食品卫生微生物学检验
食品卫生微生物指标及微生物检测
GB中国国家标准 SN 中国检验检疫行业标准
FDA BAM(Bacteriological analytical manual) 美国食品药品管理局细菌学分析手 册
ISO(International Organization for Standardization )国际标准化组织
乳糖发酵管3537 ℃ ，242小时
革兰氏阳性 革兰氏阴性 无芽孢杆菌
产气
大肠菌群阴性 报告
大肠菌群阳性 报告
不产气
大肠菌 群阴性
报告
产气实验
ＥＭＢ（伊红美蓝） 琼脂培养基原理
ＥＭＢ琼脂培养基中含有的伊红和美蓝染料， 可抑制革兰氏阳性细菌。那些能发酵乳糖的细 菌，能将染料摄入细胞，从而使菌落呈现出紫 色或边缘无色、中央暗黑色的菌落。
样品稀释25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质
大
肠
10 倍系列稀释
菌
选择适宜3 个连续稀释度的样品匀液，接种
群
LST 肉汤管
M
36 ℃ ±1 ℃ 48 h ±2h
P
不产气
产气
N
BGLB 肉汤
计
36 ℃ ±1 ℃ 48 h ±2h
数
法
不产气
产气
检
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
菌落总数 指食品检样经处理，在一定条件下培养后， 所得1g食品或1mL食品中或1cm2食品表面积 上所含有的细菌菌落总数。
一定条件：如需氧情况、营养条件、pH、培养温度和时间 等
不能满足厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求的以及非嗜中 温的细菌的生长
因此菌落总数并不表示实际中的所有细菌总数，菌落总数 并不能区分其中细菌的种类
食品卫生微生物学检验标准
食品卫生微生物学检验标准
以下是食品卫生微生物学检验标准的要点：
1. 采样方法：应根据不同食品的特点和检验目的，选择适当的采样方法，确保采集到有代表性的样本。
2. 检验项目：包括菌落总数、大肠菌群、致病菌等项目的检验，具体检验项目可根据食品种类和相关法规要求进行选择。
3. 检验方法：应选择国家标准或行业标准中规定的检验方法进行检验，确保检验结果的准确性和可靠性。
4. 结果判定：根据检验结果，按照国家标准或行业标准中的判定规则，对食品卫生状况进行判定。
5. 报告编制：检验完成后，应及时编制检验报告，报告内容应包括样品信息、检验项目、检验结果、结果判定等信息。
6. 质量控制：应建立完善的质量控制体系，确保检验过程的准确性和可靠性。
包括对检验仪器设备的校准、维护和检定，以及对检验人员的培训和考核。
食品卫生微生物学检验总则
食品卫生微生物学检验总则一、引言食品卫生微生物学检验是评价食品卫生安全的重要方法之一。
食品中存在着各种微生物，包括细菌、真菌、病毒等，有些微生物可能对人体健康造成危害。
食品卫生微生物学检验的目的是检测食品中的微生物数量和种类，评估食品的卫生状况，确保食品安全。
本文将对食品卫生微生物学检验的总则进行介绍和说明。
二、适用范围本总则适用于对各类食品进行微生物学检验的实验室和机构。
食品包括但不限于生鲜食品、加工食品、饮料等。
三、检验项目1. 总大肠菌群检验总大肠菌群是指生活在动物消化道内的肠道细菌，其检测是食品微生物学检验的基础项目。
总大肠菌群的检验可以通过测定菌落计数或采用分子生物学方法进行检测。
2. 大肠杆菌检验大肠杆菌是从动物的肠道中分离出来的一类菌株，其存在通常表示食品存在粪便污染。
大肠杆菌检验通常采用培养基培养的方法进行，辅助以相关的生化试验。
检验结果可以通过菌落计数或PCR等方法进行判断。
3. 病原菌检验食品中可能存在一些致病菌，如沙门氏菌、葡萄球菌等。
病原菌检验需要通过细菌培养和相关生化试验来确定食品中是否存在致病菌。
4. 霉菌检验某些食品容易受到霉菌的污染，如果蔬、坚果等。
霉菌检验可以通过培养和血平法来检测食品中的霉菌数量和种类。
5. 病毒检验食品中可能存在一些病毒，如诺如病毒、肝炎病毒等。
病毒检验一般采用分子生物学方法进行，如PCR、RT-PCR等。
6. 其他检验项目根据食品的不同特点，还可以针对特定的微生物进行检验，如乳酸菌检验、酵母菌检验等。
四、检验方法食品卫生微生物学检验可以采用传统的培养法和分子生物学方法。
具体的检验方法应根据食品的特点和检验要求确定。
1. 传统培养法传统培养法是检验微生物最常用的方法之一。
它通过将食品样品在相应培养基上培养，并观察和计数菌落来确定微生物的数量和种类。
常用的培养基包括营养琼脂、大肠杆菌培养基等。
2. 分子生物学方法分子生物学方法包括PCR、RT-PCR、荧光定量PCR等技术。
微生物检验国家新标准
微生物检验国家新标准集团标准化工作小组 [Q8QX9QT-X8QQB8Q8-NQ8QJ8-M8QMN]GB/T —1994食品卫生微生物学检验总则1 主题内容与适用范围本标准规定了食品卫生微生物学检验总则。
