黄芩苷提取说课讲解
黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴定修订版
黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴定修订版IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】药学专业综合实验（二）题目：黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定学院：医药学院班级： xxxxxxxxxxx姓名： xxxxxxxxxxxxxxx学号： xxxxxxxxx黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定黄芩简介：黄芩又名山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植物，以根入药。
有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。
含多种黄酮类化合物，主要为黄芩甙，黄芩素，汉黄芩甙，汉黄芩素，７-甲氧基黄芩素，７-甲氧基去甲基汉黄芩素，黄芩黄酮Ⅰ，黄芩黄酮Ⅱ等。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
一、实验目的1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
二、实验原理黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性和弱酸性，提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液，同时其可在碱性溶液中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。
利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离。
三、实验材料与仪器材料：黄芩干燥根仪器：旋转蒸发仪离心沉淀机 200g摇摆式高速中药粉碎机电子天平真空泵抽滤装置圆底烧瓶水浴锅索氏提取器量筒玻璃棒PH试纸试剂：浓盐酸 60%乙醇 40%氢氧化钠 95%乙醇 50%乙醇2mol/l盐酸镁粉二氧化锆枸橼酸三氧化铝四、实验步骤1、黄芩苷的提取、分离黄芩粗粉100g101h过滤两次滤液药渣1-2，80℃水浴保温0.5h，充分结晶，过滤氢氧化钠调pH至6.5-7，加95%乙醇，过滤滤渣(弃去加浓盐酸调pH至1-2放置4h，抽滤沉淀滤液水洗，50%乙醇洗，再用95%乙醇洗或结晶(粗制黄芩苷)2、黄芩苷的鉴定（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水浴微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，观察颜色变化。
黄芩中黄芩苷的提取与鉴定
黄芩中黄芩苷的提取与鉴定黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi）是一种常见的中草药，具有抗炎、抗菌、抗氧化等多种药理活性。
其中，黄芩苷是黄芩中的主要有效成分之一，具有广泛的药理活性和应用价值。
本文将从黄芩苷的提取和鉴定两个方面介绍黄芩苷的相关知识。
黄芩苷的提取是利用黄芩中的有效成分黄酮类化合物进行的。
黄芩干燥根茎部分被研磨成粉末状，然后通过溶剂提取的方法来获得黄芩苷。
常用的溶剂有乙醇、甲醇等。
提取过程中，需要注意溶剂的选择、浸提时间和浸提温度等因素，以保证黄芩苷的高效提取。
提取后的溶液经过过滤、浓缩、结晶等步骤，最终得到黄芩苷的纯品。
黄芩苷的鉴定主要通过理化性质鉴定和分析方法鉴定两个方面进行。
首先是理化性质鉴定，黄芩苷是一种白色或微黄色结晶性粉末，熔点为223-225℃。
它在水中几乎不溶，在乙醇、甲醇和酒精中溶解度较大。
其次是分析方法鉴定，常用的方法有红外光谱法、高效液相色谱法和质谱法等。
红外光谱法可以通过检测黄芩苷的红外吸收峰来确定其结构特征；高效液相色谱法可以用于检测黄芩苷的含量和纯度；质谱法可以通过检测黄芩苷的质荷比和碎片峰来确定其分子结构。
黄芩苷作为黄芩的主要有效成分，具有多种药理活性和应用价值。
研究表明，黄芩苷具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、抗菌等作用。
它可以通过抑制炎症因子的产生和释放，发挥抗炎作用；通过清除自由基，增强抗氧化能力，发挥抗氧化作用；通过抑制肿瘤细胞的增殖和诱导肿瘤细胞凋亡，发挥抗肿瘤作用；通过抑制细菌的生长和繁殖，发挥抗菌作用。
因此，黄芩苷在药物研发和临床应用方面具有重要的价值和潜力。
黄芩苷作为黄芩中的主要有效成分，是一种具有广泛药理活性和应用价值的化合物。
通过黄芩苷的提取和鉴定，可以获得高纯度的黄芩苷，并进一步研究其药理机制和应用价值。
希望通过对黄芩苷的深入研究，能够为人们的健康带来更多的福祉。
黄芩苷提取和测定方法研究
黄芩苷提取和测定方法研究
1黄芩苷的简介
黄芩苷（Scutellarin）是一种有机化合物，来源于多种植物，通常以多酚类植物出现，已经具有多项药理活性。
研究表明，黄芩苷有止血止痛、抗炎、解热、抗氧化、抗病毒和肝保护作用，可用于治疗出血性痢疾、白喉、肺炎和胆结石等疾病。
2黄芩苷提取和测定方法
（1）黄芩苷的提取方法
黄芩苷的提取方法主要有乙醇提取法和玻璃酸乙酯结合法，其中常用乙醇提取法，采用高纯乙醇与黄芩提取物反应溶解黄芩中的物质成为溶液，然后过滤、洗涤，将洗涤液收集，将乙醇挥发掉，取到黄芩提取物，最后将提取物经过干燥，得到白色粉末态的提取物。
