显微镜的使用与简单染色法
细菌一般染色方法
细菌一般染色方法细菌染色是一种常用的实验技术，通过染色使细菌在显微镜下能够更清晰地观察和分析。
细菌染色通常分为简单染色、阴性染色和阳性染色三种方法。
一、简单染色方法：简单染色是最基础的细菌染色方法，主要是用一种染色剂来染色所有类型的细菌。
常用的染色剂有墨汁、甲基蓝、伊红等。
简单染色的步骤如下：1.取一片细菌涂片，将其干燥。
2.在涂片上滴加染色剂，覆盖整个片面。
3.将染色剂置于片上一分钟，用水冲洗。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
简单染色可以使细菌呈现出斑点或条纹状，并能够区分一些基本形态和结构，但不能提供更多细菌信息。
二、阴性染色方法：阴性染色可使细菌显现为透明，而背景呈色的方法。
常用的阴性染色剂有阿里兹红、印度墨等。
阴性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上，使其成薄层。
2.滴加阴性染色剂到涂片上，使其均匀覆盖涂片表面。
3.用水冲洗染色液，并用纸巾擦干涂片。
4.镶片并观察。
阴性染色使背景呈色，使细菌透明，从而可以更清晰地观察其形态特征。
三、阳性染色方法：阳性染色可以使细菌显现为有色的圆点或杆状，常用的阳性染色剂有甲基蓝、伊红等。
阳性染色的步骤如下：1.将涂片上的细菌涂片均匀涂抹于载玻片上。
2.将染色剂滴加到涂片上，使其完全覆盖涂片。
3.置片5-10分钟，然后用水冲洗染色剂。
4.用纸巾将涂片上的多余水份吸干。
5.镶片并观察。
阳性染色可以染色细菌，使其呈现有色的形态，便于观察和鉴定。
此外，还有一些特殊染色方法，如革兰氏染色法、氢酒精酸快速染色法等。
革兰氏染色是一种经典的细菌染色方法，通过不同细菌细胞壁的染色性质来将其分为革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
该方法使用革兰紫染色剂和碘液，以及酒精和碳酸盐条件溶液进行染色处理。
氢酒精酸快速染色法是一种常用的快速染色方法，将细菌用甲基蓝染色液处理一段时间后，用酒精和酸性酒精进行洗涤和脱色，最后用伊红染色液着色。
这种方法可以快速地将细菌分为两种主要类型：革兰阳性细菌和革兰阴性细菌。
简单染色法步骤
简单染色法步骤一、引言染色是一种常见的实验方法，广泛应用于生物学、化学、医学等领域。
其中，简单染色法是最基础、最常用的染色方法之一。
本文将介绍简单染色法的步骤及其应用。
二、准备实验材料和设备1. 实验材料：待染色的样本（如细胞、组织切片等）、染色剂（如甲苯胺染料、嗜酸性染料等）、脱水、透明和固定剂（如乙醇、木质醋酸等）。
2. 实验设备：玻璃片、显微镜、显微镜镜头、显微镜载玻片、显微镜载玻片盖片、显微镜载玻片夹。
三、固定样本1. 取一小片待染色的样本，放置在玻璃片上。
2. 用透明剂和固定剂依次浸泡样本，使其固定在玻璃片上。
3. 将固定后的样本置于通风处晾干。
四、脱水处理1. 取一盛有乙醇的容器，将固定的样本放入其中。
2. 逐渐增加乙醇浓度，例如从浓度较低的乙醇（如70%）开始，逐渐转移到浓度较高的乙醇（如95%）中，最后转移到绝对乙醇中。
3. 每次转移样本之前，需在乙醇中浸泡一段时间，使其充分脱水。
五、染色处理1. 取一盛有染色剂的容器，将脱水后的样本放入其中。
2. 根据染色目的选择适当的染色剂，如甲苯胺染料用于碱性染色，嗜酸性染料用于酸性染色。
3. 将样本在染色剂中浸泡一段时间，使其充分染色。
六、清洗和封片1. 用脱离剂清洗染色后的样本，去除多余的染色剂。
2. 取一片干净的玻璃片，将样本置于其上。
3. 滴加一滴显微镜载玻片夹中的透明剂，将玻璃片盖在样本上。
4. 轻轻压平，使样本均匀分布在玻璃片上。
七、观察和分析1. 将封好的玻璃片放置在显微镜载玻片上。
2. 装上显微镜载玻片盖片，并用夹子夹紧。
3. 将载玻片放入显微镜镜头下，调节放大倍率和焦距，观察样本的染色情况。
4. 根据观察结果，进行分析和记录。
八、实验注意事项1. 在实验过程中，需佩戴手套和口罩，做好个人防护。
2. 实验材料和设备要保持清洁，避免污染。
3. 染色剂的选择要根据不同样本和染色目的来确定。
4. 染色时间和温度要控制适当，避免过度染色或不足染色。
光学显微镜的使用及革兰氏染色
光学显微镜的使用及革兰氏染色显微镜是研究微生物所必不可少的工具。
由于显微镜的发明，帮助人类揭开了微生物世界的奥秘。
随着科学技术的不断发展，光学显微镜已从利用可见光的范围扩大到利用紫外光源及非光源的电子显微镜，从而大大地提高了显微镜的放大率和分辨率。
当今微生物学实验室中最常用的是普通光学显微镜，无论是观察微生物的个体形态还是测量微生物细胞大小都必须使用它。