本标准适用于样品的采样、送检、检验及报告。
2 引用标准GB 食品卫生微生物学检验冷食菜、豆制品检验3 设备和材料探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子、开罐器等。
4 样品的采集在食品检验中，所采集的样品必须有代表性。
食品因其加工批号、原料情况(来源、种类、地区、季节等)、加工方法、运输、保藏条件、销售中的各个环节(例如有无防蝇、防污染、防蟑螂及防鼠等设备)及销售人员的责任心和卫生认识水平等无不影响着食品卫生质量，因此必须考虑周密。
样品种类样品种类可分为大样、中样、小样三种。
大样系指一整批，中样是从样品各部分取得的混合样品，小样系指做分析用，称为检样。
检样一般以25g为准，中样以200g为准。
采样方法采样必须在无菌操作下进行。
采样用具：如探子、铲子、匙、采样器、试管、广口瓶、剪子和开罐器等，必须是灭菌的。
根据样品种类如袋、瓶和罐装者，应取完整的未开封的。
如果样品很大，则需用无菌采样器取样；样品是固体粉末，应边取边混合；样品是液体的，通过振摇即可混匀；检样是冷冻食品，应保持在冷冻状态(可放在冰内、冰箱的冰盒内或低温冰箱内保存)，非冷冻食品需保持在0～5℃中保存。
采样数量根据不同种类，采样数量有所不同，见下表。
各种样品采样数量（图略）续表（图略）采样标签采样前或后应立即贴上标签，每件样品必须标记清楚(如品名、来源、数量、采样地点、采样人及采样年、月、日)。
5 送检样品送到食品卫生微生物检验室应越快越好，一般应不超过3h。
如果路途遥远，可将不需冷冻样品保持在1～5℃环境中(如冰壶)。
如需保持冷冻状态，则需保存在泡沫塑料隔热箱内(箱内有干冰可维持在0℃以下)。
送检时，必须认真填写申请单，以供检验人员参考。
食品卫生微生物学检验培训课件
食品卫生微生物学检验
甲 乙甲 乙
4
5
丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
9
10
丙 丁丙 丁
2
食品卫生微生物学检验一 实验准备
❖ 培养基制备 ❖ 高压蒸汽灭菌 ❖ 器材预算 ❖ 刻度吸管的无菌操作方法
食品卫生微生物学检验
3
培养基的制备（40人份）
组号
1+2 +3+4
5
培养基
乳糖胆盐 发酵培养基
营养琼脂
称量g 水量ml
❖ 大肠菌群并非细菌学分类命名, 而是卫生细菌领域的 用语, 它不代表某一个或某一属细菌, 而是指具有某 些特性的一组与粪便污染有关的细菌, 是评价食品卫 生质量的重要指标之一。
❖ 大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致, 其定义 为: 需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的 革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大 肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属 等四个属的细菌。
食品卫生微生物学检验
13
器材准备
❖ 1.冰箱: 0～4℃ ❖ 2.恒温培养箱: 35～37℃ ❖ 3.恒温水浴箱: 45～47℃ ❖ 4.灭菌1ml刻度吸管: 3支×10组×2倍 ❖ 5.灭菌10ml刻度吸管: 2支×10组×2倍 ❖ 6.灭菌90mm平皿: 7个×10组×2倍 ❖ 7.灭菌70mm平皿: 4个×2×10组×2倍 ❖ 8.灭菌中试管: 2支×10组×2倍
条包住吸管向前转动几圈, 将吸管尖退入纸筒内约3～4 厘米, 把纸筒起始端压平, 打折180度 （折3～4 厘米长、纸筒壁厚度约三层纸, 不容易被管尖扎破）, 转动并压住起始端打折部分, 继 续转动。转动时, 右手将纸条向前推平, 左手将吸管向后拉紧, 同时向前转动, 吸管就能够包得 很紧。纸筒形成以后, 把末端空心纸筒压平固定, 打折, 系牢, 多余的纸撕掉。 ❖ 每10支用1/2版（宽 20cm）的报纸包成1包。 ❖ 高压蒸汽灭菌, 烤干备用。
食品微生物检验技术PPT
分子生物学方法
基于核酸探针、PCR等分 子生物学技术，能够快速、 准确地检测出食品中的微 生物。
02
食品微生物检验技术方法
培养法
总结词
培养法是食品微生物检验中最传统的方法，通过培养基培养微生物，观察其生 长情况以确定微生物种类和数量。
详细描述
培养法具有简单易行、直观可靠的优点，适用于大多数微生物的分离、鉴定和 计数。但该方法耗时较长，且需要经验丰富的专业人员进行操作。
要点二
实时荧光定量PCR技术
利用实时荧光定量PCR技术，可实现快速、准确地检测食 品中特定微生物的数量，为食品安全控制提供科学依据。
THANKS
感谢观看
验结果的准确性。
国内食品微生物检验规范
食品安全国家标准食品微生物学检验总则
规定了我国食品微生物学检验的基本要求、抽样、检验方法及结果的判定等。