（2）黄芩苷的测定方法
一般使用的测定方法是HPLC法，首先将植物物质经过研磨、筛分处理，然后用乙醇提取物，该提取物在HPLC上测量，使用偏氟呋喃多次作为参比，以调整柱温度、流动相等、柱压和流动率实现分离，最后以检测UV信号来表示黄芩苷含量浓度大小。
3结论
黄芩苷是一类活性成分，具有多项药理作用，能够有效治疗多种疾病。
提取黄芩苷的方法有很多，但最常用的是乙醇提取法，而黄芩
苷的测定方法主要是用HPLC法来测定其含量，可以准确测定出黄芩苷的含量和活性成分。
黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定,DOC
药学专业综合实验（二）题目：黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定学院：医药学院班级：xxxxxxxxxxx姓名：xxxxxxxxxxxxxxx黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定黄芩简介：黄芩又名山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植物，以根入药。
有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。
含多种黄酮类化合物，主要为黄芩甙，黄芩素，汉黄芩甙，汉黄芩素，７-甲氧基黄芩素，７-甲氧基去甲基汉黄芩素，黄芩黄酮Ⅰ，黄芩黄酮Ⅱ等。
仪器：旋转蒸发仪离心沉淀机200g摇摆式高速中药粉碎机电子天平真空泵抽滤装置圆底烧瓶水浴锅索氏提取器量筒玻璃棒PH试纸试剂：浓盐酸60%乙醇40%氢氧化钠95%乙醇50%乙醇2mol/l盐酸镁粉二氧化锆枸橼酸三氧化铝四、实验步骤1、黄芩苷的提取、分离黄芩粗粉100g加10倍量水煎煮2次，每次1h过滤为100g，所以收率为0.139%。
本实验中：M为0.139g，M2.芩苷鉴定结果(1).盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水域微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，溶液产生樱红色。
(2).锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加数滴5%二氧化锆溶液，振荡后，显黄色并有黄绿色荧光。
再加2%枸橼酸试剂，黄色和荧光褪去。
(3).三氧化铝反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加入2%三氧化铝甲醇溶液数滴，溶液产生鲜黄色，在紫外光下显黄绿色荧光。
答：黄芩苷在黄芩中以羧酸盐存在，可以被溶剂溶出，传统的提取方法以水做提取剂，但黄芩苷只能微溶于热水，而且在水煎煮的过程中引入了大量的水溶性杂质。
黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性，所以在提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液作为提取液，大大增加它的溶出率，并且抑制象鞣质、蛋白、粘液等高分子杂质的溶出，便于过滤纯化。
浓度(50%～70%)的乙醇水溶液其极性与黄芩苷的极性相近，便于其溶出。
黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴定
黄芩中黄芩苷的提取分离与鉴定This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020药学专业综合实验（二）题目：黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定学院：医药学院班级： xxxxxxxxxxx姓名： xxxxxxxxxxxxxxx学号： xxxxxxxxx黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定黄芩简介：黄芩又名山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植物，以根入药。
有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。
含多种黄酮类化合物，主要为黄芩甙，黄芩素，汉黄芩甙，汉黄芩素，７-甲氧基黄芩素，７-甲氧基去甲基汉黄芩素，黄芩黄酮Ⅰ，黄芩黄酮Ⅱ等。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
一、实验目的1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
二、实验原理黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性和弱酸性，提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液，同时其可在碱性溶液中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。
利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离。
