乳白蛋白（α-LA）水平。
用纯化的牛α-乳白蛋白（α-LA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入α-乳白蛋白（α-LA），再与HRP标记的α-乳白蛋白（α-LA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的α-乳白蛋白（α-LA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛α-乳白蛋白（α-LA）浓度。
样本处理及要求：1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。
通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。
离心20分钟左右（2000-3000转/分）。
仔细收集上清。
保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。
加入一定量的PBS，PH7.4。
蛋白纯化试剂盒说明书
蛋白纯化试剂盒介绍试剂盒有10个重力流柱，而该柱在自然条件下纯化可重新装填Ni-IDA Sefinose TM 6 Fast Flow 和结合缓冲液，洗脱液。
这10个柱子通过固定化金属亲和层析可用于纯化带组氨酸标签的蛋白。
Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow 有很高的蛋白结合能力，低镍离子（Ni2 +）的泄漏以及可与变性剂和广泛的添加剂相兼容。
澄清和非澄清的样品可使用该柱。
特殊的frits 在纯化过程可防止介质变干燥。
一次纯化平均需要30分钟。
在变性下纯化，请自备额外的结合缓冲液和洗脱液。
特征柱材料聚丙烯桶，聚乙烯筛板介质Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow平均粒径90 µm蛋白结合能力约6 mg组氨酸标签蛋白/1毫升树脂床体积 1 mL/柱使用时兼容性在各种通用缓冲液，洗涤剂和变性剂中稳定避免在缓冲液中含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等pH稳定性，短期（2h）2-14储存20%乙醇保存温度4或30℃与NI-IDA树脂相兼容的试剂还原试剂5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇)5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)20 mmol/L β-巯基乙醇5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)10 mmol/L 还原型谷胱甘肽变性剂8 mol/L尿素6 mol/L 盐酸胍洗涤剂2% TritonX-100(非离子物质)2% Tween 20（非离子物质）2% NP-40 (非离子物质)2% 胆酸盐1% CHAPS（两性离子）其他添加剂20% 乙醇50% 甘油100 mmol/L Na2SO41.5 mol/L NaCl1 mmol/L EDTA60 mmol/L柠檬酸盐100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4 缓冲液100 mmol/L Tris-HCl pH 7.4100 mmol/L Tris pH 7.4100 mmol/L HEPES pH 7.4100 mmol/L MOPS pH 7.4100 mmol/L 醋酸钠pH 4注意：1.为了最佳的操作过程，按照上述纯化步骤进行预洗以除去任何削弱结合镍离子的物质。
蛋白纯化试剂盒说明书
蛋白纯化试剂盒介绍试剂盒有10个重力流柱，而该柱在自然条件下纯化可重新装填Ni-IDA Sefinose TM 6 Fast Flow 和结合缓冲液，洗脱液。
这10个柱子通过固定化金属亲和层析可用于纯化带组氨酸标签的蛋白。
Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow 有很高的蛋白结合能力，低镍离子（Ni2 +）的泄漏以及可与变性剂和广泛的添加剂相兼容。
澄清和非澄清的样品可使用该柱。
特殊的frits 在纯化过程可防止介质变干燥。
一次纯化平均需要30分钟。
在变性下纯化，请自备额外的结合缓冲液和洗脱液。
特征柱材料聚丙烯桶，聚乙烯筛板介质Ni-IDA Sefinose 6 Fast Flow平均粒径90 µm蛋白结合能力约6 mg组氨酸标签蛋白/1毫升树脂床体积 1 mL/柱使用时兼容性在各种通用缓冲液，洗涤剂和变性剂中稳定避免在缓冲液中含螯合剂，例如EDTA，EGTA，柠檬酸等pH稳定性，短期（2h）2-14储存20%乙醇保存温度4或30℃与NI-IDA树脂相兼容的试剂还原试剂5 mmol/L DTE(二硫赤藓糖醇)5 mmol/L DTT(二硫苏糖醇)20 mmol/L β-巯基乙醇5 mmol/L TCEP(磷酸三氯乙酯)10 mmol/L 还原型谷胱甘肽变性剂8 mol/L尿素6 mol/L 盐酸胍洗涤剂2% TritonX-100(非离子物质)2% Tween 20（非离子物质）2% NP-40 (非离子物质)2% 胆酸盐1% CHAPS（两性离子）其他添加剂20% 乙醇50% 甘油100 mmol/L Na2SO41.5 mol/L NaCl1 mmol/L EDTA60 mmol/L柠檬酸盐100 mmol/L 磷酸钠，pH 7.4 缓冲液100 mmol/L Tris-HCl pH 7.4100 mmol/L Tris pH 7.4100 mmol/L HEPES pH 7.4100 mmol/L MOPS pH 7.4100 mmol/L 醋酸钠pH 4注意：1.为了最佳的操作过程，按照上述纯化步骤进行预洗以除去任何削弱结合镍离子的物质。
