溶血葡萄球菌对8种抗菌药敏感性及多重耐药分析

实 用 医 学 杂 志 ２００７ 年 第 ２３ 卷 第 ７ 期
抗菌药 苯唑西林 红霉素 庆大霉素 环丙沙星 克林霉素 替考拉宁 万古霉素 利奈唑胺
ＭＩＣ５０（ μｇ ／ｍＬ） ≥２５６ １２８ ６４ １６ ０．１２５ ２ １ ２
表 １ ８ 种 抗 菌 药 对 ６３ 株 溶 血 葡 萄 球 菌 的 体 外 抗 菌 活 性
Ｄ 试验阳性， 即诱导型 ＭＬＳＢ 耐药； 耐万古霉素葡萄球 菌筛选试验以接种处出现 ＞ １ 个菌落生长判定阳性。 １．５ 标 准 菌 株 金 黄 色 葡 萄 球 菌 ＡＴＣＣ ２９２１３ 作 为 琼 脂 稀 释 法 、Ｅ－ｔｅｓｔ 法 和 耐 万 古 霉 素 葡 萄 球 菌 筛 选 试 验质控菌， 金黄色葡萄球菌 ＡＴＣＣ ２５９２３ 作为纸片扩 散法试验质控菌。 １．６ 资料统计分析 用 Ｗｈｏｎｅｔ ５．３ 软件进行统 计 学 分析。 ２ 结果 ２．１ 受试菌的药物敏感性 使用琼脂稀释法检测出 ６２ 株 ＭＲＳＨ， 占 ９８．４％， 仅 １ 株 甲 氧 西 林 敏 感 溶 血 葡 萄球菌（ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｓ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ） 。８ 种抗 菌 药 对 ６３ 株 溶 血 葡 萄 球 菌 的 体 外 抗 菌 活 性 见 表 １， 抗 菌 活 性 最 高 的 是 利 奈 唑 胺 ， 敏 感 率 １００％ ， ＭＩＣ５０ ／ ＭＩＣ９０ 为 ２、２ μｇ ／ｍＬ； 其次为万古霉素和替考拉宁， 敏 感 率 均 为 ９８．４％ ， ＭＩＣ５０ ／ＭＩＣ９０ 分 别 为 １、２ μｇ ／ｍＬ 和 ２、４ μｇ ／ｍＬ； ６３ 株溶血葡萄球菌对红霉素、庆大霉素 和环丙沙星高度耐药（ ６６．７％～７７．８％） 。
并 非 ＶＩＳ 或 ＶＲＳ； 替 考 拉 宁 的 ＭＩＣ 主 要 分 布 ２ 和 ４ μｇ ／ｍＬ， 发现 ３ 株对替考拉宁敏感性减低（ ＭＩＣ 均为 ８ μｇ ／ｍＬ） ， 另 １ 株 表 现 中 介 （ ＭＩＣ＝１６ μｇ ／ｍＬ） ； 利 奈 唑 胺的 ＭＩＣ 大多为 １ 和 ２ μｇ ／ｍＬ。 ２．３ 溶血葡萄球菌对大环内酯类的耐药特点 稀释
唑西林和万古霉素药敏平板接种后 ３５℃孵育 ２４ ｈ， 其 他药敏平板孵育 １６～２０ ｈ。采用 Ｄ 试验［２］ 检测大环内 酯 类 诱 导 型 克 林 霉 素 耐 药 （ ＭＬＳＢ 耐 药 ） ， 按 Ｋｉｒｂｙ－ Ｂａｕｅｒ 纸片琼脂扩散法测定红霉素和克林霉素的抑菌 环直径 ， 纸片中心间距 ２１ ｍｍ。 采 用 Ｅ－ｔｅｓｔ 法 检 测 对 万古霉素不敏感 溶 血 葡 萄 球 菌 ＭＩＣ， 药 敏 平 板 接 种 后 ３５℃孵 育 ２４ ｈ。 采 用 含 ６ μｇ ／ｍＬ 万 古 霉 素 ＢＨＩＡ 检 测 万 古 霉 素 中 介 葡 萄 球 菌 ［ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ， ＶＩＳ， ４ ＜ ＭＩＣ ≤１６ !