三、实验材料与仪器材料：黄芩干燥根仪器：旋转蒸发仪离心沉淀机 200g摇摆式高速中药粉碎机电子天平真空泵抽滤装置圆底烧瓶水浴锅索氏提取器量筒玻璃棒PH试纸试剂：浓盐酸 60%乙醇 40%氢氧化钠 95%乙醇 50%乙醇2mol/l盐酸镁粉二氧化锆枸橼酸三氧化铝四、实验步骤1、黄芩苷的提取、分离黄芩粗粉100g加10倍量水煎煮2次，每次1h过滤4h，抽滤(粗制黄芩苷)2、黄芩苷的鉴定（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水浴微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，观察颜色变化。
（2）锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加数滴5%二氧化锆溶液，振荡后，观察颜色变化；再加2%枸橼酸试剂，观察颜色变化。
黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定
药学专业综合实验（二）题目：黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定学院：医药学院班级： xxxxxxxxxxx姓名： xxxxxxxxxxxxxxx学号： xxxxxxxxx黄芩中黄芩苷的提取、分离与鉴定黄芩简介：黄芩又名山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植物，以根入药。
有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。
含多种黄酮类化合物，主要为黄芩甙，黄芩素，汉黄芩甙，汉黄芩素，７-甲氧基黄芩素，７-甲氧基去甲基汉黄芩素，黄芩黄酮Ⅰ，黄芩黄酮Ⅱ等。
主治温热病、上呼吸道感染、肺热咳嗽、湿热黄胆、肺炎、痢疾、咳血、目赤、胎动不安、高血压、痈肿疖疮等症。
产于河北、辽宁、陕西、山西、山东、内蒙古、黑龙江等。
一、实验目的1掌握从黄芩中提取、精制黄芩苷的原理、方法及操作要点。
2掌握黄芩苷的结构鉴定原理及方法。
二、实验原理黄芩苷为一连有葡萄糖醛酸结构的黄酮化合物，具有一定的脂溶性和弱酸性，提取时可以选择一定浓度的乙醇溶液，同时其可在碱性溶液中溶解，形成钠盐，在提取液中加酸酸化，使黄芩苷游离析出。
利用黄芩苷能溶于碱，不溶于酸的性质使之与酸性杂质分离。
三、实验材料与仪器材料：黄芩干燥根仪器：旋转蒸发仪离心沉淀机 200g摇摆式高速中药粉碎机电子天平真空泵抽滤装置圆底烧瓶水浴锅索氏提取器量筒玻璃棒PH试纸试剂：浓盐酸 60%乙醇 40%氢氧化钠 95%乙醇 50%乙醇2mol/l盐酸镁粉二氧化锆枸橼酸三氧化铝四、实验步骤1、黄芩苷的提取、分离黄芩粗粉100g加10倍量水煎煮2次，每次1h过滤4h，抽滤(粗制黄芩苷)2、黄芩苷的鉴定（1）盐酸-镁粉反应：取黄芩苷少许置于试管中，以乙醇1ml水浴微温振摇溶解，加镁粉适量，滴加浓盐酸数滴，观察颜色变化。
（2）锆-枸橼酸反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加数滴5%二氧化锆溶液，振荡后，观察颜色变化；再加2%枸橼酸试剂，观察颜色变化。
（3）三氧化铝反应：取黄芩苷少许置于试管中，加水2ml置水浴上温热至溶解，加入2%三氧化铝甲醇溶液数滴，观察颜色变化。
黄芩中黄芩苷类化合物的提取ppt课件
滤液
沉淀
离心机的使用
原理：通过离心机转子高速旋转产生的强大离心力，悬浮液与 悬浮颗粒之间因为重力的差异，而导致不同的沉降速度。
转子数 间
交叉对称 转速 时
打开
离心机使用注意 样品要对称放置 样品瓶外面无水 停止后才能打开
第二次
沉淀 转入锥形瓶中，加浓度95%的乙醇超声 洗涤2-3次，每次50 mL,离心
2.结晶溶剂的选择
结晶溶剂的选择是关键。 对结晶溶剂的要求：对欲纯化成分加热时溶解，冷却时析出； 对杂质则冷热都不溶或都溶； 溶剂的沸点适中； 与欲结晶的成分不发生化学反应； 尽可能安全、价廉、易得等。 常用结晶溶剂：水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、三氯甲烷等等。
第三次
结晶（黄芩苷）
由于上节课得到的黄芩 苷结晶太少，回流这一 步就暂时不做。
溶液。水浴加热15min左右，放冷。将此溶液在搅拌下倾入20ml冰水
中，析出黄色沉淀，抽滤并用水洗涤至无酸性反应，干燥。 水解所得黄色沉淀，用氯仿反复提取，合并氯仿溶液，浓缩回收
氯仿至干，残留物再用甲醇重结晶得黄色针晶，为黄芩素，供苷元的
鉴定。(不做) 滤去苷元后的水溶液，加固体碳酸钡使水溶液至中性，滤去碳酸
水解
COOH O OH OH OH O O
HO HO
O
HO OH O葡 萄 Fra bibliotek 醛 酸OH
O
黄芩苷（Baicalin）
COOH O OH OH OH OH O O OCH3 O
黄芩素（Baicalein）
OCH3 HO O
苷元
OH
O
汉黄芩苷（Wogonoside）
汉黄芩素（Wogonin）
黄芩苷的相关特性 理化性质
黄芩中黄芩苷的提取工艺流程
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在进行黄芩中黄芩苷的提取之前，需要做好充分的准备工作。
黄芩苷的提取分离鉴定
提 取 黄分 芩离 实 苷 验 流 程 图
黄芩粗粉50g
1）8倍量沸水提取两次，每次1小时(水提)
滤渣（弃去）
合并滤液 2）加盐酸调至pH=2 ; 在80度保温半小时；放冷析晶 （酸沉）
滤液(弃去)
沉淀(黄芩苷粗品) 3）加水搅匀，用浓NaOH(40%)调至pH=7，溶解，过滤 （成盐酸沉）
滤液
4
实验原理
黄芩苷有多个酚羟基、羧基，显酸性， 在植物中常以盐的形式存在。故用沸水法提 取，再将提取液调至酸性，黄芩苷即析出。
5
黄芩苷的提取分离方法（沸水提取法）