食品安全国家标准食品微生物学检验人员要求
规定了从事我国食品微生物学检验人员的资格要求、培训和考核等。
食品安全国家标准食品微生物学检验实验室设施和环境条件
规定了我国食品微生物学检验实验室的设施和环境条件，以确保检验结果的准确性。
05
食品微生物检验技术展望
新技术与新方法的发展
基因组学技术
利用基因组学技术，如全基因组测序，能够 更精确地鉴定微生物种类，提高检测的灵敏 度和特异性。
免疫学方法
新型免疫学方法如酶联免疫吸附法和胶体金 免疫层析法等，具有快速、简便、灵敏度高 等优点，适用于现场检测和快速筛选。
自动化与智能化技术的应用
肉类食品中的微生物检验
总结词
肉类食品中的微生物检验主要关注沙门氏菌、弯曲菌、志贺氏菌等常见致病菌，以确保 肉类食品的安全性。
食品卫生标准中的微生物指标
污染的可能性。
不适于用大肠菌群作为粪便污染指示菌的食品: 冷冻食品 经射线照射处理的食品 pH较高的食品 原因: 在上述食品中大肠菌群的细菌比其他肠道病原ห้องสมุดไป่ตู้更易死亡。
3.致病菌检验
• 食品卫生法规规定，食品中不能有致病菌。
2.大肠菌群检验
• 大肠菌群: 37℃，24h能发酵乳糖产酸产气的G-细菌。 • 大肠菌群作为食品卫生质量的指标的原因: • 大肠菌群是人和动物肠道中的正常微生物区系，并且只存在 于人
和动物肠道中。 • 大肠菌群通常与动物肠道病原菌同时存在，只是数量不同。 • 动物肠道病原菌抵抗外界不良环境的能力较差，在体外环境 中极
• 在绝大多数情况下，污染食品的致病菌数量是不会太多的，一般检验过 程 中很难检查出来。
• 检验致病菌所用到的药品价格一般较高，生产部门在常规检验中列入此 项 检验，会大大提高生产成本。
一、微生物检验项目及意义
微生物检验指标: 菌落总数检验 大 肠菌群检验 致病 菌检验
1.菌落总数检验
• 食品中微生物数量的表示方法: 1g或1ml食品中的细菌总数表示。 • 菌落总数作为食品卫生质量评定的原因: • 反映食品的新鲜程度（新鲜食品内部组织一般没有细菌） • 反映食品生产过程中有否变质 • 反映食品生产的一般卫生情况 • 不适于用菌落总数作为卫生质量指标的食品: • 发酵食品（尤其是细菌发酵食品） • 食品卫生质量综合评定的重要性: • 微生物毒素的存在，病原微生物的存在
• 目前生产企业一般不将致病菌检验列入常规检验指标，主要原因:
• 检验方法还存在一定的局限性，还不能仅借一种或少数几种检验方法即 能 将多种致病菌全部检出。因此，要检验多种致病菌时，势必要应用较多的 检验方法。
食品微生物检验内容与检测技术分析
食品微生物检验内容与检测技术分析食品微生物检验是指对食品样品中的微生物进行检测和分析的过程。
食品微生物检验内容包括对食品中常见的致病菌、有害菌和变质菌的检测，以及对食品中的微生物总数、菌落总数、酵母和霉菌等指标的测定。
1. 致病菌的检测：致病菌是指能够引起食物中毒或食源性疾病的微生物。
常见的致病菌有大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、产气荚膜梭菌等。
食品中的致病菌检测主要包括样品的预处理、分离培养、形态观察和生化鉴定等步骤。
2. 有害菌的检测：有害菌是指对人体健康有一定危害的微生物，包括产毒菌、过敏原菌等。
常见的有害菌有金黄色葡萄球菌、葡萄球菌、大肠埃希菌、变形杆菌等。
有害菌的检测可以采用PCR技术、酶联免疫吸附法(ELISA)、生物传感技术等。
3. 变质菌的检测：变质菌是指导致食品腐败、变质的微生物。
变质菌的检测常采用菌落总数进行评估，包括总生菌数、大肠杆菌群和金黄色葡萄球菌的测定。
常用的检测方法有平板计数法、过滤法、MPN法等。
4. 微生物总数的测定：微生物总数是指食品样品中各种微生物的总数目，是评价食品卫生质量的重要指标之一。
常用的方法有平板计数法、过滤法、MPN法等。
6. 酵母和霉菌的测定：酵母和霉菌是食品中常见的微生物，对食品的质量和安全有一定影响。
常见的方法有平板计数法、膜过滤法等。
食品微生物检验的技术包括传统培养方法和快速检测方法。
传统培养方法是指通过将食品样品接种于适当的培养基上，经过一定的温度和时间培养，观察和计数微生物菌落来确定食品样品中微生物的种类和数量。
快速检测方法是指利用现代生物技术手段，通过检测微生物的特定基因、代谢产物或抗原，结合分子生物学、免疫学等方法对微生物进行检测和鉴定。
常见的快速检测方法有PCR技术、酶联免疫吸附法(ELISA)、生物传感技术等。
食品微生物检验方法
食品微生物检验方法
食品微生物检验方法是通过对食品样品进行培养和鉴定，检测其中的微生物种类和数量。
常用的食品微生物检验方法包括以下几种：
1.总菌落计数：将食品样品分散在培养基上，经过一定时间的培养，计算每个菌落的数量，以评估食品中的总菌落数。
2.大肠菌群检测：通过将食品样品进行预处理和培养，然后用特定培养基进行筛选，检测食品中的大肠菌群数量，以评估食品的卫生质量。
