高效液相色谱测定金秋梨中吡虫啉残留量

高效液相色谱测定金秋梨中吡虫啉残留量赵方方;谢德芳;吕岱竹;张月【摘要】建立了高效液相色谱分析金秋梨中吡虫啉残留的方法.样品选择乙腈提取,Carbon/NH2固相萃取柱净化后,采用高效液相色谱紫外检测器测定,该法最小检出量为2×10-10g,定量限为0.02mg/kg.在添加量为0.02～0.20mg/kg范围内,吡虫啉平均回收率为101％～103％,相对标准偏差为1.0％～3.0％.该法准确度高,灵敏度高,线性好,完全满足吡虫啉农药残留分析的要求.【期刊名称】《宁夏农林科技》【年(卷),期】2013(054)011【总页数】3页(P65-67)【关键词】高效液相色谱;金秋梨;吡虫啉【作者】赵方方;谢德芳;吕岱竹;张月【作者单位】中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101;中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101;中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101;中国热带农业科学院分析测试中心,海南海口 571101【正文语种】中文【中图分类】TQ450.2+6吡虫啉是一种烟碱类杀虫剂，于20世纪80年代末由德国和瑞士等国农药公司开发[1]，可有效防治双翅目、鞘翅目、鳞翅目和同翅目害虫[2]。

金秋梨具有“南方梨王”的美称，其果皮金黄，汁多味美，深受人们喜爱，但是在其生产过程中极易受到梨木虱等多种病虫的危害，严重影响了金秋梨的产量和质量[3-4]。

由于吡虫啉具有高效、广谱、低毒、对环境安全、不易产生抗性等特点[5]，近年来在梨树上的使用量逐年增加，但随之带来的吡虫啉在梨中的残留量也备受关注。

目前，吡虫啉的检测方法主要有气相色谱-质谱联用法(GC-MS)[6-7]、高效液相色谱 -串联质谱(LC-MS/MS)[8]、气相色谱法(GC)[9]和高效液相色谱法(HPLC)[10-11]。

其中，GC-MS或LC-MS/MS法既能定性又可定量，是农药残留分析发展的趋势，由于其价格昂贵、设备投资大使其应用受到一定限制。

采用液相色谱法测定吡虫啉在枸杞子、浓缩苹果汁、绿茶饮料等的残留已有报道[12-14]，但目前国内关于吡虫啉在金秋梨中残留检测方法的研究报道甚少。

通过试验研究，建立了吡虫啉在金秋梨中的液相色谱分析方法，该法操作简单、稳定、快速，是一种较为实用的分析方法。

1 材料与方法1.1 试验材料吡虫啉标准品（Dr.Ehrenstorfer公司，纯度98%）；甲醇、乙腈（色谱纯）；二氯甲烷(分析纯)；氯化钠（140℃烘烤 4 h）；Waters高效液相色谱仪（717自动进样器、2487紫外检测器、1525二元梯度泵）；T18高速分散均质机（德国IKA集团）；R-210旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；Agilent Bond Elut Carbon/NH2固相萃取柱；微型旋涡混合仪（上海沪西分析仪器厂有限公司）。

1.2 样品前处理1.2.1 提取称样20.0 g置于烧杯中，加入40.0mL乙腈，匀浆2min（2 000r/min）后经滤纸过滤，滤液收集到预装有5~7 g氯化钠的100 mL具塞量筒中，盖好塞子，剧烈震荡1 min，室温下静置30 min，使乙腈相和水相分层。

移取10.0 mL上清液至100mL圆底烧瓶中，置于旋转蒸发仪上蒸发至干，加入5.0mL二氯甲烷-甲醇（95∶5 V/V）溶解混匀，待净化。

1.2.2 净化用5.0mL二氯甲烷-甲醇（95∶5 V/V）预淋洗固相萃取小柱，当溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入待净化溶液，用100mL圆底烧瓶收集；用3.0mL二氯甲烷-甲醇（95∶5 V/V）冲洗圆底烧瓶残留物后淋洗小柱，重复3次。

