抗人球蛋白试验ppt课件
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抗人球蛋白试验
博学笃行自强不息
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验是一种常用的免疫学实验，用于检测人体内是否存在抗人球蛋白抗体。
该试验的原理是将人球蛋白与抗人球蛋白抗体或血清样品反应，通过观察是否发生凝集、沉淀或溶解等反应来判断抗体的存在与否。
抗人球蛋白试验广泛应用于临床诊断及实验室研究中，可以用于检测某些自身免疫性疾病的诊断，例如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
同时，该试验还可以用于评估机体对疫苗或药物的免疫应答情况。
需要注意的是，抗人球蛋白试验只能检测抗体的存在与否，无法确定其具体种类或浓度。
因此，在临床应用中，通常需要结合其他检查方法综合分析。
1。
75.4抗人球蛋白试验和自身红细胞凝集试验
新生儿溶血症
孕产时，抗A、抗 B抗体通过脐带进 入宝宝血液
O型血 无A、B抗原，但有
抗A、抗B抗体
AB型血
抗A vs. A 抗B vs. B
宝宝红细胞被 破坏，发生新 生儿溶血
间接Coombs试验
自身红细胞凝集试验检测抗原
Y Y
YY
YY Y
Y + 红细胞
连接已知抗体的抗 红细胞单克隆抗体
抗原
YY
凝集现象
自身红细胞凝集实验操作流程
抗红细胞单抗 反应卡
全血 混匀
室温静置2min
凝集现象
思考题
1. 抗人球蛋白试验可否用于阵发性冷性血红蛋白尿症的诊断？ 2. 如果可以，应该用直接抗人球蛋白试验还是间接抗人球蛋白试验？ 会有怎样的结果出现？
抗人球蛋白试验
1945年由Coombs建立，是检测红细胞不完全抗体的一种经典方法。 临床应用：检测不完全抗体
抗人球蛋白试验
分类： 直接Coombs试验 间接Coombs试验
直接Coombs试验
临床应用
新生儿溶血症 自身免疫性溶血性贫血 医源性溶血性疾病
病例分析
陈女士，O型血，其丈夫，AB型血。二胎孩子由于新生儿溶血 症，刚出生17分钟就被紧急送往新生儿重症监护室，急需全 身换血。 问题：新生儿溶血发生的病因是什么？
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。
直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。
试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。
2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。
4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。
直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。
《抗人球蛋白试验》课件
监测治疗效果和复发
抗人球蛋白试验在监测治疗效 果中的应用
抗人球蛋白试验在预测复发风 险中的应用
抗人球蛋白试验在评估治疗效 果和复发风险中的局限性
抗人球蛋白试验在临床实践中 的应用案例
抗人球蛋白试验的 注意事项
试验前的准备
确保试验环境清洁、无菌 准备试验所需的试剂和仪器 确保试验人员具备相应的专业知识和技能 确保试验对象符合试验要求，并签署知情同意书
抗人球蛋白试验的 发展趋势和展望
抗人球蛋白试验的进展
抗人球蛋白试验的发展历程 抗人球蛋白试验的应用领域 抗人球蛋白试验的技术进步 抗人球蛋白试验的未来发展趋势
抗人球蛋白试验的未来发展方向
应用领域：拓展到更多疾病 诊断和治疗领域
标准化：建立统一的检测方 法和标准，提高检测结果的
可比性
技术进步：提高检测灵敏度 和准确性，降低检测成本
抗人球蛋白试验的优缺点
优点：操作简单，结果准确， 可用于检测多种疾病
缺点：需要专业人员操作， 成本较高，可能存在假阳性
和假阴性结果
抗人球蛋白试验的 应用
诊断自身免疫性疾病
抗人球蛋白试验： 用于检测自身免疫 性疾病的抗体
自身免疫性疾病： 免疫系统攻击自身 组织或器官的疾病
应用：抗人球蛋白 试验可以帮助诊断 多种自身免疫性疾 病
应用：用于诊断和治疗多种 疾病，如系统性红斑狼疮、
类风湿性关节炎等
目的：检测人体内是否存在 抗人球蛋白抗体
重要性：有助于医生制定更 准确的治疗方案，提高患者
的生活质量
抗人球蛋白试验的 方法
直接抗人球蛋白试验
原理：通过检测血清中抗人球蛋白抗体的含量，来判断是否感染了某些疾病 步骤：取患者血清，加入抗人球蛋白抗体，观察反应结果 结果判断：如果出现凝集反应，说明患者感染了某些疾病 注意事项：试验过程中要避免污染，保证结果的准确性
免疫球蛋白检测及应用PPT课件
（三）注意事项 1. 部分单克隆冷球蛋白可在低于 10 ℃时 发生沉淀，故取标本时要保温 2. 部分冷球蛋白在冷的条件下可迅速沉淀， 但有的需要数天，故此应放置一周 3. 正常人血清也可含有冷球蛋白，但属多 克隆冷球蛋白的性质，且含量低 4. 冷纤维蛋白原、 C 反应蛋白 - 蛋白复 合物和肝素沉淀蛋白等也具有冷沉淀特性， 实验时应加以区别
思考题： 1．IgG、IgA、IgM的测定技术 2．体液中IgG、IgA、IgM测定的临床应用 3．IgE、IgD、的测定技术 4．异常免疫球蛋白的检测技术来自THANKYOU
SUCCESS
2019/4/14
（一）定性分析 分离血清作二支分装，一支置 4℃， 一支置37℃，直立，一般于24～72小时， 4℃一管可出现沉淀 （二）定量分析 将沉淀用冷 pH7.0 ， 0.05mol/L 磷酸 盐缓冲液洗涤，然后将沉淀再溶解于 10 倍体积的 pH8.6 的 0.05mol 巴比妥 / 巴 比妥钠缓冲液中，置 37 ℃ 30min，进行 免疫电泳或免疫固定电泳进行型别鉴定