细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒产品说明书（中文版）主要用
细胞可溶性总蛋白质制备试剂盒产品说明书（中文版）主要用途细胞可溶性总蛋白质制备试剂是一种旨在使用化学方法快速充分裂解细胞，并在蛋白酶抑制混合剂的帮助下，通过超速离心，收集所有细胞内可溶性蛋白质的权威而经典的技术方法。
该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞（动物、人体）等样品。
可直接用于核酸蛋白结合凝胶迁移电泳分析（EMSA ）、DNA 足迹法检测、特定蛋白后续纯化、蛋白一维或二维电泳、西方杂交、免疫抗体和质谱分析等等。
产品即到即用，性能稳定，操作便捷，收集效果好。
技术背景通过特殊裂解液和蛋白酶抑制混合剂可以防止裂解后细胞内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留细胞内蛋白质的免疫和生物学活性。
产品内容清理液（Reagent A ） 毫升 裂解液（Reagent B ） 毫升 活性液（Reagent C ） 微升 产品说明书1份保存方式保存活性液（Reagent C ）在-20℃冰箱里, 其余的保存在4℃冰箱里, 有效保证12月用户自备细胞刮脱棒：用于脱离贴壁细胞15毫升锥形离心管：用于细胞收集后离心 1.5毫升离心管：用于样品操作4℃台式离心机：用于细胞收集和去除杂质 4℃微型台式离心机：用于收集蛋白实验步骤实验开始前，将试剂盒里的从 ℃的冰箱里取出，放进冰槽里冻融，然后移出 微升到 毫升离心管，加入 微升，充分混匀，放进冰槽里，标记为。
然后进行下列操作。
活性液（Reagent C）裂解液（Reagent B）活性液（Reagent C）裂解工作液方法一：贴壁细胞可溶性总蛋白质制备1． 准备 个 cm 2细胞培养瓶的细胞（ 细胞） 2． 小心抽去 cm 2细胞培养瓶里的培养液3． 加入 毫升，清洗生长中的细胞表面 4． 小心抽去 毫升5． 加入 微升含有和GENMED 活性液（Reagent C）的，确保铺满整个培养平面 6． 即刻使用细胞刮脱棒刮脱细胞7． 用 微升枪头移出细胞液到预冷的无菌 毫升离心管 8． 强力涡旋震荡 秒9． 放进冰槽里孵育 分钟，期间每 分钟强力涡旋震荡 秒一次 10．（选择步骤）如暂时停止，放进 ℃冰箱里储存备用 11．（选择步骤）如继续操作，放进冰槽里继续12．即刻放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g （或 RPM ，例如eppendorf 5415D ） 13．小心移取上清液到新的 毫升离心管 14．放进 ℃的冰箱里备用15．或放进冰槽里，继续后续（西方杂交、免疫沉淀等）操作方法二：悬浮细胞可溶性总蛋白质制备1． 移入待测的悬浮细胞液（ 细胞）到 毫升锥形离心管 2． 放进 ℃台式离心机离心 分钟，速度为 g 3． 小心抽去上清液4． 加入 毫升，用移液管混匀细胞颗粒群 5． 放进 ℃台式离心机离心 分钟，速度为 g 6． 小心抽去上清液7． 加入 微升含有和的 8． 强力涡旋震荡 秒，充分混匀9． 放进冰槽里孵育 分钟，期间每 分钟强力涡旋震荡 秒一次 10．用 微升枪头移出细胞液到无菌的 毫升离心管 11．（选择步骤）如暂时停止，放进 ℃冰箱里储存备用 12．（选择步骤）如继续操作，放进冰槽里继续13．即刻放进 ℃微型台式离心机离心 分钟，速度为 g （或 RPM ，例如eppendorf 5415D ） 14．小心移取上清液到新的 毫升离心管 15．放进 ℃的冰箱里备用16．或放进冰槽里，继续后续（西方杂交、免疫沉淀等）操作注意事项1． 本产品为20次操作2． 待测细胞样品为5 X 106细胞，约100毫克细胞重量 3． 根据细胞量的不同，按比例调整试剂用量 4． 所有操作均须在无菌和4℃状态下进行清理液（Reagent A）清理液（Reagent A）裂解液（Reagent B）裂解工作液清理液（Reagent A）裂解液（Reagent B）活性液（Reagent C）裂解工作液5．可以使用胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液处理贴壁细胞，然后按照方法二继续6．有利于特异性反应，最大限度地减低非特异性信号 裂解液（Reagent B）7． 5 X 106细胞通常可获得10毫克可溶性总蛋白8．如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融9．本公司提供系列蛋白制备试剂产品质量标准1．本产品经鉴定性能长期稳定2．本产品经鉴定无蛋白酶污染。
总蛋白提取试剂盒说明书
总蛋白提取试剂盒(Total Protein Extraction Kit)P1250: 蛋白抽提试剂盒-I (实体组织和细胞蛋白抽提, 100 extractions)描述: 从组织细胞中提取总蛋白是Western Blot关键步骤。
实体软组织如脑脊髓富含磷脂, 神经血管含大量结缔组织, 而脂肪则有大量油脂, 常规方法难以有效从这些组织提取蛋白。
本试剂盒为组织或培养细胞总蛋白提取提供完整处理方案。
用裂解-结合缓冲液匀浆裂解实体组织, 或直接用裂解-结合缓冲液重悬培养细胞, 然后加入抽提试剂去除非蛋白成份, 离心、干燥后即可得到总蛋白。
蛋白沉淀溶解后用常规方法进行蛋白定量。
提取过程可在30-60分钟内完成, 可在1.5ml离心管微量提取也可大规模制备, 极为简便高效。
通常一次提取10-100mg组织所取得总蛋白可进行几十到上百次分析如蛋白质电泳、Western Blot、免疫共沉淀。
组成 1. 裂解-结合缓冲液100 ml 2. 抽提试剂100 ml每毫升裂解缓冲液和抽提试剂可提取10-100mg组织或1 ⨯ 107细胞。
试剂盒裂解缓冲液是过量。