因此我们应了解显微镜的构造和原理，以达到正确使用和保养的目的。
除暗视野显微镜和相差显微镜可用于观察活的细菌细胞外，其他普通光学显微镜大都用来观察经染色后的细菌细胞，只有经过染色的细胞才能看清其形态和构造。
因此各种染色法也是微生物工作者应掌握的基本技术。
1普通光学显微镜的使用【目的】1．了解普通光学显微镜的构造和原理。
2．正确掌握使用显微镜的方法。
【概述】微生物是肉眼看不见的微小生物，必须借助光学显微镜和电子显微镜，才能观察到。
因此，显微镜是研究微生物最基本和最重要的工具之一。
所以，掌握显微镜的使用与维护是进行微生物实验研究的基本技能。
【普通光学显微镜的基本结构】普通光学显微镜由两大部分组成，即机械部分和光学部分。
机械部分包括镜座、镜臂、载物台及台上的标本推进器、镜筒、物镜转换盘、升降调节器等，其主要作用是支撑、固定镜头、调节物象焦距、搁置和移动标本。
光学系统包括反光镜（或电光源）、光圈、聚光器、物镜、目镜等，作用是收集光源并聚集于标本上，然后通过透镜放大成像，使人眼可以分辨在裸眼时不能看见的细节。
物镜一般有4×、10×、40×、100×（或90×）等几种。
100×的是油镜，是微生物实验最常用的物镜。
因为目镜多为10×，所以使用油镜观察标本时，放大倍数为1000×，可以将1μm左右的细菌放大至1mm左右。
1．机械装置(1)镜座和镜臂：它们是显微镜的基本骨架，起稳固和支持显微镜的作用。
实验1显微镜的使用细菌的简单染色
很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜，使照明亮度提高，改善观察效果。
㈢ 细菌的简单染色
利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
细菌个体微小，无色透明，不经过染色，常常不容易观 察。经过染色后，菌体与背景颜色形成鲜明的颜色对比，便 于在显微镜下观察细菌的形态、大小和排列方式。
利用同焦现象，在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时，仅用微动螺旋即可对物像清晰聚焦，从而避 免由于使用粗动螺旋时可能的错误操作而损坏镜头。
4 油镜观察 注意不要因为在下降物镜镜头时用力过猛或者调焦时误
将粗动螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片。 不可以将高倍镜转动经过加油镜油的区域。
调节目镜间距和屈光度。
瞳距调节
屈光度调节：可以适应双眼视力有差异的观察者。
2 低倍镜观察
养成良好的调焦习惯，先从侧面注视，小心调节物镜靠近 标本，然后用目镜观察，以防操作失误而损坏镜头。
3 高倍镜观察
一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦后，转动转换 器将其它物镜转到工作位置，物像保持基本准焦状态，称为物 镜的同焦(parfocal)。
㈠ 普通光学显微镜
微生物个体微小，必须借助显微镜才能观察到，显微镜 是微生物学者不可缺少的基本工具。
普通光学显微镜利用目镜、物镜两组透镜系统来放大成 像，常称为复式显微镜，由机械装置和光学系统两大部分组 成。
1 机械装置 镜座和镜臂：镜座支持整个显微镜，镜臂支持镜筒部分。
镜筒：上接目镜，下接转换器，分为单筒和双筒两种。
目镜：安装在镜筒上端，由两块透镜组成，将物镜成的像 再次放大，但是不增加分辨力，目镜放大倍数过大，反而影响 观察效果。
显微镜的使用及细胞的革兰氏染色
微生物学实验报告题目：显微镜的使用及细胞的革兰氏染色姓名：学号：年级班级：组别：同组者：时间：【实验器材】1．菌种大肠杆菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌16h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，枯草芽孢/胞杆菌16h牛肉膏蛋白胨斜面培养物。
2．溶液和试剂革兰氏染液，草酸铵结晶紫染液，卢戈式（Lugol）碘液，95%乙醇，番红复染液，香柏油，二甲醇等。
3．仪器和其他用品普通光学显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，双层瓶，接种环，试管架，镊子，滴管。
【目的要求】1．显微镜的构造及使用。
2．学习油镜的使用、涂片、染色技术。
3．初步认识细菌形态。
4．掌握革兰氏染色法。