THANK
YOU
SUCCESS
2019/4/14
第四节 异常免疫球蛋白的检测
一、 M 蛋白的检测与鉴定 M 蛋白是一种异常单克隆免疫球蛋白，多 见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋 巴瘤。
（一）血清蛋白区带电泳 IgG 型多位于 α 区与慢 γ 区 IgA 型多位于慢 γ 区与 β 区 IgM 型多位于 β 2 区或 γ 区 IgD 型多位于 β 区或 γ 区 但最终鉴定需用特异性抗体，在轻链病 时 M 蛋白呈淡染区带常在 β 或 γ 区， 需与尿中本周蛋白检测或尿蛋白电泳同时 观察。
第三节 IgE 和 IgD 的测定
一、 IgE 的测定方法 1 、放射免疫法：固相抗 -IgE+IgE+ 125 I 标记抗人 IgE 2 、化学发光免疫分析法：固相抗 IgE+IgE+ 酶标抗 IgE+ 底物 3 、乳胶颗粒免疫浊度法 4 、酶免疫试验
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验（coombs实验）
直接试验：实验原理：本实验是检查不完全抗体试验，包括直接试验和间接试验。
直接试验和间接试验阳性为红细胞表面不完
全抗体存在及血清中游离的不完全抗体存在，判定结果凝
集为阳性。
正常结果：均为阴性。
临床意义：阳性见于自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、阵发性寒冷性血红蛋白尿、药物致免疫性溶贫、输血引起溶贫和新生儿同种免疫性溶贫。
阴性不能排除免疫性溶贫。
试剂：
1、受检者红细胞：取患者全血脱纤维蛋白或抗凝，离
心除上清液，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，
然后制成10%的红细胞悬液。
2、受检血清
3、正常0型混合红细胞：取数名正常0型抗凝血，离
心除血浆，用大量生理盐水洗涤红细胞3—5次，然
后制成10%的红细胞悬液。
4、抗人球蛋白血清
5、抗D血清
6、AB血清
7、0.85%生理盐水
操作方法：
取试管3支
1 2 3
反应物（低）
受检者阳性对照阴性对照
受检者压积红细胞 2 ——
对照同型压积红细胞— 2 2
抗D血清— 4 —
AB血清—— 4
将2 3 管置37℃水浴中1小时，然后3支试管均用大量生理盐水洗涤两次，每管再以生理盐水配成10%的红细胞悬液。
直接试验：
取小试管4支
反应物（滴）
受检者盐水对照阳性对照阴性对照
抗人球蛋白血清 2 — 2 2。
抗人球蛋白试验
② 取试管3支按下表操作。 ③ 混匀各管，置37℃水浴箱中1h后取出，用生
理盐水洗涤3次，最后一次弃支上清液，仅留 1滴红细胞悬液。 ④ 每管加抗人球蛋白血清1滴，混匀，5min后 观察结果。
反应物（滴）
1管（测定 2管（阳性
管）
对照管）
3管（阴性 对照管）
被检血清
2
—
—
5%O型D阳性 红细胞
1
1
② 正常“O”型抗凝血，离心除去上清液，每次用 5ml生理盐水洗涤红细胞3次，然后配成10%红 细胞悬液。
实验操作
③ 阳性对照红细胞悬液的制备：取经洗涤的混合O 型红细胞（离心后）1滴，加抗D血清2滴混匀， 置37℃水浴1h。离心后弃去上清液，再用生理 盐水洗涤3次，配成10%红细胞悬液。
④ 取试管4支，编号按下表进行操作。 ⑤ 混匀后置室温5min后观察。或低速离心
（1000rpm/min,1min）轻轻混和。
反应物（滴） 1管
2管
3管
（测定管） （阴性管） （阳性管）
4管（盐水 对照）
受检者红细 胞悬液
1
—
—
1
正常人红细 胞悬液
—
1
—
—
阳性对照红 细胞悬液
—
—
1
—
抗人球蛋白
血清（工作
1
1
1
—
液）
生理盐水
—
—
—
1
实验操作
2. 间接试验
① 将混合O型Rh阳性红细胞用生理盐水洗涤1次， 配成5%红细胞生理盐水悬液。
结果判断（健康人都呈阴性）
1. 直接试验 如阴性对照不出现凝集，而阳性对 照及被检红细胞出现凝集，即阳性结果，表 示被检红细胞膜上有不完全抗体。
理盐水洗涤3次，最后一次弃支上清液，仅留 1滴红细胞悬液。 ④ 每管加抗人球蛋白血清1滴，混匀，5min后 观察结果。
反应物（滴）
1管（测定 2管（阳性
管）
对照管）
3管（阴性 对照管）
被检血清
2
—
—
5%O型D阳性 红细胞
1
1
② 正常“O”型抗凝血，离心除去上清液，每次用 5ml生理盐水洗涤红细胞3次，然后配成10%红 细胞悬液。
实验操作
③ 阳性对照红细胞悬液的制备：取经洗涤的混合O 型红细胞（离心后）1滴，加抗D血清2滴混匀， 置37℃水浴1h。离心后弃去上清液，再用生理 盐水洗涤3次，配成10%红细胞悬液。
④ 取试管4支，编号按下表进行操作。 ⑤ 混匀后置室温5min后观察。或低速离心
（1000rpm/min,1min）轻轻混和。
反应物（滴） 1管
2管
3管
（测定管） （阴性管） （阳性管）
4管（盐水 对照）
受检者红细 胞悬液
1
—
—
1
正常人红细 胞悬液
—
1
—
—
阳性对照红 细胞悬液
—
—
1
—
抗人球蛋白
血清（工作
1
1
1
—
液）
生理盐水
—
—
—
1
实验操作
2. 间接试验
① 将混合O型Rh阳性红细胞用生理盐水洗涤1次， 配成5%红细胞生理盐水悬液。
结果判断（健康人都呈阴性）
1. 直接试验 如阴性对照不出现凝集，而阳性对 照及被检红细胞出现凝集，即阳性结果，表 示被检红细胞膜上有不完全抗体。
实验直接抗人球蛋白实验优秀课件
致敏红细胞
抗人球蛋白
直接抗人球蛋白试验
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和抗
- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
受检标本 红细胞悬液配制： 1. 抗凝全血 2ml（与抗凝剂混匀）