适用多种实体软组织(> 1 mg), 如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道组织、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等, 以及多种原代细胞和永生化细胞系。
保留: 室温或4ºC保留2年固体组织蛋白提取1.每10-100mg固体组织剪碎后加入0.5-1 ml裂解液, 放入玻璃匀浆器内上下手动匀浆15次; 或用高速机械匀浆器12,000 rpm 破碎组织。
注意: 初始组织量应在10-100mg范围。
肝肾组织蛋白含量高, 提取时应加较少许组织, 不然形成蛋白膜厚、致密且难溶。
少许小未破碎组织不影响后续抽提。
2.仅取0.5ml组织匀浆液转移到1.5ml离心管, 弃去剩下组织匀浆液。
每0.5ml组织匀浆液加入2倍体积(1 ml)抽提试剂充足混匀。
D0061 哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒
哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒产品简介：碧云天生产的哺乳动物基因组DNA抽提试剂盒(Mammalian genomic DNA extraction kit)，采用了经典的蛋白酶K处理法，可以抽提到100-150kb以上的基因组DNA。
用本试剂盒抽提到的基因组DNA适用于Southern杂交、基因组DNA的PCR扩增及基因组DNA文库的构建等。
通常使用本试剂盒，从20毫克组织可以抽提到约40微克基因组DNA，从106-107Hela细胞可以抽提到约5-50微克基因组DNA。
本试剂盒足够抽提50个常规量的样品。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
10M 醋酸铵和Nuclease Free Water也可以室温保存。
注意事项：需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。
如果打算抽提到大片断的基因组DNA，则要尽量避免基因组DNA的物理性剪切。
例如避免剧烈振荡含有基因组DNA的样品，可以用剪掉枪头尖的枪头吸取含有基因组DNA的样品。
不可过分干燥基因组DNA沉淀，否则会极难溶解。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 样品收集a)对于组织样品：切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。
b) 对于贴壁细胞：胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
c)对于悬浮细胞：1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2. 基因组DNA抽提a) 样品处理完毕后，每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
b) 对于上述处理好的样品，每20毫克组织或106-107个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，颠倒混匀数次，充分裂解组织或细胞。
c) 50℃水浴消化过夜。
d) 加入500微升Tris平衡苯酚抽提样品。
e) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次。
f) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次。
蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用, 100X)
北京索莱宝科技有限公司蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用,100X)货号：P6731规格：100T保存：-20ºC保存，有效期12个月；4ºC保存，2个月有效；室温保存2周有效。
产品组成：产品名称规格保存蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用,100X)1mL-20ºC避光0.5M EDTA,pH8.01mL RT产品说明：哺乳动物细胞或组织提取物中含有许多内源性的蛋白酶、磷酸酶等，容易导致提取物中的蛋白降解或去修饰，从而影响后续的蛋白检测。
因此在提取物中添加适当的蛋白酶、磷酸酶等抑制剂是防止蛋白降解和去修饰的有效方法。
本产品用于哺乳动物细胞或组织蛋白提取的蛋白酶抑制剂混合物，包含了广谱的丝氨酸、半胱氨酸和酸性蛋白酶抑制剂、以及氨基肽酶抑制剂。
如用于检测金属蛋白酶活性，则不宜添加EDTA。
以1:100的比例分别把蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用,100X)和0.5M EDTA加入裂解液中，即可用于哺乳动物细胞或组织蛋白的提取，并有效抑制蛋白降解。
适用范围：抑制哺乳动物细胞或组织提取物中的各种蛋白酶活性，如丝氨酸蛋白酶、氨基肽酶、半胱氨酸蛋白酶、苏氨酸和天冬氨酸蛋白酶、金属蛋白酶等。
适用于Western Blot和免疫共沉淀检测磷酸化蛋白质、蛋白激酶活性测定等。
使用方法：1、蛋白酶抑制剂混合物（100X），使用时分别按照1:100的比例加入到裂解液中，混匀后即可使用。
含有蛋白酶抑制剂混合物的裂解液宜现用现配，不宜配制后冻存待后续使用。
2、根据需要，0.5M的EDTA也按照1:100的比例加入到裂解液中。
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动物细胞高纯内质网分离试剂盒产品说明书(中文版)