【实验原理】现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在普通光学显微镜通常配置的集中物镜中油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要，与其他物镜相比，油镜的使用方法比较特殊，需要在载玻片和镜头之间滴加香柏油。
简单染色法是利用单一染料使细菌着色以显示其形态的染色方法。
常用于染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。
碱性染料电离时，其分子染色部分带正电荷，能和带负电荷的物质结合。
由于细菌生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料使其着色。
当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。
中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。
作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法，革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G－）两大类。
G－菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。
光学显微镜的使用简单染色及革兰氏染色
光学显微镜的使用简单染色及革兰氏染色摘要显微镜的使用在我们学习微生物等课程中非常重要，历史上显微镜的发明和显微镜的每一次创新都给人类的认知带来了飞跃式的发展；给人类的生活带来了空前的拓展。
在提倡科技创新的今天，显微镜的使用已经成为我们的一项基本技能。
本次试验的主要目的是通过用油镜观察经过复染色的细菌玻片，分辨细菌的革兰氏阴阳性。
通过实验学习光学显微镜油镜的使用原理与方法、细菌的革兰氏染色法及分类鉴定的原理。
为了研究细菌的形态，微生物学家发明了对细菌的染色，用两种以上的称复染，革兰氏发明了复染色法；先后用两种染色剂和媒染剂、脱色剂组合，由此而命名为革兰氏染色。
革兰氏染色不仅可以观察细菌的形态，同时将细菌分为两大类。
一类是染色阳性菌是紫色，另一类染色阴性的是红色。
由于细菌的结构上的差异，形成了不同的染色效果。
了解染色性能有助于临床用药和细菌的鉴定。
关键词显微镜的使用(Use of Microscope 革兰氏染色(Gram stain)复染(counterstain) 媒染(mordant dyeing)脱色(discoloration)一、实验目的1、了解显微镜的构造及使用2、学习显微镜(特别是白色圈标记的油镜)的使用方法3、学习并掌握微生物制片及简单染色的基本技术4、初步了解不同细菌的形态特征5、了解革兰氏染色原理，并掌握其方法二、实验原理（一）、普通显微镜的基本原理1、基本原理显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。
所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。
要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1,而香柏油的折射率为1.51 ,和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。
显微镜的使用和细菌简单染色
（二）光学显微镜的油镜原理
显微镜的分辨率D：是指显微镜能辨别两点之间 的最小距离的能力，即最小分辨距离。D越小，分 辨率越高。
D=λ/2NA λ为光源光波波长， NA为物镜的数值孔径值
数值孔径值 NA= η sinθ θ为物镜镜口角的半数， η为香柏油的折射率（1.52）
比如：水的折射率1.33， 空气的折射率为1.0 NA香柏油=1.2-1.4， D油镜=0.2μm＞细菌直径0.5μm
光学显微镜的结构示意图
三、实验器材
1、菌种：蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 2、染色液和试剂：美蓝染液、复红染液 3、器材：载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜
四、方法和步骤
1.涂片：在载玻片中央滴一滴蒸馏水，无菌接种环 挑取少量菌体与水滴混合均匀，涂成薄的 菌膜。
6. 干燥：自然干燥或用吸水纸盖在涂片处吸取多余 水分。
7. 观察：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的 视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏 油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观 察细菌的形态。