3.致病菌检测：针对食品中可能存在的致病菌进行检测，常用的方法包括PCR（聚合酶链式反应）、免疫学方法、逆向传播法等。
4.真菌检测：通过培养方法，筛选食品样品中的真菌数量和种类，以评估食品的真菌污染程度。
5.酵母菌检测：通过培养方法，筛选食品样品中的酵母菌数量和种类，以评估食品的酵母菌污染程度。
6.蛋白质降解菌检测：通过培养方法，筛选食品样品中的蛋白质降解菌数量和种类，以评估食品的质量。
这些方法都需要严格的实验操作和操作规范，以确保检验结果
的准确可靠。
同时，在进行食品微生物检验时，还需要遵守相关的卫生和安全规定，保证实验环境和操作的无菌状态。
食品卫生检验方法
食品卫生检验方法
食品卫生检验方法是指用于检测食品中是否存在有害物质、细菌、病毒等的检验方法。
以下是常见的食品卫生检验方法：
1. 外观检查：检查食品的色泽、形状、气味等是否正常。
2. 生物学检验：包括微生物指标的检验和致病微生物的检验。
微生物指标包括总菌落数、大肠杆菌数、黄金葡萄球菌数等。
致病微生物的检验主要包括沙门氏菌、副溶血性弧菌、腺病毒等。
3. 化学检验：包括添加剂、重金属、农药残留、防腐剂等有害物质的检验。
常用的化学检验方法包括高效液相色谱法、气相色谱法、原子吸收光谱法等。
4. 物理检验：包括质量指标（如含水率、灰分含量）、纤维含量、维生素含量等的检验。
5. 代谢产物检验：用于检测食品中是否存在有害代谢产物，如亚硝酸盐、黄曲霉毒素等。
6. 快速检验方法：如PCR、酶联免疫吸附试验（ELISA）等，用于快速检测食品中的致病菌或有害物质。
以上是常见的食品卫生检验方法，不同的食品类型和目的可能需要使用不同的检验方法。
食品卫生微生物指标及微生物检测
检样
图
25 g(mL)样品+225 mL 稀释液，均质
大
肠
10 倍系列稀释
菌
选择适宜3 个连续稀释度的样品匀液，接种
群
LST 肉汤管
M
36 ℃ ±1 ℃ 48 h ±2h
P
不产气
产气
N
BGLB 肉汤
计
36 ℃ ±1 ℃ 48 h ±2h
数
法
不产气
产气
检
大肠菌群阴性
大肠菌群阳性
制法：将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌， 调节pH。煮沸2min，将培养基冷却至45-50℃倾注平板。 使用前临时制备，不得超过3h。
选取菌落数在15 CFU～150 CFU 之间的 平板，分别计数平板上出现的典型和可疑 大肠菌群菌落。 典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆 盐沉淀环，菌落直径为0.5 mm 或更大。
食品卫生微生物学指标
食品卫生标准
是检验食品卫生状况的依据，包括
感官指标
指通过目视、鼻闻、手摸和口尝检 查各种食品外观的指标，一般包括 色泽、气味、口味和组织状态等。
理化指标
指食品在原料、生产、加工过程中 带入的有害物质以及由于霉变和腐 败变质而产生的有毒有害物质。
微生物指标
目前实际应用的指标菌可以分为以下三种：
乳糖发酵管3537 ℃ ，242小时
革兰氏阳性 革兰氏阴性 无芽孢杆菌
产气
大肠菌群阴性 报告
大肠菌群阳性 报告
不产气
大肠菌 群阴性
报告
产气实验
ＥＭＢ（伊红美蓝） 琼脂培养基原理
ＥＭＢ琼脂培养基中含有的伊红和美蓝染料， 可抑制革兰氏阳性细菌。那些能发酵乳糖的细 菌，能将染料摄入细胞，从而使菌落呈现出紫 色或边缘无色、中央暗黑色的菌落。
食品卫生微生物检验基本程序
5)消毒剂： 70%~75%乙醇溶液、中等浓度（100mg/L） 次氯酸钠溶液等。
6）标记工具：标签纸（不干胶标签纸）、油性或不可 擦拭记号笔。
7）样品运输工具：便携式冰箱或保温箱。 8）天平：最大量程为2000g，感量为0.1g。 9）搅拌器和混合器：必要时配备带有灭菌灌的搅拌器
或混合器。 10）稀释液：灭菌的磷酸盐缓冲液、0.1%蛋白胨水、
生理盐水以及其他稀释液如脑心浸液肉汤、M肉汤、 LB肉汤等。 11）防护用品：对样品的防护。即保护生产环境、原 料和成品等不会在取样过程中被污染，同样也保护 样品不被污染。工作服、工作帽、口罩、雨鞋、手 套等。事先消毒灭菌（或使用一次性无菌物品)。
✓应根据不同的样品特征和采样环境，对采样 物品和试剂进行事先准备和灭菌等工作。
✓ 一般说来，进出口贸易合同对食品采样量有明确 规定的，按合同规定采样；进出口贸易合同没有具体 采样规定的，可根据检验的目的，产品及被抽样品批 的性质和分析方法的性质确定采样方案。
✓ 目前的采样方案多为ICMSF推荐的采样方案和随 机采样方案。无论采取何种方法采样，每批货物的采 样数量不得少于5件。对于需要检验沙门氏菌的食品， 采样数量应适当增加，最低不少于8件。
• 对采样人员和制样人员提出了很高的专业要求，既要 保证样品的代表性和一致性，又要保证整个微生物检 验过程在无菌操作的条件下完成。
一、 采 样
