实验七 氨基酸的分离鉴定

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实验结果:
丙氨酸 苯丙氨酸 天冬氨酸
L/㎝ d/㎝ Rf
原点到溶剂前沿距离为L，原点到层析点中心距离为d
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氨基酸的定量分析 —甲醛滴定法
一、目的：
初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量的原理和操作要点
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二、实验原理
水溶液中的氨基酸为兼性离子，因而不能直接用碱 滴定氨基酸的羧基。甲醛可与氨基酸上的—N+H3结合 ，形成—NH—CH2OH、—N(CH2—OH)2 等羟甲基衍 生物，使N+H3上的H+游离出来，这样就可以用碱滴定 N+H3放出H+，测出氨基氮，从而计算氨基酸的含量。
（二）实验器具
锥形瓶 、碱式滴定管、移液管洗耳球、天平
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容量瓶、试剂瓶、量筒、玻棒与烧杯
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四、操作步骤
1、取5只50ml锥形瓶，按下表加入试剂。
锥形瓶编号 1
2
3
4
试剂
0.1mol/L甘氨酸溶液 0 /mL
1
1
0
中性甲醛溶液/mL 1
1
1
1
水/mL
3
2
2
2
0.5%酚酞酒精溶液 （滴）
4
4
4
一次。尽量点成圆形，并在各点表上样品名。
3 手通过纸将滤纸卷成圆筒形，并用针缝，共3针。每缝一针打
个结，第三针的线留长一点。
4 将缝好的纸（装入）垂直放入装有扩展剂的层析缸内（点样的
一端朝下，滤纸不应碰到缸壁）
5 约2个小时后，将滤纸取出，拆掉线后，放入烘干机内烘干，约 10分 钟后取出即显色。
6 画出溶液前沿线，确立个实层用析文点档中心，计算各氨基酸的Rf值
体积
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五、计算
VNaoH*0.0200mol/L
标准甘氨酸氨基氮的回收率=
*14.008
理论计算值
理论计算值:取用氨基酸的体积乘以浓度,再乘以14.008 VNaoH 两次测定所用氨基酸的体积的平均值
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每毫升氨基酸溶液中含氨基氮的毫克数为
式中：V1为滴定样品消耗氢氧化钠的体积（ml）； V2为滴空白消耗氢氧化钠的体积（ml）； MNaOH 标准NaOH溶液的摩尔浓度
1、0.5%酚酞酒精溶液
称0.5g酚酞溶于100ml50%酒精中。
2、0.1mol/L甘氨酸溶液
取3.75g甘氨酸溶于500ml蒸馏水。
3、标准0.0200mol/L 氢氧化钠溶液
4、中性甲醛溶液
取甲醛溶液50ml，加0.5%酚酞指示剂约3ml，滴加0.01mol/LNaOH
溶液，
使溶液呈微红色，临用前中和。
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若样品中只含有单一的已知氨基酸，则可由此法滴 定的结果算出氨基酸的含量。若样品中含有多种氨 基酸（如蛋白质水解液），测不能由此法算出氨基 酸的含量。 脯氨酸与甲醛作用后，生成的化合物不稳定，导致 滴定后结果偏低；酪氨酸含酚基结构，导致滴定结 果偏高。
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三、材料、试剂与器具
（一）试剂
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思考题
1、甲醛法测定氨基酸含量的原理是什么？ 2、根据滴定结果，总结分析此法在实际应用中的
优缺点。 3、为什么氢氧化钠溶液滴定氨基酸的—N+H3基 上
的H+，不能用一般的酸碱指示剂？
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2
溶剂
溶液前沿层析 前沿
点
苯丙
氨酸
酸
原点 氨酸
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丙氨 天冬
3
一 器材 1 层析缸 4 培养皿
2 毛细管 3 喷雾器 5 层析滤纸
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4
四 操作步骤
1 取层析滤纸一张，在纸的一端距边缘2-3㎝处用铅笔划一条直
线，在直线上约每隔3-4㎝做一次记号，共记四次。
2 用毛细管将各种氨基酸样品分别点在4个记号点上，干后再点
实验七 氨基酸的分离鉴定
——纸层析法
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一 目的 通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理及操作方法
二 原理 纸层析法是利用各物质不同的分配系数，使混合物随流动相时而得
到分离的方法。 纸层析法是以滤纸作为惰性支持物的。滤纸纤维与水亲和力较强，
而与有机溶剂亲和力弱，所以纸层析以滤纸纤维和结合水为固定相， 以有机溶剂为流动相。当有机相沿滤纸流动经过样品点时，样品点上 的溶液在水相和有机相之间进行分配，样品移动速率与样品的极性及 水亲和力有关，因此，极性氨基酸移动较慢，而非极性氨基酸移动较 快。 物质被分离后在纸层析图上的位置用Rf值表示 Rf=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿距离 在一定条件下某种物质的Rf值是常数
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未知浓度的
0
0
0
1
氨基酸混合溶液/mL
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0 1 2 4 1
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2、用0.0200mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色 注意：滴定管中溶液的初始位置和滴定结束时的位置； 滴定管的使用方法
3、用0.0200mol/L NaOH溶液滴定至溶液变微红色
4、记录每次滴定所用的0.0200mol/L NaOH溶液 的