五、结果观察
蜡状芽孢杆菌的简单染色
五、结果观察
蜡状芽孢杆菌的简单染色
六、实验完毕后的处理
1.将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净， a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。
显微镜的使用和 细菌的简单染色
一、实验目的
1.熟悉光学显微镜使用方法 2.掌握细菌的涂片和简单染色法的 基本方法和步骤
二、基本原理
（一）简单染色基本原理 通常采用碱性染料进行简单染色: 这是因
为细菌在中性、碱性和弱酸性环境中通常带负 电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部 分带正电荷，因此碱性染料（美蓝，结晶紫， 碱性复红等）很容易与细菌结合使其着色。
简单染色法的名词解释
简单染色法的名词解释简单染色法是一种常见的生物学实验技术，用于染色和可视化细胞、组织或生物分子的研究。
这种方法利用染色剂与特定的生物分子或细胞结构发生反应，使其在显微镜下可见。
本文将对简单染色法的基本原理和常见应用进行解释。
一、基本原理简单染色法的基本原理是利用染色剂与目标物质之间的物理或化学相互作用，以改变目标物质的颜色或形态，并使其能够被光学设备观察到。
常见的染色剂包括染料、荧光探针和金属离子等。
通常，染色剂会选择性地与目标物质结合，使其产生明显的颜色反应。
例如，生物组织常用的染色剂溴化乙锭会与DNA结合形成蓝色颗粒，从而帮助研究者观察和定位细胞核。
此外，脂质染色剂类似尼罗红和苏丹红可以染色细胞膜和脂滴，从而帮助研究者观察和分析细胞膜的形态和构成。
二、常见应用1. 细胞标记简单染色法被广泛应用于细胞标记，以研究细胞的结构和功能。
通过选择合适的染色剂，研究者可以染色和区分细胞核、细胞质、细胞膜等不同细胞结构，并可视化细胞中的特定分子或蛋白质，以便研究其相互作用和功能。
2. 组织切片染色在研究组织学时，简单染色法可以帮助研究者观察和分析不同组织的形态、结构和成分。
经过适当的处理和染色，可以将细胞核、细胞质、细胞器、间质等区分开来，有助于对组织的组成和功能进行研究。
3. 分子探针染色剂也可以用于特定分子或基因的检测和分析。
例如，荧光染料羟吡啶绿和丙烯香豆素可以与DNA结合，形成特定的荧光信号，帮助研究者观察和定位基因或染色体。
此外，还有许多专门用于检测特定蛋白质、酶活性或细胞信号通路的染色剂和化学荧光探针。
4. 分子定位和定量通过简单染色法，可以确定分子或细胞在组织或细胞中的定位和分布情况。
例如，在免疫组织化学中，通过与特定抗体结合，可以标记和检测特定蛋白质在组织切片或细胞中的定位，从而揭示与该蛋白质相关的结构和功能信息。
5. 疾病诊断和研究简单染色法在病理学和临床诊断中也有着重要的应用。
例如，肿瘤组织切片常用的染色法可以帮助病理学家识别和分类肿瘤细胞，为肿瘤的诊断和治疗提供依据。
实验二普通显微镜的使用及细菌的简单染色法
实验二普通显微镜的使用及细菌的简单染色法一、实验目的1.学习并掌握油镜的原理和实使用方法。
2.复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二、实验原理（一）.普通显微镜普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大。
使用油镜时，需在载玻片与镜头之间加滴油，原因：1.增加照明亮度。
2.增加显微镜的分辨率。
（二）.简单染色法简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
它适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。
常用碱性染料进行简单染色，因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带有负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更容易于识别。
常用做染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。
三、实验器材1.菌种细菌营养琼脂平板培养物。
2.染色剂结晶紫染液。
3.仪器或其他用具显微镜，酒精灯，接种环，擦镜纸，生理盐水等。
四、操作步骤1.涂片取两块载玻片，各滴一滴生理盐水于玻片中央，用接环以无菌操作从细菌平板上挑取少许菌体于水滴中，混匀并涂成薄膜。
2.干燥室温自然干燥。