ｇ ／ｍＬ］ 和耐万古霉 素葡萄球菌 ［ ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ， ＶＲＳ， ＭＩＣ≥３２ !ｇ ／ｍＬ］ ， 操 作 按 临 床 实 验 室 标 准 委 员 会 （ ＣＬＳＩ） ２００６ 年 Ｍ７－Ｔａｂｌｅ ２Ｄ 规定进行。 １．４ 结 果 阅 读 及 判 断 标 准 按 ＣＬＳＩ ２００６ 年 标 准 判 断结果， 新更改万古霉素对葡萄球菌稀释法的药敏折 点为 ＭＩＣ≤２ μｇ ／ｍＬ 判定敏感； 以克林霉素抑菌环靠 近红霉素纸片一侧因拮抗作用出现缺损的边界判定
●２
●３
图 １ 万 古 霉 素 对 ６３ 株 溶 血 葡 萄 球 菌 ＭＩＣ 分 布 溶 血 葡 萄 球 菌 ＭＩＣ 分 布
图 ２ 替 考 拉 宁 对 ６３ 株 溶 血 葡 萄 球 菌 ＭＩＣ 分 布
图 ３ 利 奈 唑 胺 对 ６３ 株
法 不 能 检 测 诱 导 型 ＭＬＳＢ 耐 药 ， Ｄ 试 验 检 测 结 果 如 表 ２ 所示， ６ 株（ ９．５％） 表现结构型 ＭＬＳＢ 耐药， ４３ 株耐红 霉素但对克林霉素敏感， 其中 １５ 株（ ３４．９％） Ｄ 试验阳 性 （ 诱 导 型 ＭＬＳＢ 耐 药 ） ， 占 全 部 受 试 菌 ２３．８％ ， 另 ２８ 株 Ｄ 试验阴性。
可能耐药机制 结 构 型 ＭＬＳＢ 林可霉素核苷转移酶
－
诱 导 型 ＭＬＳＢ 主动外排
注 ： ＥＲＹ 红 霉 素 ， ＣＬＩ 克 林 霉 素 ； Ｒ 耐 药 ； Ｓ 敏 感
２．４ ＭＲＳＨ 多重耐药分析 以红霉素、庆大霉素和环 丙沙星对 ６２ 株 ＭＲＳＨ 进行多重耐药分析， 其中 ６ 株 对 ３ 种抗菌药全部敏感， ９ 株对其中 １ 种耐药， ７ 株对 其 中 ２ 种 耐 药 ， ４０ 株 对 ３ 种 全 部 耐 药 ， 多 重 耐 药 ＭＲＳＨ 占 ６４．５％。 ３ 讨论
临床分离溶血葡萄球菌除耐苯唑西林外， 常对大环 内酯类、庆大霉素和氟喹诺酮类多重耐药［３－５］， 糖肽类是
治疗该菌最常用的抗菌药， 广州已报道了异质性耐万古 霉素的溶血葡萄球菌（ ｈｅｔｅｒｏ－ＶＲＳＨ） ［６－７］和其他 ＣＮＳ。
本研究发现， 我院新生儿住院患者分离的溶血葡 萄球菌中 ＭＲＳＨ 高达 ９８．４％， 药敏试验结果显示， 万 古霉素和替考拉宁尽管仍维持较高抗菌活性， 但均发 现 了 不 敏 感 株 ， 是 否 存 在 ｈｅｔｅｒｏ－ＶＲＳＨ 需 进 一 步 研 究。琼脂稀释法检测克林霉素的敏感性为 ８７．３％， 但 Ｄ 试验发现 １５ 株诱导型 ＭＬＳＢ 耐药， 已有大量报道关 于使用克林霉素或林可霉素治疗诱导型 ＭＬＳＢ 葡萄球 菌严重感染失败的病例［２］， 临床上不应使用克林霉素 治疗诱导型 ＭＬＳＢ 耐药菌的感染， 临床实验室应常规 进行 Ｄ 试验检测葡萄球菌诱导型 ＭＬＳＢ 耐药。另外我 院新生儿分离 ＭＲＳＨ 对红霉素、庆大霉素和环丙沙星 高 度 耐 药 ， 多 重 耐 药 ＭＲＳＨ 高 达 ６４．５％， 应 引 起 临 床 重视。 ４ 参考文献