（1）称取黄芩粗粉50g，置于1000ml烧杯中，加8倍量水 （500ml）,加热煮沸1小时，如此2次，合并提取液。(水提) （2）将提取液加浓盐酸至pH1-2,加热至80度左右保温半小时 后，放冷析出结晶，抽滤。（酸沉） （3）收集粗品，加入8倍量水，搅匀，用浓氢氧化钠(40%)调 至pH7，溶解，过滤取滤液，加等量乙醇，使黄芩苷成钠盐溶解， 滤除杂质。（成盐除杂） （4）往滤液中滴加浓盐酸至pH1-2,充分搅拌，50度下保温半 小时使黄芩苷析出，滤取沉淀，以10ml乙醇洗涤，干燥，得黄芩 苷。再以7倍量95%乙醇洗涤，干燥，得较纯的黄芩苷。
黄芩粗粉50g18倍量沸水提取两次每次1小时水提滤液弃去沉淀黄芩苷粗品2加盐酸调至ph2合并滤液3加水搅匀用浓naoh40调至ph7溶解过滤成盐酸沉残渣弃去滤液沉淀乙醇洗涤得黄芩苷纯品4加hcl至ph2充分搅拌50度下保温30min使黄芩苷析出过滤定性反应
1
天然药物化学
黄芩中黄芩苷的提取、分离和结构鉴定
2
又名：山茶根、黄芩茶、土金茶根；为唇形科植 物，以根入药。有清热燥湿，凉血安胎，解毒等功效。 【化学成分】 含多种黄酮类化合物, 主要为黄芩甙, 黄 芩素, 汉黄芩甙, 汉黄芩素, ７-甲氧基黄芩素, ７-甲氧 基去甲基汉黄芩素, 黄芩黄酮Ⅰ, 黄芩黄酮Ⅱ等。
黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别
黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别黄芩为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的根，又名空心草、黄金茶。
味苦、性寒。
能泻实火，除湿热，止血，安胎。
治壮热烦渴，肺热咳嗽，湿热泻痢，黄疸，热淋，吐、衄、崩、漏，目赤肿痛，胎动不安，痈肿疔疮。
黄芩根含黄芩素、黄芩甙、汉黄芩素、汉黄芩甙和黄芩新素等多种黄酮类化合物，还含苯甲酸、β-谷甾醇等。
黄芩茎叶中含黄芩甙。
黄芩主要药理作用有抗炎、抗变态反应、利尿、利胆、降胆固醇、抗血栓形成、缓解哮喘等作用。
黄芩总黄酮为中成药“银黄注射液”、“三黄片”中主要有效成分，用于治疗呼吸道感染、菌痢和传染性肝炎等症。
一、实验目的1．掌握从黄芩中提取黄酮类化合物的提取分离原理和操作方法；2．熟悉黄酮类成分及黄芩苷的主要理化性质和一般鉴别方法。
二、仪器与试药（一）仪器SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱烧杯（1000mL、100mL）乳钵电炉子移液管（10mL、5mL）离心机三角烧瓶（250mL）（二）试药黄芩粗粉盐酸温度计乙醇镁粉硅胶 CMC-Na 黄芩苷对照品α-萘酚试液浓硫酸氯化氧锆甲醇柠檬酸三、主要成分的结构与性质R RH 黄芩素 H 汉黄芩素 葡萄糖醛酸 黄芩苷 葡萄糖醛酸 汉黄芩苷四、实验原理：黄芩苷及其他黄酮类化合物在热水中溶解度大，在强酸性条件下易析出总黄酮沉淀，利用此性质从黄芩中提取总黄酮。
利用黄芩苷和黄芩素两者在95%乙醇中溶解度的差别而可将黄芩苷和黄芩素彼此分离。
五、实验内容： （一）总黄酮的提取20分钟，过滤20分钟，过滤沉淀 直接在离心筒中用热水洗两次（第一次不搅，洗去沉淀表面上的酸液；第二次加入热水把沉淀搅匀，离心后，倾去上清液）OOOHOH RO沉淀60-70℃干燥2小时总黄酮（二）黄芩苷与黄芩素的分离总黄酮20mL乙醇转溶在三角烧瓶中，（注1乙醇同上法浸泡10分钟，抽滤醇液（同注1）沉淀再用10mL95%乙醇直接在滤器上分次洗涤沉淀数次，至滤液颜色变浅醇液（同注1）沉淀抽干，80℃干燥30分钟黄芩苷粗品（二）黄芩苷的精制乙醇回流20分钟，趁热抽滤15分钟，趁热抽滤（三）黄芩苷的鉴别1．化学检识：（1）盐酸-镁粉反应：取1mL乙醇样品液于试管中，加入浓盐酸1mL，再加镁粉少许，观察颜色变化。
黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别
黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别黄芩中黄芩苷的提取分离和鉴别黄芩为唇形科植物黄芩(Scutellaria baicalensis Georgi)的根，⼜名空⼼草、黄⾦茶。
味苦、性寒。
能泻实⽕，除湿热，⽌⾎，安胎。
治壮热烦渴，肺热咳嗽，湿热泻痢，黄疸，热淋，吐、衄、崩、漏，⽬⾚肿痛，胎动不安，痈肿疔疮。
黄芩根含黄芩素、黄芩甙、汉黄芩素、汉黄芩甙和黄芩新素等多种黄酮类化合物，还含苯甲酸、β-⾕甾醇等。
黄芩茎叶中含黄芩甙。
黄芩主要药理作⽤有抗炎、抗变态反应、利尿、利胆、降胆固醇、抗⾎栓形成、缓解哮喘等作⽤。
黄芩总黄酮为中成药“银黄注射液”、“三黄⽚”中主要有效成分，⽤于治疗呼吸道感染、菌痢和传染性肝炎等症。
⼀、实验⽬的1．掌握从黄芩中提取黄酮类化合物的提取分离原理和操作⽅法；2．熟悉黄酮类成分及黄芩苷的主要理化性质和⼀般鉴别⽅法。
⼆、仪器与试药（⼀）仪器SHB-Ⅲ循环⽔式多⽤真空泵 HHS型电热恒温⽔浴锅玻璃仪器⽓流烘⼲器ZF-2型三⽤紫外仪电热恒温⼲燥箱烧杯（1000mL、100mL）乳钵电炉⼦移液管（10mL、5mL）离⼼机三⾓烧瓶（250mL）（⼆）试药黄芩粗粉盐酸温度计⼄醇镁粉硅胶 CMC-Na 黄芩苷对照品α-萘酚试液浓硫酸氯化氧锆甲醇柠檬酸三、主要成分的结构与性质R RH 黄芩素 H 汉黄芩素葡萄糖醛酸黄芩苷葡萄糖醛酸汉黄芩苷四、实验原理：黄芩苷及其他黄酮类化合物在热⽔中溶解度⼤，在强酸性条件下易析出总黄酮沉淀，利⽤此性质从黄芩中提取总黄酮。
利⽤黄芩苷和黄芩素两者在95%⼄醇中溶解度的差别⽽可将黄芩苷和黄芩素彼此分离。