1000g 离心3min 分离上层血浆 2. 压积红细胞的制备：NS洗涤三次，注意离心速度及时间 （1000g离心1min） （注意操作轻柔，防溶血！） 3. 取压积红细胞配成5％的红细胞悬液（1d压积红细胞＋ 19d NS）
人工制备IgG型致敏红细胞（阳性对照）：
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
实验直接抗人球蛋白实验优秀 课件
第一部分 直接抗人球蛋白试验原理
直接抗人球蛋白试验原理 ：
直接抗人球蛋白试验是检测红细胞在体内是否被 不完全抗体致敏的实验。若红细胞在体内已被不完全 抗体所致敏，加入的抗人球蛋白则可与红细胞表面不 完全抗体结合使红细胞相互连接起来出现凝集现象。
——直接抗人球蛋白试验阳性
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
实验7直接抗人球蛋白实验
注意事项：避免干扰因素， 确保实验准确性
解读方法：结合临床资料， 综合分析结果
直接抗人球蛋白实 验的局限性
直接抗人球蛋白实验的局限性之一是可能出现假阳性结果，即错误地将正常红细胞判定为阳性。 假阳性结果可能是由于抗体与红细胞结合的亲和力不足或抗体浓度过高导致。 抗体与红细胞结合的亲和力不足可能导致实验结果不稳定，容易出现假阳性或假阴性。 抗体浓度过高可能导致非特异性结合增加，从而产生假阳性结果。
直接抗人球蛋白实 验的步骤
采集静脉血液样本 避免溶血和污染
分离血清或血浆 记录样本信息
准备试剂和器材： 确保所需的试剂 和器材已经准备 好，包括抗人球 蛋白抗体、离心
机、试管等。
样本处理：将 待检测的样本 进行离心处理， 分离出血浆和
红细胞。
抗体孵育：将 抗人球蛋白抗 体与离心后的 红细胞混合， 孵育一定时间。
红细胞上的抗原与特异性抗体结合后，可引起红细胞凝集，出现阳性反应。
未结合抗体的红细胞不会发生凝集，呈现阴性反应。
通过观察凝集程度，可以判断待测血清中抗体的含量。
直接抗人球蛋白实验的原理是利用抗原抗体反应的特异性，将抗人球蛋白抗体与待测血清中的红细胞结合，观察 是否发生凝集反应。 抗人球蛋白抗体与红细胞上相应的抗原结合后，可引起红细胞凝集，从而判断待测血清中是否存在相应的抗体。
正确使用试剂：使用经 国家药品监督管理局批 准的合格试剂，确保实 验结果的准确性。
标准化操作：严格按 照试剂盒说明书进行 操作，避免操作过程 中的人为误差。
避免交叉污染：在实验 过程中，要确保不同样 本之间的交叉污染，以 免影响实验结果。
阳性结果：可能存在自身 抗体
阴性结果：不能完全排除 自身抗体存在
直接抗人球蛋白实 验的局限性之一是 可能出现假阴性结 果。
抗人球蛋白试验 PPT
抗人球蛋白试验
抗人球蛋白试验
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs）
等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库 姆斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作 为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异
抗体，使红细胞凝集。
抗人球蛋白试验
4.冷凝集素综合征： 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。由于本病红细 胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗 IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的 抗血清做试验则直接反应阳性。
抗人球蛋白试验
14
5.红细胞血型不合引起的输血反应
6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的 血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏 以前，直接反应阳性
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入 相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再 加入待检血浆或血清25ul；
2.将检测卡37℃孵育≧10 min，取出，置离心 机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；（方法同上）
抗人球蛋白试验
10
同种异型抗体
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
抗人球蛋白试验
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物 。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗 原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全 抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼 可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红 细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
抗人球蛋白试验
1
1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs）