动物细胞高纯内质网分离试剂盒产品说明书（中文版）主要用途动物细胞高纯内质网分离试剂是一种旨在通过机械或化学处理、差速和等密度离心方法，从动物细胞中分离出活性完整而高度纯化的内质网细胞器组分的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其制备物产量高，活性保证，纯度可达99％。
适合于各种动物原代和培养细胞（人体、老鼠、兔子等）内质网的制备。
可以被用于细胞色素P450系统外源化合物（xenobiotics）代谢、脂类代谢、内质网膜蛋白和腔内蛋白等研究。
产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定，分离产量高。
技术背景内质网（endoplasmic reticulum；ER）是真核生物的细胞器组分，构成细胞内小管（tubules）、囊泡（vesicles）和小池（cisternae/sac）相互连接的网络结构，负责蛋白转译、折叠和转运成为细胞膜成分（例如跨膜受体和其它整合膜蛋白等）或分泌型蛋白（例如消化性酶），负责钙离子区隔（sequestration），以及糖原、固醇类和其它大分子的生产和储存等功能。
内质网分成三种：粗面内质网（Rough endoplasmic reticulum；RER）、滑面内质网（Smooth endoplasmic reticulum；SER）和肌质网（sarcoplasmic reticulum；SR）。
根据细胞代谢的需要，粗面内质网和滑面内质网会互相转换。
粗面内质网通过核糖体合成蛋白质并分类；滑面内质网进行固醇、碳水化合物和药物代谢等。
肌质网的主要功能为储存和释放钙离子。
内质网的分离是现代细胞生物学研究的常用手段之一：第一，通过机械或化学方法破裂组织细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得内质网；甚至，第四，可以通过等密度离心获得纯度更高的内质网。
产品内容清理液（Reagent A）毫升裂解液（Reagent B）毫升净化液（Reagent C）毫升活性液（Reagent D）微升强化液（Reagent E）毫升保存液（Reagent F）毫升高纯液（Reagent G）毫升分层液（Reagent H）毫升产品说明书1份保存方式保存净化液（Reagent C）和活性液（Reagent D）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里，有效保证6月用户自备HANK平衡盐缓冲溶液（HL12028）或PBS缓冲溶液（HL12033）：用于清理细胞胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（HL12024）：用于细胞脱离完全细胞培养液（HL12052）：用于细胞处理所需的培养基50毫升锥形离心管：用于样品制备的容器15毫升锥形离心管：用于样品制备的容器1.5毫升离心管：用于样品操作的容器6毫升超速离心管：用于超高速离心的容器4℃台式离心机：用于样品制备4℃超速离心机：用于样品制备DOUNCE匀浆器：用于裂解组织试管固定支架：用于离心管固定支撑3号针筒和18号针头：用于收集样品实验步骤一、组织匀浆法实验开始前，将试剂盒里的净化液（Reagent C）和活性液（Reagent D）冻融，然后移出移取xx微升活性液（Reagent D）、xx毫升净化液（Reagent C）到xx毫升的裂解液（Reagent B）里，混匀后，置入冰槽里，标记为裂解工作液。
真核哺乳动物细胞标签蛋白纯化
真核哺乳动物细胞标签蛋白纯化简介哺乳动物表达系统的突出优点是表达蛋白可正确折叠以及进行糖基化等翻译后修饰，表达产物具有生物活性，已成为表达和生产蛋白质药物，基因工程抗体，疫苗抗原和研究用目的蛋白功能的首选表达体系。
哺乳动物表达体系蛋白表达的主要流程为：PCR扩增目的片段——将基因片段克隆到表达载体上——细胞转染——细胞株的筛选和培养——纯化目的蛋白解决方案1、查找目的基因序列由于引物是根据目的基因序列来设计的，所以查找到目的基因序列是设计引物的第一步。
查找目的基因序列可以在多个网站上查到，也可以在文献中查找。
这里介绍的是比较常用的NCBI网站查找基因序列的方法。
NCBI 是美国国家生物技术信息中心，网站上具有多个生物数据库，是生物学研究常用的网站。
1.1打开NCBI网站，在下拉框选择Gene，输入目的蛋白名称；（这里以p65为例）1.2 找到对应物种，也可以选择右侧框中的物种查找；1.3 页面往下拉，找到mRNA and Protein(s)，选择正确的isoform，NMxxx表示mRNA序列，NPxxx表示蛋白质序列；1.4 新页面往下拉，点击CDS，点击右侧FASTA，即可得到目的基因的mRNA序列，复制粘贴到新的文本，以备使用。
2、选择合适的表达载体常用的真核表达载体有pCMV，pcDNA等。
表达载体一般包括启动子，多克隆位点，抗性基因，标签基因等等。
表达载体的选择原则：1）启动子是否为真核启动子；2）标签基因是否是我们需要用的标签。
常用的标签的标签有His，GST，MBP，Strep，Flag标签等，标签选择如下：3、设计引物设计引物也有多个软件可以使用，这里介绍的是常用的Primer 5软件。
设计引物的基本原则是：1）引物长度一般为15-30bp，常用的为18-27bp，但不能大于38bp；2）引物GC含量一般为40%-60%，以45-55%为宜，上下游引物GC含量和Tm值要保持接近；3）引物所对应的模板序列的Tm值最好在72℃左右；4）3'端最好不要是连续碱基，GGG或CCC会导致错误的引发，同时3'端最后一个碱基最好不要是A或T，否则容易导致错配；5）以公式Tm=4*（G+C）+2*（A+T）-5计算Tm值，也就是退火温度。
全蛋白抽提试剂盒
凯基全蛋白提取试剂盒Cat Number：For Research Use OnlyStore at 4℃ for one yearExpire date：一、 试剂盒说明本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白， 用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效。