五、实验内容：（⼀）总黄酮的提取20分钟，过滤20分钟，过滤沉淀直接在离⼼筒中⽤热⽔洗两次（第⼀次不搅，洗去沉淀表⾯上的酸液；第⼆次加⼊热⽔把沉淀搅匀，离⼼后，倾去上清液）OOOHOH RO沉淀60-70℃⼲燥2⼩时总黄酮（⼆）黄芩苷与黄芩素的分离总黄酮20mL⼄醇转溶在三⾓烧瓶中，（注1⼄醇同上法浸泡10分钟，抽滤醇液（同注1）沉淀再⽤10mL95%⼄醇直接在滤器上分次洗涤沉淀数次，⾄滤液颜⾊变浅醇液（同注1）沉淀抽⼲，80℃⼲燥30分钟黄芩苷粗品（⼆）黄芩苷的精制⼄醇回流20分钟，趁热抽滤15分钟，趁热抽滤（三）黄芩苷的鉴别1．化学检识：（1）盐酸-镁粉反应：取1mL⼄醇样品液于试管中，加⼊浓盐酸1mL，再加镁粉少许，观察颜⾊变化。
黄芩苷提取和测定方法研究
黄芩苷提取和测定方法研究黄芩苷是一种具有良好的药理学活性的天然多糖类化合物，广泛存在于中草药，特别是黄芩属植物中，具有抗氧化、抗肿瘤等作用，因此在现代药物研究中受到重视。
但其中提取与分析方法尚未完善，相关研究还非常不完善。
研究者期望采用有效、简便、容易操作的方法来提取和测定黄芩苷，以此为基础深入研究其药理学作用和药代动力学特性。
一、提取黄芩苷黄芩苷主要存在于植物的叶片和根系中，在植物的接受部位中存在着差异，因此其提取方法也不一样。
常用的提取方法有溶剂提取法、水萃取法、超声波提取法和气相色谱提取法等。
（1）溶剂提取法：溶剂提取法是一种有效的黄芩苷提取方法，在提取前，可用热水溶解植物细胞壁，然后采用溶剂提取技术，以某种溶剂和分散液混合检测植物样品中的黄芩苷，最终得到溶剂提取液。
（2）水萃取法：水萃取法是将植物样品和蒸馏水混合，在特定的时间和温度下进行搅拌萃取，然后经过离心分离和过滤，以膜过滤器过滤得到水萃取液，然后经过浓缩和精制可得到大量的水萃取物。
（3）超声波提取法：超声波提取法是通过植物样品与溶剂在某种特定超声振动条件下混合共振，以物理方式将被提取物与有效成分从植物体内分离，提取出有效成分的一种方法。
（4）气相色谱提取法：气相色谱提取法是一种综合的液体样品提取分离技术，它可用来提取黄芩苷及其他有毒物质，可以有效提取微量物质。
二、测定黄芩苷黄芩苷的测定通常包括定性和定量两个方面。
定性一般采用薄层色谱法，可以有效分离出黄芩苷，以迅速确定黄芩苷的情况；定量通常采用核磁共振成像技术，可以准确的测量黄芩苷的结构含量和含量大小。
（1）薄层色谱法：薄层色谱法是一种定性分析黄芩苷的方法，它采用植物提取液和色谱剂混合，在色谱板上用一定的条件进行吸附和分离，以其特定的特性或染色来确定被测物质的存在或缺失。
（2）核磁共振成像技术：核磁共振成像技术是一种非常有效的测试黄芩苷含量的方法，通过测量植物样品中的核磁共振信号，可以准确的测量黄芩苷的结构含量和含量大小。
黄芩苷提取及结构鉴定PPT课件
可用于制作抗衰老化妆品。
保湿化妆品
03
黄芩苷具有保湿作用，能够保持皮肤水分，可用于制作保湿化
妆品。
05 黄芩苷提取及结构鉴定的 发展趋势
技术发展趋势
高效液相色谱法
随着高效液相色谱技术的不断进步，其在黄芩苷的提取和分离中 应用越来越广泛，提高了提取和分离的效率和精度。
超声辅助提取
超声波的空化作用和机械作用有助于黄芩苷的释放和扩散，加速了 提取过程，提高了提取效率。
02
药效学研究主要关注黄芩苷对 生物体生理功能的影响，以及 其治疗疾病的作用机制。
03
药动学研究则关注黄芩苷在体 内的吸收、分布、代谢和排泄 过程，以及药物在体内的代谢 产物和代谢途径。
药理作用机制
黄芩苷通过多种途径发挥药理 作用，包括抗炎、抗氧化、抗
肿瘤、抗病毒等。
在抗炎方面，黄芩苷能够抑制 炎症因子的表达和释放，减轻
生物活性研究
深入研究黄芩苷的生物活性及其作用机制，为其在医药、保健品等领域的应用提供科学 依据。
未来发展前景
广泛应用
随着人们对黄芩苷生物活性的深入了解，其 在医药、保健品、化妆品等领域的应用将越 来越广泛。
技术创新
随着科技的不断进步，黄芩苷的提取、分离和结构 鉴定技术将不断得到创新和发展，提高其纯度和分 离效率。
黄芩苷对多种病毒具有抑制作用，如 流感病毒、肝炎病毒等，可用于抗病 毒治疗和预防。
抗炎作用
黄芩苷具有抗炎作用，能够抑制炎症 介质的产生和炎症细胞的活化，对治 疗炎症性疾病具有潜在的应用价值。
在保健品领域的应用
抗氧化保健品
黄芩苷具有抗氧化作用，能够清 除自由基，保护细胞免受氧化损 伤，可用于制作保健品。
利用超声波的振动和空化作用，加速黄芩中黄芩苷的释放和扩散，提 高提取效率。
黄芩苷性质[指南]
![黄芩苷性质[指南]](https://img.taocdn.com/s3/m/effea6d06037ee06eff9aef8941ea76e59fa4a56.png)
黄芩苷性质
【实训原理】
本实验是根据黄芩中的黄芩苷在植物中以镁盐形式存在,可以被沸水溶出,在酸性(pH1～2)情况下转变成黄芩苷,溶解度降低沉淀析出,从而与共同存在的水溶性杂质分离,进一步精制是利用其钠盐在pH6.5～7时可溶于50％的乙醇,使之与不溶于50％乙醇的杂质分离,在pH1～2时黄芩苷在50％的乙醇中溶解度降低而析出,而得各单体苷元.
【操作步骤】
1、黄芩苷的提取
称取黄芩粗粉100g,加10 倍量沸水,并加热煮沸30分钟,随时补充失去的水分,脱脂棉过滤.药渣再加8倍量水煮沸30分钟,过滤.合并两次滤液.加浓盐酸调pH1～2,水浴保温80℃30分钟,放置24小时,析出黄色沉淀.离心滤去沉淀中的水分.将沉淀移入500ml烧杯中,加水100ml,充分搅拌使成为均匀的混悬液,滴加40％氢氧化钠溶液调pH6.5～7,使黄芩苷全部溶解,加入等体积95％乙醇,搅匀后于50℃(水浴保温)迅速抽滤,滤液加热至50℃,以浓盐酸调pH1～2,放置(约4小时)使析出沉淀.倾去上清液,沉淀物抽滤,沉淀用蒸馏水抽洗2～3次,抽干,60℃以下干燥,得粗制黄芩苷.