等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库 姆斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作 为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异
抗体，使红细胞凝集。
抗人球蛋白试验
4.冷凝集素综合征： 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。由于本病红细 胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗 IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的 抗血清做试验则直接反应阳性。
抗人球蛋白试验
14
5.红细胞血型不合引起的输血反应
6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的 血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏 以前，直接反应阳性
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入 相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再 加入待检血浆或血清25ul；
2.将检测卡37℃孵育≧10 min，取出，置离心 机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；（方法同上）
抗人球蛋白试验
10
同种异型抗体
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
抗人球蛋白试验
15
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物 。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗 原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全 抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼 可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红 细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
实验7-直接抗人球蛋白实验PPT课件
IgM或抗C3单特异性抗球蛋白试剂进行试验。 ❖ 红细胞上若抗体吸附较少，自身免疫性溶血性贫血直接抗球蛋白试验可
呈阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
14
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
15
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
3
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和
抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
9
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
10
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
12
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
呈阴性反应。 ❖ 全凝集、冷凝集血标本或脐血标本，试验前应充分洗涤，否则产生假阳
性。
14
实验重点掌握： ❖ 直接抗人球蛋白试验的原理及临床意义
15
1、采集3人份O型RhD阳性抗凝全血，1000g离心3min， 分离血浆；红细胞经生理盐水（NS）3次洗涤后，取3人份 的压积红细胞各5滴混匀，备用；
2、用一次性吸管取压积红细胞3滴于试管中，加入2倍体积 的单克隆IgG抗D血清，混匀，置于37℃孵育45min；
3、孵育结束取出试管，1000g离心2min，弃上清，用2倍 体积的NS洗涤3次（1000g离心1min），最后加入NS配制 成约5％的致敏红细胞悬液（1d压积红细胞＋19d NS），备 用
3
抗球蛋白试剂通常有三种： ❖ 多特异性抗球蛋白试剂，简称多抗，多抗包括了抗-IgG和
抗- C3两种成分，在直抗试验中常常作为初筛试剂使用。 ❖ 单特异性抗-IgG试剂，简称抗-IgG ❖ 单特异性抗-C3试剂，简称抗-C3 ❖ 在直抗试验中一旦出现阳性结果，通常需要抗-IgG和抗-C3
进一步分析。
9
未致敏红细胞（阴性对照）： 取3滴3人份混合压积红细胞，加入57滴NS混匀，备用。
（无须单克隆IgG抗D血清致敏）
10
受检者标本检测
❖ 标记3支试管，分别为待检管、阴性对照和阳性对 照。按下表加入各反应物：
反应物 5％待检标本RBC 5％阴性对照RBC 5％阳性对照RBC 多特异性抗球蛋白试剂
12
结果判定
❖如阳性对照凝集，阴性对照不凝集，受检RBC凝集 者直接抗球蛋白试验为阳性，不凝集者为阴性。
抗人球实验教学课件
•
11、人总是珍惜为得到。21.8.2015:40: 4315:4 0Aug-2 120-Aug -21
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12、人乱于心，不宽余请。15:40:4315 :40:431 5:40Fri day, August 20, 2021
•
