第八节心脑血管药理学实验方法与技术简介

第八节心脑血管药理学实验方法与技术简介

心脑血管药物实验方法很多，择其要者简介如下：

一、血压测定及相关模型

血压测定法大体分为直接和间接测压法。直接测压可选用颈动脉或股动脉插管，通过压力换能器记录血压变化，一般用麻醉动物作急性实验。常用的间接测压法主要有大鼠尾容积测压及尾动脉脉搏测压法。实验性高血压模型有：1、肾血管性高血压模型（肾动脉狭窄性高血压模型），分为2肾1夹型（两侧肾完整，一侧肾动脉狭窄）、1肾1夹型（一侧肾切除，另一侧肾动脉狭窄）和2肾2夹型（两侧肾完整，两侧肾动脉狭窄），常用动物是狗和大鼠。

2、内分泌性高血压模型常用大鼠，包括DOC盐性高血压模型、肾上腺再生性高血压模型。

3、神经原性高血压模型。

4、遗传性高血压模型，根据采用的遗传学方法进行分类：①选择性近亲繁殖高血压模型（如自发性高血压大鼠SHR、Dahl盐敏感大鼠DS、米兰种高血压大鼠 MHS、遗传性高血压大鼠 GH、以色列种高血压大鼠 SBH、里昂种高血压大鼠 LH）②基因工程高血压模型高血压转基因动物（transgenic animals of hypertension）、高血压基因敲除动物（geneknockout animals of hypertension）。

研究降压药作用机理的实验方法包括:中枢降压(毁髓猫或大鼠模型、减弱神经反射性调节实验等)；外周降压（神经节阻断、对传出神经递质及受体的影响、对在体血管阻力或离体血管平滑肌作用实验等）。

二、心脏与血管实验法简介

心脏实验可用在位心脏和离体心脏进行。离体心脏实验最常用的方法是Straub法、八木-Hartung法与Langendorff法。前两种方法主要观察药物直接对心脏收缩力、传导与心输出量的影响，适用于两栖类动物如青蛙、蟾蜍等离体心脏；后者适用于哺乳类动物兔、豚鼠、大鼠等，不仅可观察药物对心肌的直接作用，还可观察药物对冠脉流量的影响。本法虽然排除了神经体液的调控作用，但不能同时控制前、后负荷和心率，故又建立了离体工作心脏实验法。在位心脏实验法有Bülbring法、家兔不破坏胸膜记录心收缩力法、狗心肺装置实验法等。

冠脉血管及冠脉血流量实验法离体实验主要有冠状动脉条实验、Langendorff离体心脏测定冠脉灌流量法；在位心脏测定冠脉血流量及心肌耗氧量、测定区域性心肌血流量、86Rb 测定心肌营养血流量法。

心血管药理实验方法中的技术手段还有：清醒大鼠心功能及血流动力学实验、动物心电图、心导管技术等。

三、抗心肌缺血与再灌注损伤药物实验法简介

首先介绍心肌缺血与再灌注损伤模型的制备：①整体动物结扎冠脉后再灌注模型（常用犬、兔、大鼠进行）；②离体心脏缺氧造成全心缺氧和其后的在给氧损伤，亦可结扎离体心脏的冠脉，然后松结产生局部心肌再灌注损伤；③体外心肌培养缺糖缺氧与再给糖给氧产生再灌注损伤。

心肌缺血与梗塞范围测定：组织学检查；NBT或TTC标本染色法；心肌酶活性测定（如CK、LDH）；心表面NADH荧光照相法。

还可应用心肌代谢测定法观察药物的影响，如测定血或组织中的乳酸、游离脂肪酸（FFA）、丙二醛（MDA）等，一般用试剂盒检测。

四、脑缺血和脑血流实验法简介

阻断支配脑组织的血管，可模拟与人脑卒中相近似的病理模型，实验性脑缺血模型制备的方法主要有：1、全脑缺血：结扎大鼠双侧颈总动脉和椎动脉；结扎大鼠双侧颈总动脉合

并血压下降法；沙土鼠双侧颈总动脉阻断；结扎大鼠一侧颈总动脉合并低氧环境处理等。2、局灶性脑缺血：阻断大鼠大脑中动脉（MCAO）法；沙土鼠一侧颈动脉结扎；光化学法致大鼠局部脑血栓和颈动脉内注入血栓法等。3、自发性高血压大鼠阻断大脑中动脉致脑卒中模型。

评价脑缺血程度的方法：⑴脑功能改变（神经症状评分、脑电图改变等）；⑵测定脑血流（放射微球法、放射自显影法和氢清除法等）；⑶组织学检查（脑切片染色法、病理切片）；

⑷脑代谢测定（如SOD、MDA等）。

测定脑血流是评价脑缺血程度和药物作用的重要方法，目前常用的方法主要有：①开颅窗显微镜下直接观察；②流量计测定法；③示踪技术常用H2清除法；④脑组织同位素标记法；⑤大鼠脑血管在位灌流法等。

五、抗心功能不全药与抗心律失常药物实验简介

㈠抗心功能不全药实验法在心功能不全动物模型上观察药物作用，制备模型至关重要，方法主要有：1、心脏压力超负荷模型：主动脉狭窄法（结扎或用特制动脉夹致腹主动脉狭窄、缩窄肾动脉、单侧或双侧肾切除等）；肺动脉狭窄法。2、心脏血容量超负荷模型：动静脉短路法、腔静脉缩窄法、主动脉瓣与二尖瓣关闭不全法等。3、化学因素致心功能不全模型：抑制心脏的药物（普萘洛尔、维拉帕米、戊巴比妥钠等）诱发心衰；阿霉素致心肌损害；氧自由基损伤心功能；心肌梗死加快速起搏造成CHF；拟似冠心病高血压的CHF等。

㈡抗心律失常药实验法制备实验性心律失常通常以心电图II导联记录以观察心律失常类型、发生时间和持续时间等，进行药物研究可预防给药和治疗给药。主要方法简介如下：

1、药物诱发心律失常：氯仿致小鼠室颤；氯仿-肾上腺素致兔室性心律失常；哇巴因、乌头碱、氯化钡等诱发室性心律失常；乙酰胆碱诱发房颤等。

2、电刺激诱发心律失常：电刺激下丘脑或直接刺激心脏。

3、冠脉结扎诱发心律失常。

4、产生窦房结功能低下及房室传导阻滞模型：阻塞窦房结动脉和房室结动脉法；缺氧营养液灌流离体窦房结和房室结标本法；维拉帕米致窦房结、房室结功能低下等。