2、黄芩苷的精制
称取黄芩苷粗品,加10倍量水搅拌均匀,以40%氢氧化钠溶液调pH6.5～7,使黄芩苷全部溶解,加活性炭适量拌匀,加热至80℃30分钟(水浴),抽滤除去活性炭渣,滤液用浓盐酸调pH1～2,加入等体积95%乙醇,50℃保温30分钟(水浴),至有沉淀析出时取出,放置过夜,抽滤,沉淀用少量乙醇抽洗,抽干,60℃以下干燥,得
精制黄芩苷,称重,计算得率.。
(完整版)黄芩苷提取
项目一天然植物有效成分提取子项目一、黄芩根中黄芩苷的提取1、【项目目的】（1）掌握黄芩苷不同提取工艺和操作要点，不同工艺对产品得率和品质的影响；（2）通过黄芩苷含量检测，掌握定性、定量方法在黄酮类物质检测中的应用；（3）通过对黄芩苷的单因素和正交实验优化，掌握正交方法在植物有效成分提取中的应用；（4）通过黄芩苷的提取工艺优化实训，掌握黄酮类物质提取的一般规律。
2、【项目任务】（1）通过查阅文献，掌握水提法、醇提法在黄芩苷提取中的基本原理；（2）查阅文献设计不同的黄芩苷提取工艺，并结合正交实验进行黄芩苷的提取工艺优化，得到提取得率最大化；（3）查阅文献并结合黄芩苷国标检测方法，对提取中黄芩苷含量进行准确测定；（4）总结黄芩苷提取工艺各环节具体参数，得出最佳工艺条件，并分析存在的问题，各小组以PPT形式作出整体汇报。
3、【项目要求】（1）能够全面准确采用单因素实验对可能影响提取得率的因素进行测定分析，同时确定主要影响因素；（2）在单因素的基础上进行正交分析，确定合适的因素和水平设计正交实验；（3）通过正交分析确定最佳提取工艺条件4、【项目背景】（1）黄芩及黄芩苷简介黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi ）具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。
其主要成分黄芩苷（Baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄酮类化合物，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，且具有较强的抗癌反应等生理效能。
黄芩苷还能吸收紫外线，清除氧自由基，同时，又能抑制黑色素的生成，是一种很好的功能性美容化妆品原料，具有较高的开发利用前景。
黄芩化学成分研究逐渐为药学和化学工作者所重视，目前，国内对黄芩苷提取工艺的研究有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法等，但如何提高黄芩苷收率和纯度一直是实际生产中存在的问题，缺乏对整个工艺条件进行全面研究，因此，有必要对影响黄芩苷提取工艺及其影响因素作一全面探讨。
黄芩中黄芩苷提取分离研究进展PPT课件
七 参考文献
[1] 张红医,赵淑军,成 谦,等.中药黄芩提取方法的优化[J].河北大学学报(自然科学版)2006, 26(4): 390.
[2] 李晓芳,傅 军,金描真,等.黄芩水提取工艺中黄芩苷降解动力学研究[J].现代 食品与药品杂 志, 2006, 26(4): 27.
[3] 李成文,闫东海,陈建玉.黄芩苷提取工艺研究[J].中成药, 2003,25(8): 666. [4] 赵越平,雷其云,苏永芝,等.黄芩中黄芩苷不同提取方法的比[J].第四军医大学学报, 1996, 17(6):
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5 微波提取 郭 振 峰 [9]等 用 微 波 法 提 取 黄 芩 苷 。 提 取 工 艺 ： 黄 芩 样 品 置 特 制 氟 塑 料 P FA
内杯中，加入选取的提取溶剂，并淹没样品。放入微波制样系统中，处理结束后， 待制样罐内溶剂冷却至沸点以下，取出制样罐，把样品转移到50ml容量瓶中， 并 用 同 样 的 溶 剂 清 洗 P FA 内 杯 并 定 容 。
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6 超声法 江霞[究，
以黄芩苷为指标，采用HPLC测定黄芩苷质量浓度，比较水提酸沉法、醇提酸沉 法与超声法工艺的差异。结果发现，超声法提取黄芩苷质量浓度最高。
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五结 论
1 浸渍法技术的应用，制品纯度低，工艺繁琐， 生产周期长，生产成本高。经分离纯化后， 虽然纯度有所提高，但收率低位5%左右，位 生品黄芩中黄芩苷的1/2。
用,2008,2(9):10-11.