13、生气是拿别人做错的事来惩罚自 己。21. 8.2021. 8.2015: 40:4315 :40:43 August 20, 2021
4000 3000 2000 1000
0
2021/7/9
IgG
IgA
IgM
正常人 病人
10
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9、 人的价值，在招收诱惑的一瞬间被决定 。21.8.2 021.8.2 0Friday , August 20, 2021
•
10、低头要有勇气，抬头要有低气。1 5:40:43 15:40:4 315:40 8/20/20 21 3:40:43 PM
Coombs实验
2021/7/9
4
直接抗人球蛋白实验---DAT
• 直接抗人球蛋白实验---Direct antigloubin test DAT • 实验步骤
3%红细胞一份+抗人球试剂一份
阳性
阴性
出报告
3%红细胞一份 +
抗IgG一份
3%红细胞一份 +
抗C3d一份
2021/7/9
出报告
如果有明显AIHA， 但DAT阴性，反 映了什么问题？
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14、抱最大的希望，作最大的努力。2 021年8 月20日 星期五 下午3 时40分4 3秒15: 40:4321 .8.20
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15、一个人炫耀什么，说明他内心缺 少什么 。。202 1年8月 下午3 时40分2 1.8.201 5:40August 20, 2021
抗人球蛋白试验(直接法)
抗人球蛋白试验（直接法）简介抗人球蛋白试验（直接法）是一种常见的免疫学实验方法，用于检测机体内特定抗体（抗人球蛋白抗体）的水平和活性。
通过这一试验可以评估机体对人球蛋白的免疫反应情况，是许多研究和临床诊断工作中重要的实验手段之一。
实验原理抗人球蛋白试验（直接法）基于抗原-抗体相互作用的原理。
人球蛋白是一种外源蛋白，当人体受到人球蛋白的免疫刺激后，机体会产生抗人球蛋白抗体。
通过将待测血清与标准人球蛋白溶液混合反应，通过测定溶液中抗体与抗原结合的程度，进而评价该血清中抗人球蛋白抗体的水平。
实验步骤1.准备试剂：标准人球蛋白溶液、待测血清、辅助试剂等。
2.取等量的标准人球蛋白溶液和待测血清，混合均匀。
3.将混合溶液孵育一段时间，促使抗体与抗原结合。
4.添加特定试剂，使未结合的物质沉淀或产生其他特定反应。
5.通过光密度仪或其他检测仪器测定光密度值，计算出抗体水平。
实验结果分析实验结果以光密度值或其他测量指标呈现，一般抗体水平较高的样本对应较高的光密度值。
通过比较待测样本的结果与标准曲线或对照组的结果，可以判断该样本中抗人球蛋白抗体的水平及活性。
应用领域抗人球蛋白试验（直接法）在免疫学研究、临床诊断以及药物疗效评价等领域有着广泛的应用。
例如，在自身免疫性疾病的诊断中，该试验可帮助医生评估患者的免疫系统功能状态；在药物疗效评价方面，可用于监测药物对患者免疫功能的影响。
结论抗人球蛋白试验（直接法）是一种重要的实验技术，可以用于评估机体对人球蛋白的免疫反应水平。
通过本实验，我们可以深入了解机体免疫系统的功能状态，为研究和临床诊断提供有力的支持。
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3.药物诱发的免疫性溶血性贫血 ①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。 ②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性 ③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性
4.冷凝集素综合征： 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。由于本病红细 胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗 IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的 抗血清做试验则直接反应阳性。
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直接抗人球蛋白试验
直接抗人球蛋白试验原理： 患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗
体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物 。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗 原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全 抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼 可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红 细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
2.将检测卡37℃孵育≧10 min，取出，置离心 机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；（方法同上）
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同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