采样是指在一定质量或数量的产品中， 取一个或多个代表性样品，用于微生物 检验的过程。
样品必须对采样的整个产品或批量具 有代表性。样品的大小应能满足在需要 时进行重复分析的需要。
• 8搅拌器和混合器 • 9 稀释液 • 10 防护用品
二、取样计划
• 1 食品卫生微生物学检验的取样点 • 原料、生产线样品（半成品，环境）、
食品微生物检验的指标PPT课件
02
食品微生物检验的指标
细菌总数
细菌总数
指在一定条件下，每克或每毫升 食品中生长的细菌菌落的总数， 是评价食品卫生质量的重要指标
质量保证与质量控制
加强质量保证和质量控制，确保检验结果的 准确性和可靠性。
04
食品微生物检验的应用和发展
食品微生物检验的应用领域
食品生产过程控制
01
通过微生物检验，监控食品生产过程中的卫生状况，确保食品
不受微生物污染。
食品安全评估
02
对食品进行微生物检验，评估食品的安全性，确保食品符合国
家食品安全标准。
之一。
检测方法
通常采用倾注培养法或表面涂布法 进行检测，需要经过培养、计数和 报告三个步骤。
参考范围
不同食品的细菌总数参考范围不同， 一般而言，生乳的细菌总数应不超 过100000cfu/mL，饮用水的细菌 总数应不超过100cfu/mL。
大肠菌群
大肠菌群
指一群在37℃培养24小时后能发酵乳 糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革 兰氏阴性无芽孢杆菌。
实验室环境控制
实验室应保持清洁和良 好的微生物学状态，定
期进行环境监测。
人员安全与培训
检验人员应接受相关培 训，了解微生物安全知 识，遵守实验室安全规
定。
检验过程中的注意事项
01
02
03
04
无菌操作
在检验过程中，应遵循无菌操 作原则，避免交叉污染。
食品中的微生物检验方法
食品中的微生物检验方法食品安全一直是人们关心的重要问题，各种微生物的存在往往对食品的质量和安全性产生着巨大的影响。
因此，对食品中微生物的检验方法显得尤为重要。
本文将介绍一些常用的食品微生物检验方法，以及它们的原理和应用。
一、总菌落计数法总菌落计数法是评估食品中微生物总数的一种常用方法。
该方法通过将食品样品制备成适当的稀释液，在特定的寒暖培养条件下培养菌落生长，进而通过数目的计数来评估食品样品中的总菌落数。
这种方法适用于各种食品，如肉类、乳制品、水果蔬菜等。
二、大肠杆菌检测法大肠杆菌是一种常见的致病菌，其存在于食品中可能对人体健康构成较大的威胁。
因此，检测食品中的大肠杆菌也是一项重要的微生物检验方法。
该方法通常使用大肠杆菌培养基，将食品样品接种于培养基上，经过一段时间的培养和生长后，观察培养基上是否有大肠杆菌的产生。
三、霉菌和酵母菌检测法霉菌和酵母菌是常见的食品污染源，它们能够在食品中迅速繁殖和生长，不仅会导致食品变质，还可能产生一些毒素，对人体健康造成威胁。
因此，对食品中的霉菌和酵母菌进行检测也是非常重要的。
该方法通常使用含有特定培养基的琼脂糖平板，将食品样品沉积于琼脂糖平板上，经过一段时间的培养和生长后，观察平板上是否有霉菌和酵母菌的产生。
四、PCR法PCR（聚合酶链反应）是一种常用的分子生物学方法，也可以应用于食品微生物检验。
该方法通过选择适当的引物，将食品样品中的微生物DNA扩增，进行定性和定量分析。
PCR法具有快速、灵敏的优势，能够准确检测食品中微生物的存在和种类，进而评估食品的安全性。
以上介绍的是一些常用的食品微生物检验方法，它们可以帮助我们了解食品中微生物的质量和安全状况。
然而，需要注意的是，不同的食品样品可能需要不同的检验方法，因此在实际操作中需要根据具体情况选择合适的检验方法。
此外，检验过程中的卫生条件、培养基的质量等因素也会对结果产生影响，因此在进行微生物检验时，务必严格控制各项操作条件，以保证检验结果的准确性和可靠性。
《食品微生物检验》课件
在食品储存和运输过程中，定期进行 微生物检验，以检测食品中微生物的 生长和变化，及时发现并控制潜在的 食品安全问题。
食品卫生与安全评价的微生物检验
总结词
评估食品卫生状况和食品安全性能，为消费者提供可靠的食品安全信息。
详细描述
通过微生物检验，对食品卫生状况和食品安全性能进行评价，为消费者提供可 靠的食品安全信息，保障公众健康。
提高食品安全预警能力。
智能化与自动化检测设备的研发
智能化检测设备
通过人工智能和机器学习技术，实现对食品中微生物的自动识别 、分类和计数，提高检测准确性和效率。
自动化检测设备
利用自动化技术，实现食品微生物检验的自动化流程，减少人工 操作和误差，提高检测的一致性和可靠性。
在线监测系统
研发在线监测系统，实时监测食品生产过程中的微生物状况，及 时发现和解决食品安全问题。
02
食品微生物的种类与特性
细菌
01
02
03
常见种类
大肠杆菌、沙门氏菌、志 贺氏菌等。
特性
细菌通常为单细胞微生物 ，形态多样，可在食品中 广泛分布，部分细菌可引 起食物中毒和肠道疾病。
检测方法
通过培养、分离、鉴定等 步骤进行细菌检测，常用 生化试验和免疫学方法进 行鉴定。