获得的全蛋白可用于Western Blot、免疫共沉淀等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂。
二、 试剂盒组份组份 KGP250 （50 tests） KGP2100（100 tests）储存温度 Lysis Buffer 50 mL 100 mL 4℃磷酸酶抑制剂 250 μL 500μL -20℃蛋白酶抑制剂 50 μL 100 μL -20℃PMSF（100mM）500 μL 1000 μL -20℃L三、 操作步骤Ⅰ 实体组织蛋白的提取1． 在每1mL 冷Lysis Buffer加入5 μL磷酸酶抑制剂， 1 μL蛋白酶抑制剂和 5μL 100mM PMSF，混匀。
冰上保存数分钟待用。
2． 每100mg固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3mm×3mm左右的小块，加入0.5～1 mL冷 Lysis Buffer，玻璃匀浆器上下手动匀浆15次，注意低温操作；3． 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，离心10000转/分，4℃离心5 min；4． 取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，蛋白定量（Bradford法、BCA法）；5． 分装保存于-70℃,避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取1． 贴壁培养的细胞，吸去培养基后，加入10mL/150mm培养板的冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除培养液；2． 悬浮培养的细胞或用细胞刮子刮下的贴壁细胞，将细胞及培养液移至离心管中， 1000转/分离心10 min，再用10mL/150mm培养板的冷PBS，1000转/分离心5 min洗两次；3． 在每 1mL冷 Lysis Buffer加入5μL磷酸酶抑制剂， 1μL蛋白酶抑制剂和5μL 100mM PMSF，混匀。
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INSTRUCTIONSM-PER ®Mammalian Protein Extraction ReagentNumber Description78503 M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent , 25mL, sufficient reagent to extract protein from ~2.5g of cells78501 M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent , 250mL, sufficient reagent to extract protein from ~25g of cells78505M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent , 1L, sufficient reagent to extract protein from ~100g of cellsStorage: Upon receipt store product at room temperature.IntroductionThe Thermo Scientific M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent extracts cytoplasmic and nuclear protein from cultured mammalian cells using a proprietary detergent in 25mM bicine buffer (pH 7.6). The simple composition of this reagent is compatible with many different applications, such as reporter assays (e.g., luciferase, β-galactosidase,chloramphenicol acetyltransferase), protein assays (e.g., PKA, PKC, tyrosine kinase), immunoassays (e.g., Western blot, ELISA, RIA) and protein purification. M-PER Reagent enables rapid, mild and efficient lysis. The reagent is dialyzable and the cell lysate is compatible with protein assays such as the Thermo Scientific Coomassie Plus (Bradford) Assay and the Pierce BCA Protein Assay.Important Product Information•Adherent Cells vs. Cell Pellets: M-PER Reagent effectively lyses both plated cells and cells pelleted from suspension cultures or scraped cells. For direct, in-plate lysis of adherent cells, protein extraction efficiency using M-PER Reagent is similar to freeze/thaw methods. For lysis of pelleted cells, either from cell suspension or scraped adherent cells, protein extraction efficiency is typically 25% higher than that achieved with freeze-thaw (three cycles) and 20% higher than sonication (2 minutes with 50% pulse) methods.