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4.结果解释 阳性：待检血浆或血清中含有不完全抗体
IgG或完全抗体IgM ； 阴性：待检血浆或血清中不含不完全抗体
.
8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
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我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
IgG或完全抗体IgM ；
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抗人球蛋白试验意义
1.本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重 要依据，特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接 反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳 性。（血肾科有一病例）
2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血 病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血 输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合 引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反 应为阳性.
抗人球蛋白
直接Coombs试验
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4.结果解释 阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体
或补体； 阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体
。
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间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不 完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结 合，出现肉眼可见凝集。
这种通过体外将红细胞致敏后，再检测红细胞有 无不完全抗体或抗原的试验称为间接抗人球蛋白 试验。
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间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验操作：（65%凝胶，35% 抗人球蛋白试剂）
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入 相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再 加入待检血浆或血清25ul；
抗人球蛋白试验
马强虎
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1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上 有无不完全抗体。 间接Coombs试验：是检查血清中游离的 不完全抗体。
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谢谢
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5.红细胞血型不合引起的输血反应
6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的 血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏 以前，直接反应阳性
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
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直接抗人球蛋白试验
直接抗人球蛋白试验操作：（65%凝胶， 35%抗人球蛋白试剂）
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中加入待检 1%RBC生理盐水悬液50ul；
2.将检测卡于离心机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；
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结果判读
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致敏RBC
可见凝集
自身抗体
3.药物诱发的免疫性溶血性贫血 ①α-甲基多巴型：直接及间接反应均阳性。 ②青霉素型：直接反应阳性，间接反应阴性 ③福阿亭型：（奎宁等药物）抗体通常为IgM，偶有IgG 型者，直接反应为阳性，间接反应阴性
4.冷凝集素综合征： 直接反应阳性，间接反应阴性（ 37℃）。由于本病红细 胞膜附着的是补体C4和C3而不是IgG或IgM，如果用抗 IgG或抗IgM抗血清做试验时则结果阴性，如以抗补体的 抗血清做试验则直接反应阳性。
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直接抗人球蛋白试验