3.固定涂面朝上，通过火焰2~3次。
此操作过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。
4.染色将玻片平放于玻片搁架上，滴加染液于涂片上。
5.水洗倒去染液，用自来水冲洗，直至图片上流下的水无色为止。
6.干燥自然干燥，或用电吹风吹干，也可用吸水纸吸干。
7.镜检涂片干燥后镜检。
（1）在低倍镜下观察。
（2）在高倍镜下观察。
（3）在油镜下观察：在高倍镜或低倍镜下找到要观察的样品区域后，用粗调节器将镜筒升高，然后将油镜转到工作位置。
病原生物学实验3显微镜的使用、标本的制备与染色观察
1、简单染色法
原理：利用单一染料对细菌进行染色的一种 方法。
用途：适用于菌体一般形态和细菌排列的观 察。
染料：多采用美蓝、结晶紫或者碱性复红等 碱性染料。
菌种：大肠杆菌、葡萄球菌斜面18-24h培养 物。
实验步骤：
①涂片： ②干燥： 涂片制备 ③固定： ④染色：滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄 膜为宜），保留染液1-2min。 ⑤水洗：倒去染液，用自来水小水流冲洗，至涂片 上流水的水无色为止。 ⑥干燥：自然干燥或吸水纸吸干。
3. 油镜的使用原理:
使用油镜要加香柏油
原因：因为油镜的透镜很小，从载玻片透过的 光线通过空气，因玻片和空气介质密度不同， 发生折射现象，使射入镜筒的光线很少，物像 不清。若在油镜与载玻片中间加入和玻片折射 率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），则 使通过的光线不致产生折射而损失，进入油镜 的光线增多，视野光亮度增强，因此能清楚的 看到物像。
菌种：伤寒杆菌8-12 h肉汤培养物 实验方法： 取凹玻片一张，用火柴杆在凹窝四周涂凡士林
少许； 取盖玻片一张，用无菌接种环取1-2滴菌液滴
加在盖玻片中央（勿使菌液流开）；
将凹玻片扣在盖玻片上，使液滴正好对 准凹玻片的窝心，然后再轻轻按下，使 盖玻片与凡士林紧密固定，迅速翻转凹 玻片；
三、实验结果及讨论
要求画图记录实验结果 列表简述三种细菌的染色结果(说明各菌的形
状、颜色和革兰氏染色反应)。 对实验进行讨论
四、思考题
1、涂片制备时固定的目的是什么？ 2、G+菌与G-菌细胞壁的区别？ 3、哪些环节会影响革兰染色结果的正确
性？其中最关键的环节是什么？
1. 普通光学显微镜的构造：
显微镜的使用和细菌简单染色
显微镜的使用和细菌简单染色显微镜的使用和细菌简单染色是微生物学中最基础的技术和实验方法之一、显微镜的使用可以让我们观察到肉眼无法看清的微小物体，如细菌和其他微生物；而细菌的染色则能够使细菌更清晰地显示出来，以方便我们进行观察和研究。
首先，让我们先了解显微镜的基本结构和使用方法。
显微镜由以下几个关键部分组成：管柱，目镜，物镜，镜头，台面，光源和调焦机构。
管柱连接了目镜和物镜，它可以通过调节来确定两者之间的间距。
目镜位于管柱的上方，我们通过它来观察样本。
物镜位于目镜下方，它是负责放大被观察物体的主要部分。
镜头是位于物镜下方的几片放大镜片。
台面是放置样本的地方，通常有可移动的台面调节以控制位置。
光源位于显微镜的底部，它提供背景光源以照亮样本。
在使用显微镜之前，我们首先需要将样本准备好。
对于细菌的观察，我们可以通过简单染色方法来使细菌更加明显。
简单染色方法中，最常用的是利用染色剂龙格拉菲染液。
首先，取一片玻片，并在上面滴上一滴菌液。
然后用火钳或针头将玻片加热使其快速干燥。
接下来，将玻片持在火焰中，使其变热然后将龙格拉菲染液倒入滴在样本上。
染液滴在样本上后需静止2-3分钟，然后用水冲洗掉多余的染液即可。
准备好样本后，我们可以开始使用显微镜进行观察。
首先，将制备好的样本放在显微镜的台面上。
然后，将管柱与目镜对其，并逐渐调节管柱的高度，直到能够清晰地看到样本为止。
这一步需要耐心和细致的调节。
接下来，我们可以用目镜来初步观察样本的大致情况和形状。
然后，通过控制物镜的旋钮，使用不同倍率的物镜对样本进行进一步的放大观察。
一般来说，我们从低倍物镜开始，然后逐渐转到高倍物镜，以获得更细致的观察。
在观察的过程中，我们需要不断调节焦距，使样本的清晰度达到最佳状态。
这可以通过旋转调焦机构来实现。
在观察细菌时，我们可以看到细菌的形态、大小、排列以及其他特征，这对我们进一步研究和了解细菌是非常重要的。
细菌简单染色和显微镜的使用是微生物学研究中最基础的技术。
普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色
2、干燥
– 在空气中自然干燥或在
火焰快速通过干燥(与 热固定同步进行).