•Cell Lines: M-PER Reagent has been tested on cell lines representing several different cell types. Complete lysis of adherent cells is observed with, but is not limited to, the following cell lines: COS-7, NIH3T3, Hepa 1-6, 293, CHO, MDA, MB 231 and FM2 cells. For protein extraction from tissues, greater efficiency may be achieved using Thermo Scientific T-PER Tissue Protein Extraction Reagent (Product No. 78510).•Additives: Protease inhibitors, such as Thermo Scientific Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (Product No. 87785) may be added to the reagent. For immunoassays, such as ELISA or RIA, extracts prepared in M-PER Reagent alone generate satisfactory results; however, adding 150mM NaCl to the cell lysate often improves results.•Volume for Cell Lysis: Volumes indicated in Table 1 are optimal for maximum cell lysis without scraping cells. If more concentrated extracts are preferred, use a smaller volume; however, scraping the cells is necessary for maximal recovery. If cell volume is unknown, it may be estimated. For example, 2 × 106 of HeLa cells equals ~10μL of a packed cell volume, which is equivalent to 20 mg of cells and requires 200 μl of M-PER Reagent.• Compatibility with Protein Assays: M-PER Reagent is compatible with Coomassie Plus (Bradford) Assay (Protein No. 23236) and the Pierce ® BCA Protein Assay Kit (Product No 23225).Procedure for Lysis of Monolayer-cultured Mammalian CellsNote: M-PER Reagent does not contain protease inhibitors. If desired, add Halt™ Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (Product No. 87785) to the reagent.1.Carefully remove (decant) culture medium from adherent cells.Note: If the culture medium contained phenol red or other reagents that could interfere with subsequent protein analysis,wash cells once in wash buffer (e.g., PBS).2.Add the appropriate amount of M-PER Reagent to the plate or to each plate well (see Table 1). Shake gently for5 minutes.Table 1. Suggested volume of Thermo Scientific M-PER Reagent to use for different sizes ofstandard culture plates.Plate Size/Surface Area M-PER Reagent Volume100mm* 500-1,000μL60mm 250-500µL 6-well plate 200-400µL per well24-well plate 100-200µL