高效液相色谱测定金秋梨中吡虫啉残留量

高效液相色谱测定金秋梨中吡虫啉残留量

赵方方;谢德芳;吕岱竹;张月

【摘要】建立了高效液相色谱分析金秋梨中吡虫啉残留的方法.样品选择乙腈提取,Carbon/NH2固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱紫外检测器测定,该法最小检出量为2×10-10g,定量限为0.02mg/kg.在添加量为0.02～0.20mg/kg范围内,吡虫啉平均回收率为101％～103％,相对标准偏差为1.0％～3.0％.该法准确度高,灵敏度高,线性好,完全满足吡虫啉农药残留分析的要求.

【期刊名称】《宁夏农林科技》

【年(卷),期】2013(054)011

【总页数】3页(P65-67)

【关键词】高效液相色谱;金秋梨;吡虫啉

【作者】赵方方;谢德芳;吕岱竹;张月

【作者单位】中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101;中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101;中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101;中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101

【正文语种】中文

【中图分类】TQ450.2+6

吡虫啉是一种烟碱类杀虫剂，于20世纪80年代末由德国和瑞士等国农药公司开发[1]，可有效防治双翅目、鞘翅目、鳞翅目和同翅目害虫[2]。金秋梨具有“南方

梨王”的美称，其果皮金黄，汁多味美，深受人们喜爱，但是在其生产过程中极易受到梨木虱等多种病虫的危害，严重影响了金秋梨的产量和质量[3-4]。由于吡虫啉具有高效、广谱、低毒、对环境安全、不易产生抗性等特点[5]，近年来在梨树上的使用量逐年增加，但随之带来的吡虫啉在梨中的残留量也备受关注。

目前，吡虫啉的检测方法主要有气相色谱-质谱联用法(GC-MS)[6-7]、高效液相色谱 -串联质谱(LC-MS/MS)[8]、气相色谱法(GC)[9]和高效液相色谱法(HPLC)[10-11]。其中，GC-MS或LC-MS/MS法既能定性又可定量，是农药残留分析发展的趋势，由于其价格昂贵、设备投资大使其应用受到一定限制。采用液相色谱法测定吡虫啉在枸杞子、浓缩苹果汁、绿茶饮料等的残留已有报道[12-14]，但目前国内关于吡虫啉在金秋梨中残留检测方法的研究报道甚少。通过试验研究，建立了吡虫啉在金秋梨中的液相色谱分析方法，该法操作简单、稳定、快速，是一种较为实用的分析方法。

1 材料与方法

1.1 试验材料

吡虫啉标准品（Dr.Ehrenstorfer公司，纯度98%）；甲醇、乙腈（色谱纯）；二氯甲烷(分析纯)；氯化钠（140℃烘烤 4 h）；Waters高效液相色谱仪（717自动进样器、2487紫外检测器、1525二元梯度泵）；T18高速分散均质机（德国IKA集团）；R-210旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；Agilent Bond Elut Carbon/NH2固相萃取柱；微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）。

1.2 样品前处理

1.2.1 提取称样20.0 g置于烧杯中，加入40.0mL乙腈，匀浆2min（2 000

r/min）后经滤纸过滤，滤液收集到预装有5~7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，盖好塞子，剧烈震荡1 min，室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。移取10.0 mL上清液至100mL圆底烧瓶中，置于旋转蒸发仪上蒸发至干，加入5.0

mL二氯甲烷-甲醇（95∶5 V/V）溶解混匀，待净化。

1.2.2 净化用5.0mL二氯甲烷-甲醇（95∶5 V/V）预淋洗固相萃取小柱，当溶剂

液面到达柱吸附层表面时，立即倒入待净化溶液，用100mL圆底烧瓶收集；用

3.0mL二氯甲烷-甲醇（95∶5 V/V）冲洗圆底烧瓶残留物后淋洗小柱，重复3次。收集液旋转蒸发至干，经2.5 mL甲醇定容后过0.22μm滤膜待测。

1.3 液相色谱条件

液相色谱柱：流动相为乙腈-水(20∶80 V/V)；流速为1mL/min；

SunfireTMC18(4.6mm×150mm，5μm)；柱温40℃；紫外检测波长270 nm。1.4 标准曲线与线性范围

将吡虫啉标准品配制成100μg/mL标准贮备液，用甲醇逐级稀释成 0.02、0.05、0.20、1.00、2.00μg/mL标准溶液，进样分析，进样量10μL，外标法定量。对浓度和峰面积进行线性回归，计算方程的相关系数。

1.5 准确度与精密度测定

量取一定体积吡虫啉标准液加入金秋梨空白样品中，制得对应质量浓度分别为

0.02、0.05、0.20 mg/kg的3个添加水平，按“1.2”和“1.3”对样品进行处理，每个添加水平5次试验，同时做空白对照，计算回收率及相对标准偏差。

2 结果与分析

2.1 色谱条件的选择

图1 吡虫啉标准溶液（三种流动相比例）、金秋梨空白及加标样品中吡虫啉色谱

图

吡虫啉极性较强，选用反相液相色谱柱C18进行测定，当流动相中乙腈比例增大时，吡虫啉出峰时间变小，出峰速度快。试验结合金秋梨样品的实际情况，比较3种流动相比例（乙腈∶水为30∶70，20∶80，15∶85），发现当乙腈∶水为

30∶70(V/V)时，目标峰与杂质出峰时间接近；当乙腈∶水为15∶85(V/V)时，目

标物出峰时间过长（接近20 min）；当乙腈∶水为20∶80(V/V)时，目标峰和样品杂质可以实现完全分离，吡虫啉保留时间为8.894min（见图1A-D）。参考相关文献可知，吡虫啉标准溶液在270 nm波长处有最大吸收[11]，因此实验将此作为该农药的检测波长。

2.2 提取净化条件的选择

由于该农药极性较强，常选用丙酮、二氯甲烷、乙腈作为提取溶剂。3者中丙酮毒性最低，但其共萃物较多；二氯甲烷毒性与乙腈相当，但二氯甲烷沸点较低，对环境和实验人员污染较大；因此，选择乙腈作为提取溶剂，而且它在饱和NaCl溶液存在下能与水更好的分层，可以除去溶于水的一部分干扰杂质。对样品的净化，常选用硅胶(Si)、弗罗里硅土(Florisil)、氨基（NH2）等固相萃取柱。其中，硅胶固相萃取柱仅能除去一部分干扰杂质，而弗罗里硅土(Florisil)柱则可同时降低干扰物及目标物的响应值 [14]。因此，实验选择Carbon/NH2固相萃取柱，该柱对各种极性化合物物具有更广泛的保留范围并更容易洗脱，同时小柱填充了高纯的石墨化碳颗粒，可去除水果中导致色谱性能降低的色素，具有良好的净化效果（见图

1D-E）。

2.3 线性范围

分别配制0.02~2.00μg/mL标准工作液，在实验条件下进行测定。以吡虫啉浓度x(μg/mL)为横坐标，以相应峰面积y为纵坐标绘制工作曲线(图2)。吡虫啉标准曲线回归方程为y=58 766 x-476.77，相关系数为0.999 7。

2.4 准确度和精密度

金秋梨样品中添加吡虫啉的回收率及相对标准偏差测定结果见表1。从表1可以看出，在3个添加水平下，样品中吡虫啉的平均回收率为101%~103%，相对标准偏差为1.0%~3.0%。回收率以及相对标准偏差均在农药残留试验准则允许范围内[15]，说明该法重复性好，完全满足残留分析的要求。