收集液旋转蒸发至干，经2.5 mL甲醇定容后过0.22μm滤膜待测。

1.3 液相色谱条件液相色谱柱：流动相为乙腈-水(20∶80 V/V)；流速为1mL/min；SunfireTMC18(4.6mm×150mm，5μm)；柱温40℃；紫外检测波长270 nm。

1.4 标准曲线与线性范围将吡虫啉标准品配制成100μg/mL标准贮备液，用甲醇逐级稀释成 0.02、0.05、0.20、1.00、2.00μg/mL标准溶液，进样分析，进样量10μL，外标法定量。

对浓度和峰面积进行线性回归，计算方程的相关系数。

1.5 准确度与精密度测定量取一定体积吡虫啉标准液加入金秋梨空白样品中，制得对应质量浓度分别为0.02、0.05、0.20 mg/kg的3个添加水平，按“1.2”和“1.3”对样品进行处理，每个添加水平5次试验，同时做空白对照，计算回收率及相对标准偏差。

2 结果与分析2.1 色谱条件的选择图1 吡虫啉标准溶液（三种流动相比例）、金秋梨空白及加标样品中吡虫啉色谱图吡虫啉极性较强，选用反相液相色谱柱C18进行测定，当流动相中乙腈比例增大时，吡虫啉出峰时间变小，出峰速度快。

试验结合金秋梨样品的实际情况，比较3种流动相比例（乙腈∶水为30∶70，20∶80，15∶85），发现当乙腈∶水为30∶70(V/V)时，目标峰与杂质出峰时间接近；当乙腈∶水为15∶85(V/V)时，目标物出峰时间过长（接近20 min）；当乙腈∶水为20∶80(V/V)时，目标峰和样品杂质可以实现完全分离，吡虫啉保留时间为8.894min（见图1A-D）。

参考相关文献可知，吡虫啉标准溶液在270 nm波长处有最大吸收[11]，因此实验将此作为该农药的检测波长。

2.2 提取净化条件的选择由于该农药极性较强，常选用丙酮、二氯甲烷、乙腈作为提取溶剂。

3者中丙酮毒性最低，但其共萃物较多；二氯甲烷毒性与乙腈相当，但二氯甲烷沸点较低，对环境和实验人员污染较大；因此，选择乙腈作为提取溶剂，而且它在饱和NaCl溶液存在下能与水更好的分层，可以除去溶于水的一部分干扰杂质。

对样品的净化，常选用硅胶(Si)、弗罗里硅土(Florisil)、氨基（NH2）等固相萃取柱。

其中，硅胶固相萃取柱仅能除去一部分干扰杂质，而弗罗里硅土(Florisil)柱则可同时降低干扰物及目标物的响应值 [14]。

因此，实验选择Carbon/NH2固相萃取柱，该柱对各种极性化合物物具有更广泛的保留范围并更容易洗脱，同时小柱填充了高纯的石墨化碳颗粒，可去除水果中导致色谱性能降低的色素，具有良好的净化效果（见图1D-E）。

2.3 线性范围分别配制0.02~2.00μg/mL标准工作液，在实验条件下进行测定。

以吡虫啉浓度x(μg/mL)为横坐标，以相应峰面积y为纵坐标绘制工作曲线(图2)。

吡虫啉标准曲线回归方程为y=58 766 x-476.77，相关系数为0.999 7。

2.4 准确度和精密度金秋梨样品中添加吡虫啉的回收率及相对标准偏差测定结果见表1。

从表1可以看出，在3个添加水平下，样品中吡虫啉的平均回收率为101%~103%，相对标准偏差为1.0%~3.0%。

回收率以及相对标准偏差均在农药残留试验准则允许范围内[15]，说明该法重复性好，完全满足残留分析的要求。

图2 吡虫啉标准曲线表1 回收率及相对标准偏差(n=5)添加浓度(mg/kg)Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 平均0.02 103 98 105 100 103 102 2.8 0.05 104 103 102 102 104 103 1.0 0.20 97 100 104 104 99 101 3.0回收率(%) 相对标准偏差(%)2.5 灵敏度以一定量的吡虫啉标准溶液进样，按信噪比S/N为3时标准溶液的浓度计算(进样量10μL)，吡虫啉最小检出量为2×10-10 g。