per well96-well plate 50-100µL per well*Cells grown in 100mm plates typically contain 10 cells (50mg) and yield ~3mg total protein depending oncell type.3.Collect the lysate and transfer to a microcentrifuge tube. Centrifuge samples at ~14,000 ×g for 5-10 minutes to pellet thecell debris.4.Transfer the supernatant to a new tube for analysis.Procedure for Lysis of Suspension-cultured Mammalian Cells1.Pellet the suspension of cells by centrifugation at 2,500 ×g for 10 minutes. Discard the supernatant.2.Optional Wash: If the culture medium contained phenol red or other reagents that could interfere with subsequent proteinanalysis, wash the cells once by resuspending the cell pellet in wash buffer (e.g., PBS). Pellet cells by centrifugation at2,500 ×g for 10 minutes.3.Add M-PER Reagent to the cell pellet. Use at least 1mL of M-PER Reagent for each 100 mg (~100μL) of wet cell pellet.If a large amount of cells is used, first add 1/10 the final recommended volume of M-PER Reagent to the cell pellet.Pipette the mixture up and down to resuspend pellet. Add the rest of the M-PER Reagent to the cell suspension.Note: Total protein yield for 100mg of wet cell pellet is approximately 6 mg depending on cell type.4.Shake mixture gently for 10 minutes. Remove cell debris by centrifugation at ~14,000 ×g for 15 minutes.5.Transfer the supernatant to a new tube for analysis.TroubleshootingProblem PossibleCause SolutionProtein expression was low Optimize the transfection procedureInsufficient amount of M-PER Reagent was used Add more M-PER ReagentLow protein yieldM-PER Reagent was unable to penetrate the cell membrane Increase incubation time and shake more vigorously during incubationUnable to retrieve membrane protein M-PER Reagent extracts only nuclear andcytoplasmic proteinsUse Thermo Scientific Mem-PER MembraneProtein Extraction Reagent (Product No.89826)Related Thermo Scientific Products87785 Halt Protease Inhibitor Cocktail, EDTA-Free (100X), 1mL87786 Halt Protease Inhibitor Cocktail, contains sufficient reagents to treat 100mL of sample78248 B-PER® Bacterial Protein Extraction Reagent, 500mL78990 Y-PER® Yeast Protein Extraction Reagent, 500mLProtein Extraction Reagent Kit89826 Mem-PERMembrane23236 Coomassie Plus (Bradford) Assay23227 Pierce BCA Protein Assay Kit78833 NE-PER® Nuclear and Cytoplasmic Extraction Kit26148 Pierce Direct IP Kit34080 SuperSignal® West Pico Chemiluminescent Substrate, 500mL, Western blot substrate for HRP 34076 SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate, 200mL, Western blot substrate