霉菌
常见种类
黄曲霉、毛霉、根霉等。
03
利用磁珠与微生物的结合，实现微生物的分离和富集。
分子生物学检测技术
1 2
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增微生物的DNA片段，实现快速、灵敏的 检测。
基因测序
对微生物的基因组进行测序，鉴定其属性和类型 。
3
生物芯片技术
将微生物的基因标记在芯片上，通过扫描仪进行 检测和计数。
食品微生物检验
食品微生物检验食品微生物检验一、概念食品微生物检验是指对食品样品中的微生物进行检测与鉴定的过程。
食品微生物检验的目的是了解食品中是否存在有害的微生物，保证食品的安全性和质量。
二、检测对象1、生产企业所生产的食品产品。
2、进口食品。
3、在流通环节中的食品产品。
三、检测方法1、直接计数法直接计数法是指将食品样品进行稀释，然后在培养基中进行生长，最后通过显微镜对微生物进行计数测定。
2、传统培养法传统培养法是将食品样品进行稀释，然后将稀释后的样品加入富含营养物质的培养基中，进行细菌的生长与繁殖，最后根据对培养基上生长菌落数量及菌种种类的鉴定，确定食品样品中的微生物。
3、膜过滤法膜过滤法是将食品样品通过特制的滤膜进行过滤，将滤液中的微生物沉积在滤膜上，最后通过显微镜对微生物进行计数测定。
四、检测项目1、细菌总数细菌总数是指食品样品中包含的微生物总数。
食品样品中细菌总数的高低直接影响着食品的卫生质量。
2、大肠杆菌大肠杆菌是食品中一种非常危险的微生物，它的存在说明食品可能受到了肠道污染。
检测大肠杆菌的标准是一克食品样品中大肠杆菌数量不能超过100个。
3、菌落计数菌落计数是指在选定的培养条件下，分别从食品样品中挑选出单个菌落，并计算其数量。
4、霉菌与酵母菌霉菌与酵母菌是一种常见的食品微生物，它们会在食品中生长繁殖，对食品的质量与卫生带来不良的影响。
五、检测机构1、国家食品安全监管总局国家食品安全监管总局是监督食品卫生、安全的最高权力机构，其下设有检测部门，专门负责对食品微生物进行检测与鉴定。
2、食品检验机构食品检验机构是指专门从事食品检测与鉴定的机构，其主要职责是根据国家与地方政府的要求，对食品样品进行检测与鉴定。
六、检测要求1、合理择样食品微生物检验的样品应该是从食品的各个环节中随机采样的，并且样品不能被人为操纵或者加工。
2、严格控制食品微生物检验在操作过程中必须严格控制污染，否则检测结果将会失真。
此外，在微生物检验过程中操作人员也应该严格控制人员本身的污染。
微生物检验总则GB-4789
随机性
代表性 无菌性
3.2采样方案 (1) 根据检验目的、食品特点、批量、检验方法、微生物的危害程 度等确定采样方案。 (2) 采样方案分为二级和三级采样方案。二级采样方案设有n、c和 m 值,三级采样方案设有n、c、m 和 M 值。 n:同一批次产品应采集的样品件数; c:最大可允许超出 m 值的样品 数; m:微生物指标可接受水平限量值(三级采样方案)或最高安全限 量值(二级采样方案); M:微生物指标的最高安全限量值。
2.3.3干热灭菌
是利用恒温干燥箱内120ºC～150ºC的高热，并 保持90～120分钟，杀死细菌和芽孢，达到灭菌目的 的一种方法。主要适用于不便在压力蒸汽灭菌器中 进行灭菌，且不易被高温损坏的玻璃器皿、金属器 械以及不能和蒸汽接触的物品的灭菌。用此方法灭 菌的物品干燥，易于贮存。
2.3.4过滤除菌
食品安全国家标准食品微生物学检验总则 GB 4789.1-2016
目录
一、范围 二、实验室基本要求 三、样品的采集 四、检验 五、生物安全与质量控制 六、记录与报告 七、检验后样品的处理
1/范围
本标准规定了食品微生物学检验基本 原则和要求。 本标准适用于食品微生物学检验。
2/实验室基本要求
2.1检验人员 (1) 应具有相应的微生物专业教育或培训经历,具备相应的资质,能 够理解并正确实施检验。 (2)应掌握实验室生物安全操作和消毒知识。 (3) 应在检验过程中保持个人整洁与卫生,防止人为污染样品。 (4) 应在检验过程中遵守相关安全措施的规定,确保自身安全。 (5) 有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验。
2.2微生物基本操作
30%
梯度稀释
平板倾注
45%
35%
平板划线
食品微生物学检验GB-4789-系列知识点汇总
食品微生物学检验GB 4789 系列知识点汇总GB 4789.1-2016 食品卫生学检验总则一、2016版总则变更内容1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。
2.删除了标准性引用文件。
3.修改了实验室基本要求：应具有相应的微生物专业教育或培训经历〔如生物学、植物学、医学、食品科学与工程、食品质量与安全等与微生物有关的相关专业〕，具备相应的资质〔应有岗位上岗证、生物安全上岗证和压力容器上岗证〕，能够理解并正确实施检验。