直接抗人球蛋白试验原理： 患者体内若有与红细胞抗原不相合的不完全抗
体存在，可与红细胞结合形成抗原抗体复合物 。 但因不完全抗体分子量小，不能有效地连接抗 原抗体复合物，仅使红细胞处于致敏状态。 加入抗球蛋白血清，与红细胞上吸咐的不完全 抗体结合，在致敏红细胞之间搭桥，出现肉眼 可见的凝集。 这种直接检测体内被抗体或（和）补体致敏红 细胞的试验称之为直接抗球蛋白试验。
2.将检测卡37℃孵育≧10 min，取出，置离心 机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；（方法同上）
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同种异型抗体
抗人免疫球蛋白
间接Coombs试验
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4.结果解释 阳性：待检血浆或血清中含有不完全抗体
IgG或完全抗体IgM ； 阴性：待检血浆或血清中不含不完全抗体
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8.在传染性单核细胞增多症、SLE、恶性淋巴 瘤、慢性淋巴细胞白血病、癌肿、铅中毒 、结节性动脉周围炎、EVan氏综合征等， 病人直接反应亦可阳性
9.阵发性寒冷性血红蛋白尿症患者中，急性 发作后用抗补体血清做试验直接反应常为 阳性。
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我们科室Coombs试验已开展，报告方法： 1、接收标本； 2、完成试验； 3、免疫组中免疫手工中报告结果。
IgG或完全抗体IgM ；
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抗人球蛋白试验意义
1.本试验是诊断自身免疫性溶血性贫血(AIHA)的重 要依据，特别是IgG型引起的溶血性贫血，直接 反应常呈强阳性，间接反应大多阴性，但亦可阳 性。（血肾科有一病例）
2.新生儿同种免疫溶血病：因Rh血型不合所致溶血 病，直接及间接反应均强阳性，持续数周、换血 输血后数天内可变为阴性，由于“ABO”血型不合 引起 的溶血病，直接常为阴性或弱阳性，间接反 应为阳性.
抗人球蛋白
直接Coombs试验
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4.结果解释 阳性：待检标本RBC已致敏IgG不完全抗体
或补体； 阴性：待检标本RBC未致敏不完全IgG抗体
。
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间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验原理：
用已知抗原的红细胞检测受检者血清中相应的不 完全抗体；或用已知的不完全抗体检测红细胞上 相应的抗原。
在37℃条件下，若被检血清或红细胞有对应的不 完全抗体或抗原，则抗原抗体作用使红细胞致敏
再加抗人球蛋白试剂，与红细胞上不完全抗体结 合，出现肉眼可见凝集。
这种通过体外将红细胞致敏后，再检测红细胞有 无不完全抗体或抗原的试验称为间接抗人球蛋白 试验。
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间接抗人球蛋白试验
间接抗人球蛋白试验操作：（65%凝胶，35% 抗人球蛋白试剂）
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中依标记分别加入 相应的0.5%筛选细胞LIM悬液100ul，各管再 加入待检血浆或血清25ul；
抗人球蛋白试验
马强虎
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1945年，英国免疫学家库姆斯（Coombs） 等人发明了能检测红细胞表面抗体的一种新试验 ，即抗人球蛋白试验。别名： Coombs‘试验(库姆 斯试验) 。 Coombs试验是利用抗球蛋白抗体作为 第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗
体，测不完全抗体的经典方法， 分为直接试验(直接反应)和间接试验(间 接反应)。 直接Coombs试验：是检查被检红细胞上 有无不完全抗体。 间接Coombs试验：是检查血清中游离的 不完全抗体。
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谢谢
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5.红细胞血型不合引起的输血反应
6.ABO或Rh血型不合输血，供者的红细胞被受者的 血型抗体致敏，在供者被致敏的红细胞完全破坏 以前，直接反应阳性
7.Rh阴性者如过去不曾接受过Rh阳性者的血或曾没 有妊娠Rh阳性胎儿者，间接反应阳性，第一次输 血后（Rh阳性的血），数天之内间接反应也会变 为阳性
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直接抗人球蛋白试验
直接抗人球蛋白试验操作：（65%凝胶， 35%抗人球蛋白试剂）
1.撕开检测卡的封膜于反应腔中加入待检 1%RBC生理盐水悬液50ul；
2.将检测卡于离心机1800r/min 1min, 2500r/min 1min离心；
3.取出，结果判读；
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结果判读
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致敏RBC
可见凝集
自身抗体