for HRP Product ReferencesCampa, M.J., et al. (2003). Protein expression profiling identifies macrophage migration inhibitory factor and cyclophilin A as potential molecular targets in non-small cell lung cancer. Cancer Res63:1652-6.Deng, W., et al. (2003). LPA protects intestinal epithelial cells from apoptosis by inhibiting the mitochondrial pathway. Amer J Physiol-Gastrointest L 284:821-9.Phiel, C.J., et al. (2001). Differential binding of an SRF/NK-2/MEF2 transcription factor complex in normal versus neoplastic smooth muscle tissues. Biol Chem.276(37):34637-50.Waite, K.A. and Eng, C. (2003). BMP2 exposure results in decreased PTEN protein degradation and increased PTEN levels. Hum Mol Genet12(6):679-84. B-PER® Technology is protected by U.S. Patent # 6,174,704.SuperSignal® Technology is protected by U.S. Patent #6,432,662.This product (“Product”) is warranted to operate or perform substantially in conformance with published Product specifications in effect at the time of sale, as set forth in the Product documentation, specifications and/or accompanying package inserts (“Documentation”) and to be free from defects in material and workmanship. Unless otherwise expressly authorized in writing, Products are supplied for research use only. No claim of suitability for use in applications regulated by FDA is made. The warranty provided herein is valid only when used by properly trained individuals. Unless otherwise stated in the Documentation, this warranty is limited to one year from date of shipment when the Product is subjected to normal, proper and intended usage. This warranty does not extend to anyone other than the original purchaser of the Product (“Buyer”).No other warranties, express or implied, are granted, including without limitation, implied warranties of merchantability, fitness for any particular purpose, or non infringement. Buyer’s exclusive remedy for non-conforming Products during the warranty period is limited to replacement of or refund for the non-conforming Product(s).There is no obligation to replace Products as the result of (i) accident, disaster or event of force majeure, (ii) misuse, fault or negligence of or by Buyer, (iii) use of the Products in a manner for which they were not designed, or (iv) improper storage and handling of the Products.Current versions of product instructions are available at /pierce. For a faxed copy, call 800-874-3723 or contact your local distributor.© 2010 Thermo Fisher Scientific Inc. All rights reserved. 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