实验室生物安全操作和消毒知识〔相关标准及培训，如GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求、消毒技术标准〔2002〕〕。
应在检验过程中保持个人整洁与卫生，防止人为污染样品。
应在检验过程中遵守相关安全措施的规定，确保自身安全。
有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验〔即无颜色视觉障碍〕。
②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。
生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应:引起人和动物非常严重疾病，国家未发现或已宣布消灭的微生物，如天花病毒。
引起任何动物比较严重疾病，在人和人、人和动物之间传播如霍乱弧菌。
病原微生物分类成严重危害如沙门氏菌、单增李斯特氏菌。
BSL-1〕：操作第四类病原微生物〔属适用范围如大肠埃希氏菌、枯草芽重要设备是超净工作台，它可以〕实验室生物安全级别BSL-2〕：操作第三类病原微生物〔属II级生物安全柜。
〕BSL-3〕：操作第二类病原微生物BSL-4〕：操作第一类病原微生物消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。
灭菌：是杀死和去除所有微生物及其中孢子的过程。
紫外线消毒〔臭氧〕空间熏蒸〔如空间被霉菌微生物实验湿热灭菌或常用高压灭菌180℃1h或170℃2h〕紫外线消毒法：紫外灯管放射一定波长，破坏细菌或病毒的DNA和RNA，使他们丧失生存能力和繁殖能力，从而到达灭菌目的。
紫外线的特点是对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌芽孢对其抵抗力大，且紫外线穿透力极低，所以只能用于外表灭菌，对固体物质灭菌不彻底。
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1500W电炉▲安全警告
1.电源插塞与电炉插孔接触良好→插头插入插座。 2.如果培养基潽了，流入电炉；必须立即切断电源、 拔除插头；以免触电，危及生命！
东西两侧边台各一个电炉，每个电炉 可同时放置3个500ml锥形瓶进行加热。
加热时,常摇动。 沸腾时，不能摇动！
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实验分组（40人）
❖ 俩俩相对4人为一个小组,组号编在电源插座上。 ❖ 按从前到后从左到右顺序，编为1～5，6～10。 ❖ 两个小组编为一个大组：1+2,4+5, 6+7,9+10, 3+8。
左
甲 乙甲 乙甲 乙
1
2
3
丙 丁丙 丁丙 丁
讲
台
右
甲 乙甲 乙甲 乙
6
7
第二部分（菌落总数测定）。 2003是指该标准制定或修改的年份。
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食品卫生标准中的微生物指标
❖ 指示菌
概念:在常规安全卫生监测中，用以指示检样卫生状况及安 全性的指示性微生物。
项目：菌落总数 、大肠菌群、耐热大肠菌群、总大肠菌群。
❖ 食源性致病菌及其毒素
沙门菌、志贺菌、副溶血性弧菌、变形杆菌、单核细胞增 生李斯特菌、阪崎肠杆菌、空肠弯曲菌、致病性大肠埃希 菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌、肉毒梭菌、产气荚 膜梭菌等。
1+2 +3+4
乳糖胆盐 发酵培养基
8.75
250
4瓶
10
5
营养琼脂
5
130
8瓶
6
氯化钠
2
225
9瓶
6
氯化钠
00.8 300
3瓶
7、8
EC肉汤
7.4
200
1瓶
5
★加热时常摇动，煮至完全溶解→分装于带有倒放小倒管的试管中 →试管筐内→罩上硫酸纸、牛皮纸，扎好→高压蒸汽灭菌15分钟
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标准的分类
❖ 根据适用范围分为国家标准、行业标准、地方 标准和企业标准四级。
❖ 根据法律的约束性分为强制性标准和推荐性标 准。
❖ 标准号:代号 + 序号 + 年份组成 GB/T 4789.2 - 2003
代号GB表示国家标准， T指推荐性标准。 序号4789指食品卫生微生物学检验，点2指该检验的
❖ 菌落总数所用培养基、培养温度、培养时间的 差异会影响到菌落计数的结果。因此，必须严 格遵照国家规定的检验方法中的操作条件，以 获得始终可比的结果。
❖ 菌落总数的食品卫生意义：判定检样被微生物 污染的程度，预测食品存放的期限。
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大肠菌群