在空白样品中添加一定量的吡虫啉标准溶液，按信噪比S/N为10时所需待测物的浓度计算 (以mg/kg为单位)，方法定量限为0.02 mg/kg，完全满足水果中吡虫啉农药残留限量的检测要求[GB2763—2012中规定了吡虫啉在水果中的最大允许残留限量(MRL)，其中最低为0.5 mg/kg)]。

3 结论该研究建立了金秋梨中吡虫啉残留量的高效液相色谱检测方法。

该法线性关系好，准确度高，精密度高，灵敏度好；回收率、相对标准偏差均符合农药残留分析要求。

参照国家水果中吡虫啉的残留限量标准，该法完全满足金秋梨中残留分析要求，同时也为其他作物中吡虫啉残留的分析提供了依据。

【相关文献】[1]王新伟，杨宝东，张志勇，等.吡虫啉在桃果实中残留分析方法[J].北京农学院学报，2011，26（3）：20-23.[2]何进林，张志华.高效液相色谱法测定水果中吡虫啉农药残留量[J]. 食品科学，2011，32（6）：230-232.[3]李涛，张圣喜，覃皓，等.黑翅土白蚁在金秋梨上的发生危害调查初报[J]. 中国农学通报，2010，26(13)：328-331.[4]周应彪.金秋梨果园梨木虱防治技术[J].植物保护，2010(5)：36-37.[5]樊苑牧，顾晓俊，俞雪钧，等.高效液相色谱法测定蔬菜和水果中吡虫啉农药残留量[J]. 分析科学学报，2007，23（5）：583-585.[6] Alberto Navalon， Antonio Gonzalez-Casado. Determination of imidacloprid in vegetable samples by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Analyst，1997，122：579-581.[7]刘永波，刘海山，王红芳.固相萃取-气相色谱-质谱联用法测定蔬菜、水果中吡虫啉残留量[J].理化检验-化学分册，2007，43（1）：23-25.[8]万积成，林源，王金花，等.液相色谱-串联质谱与胶体金法检测蔬菜中吡虫啉残留比较[J].中国卫生检验杂志，2009，19（10）：2258-2301.[9]李广领，姜金庆，王自良，等.气相色谱法检测卷心菜中啶虫脒和吡虫啉残留[J]. 西北农业学报，2010，19（9）：71-74.[10] Amadeo R，Fernandez-Alba，Antonio Valverde，et al. Determination o f imidacloprid in vegetable samples by high-performance liquid chromatography with diode-array detection[J]. J Chromatogr A，1996，72（1）：97-105.A，1996，72（1）：97-105.[11]李乃洁，牛森，王勇，等.蔬菜、水果中吡虫啉残留量的 H P L C 测定[J]. 农药，2004，43(10)：467-468.[12]罗娟，谢云.高效液相色谱法检测枸杞子中吡虫啉残留量[J].湖北中医药大学学报，2011，13（1）：34-36.[13]刘温喜，孔祥虹，郝少莉，等.超高效液相色谱法测定进出口浓缩苹果汁中的吡虫啉残留量[J].分析试验室，2009，28（4）：70-72.[14]路海燕，李斌，陈忠正，等.分散固相萃取-H P L C检测绿茶饮料中吡虫啉和啶虫脒残留[J].食品科学，2013，网络预发表.[15]N Y/T 788-2004农药残留试验准则[S].北京：中国农业出版社，2004.。