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主要内容
一 研究背景
二 目的意义
三 实验内容
四 实验结果
黄芩苷的提取与分离技术比较及其含量分析
1、3酶辅助提取法
酶辅助提取法是通过使用酶制剂，如纤维素酶、果胶酶等，以降解植物细胞 壁，从而释放出黄芩苷。这种方法可有效提高黄芩苷的提取率，但酶的价格较高， 可能增加生产成本。
二、黄芩苷的分离技术
2、1沉淀分离法
沉淀分离法是利用黄芩苷与其他成分在溶剂中的溶解度差异，通过添加沉淀 剂或改变溶剂的性质，使黄芩苷沉淀下来。该方法简单易行，但可能存在分离不 纯的问题。
2、2柱色谱分离法
柱色谱分离法是一种常用的分离技术，主要利用黄芩苷在不同性质的固定相 和流动相之间的分配系数差异来实现分离。常用的柱色谱介质包括硅胶、大孔吸 附树脂等。该方法能够实现较好的分离效果，但操作相对复杂，适用于实验室研 究。
2、3超临界流体萃取法
超临界流体萃取法是一种高效、环保的分离技术，其主要利用超临界流体 （如二氧化碳）作为萃取剂，以实现对黄芩苷的萃取和分离。该方法具有较高的 选择性和萃取效率，且对环境友好，适用于大规模生产。
3、3荧光光谱法
荧光光谱法是通过激发黄芩苷分子，测量其发射荧光的强度来确定其含量。 该方法具有较高的灵敏度和选择性，但需要使用特定的激发光源和检测器。
结论：
黄芩苷的提取与分离技术比较及其含量分析是中药研究的重要领域之一。各 种提取和分离技术的选择需要根据实际需求和条件进行综合考虑。在含量分析方 面，应根据具体的样品情况和要求选择合适的分析方法。通过对这些技术的深入 了解和掌握，将有助于提高黄芩苷的生产效率和质量水平，推动中药产业的发展。
参考内容
引言
黄芩是一种广泛应用于传统中药学的植物，其活性成分黄芩苷具有清热解毒、 抗氧化、抗炎等多种药理作用。随着中药现代化和产业化的不断发展，研究黄芩 苷的提取分离工业化生产工艺具有重要意义。本次演示将综述黄芩苷提取分离工 业化生产工艺的研究现状，旨在解决现有工艺中存在的问题，提高黄芩苷的产量 和纯度，为工业化生产提供理论依据。
简略解释黄芩苷提取的原理及应用
简略解释黄芩苷提取的原理及应用原理黄芩苷（baicalin）是从黄芩（Scutellaria baicalensis）根部提取的一种黄酮类化合物，具有多种生物活性。
黄芩苷提取的原理主要包括以下几个步骤：1.原料准备：选择优质的黄芩根部作为原料，鲜根或熟根均可，干燥后研磨成粉。
2.提取剂选择：根据黄芩苷的生物活性和化学特性，选择合适的提取剂进行提取。
常用的提取剂有乙醇、乙醚、丙酮等。
3.提取过程：将黄芩粉末与提取剂混合，进行浸泡提取，通常在温和的条件下进行，比如室温下浸泡多小时，也可以采用超声波辅助提取等方法。
4.分离：通过过滤、离心、蒸发等方法分离提取液中的植物提取物和提取剂，得到含有黄芩苷的提取液。
5.精制：对提取液进行精制，通常采用溶剂结晶、洗脱、凝胶柱层析等方法，去除杂质，提纯黄芩苷。
6.干燥：将提纯后的黄芩苷进行干燥处理，得到干燥的黄芩苷粉末。
应用黄芩苷是一种重要的天然药物成分，广泛应用于医药、保健品、化妆品等领域。
以下是黄芩苷的主要应用：1.抗氧化剂：黄芩苷具有较强的抗氧化作用，可以清除自由基，改善细胞的氧化损伤，有助于延缓衰老过程，并对预防心血管疾病、神经系统疾病等具有保护作用。
2.抗炎作用：黄芩苷可以抑制炎症反应，调节免疫系统。
在临床上，黄芩苷被广泛应用于治疗炎症性疾病，如肝炎、肾炎、关节炎等。
3.抗菌作用：黄芩苷具有一定的抗菌活性，可以抑制多种细菌和真菌的生长，对感染性疾病有一定的治疗效果。
4.抗肿瘤作用：黄芩苷被认为是一种有效的抗肿瘤化合物，可以抑制肿瘤细胞的生长和转移，并对某些癌症有一定的治疗作用。
5.抗过敏作用：黄芩苷可以抑制过敏反应，减少过敏症状的发生，对过敏性疾病如过敏性鼻炎、湿疹等有辅助治疗的作用。
6.美容养颜：黄芩苷作为一种有效的抗氧化剂和抗炎剂，被广泛应用于化妆品中，可以改善肌肤质量，延缓皮肤衰老，提高皮肤的抗氧化能力。
综上所述，黄芩苷的提取原理及应用十分广泛，具有重要的价值和发展潜力。
黄芩的结构提取与生理活性(1).ppt
上清液 旋蒸
上层液（脂类）
石油醚 取10ml
下层液
旋蒸浓缩 调PH干燥
用标准曲线测 吸光度
黄芩黄酮
方法
超声提取法 微波提取法 乙醇回流提取法 乙醇浸提法 水煎法
粗黄酮产率（%）
4.50 5.94 1.25 4.34 1.28
五、药理活性
1、抗肿瘤作用、抗病原体作用 2、抗氧化作用 3、对肝损伤的保护作用 4、对糖尿病肾病的改善 5、对脑损伤 的修复保护作用 6、抗过敏反应 7、对视网膜病变的影响
六、应用
黄芩是一味常用中药, 临床使用较广泛, 有许多 固定的组方, 但对其配伍机理的研究相对滞后。
临床上用于治疗上呼吸道感染、泌尿系统感染 、菌痢、肝炎、高血压等病症。
黄芩甙具有防紫外线、抗过敏、抑制黑色素及 消炎抑菌等功效，既可用于医药，又可用作化妆 品和牙膏的添加剂，是一种很好的功能性美容产 品原料。
黄芩为唇形科植物黄芩的干燥根。主要有效成分为黄 芩苷( Baicalin) 、黄芩苷元( Baicalein) 、汉黄芩素 (Wogonin) 和汉黄芩苷(Wogonoside) 等黄酮类化合物。
二、化学结构
黄芩苷
黄芩苷元
汉黄芩苷
汉黄芩素
三、结构鉴定
盐酸---镁粉反应 硼氢化钠还原 五氯化锑反应 醋酸镁和三氯化铝反应 三氯化铁反应 氢氧化钠反应 IR光谱解析，UV2Vis光谱解析，质谱解析，核磁共振谱解析
备工艺和检测方法研究进展》 • 周泽琳，杨轶眉，顾宇翔，冯俊，汪霄峰《黄芩甙在化妆品中的应用