❖ 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的 用语，它不代表某一个或某一属细菌，而是指具有某 些特性的一组与粪便污染有关的细菌，是评价食品卫 生质量的重要指标之一。
❖ 大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致，其定义 为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的 革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大 肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属 等四个属的细菌。
❖ 大肠菌群是作为粪便污染指示菌提出来的，该菌群的 检出，可推测检样中存在着肠道致病菌污染的可能性。
❖ 考虑问题应该周到，设备、材料准备齐全，确保实验 顺利进行。
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器材准备
❖ 1.冰箱：0～4℃ ❖ 2.恒温培养箱：35～37℃ ❖ 3.恒温水浴箱：45～47℃ ❖ 4.灭菌1ml刻度吸管：3支×10组×2倍 ❖ 5.灭菌10ml刻度吸管：2支×10组×2倍 ❖ 6.灭菌90mm平皿：7个×10组×2倍 ❖ 7.灭菌70mm平皿：4个×2×10组×2倍 ❖ 8.灭菌中试管：2支×10组×2倍
❖ 大肠菌群的食品卫生意义：作为粪便污染食品的指示 菌，作为肠道致病菌污染食品的指示菌。
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大肠菌群
属
代表种
致病性
埃希菌属 (Escherichia）
枸橼酸杆菌属 (Citrobacter)
克雷伯菌属 (Klebsiella)
肠杆菌属 (Enterobacter)
大肠埃希菌 (E.coli)
❖ 霉菌、酵母菌及其毒素
黄曲霉毒素B1 、B2等。
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菌落总数
❖ 菌落总数是指被检样品的单位重量(g)、容积 (ml)、表面积(cm2)或体积(m3)内，所含有的 能在某种固体培养基上,经一定条件、一定时 间培养后长出的菌落数量。 包括细菌、霉菌和酵母菌的菌落总数。
8
丙 丁丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
4
5
丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
9
10
丙 丁丙 丁
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食品卫生微生物学检验一 实验准备
❖ 培养基制备 ❖ 高压蒸汽灭菌 ❖ 器材预算 ❖ 刻度吸管的无菌操作方法
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培养基的制备（40人份）
组号
培养基
称量g 水量ml 瓶数 分装量ml★
弗劳地枸橼酸杆菌 (C.freundii)
肺炎克雷伯菌 (K.pneumoniae)
产气杆菌 (E.aerogenes)
肠道外感染， 急 性腹泻。
条件致病菌，引起 继发性感染。
肺炎，泌尿系、创 伤感染、败血症等。
很少引起原发性感 染。
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实验预算
❖ 编写实验预算必须仔细阅读操作步骤，确认器材。 2例5g如(m：l)P剪10 碎7放.操于作含步有骤225m7l.灭1.菌1 生“理以盐无水菌或操其作他将稀检释样 液灭菌玻璃瓶内……。” 取“25ml”联想到10ml无菌刻度吸管和洗牙球，无 菌吸管应该怎样包装灭菌？ “剪碎”固体样品需要无菌剪刀，如果是液体检品 则不需要。 “225ml灭菌生理盐水”，应该装在250ml的盐水瓶 里，怎样配制生理盐水？需要什么物品和器材？
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培养基隔石棉网煮沸，使完全溶解。
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称量纸置于左盘，游码
秤物时“左物右码”，
移至标尺左端“0”点位置
砝码在右盘，物品在左盘
上，指针应对准中线，取得
上，尽可能放在秤盘中心。
平衡。否则将杠杆两端的调 整螺母旋动调节平衡。
天平保持干燥、清洁。用 过的药勺要清洗干净。
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培养基预算
❖ 乳糖发酵管：微量乳糖发酵管（已购买） ❖ 乳糖胆盐发酵管（见P2054.9)：10ml×10支×10组×120％ →