3、热固定
– 用镊子夹住涂片一端,
在火焰上连续通过几次; 以载玻片在手背上试感 觉不烫为宜.
4、染色
– 在固定的标本上加美兰
（结晶紫）染液1-2滴,染 色1min,轻轻滴加水洗; 吸干, 加半滴水, 盖上盖 玻片, 滴上半滴镜油油镜 检。 (到此实际上即为细菌普 通染色)
®请大家做好预习。
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内容提要：
实验1、观察制备好的装片来自； 实验2、每个同学自己动手单染三张 片子进行观察 ；
一、实验目的：
1.学习普通光学显微镜的构造和功能； 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法； 3.学习微生物的简单染色，观察细菌的 形态。 返回
二、实验材料：
显微镜 双层瓶
载玻片 染色剂
香柏油 滴管
超高压透射 电子显微镜
2、光学系统 （P15图1）
在光学系统中 ，物镜的性能最为关键，分为低、高、油镜头。油 镜的放大倍数最大，在使用时比较特殊，需要在载玻片与镜头之 间加滴镜油——香柏油。 返回
四、油镜的原理：
放大倍数可100倍之大，焦距很短，光强度最大。 油=1.52（香柏油） 介质折射率 水=1.33 空气=1 玻璃=1.55 香柏油对光的折射率与玻璃相似，光线直接通过香柏油进 入物镜而不发生折射，不但增加了照明度，而且使油镜的 数值孔径增加，用NA表示，一般在1.2—1.4。低高倍镜头 等干镜NA都低于1.0。若以可见光的平均波长为0.55μm来 计算，数值孔径通常在0.65的高倍镜只能分辨出距离不小 于 0.4 μm的物体而油镜的分辨率却可达到 0.2 μm左右。可 见显微镜的放大效能是由数值孔径决定的。
实验1显微镜的使用和简单染色
实验一显微镜的使用和简单染色一、实验目的：1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术；2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理：细菌小且透明，当把细菌悬浮于水滴内，由于菌体和背景没有显著的明暗差，用光学显微镜难以看清它们的形态结构。
所以，先将细菌进行染色，借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
常用碱性染料进行简单染色，这是因为碱性染料电离后带有正电荷，很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料：1.菌种：枯草杆菌Ba cillu s subtil is、大肠杆菌Es cheri chiacoli、金黄色葡萄球菌Stap hyloccus aureus等培养好的细菌斜面；2.染料和试剂：美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油3.器材：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤：1.涂片：在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水，用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中，混匀并涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥：室温自然干燥3.固定：手执载玻片一端，使涂菌一面向上，通过火焰2~3次。
此操作也称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在玻片上。
4.染色：将涂片置于水平位置，滴加结晶紫染色液（以刚好覆盖涂片薄膜为宜），染色1min左右。
5.水洗：倾去染液，斜置载片，用自来水的细水流由载片上端流下，不得直接冲洗在涂菌处，直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥：自然干燥，或用电吹风吹干，也可用滤纸吸干，注意不要檫掉菌体。
7.镜检：待标本片完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成，而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
（一）显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件（1）镜座镜座是显微镜的基本支架，它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒，它是用来安装光学放大系统部件的基础。
（2）镜筒镜筒上接接目镜，下接转换器，形成接目镜与接物镜（装在转换器下）间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化，不仅放大倍率随之变化，而且成像质量也受到影响。
因此，使用显微镜时，不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm，此数字标在物镜的外壳上。
（3）物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜，一般是三个接物镜（低倍、高倍、油镜）。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器，可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通，与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
（4）载物台载物台中央有一孔，为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器，其作用为固定或移动标本的位置，使得镜检对象恰好位于视野中心。