研究与展望》 • 李云霞, 索全伶, 贺文智, 李春萍, 黄延春《黄芩素的分离纯化与结构表
征》 • 许伯慧，严菲《黄芩苷及其苷元黄芩素体内过程的研究进展》
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黄芩苷提取
项目一天然植物有效成分提取
子项目一、黄芩根中黄芩苷的提取
1、【项目目的】
（1）掌握黄芩苷不同提取工艺和操作要点，不同工艺对产品得率和品质的影响；
（2）通过黄芩苷含量检测，掌握定性、定量方法在黄酮类物质检测中的应用；（3）通过对黄芩苷的单因素和正交实验优化，掌握正交方法在植物有效成分提取中的应用；
（4）通过黄芩苷的提取工艺优化实训，掌握黄酮类物质提取的一般规律。
2、【项目任务】
（1）通过查阅文献，掌握水提法、醇提法在黄芩苷提取中的基本原理；
（2）查阅文献设计不同的黄芩苷提取工艺，并结合正交实验进行黄芩苷的提取工艺优化，得到提取得率最大化；
（3）查阅文献并结合黄芩苷国标检测方法，对提取中黄芩苷含量进行准确测定；
（4）总结黄芩苷提取工艺各环节具体参数，得出最佳工艺条件，并分析存在的问题，各小组以PPT形式作出整体汇报。
3、【项目要求】
（1）能够全面准确采用单因素实验对可能影响提取得率的因素进行测定分析，同时确定主要影响因素；
（2）在单因素的基础上进行正交分析，确定合适的因素和水平设计正交实验；（3）通过正交分析确定最佳提取工艺条件
4、【项目背景】
（1）黄芩及黄芩苷简介
黄芩（Scutellaria baicalensis Georgi ）具有清热燥湿、泻火解毒、止血安胎等功效。
其主要成分黄芩苷（Baicalin）是从黄芩根中提取分离出来的一种黄
酮类化合物，具有抑菌、利尿、抗炎、抗变态及解痉作用，且具有较强的抗癌反应等生理效能。
黄芩苷还能吸收紫外线，清除氧自由基，同时，又能抑制黑色素的生成，是一种很好的功能性美容化妆品原料，具有较高的开发利用前景。
黄芩化学成分研究逐渐为药学和化学工作者所重视，目前，国内对黄芩苷提取工艺的研究有较多报道，其提取方法主要有温浸法、煎煮法、微波法、超滤法等，但如何提高黄芩苷收率和纯度一直是实际生产中存在的问题，缺乏对整个工艺条件进行全面研究，因此，有必要对影响黄芩苷提取工艺及其影响因素作一全面探讨。
A、水提法
黄芩粉碎为20-40目，提取2次，物料比为 10和5倍，时间为60 min和30 min，分离方式为先用双层细滤布过滤再离心分离，60℃用盐酸调 pH 2—3，再 70℃保温60 min，静置 3 h，蒸馏水分离洗涤两次，干燥得黄芩苷粗品，测量黄芩苷的含量，计算提取率。
工艺流程
原料选择→粉碎→煎煮→过滤→离心→调节Ph值→保温→静置→洗涤→粗制品→加蒸馏水溶解→调节Ph值→加乙醇→调节Ph值→冷却→过滤→干燥→成品。
B、回流提取法
黄酮苷类 (如羟基黄酮、双黄酮、橙酮、查耳酮等)一般可用丙酮、醋酸乙酯、乙醇、水或某些极性较大的混合溶剂进行提取。
其中用得最多的是甲醇一水(1：1)或甲醇。
乙醇和甲醇是最常用的黄酮类化合物提取溶剂，高浓度的醇(如90％、95％)宜于提取甙元，60％左右浓度的乙醇或甲醇水溶液适宜于提取甙类物质。
可以采用一定浓度的醇溶剂提取，测量黄芩苷的含量，计算提取率。
C、黄芩苷含量测定方法
标准曲线的绘制：精确称取黄芩苷标准品50 mg，用50%乙醇溶解并定容于100 mL容量瓶，配制0.5 mg/mL黄芩苷标液，分别吸取标液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL于100 mL容量瓶中，用50%乙醇定容，紫外可见分光光度计278 nm处测吸光值，得到吸光度-浓度回归曲线。
样品含量的测定：精确称取实验所得黄芩苷粗品50 mg用50%乙醇溶解定容于100 mL容量瓶。
用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，吸取续滤液2.5 mL于100 mL容量瓶中，用50%乙醇定容。
另取50%乙醇作空白，于278 nm波长处测吸光度，由回归方程式计算出对应浓度，按下式计算黄芩苷含量。
黄芩苷含量（%）=［对应浓度（μg/mL）×100×40］/样品重(mg)
5、【项目实训流程】
（1）在教师指导下，按照材料中所述的参考方法，自行设计并完成黄芩苷提取工艺实训方案；
（2）通过正交实验，得出提取得率较高的生产工艺，并确定影响提取的主要因素和影响程度；
（3）完成提取工艺总结报告：列表记载提取得率；
（4）对不同的提取工艺条件的提取得率进行比较分析，提出提取工艺的最佳条件，简要估算每种工艺对应的加工成本（不含人工费）；
（5）掌握黄酮类物质提取的一般规律和方法。
6、【项目成果形式】
（1）黄芩根中黄芩苷类物质提取工艺条件详细设计方案，每小组提交1份；（2）优化后的黄芩苷提取工艺，并列出主要影响因素及影响程度；
（3）每小组提供黄芩苷提取实训总结报告1份，并对整个工艺环节作出详细总结和分析；
（4）以PPT形式作出汇报，小组成员随机汇报。
7、【项目评价考核标准】
（1）、考核要求（N+2）
A、考核形式分为过程性考核(N)和终结性汇报考核(2)，比例为4:6；
B、学生出勤率达到75%或以上的要求，否则或不获准参加该科目之考评。
C、过程考核主要是对学生的查阅文献并设计生产工艺条件、实际操作技能进行考核，主要包括提取设计方案的制定、项目组织与实施、出勤情况、仪器操作能力等；
（4）终结性考核主要是考核本实训的详细优化后的提取工艺及其存在的问题总结，包括工艺条件、工艺总结报告、汇报PPT等。
（2）、考核比重。