（5）推动器是移动标本的机械装置，它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的，好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺，构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分，在第一次检查时，可记下纵横标尺的数值，以后按数值移动推动器，就可以找到原来标本的位置。
（6）粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件，老式显微镜粗螺旋向前扭，镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜（如Nikon显微镜）镜检时，右手向前扭载物台上升，让标本接近物镜，反之则下降，标本脱离物镜。
微生物实验报告---普通光学显微镜的使用及简单染色、革兰氏染色
普通光学显微镜的使用及简单染色、革兰氏染色郑小煜201100140069生命科学学院生科3班同组者:赵莉、高瑞、刘梦迪2012年10月10日一、实验目的和要求1、学习显微镜的使用方法。
微生物涂片、染色的基本技术，掌握细菌单染色。
2、学习3、初步认识细菌的显微形态特征。
4、学习并掌握细菌革兰氏染色，了解革兰氏染色在细菌分类鉴定中的重要性。
二、实验原理1、细菌的细胞小而透明，在普通光学显微镜下不易识别，必须对他们进行染色，使经染色后的菌体与背景形成明显的色差，从而更能清楚的观察到其形态和结构。
2、油镜:油镜的放大倍数可达100倍，焦距很短，直径很小，但所需的光照度却很大。
为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃折射率相仿的镜油(通常用香柏油)。
且油镜分辨率很高，可达0.2微米左右。
3、通常采用碱性染料进行简单染色，原因在于微生物细胞在碱性、中性及酸性溶液中通常带负电荷，而染料电离后染色部分带正电荷，很容易与细胞结合使其着色;当细胞处于碱性条件下所带正电荷增加时，可采用碱性染料染色。
4、革兰氏染色革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性(G?)和革兰氏阴性(G?)两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异所决定的。
首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。
然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。
之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。
革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。
而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂染色后又变为复染剂颜色。
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⑴圆规绘ห้องสมุดไป่ตู้视野图，直径为8cm； ⑵标注菌种名称，放大倍数，染色剂等信息。
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三 试验内容
（一）显微镜的使用
1.普通光学显微镜的构造 （1）机械装置 （2）光学系统
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2. 光学显微镜的工作原理
① N ·A = n sinθ ②D=λ/2 N ·A = λ/2 n sin θ
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3.油镜的使用及维护 （1）反向调节 （2）镜头维护：4~6层镜头纸，单向擦拭
（二）简单染色法
1.操作步骤 ①涂片 ②干燥 ③固定
④染色 ⑤水洗 ⑥干燥 ⑦镜检
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无菌操作示意图
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无菌操作示意图
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四 结果与讨论
1.油镜的工作原理？ 2.细菌涂片染色过程中，固定的目的是什么？ 3.绘图表示所观察到的菌体形态。
①用镜头纸单向擦拭，擦除香柏油； ②用镜头纸蘸取二甲苯，擦除残余香柏油； ③用镜头纸单向擦拭，擦除残余二甲苯。
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4.其它类型的显微镜
①暗视野显微镜 ②相差显微镜 ③荧光显微镜 ④电子显微镜
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研究型(相差、荧光)显微镜
相差显微镜的成像原理
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普通微生物学实验
显微镜的使用与简单染色法
制作人：贾 乐 周 波 杜秉海 丁延琴
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一 实验目的
1.熟练掌握显微镜的结构及使用方法 2.熟练掌握细菌涂片的制作及简单染色法 3.初步建立无菌操作的观念
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二 实验材料
1.双目电光源光学显微镜。 2. 香柏油、二甲苯、复红、接种环等。 3. 黄色四联球菌（24小时）。