关键词 葡萄球菌， 溶血性 微生物敏感性试验
溶血葡萄球菌是临床上仅次于表皮葡萄球菌的 较 常 见 的 凝 固 酶 阴 性 葡 萄 球 菌 （ ｃｏａｇｕｌａｓｅ－ｎｅｇａｔｉｖｅ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ， ＣＮＳ） 之一， 是医院内感染重要的条件致 病菌［１］， 甲氧西林耐药溶血葡萄球菌（ ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ， ＭＲＳＨ） 常 对 各 类 抗 菌 药 高 度 耐 药 并 呈多重耐药， 给临床抗感染治疗造成极大困难。本研 究旨在分析我院新生儿分离溶血葡萄球菌对常用抗 菌药的耐药特点， 并了解利奈唑胺对溶血葡萄球菌的 抗菌活性， 为临床防治该菌感染提供基础。 １ 材料与方法 １．１ 菌株来源 ２００２ 年 １ 月至 ２００５ 年 １２ 月， 本院 新生儿科分离的 ６３ 株溶血葡萄球菌 （ 排除同一病人 同一部位重复分离的菌株） ， 其中来源于血液 ３９ 株、 气 管 分 泌 物 １７ 株 、咽 拭 子 ３ 株 、伤 口 分 泌 物 ２ 株 、脑 脊液和深静脉导管各 １ 株。菌种鉴定 采 用 ＶＩＴＥＫ 系 统（ ＢｉｏＭｅｒｉｅｕｘ， 法国） 及常规生化试验。 １．２ 抗菌药、药敏纸片、Ｅ－ｔｅｓｔ 条及培养基 苯唑西 林［ 中 诺 药 业 （ 石 家 庄 ） 有 限 公 司 ］ 、红 霉 素 （ 大 连 美 罗 大药厂） 、克林霉素（ 山东方明药业股份有限公司） 、庆 大 霉 素 （ 天 津 药 业 焦 作 有 限 公 司 ） 、环 丙 沙 星 （ 四 川 科 伦 药 业 股 份 有 限 公 司 ） 、万 古 霉 素 、替 考 拉 宁 ， 浙 江 医 药 股 份 有 限 公 司 ） 、利 奈 唑 胺 （ ｐｈａｒｍａｃｉａ） 。 万 古 霉 素 Ｅ－ｔｅｓｔ 条 （ ＡＢ ＢＩＯＤＩＳＫ， 瑞典） 浓度范 围 ０．０１６～２５６ μｇ ／ｍＬ。 药 敏 纸 片 头 孢 西 丁 （ ３０ μｇ ／ 片 ） 、红 霉 素 （ １５ μｇ ／ 片 ） 和 克 林 霉 素 （ ２ μｇ ／ 片 ） 及 Ｍｕｅｌｌｅｒ－Ｈｉｎｔｏｎ Ａｇａｒ （ ＭＨＡ） 培 养 基 均 为 英 国 ＯＸＯＩＤ 公 司 产 品 ； 脑 心 浸 液 琼脂（ ＢＨＩＡ） 为 ＢＤ 公司产品。 １．３ 药敏试验方法 使用琼脂稀释法检测 ８ 种抗菌 药对 ６３ 株溶血 葡 萄 球 菌 的 最 低 抑 菌 浓 度 （ ＭＩＣ） ， 检 测 苯 唑 西 林 抗 菌 活 性 使 用 含 ２％ＮａＣｌ 的 ＭＨＡ， 含 苯
ＭＩＣ９０（ μｇ ／ｍＬ） ≥２５６ ２５６ １２８ ６４ ８ ４ ２ ２
均 值 （ μｇ ／ｍＬ） ５２．５０１ ３４．１８４ １６．６６６ ５．１５２ ０．２９０ ２．３５９ １．３３１ １．５３６
ＭＩＣ 范围 （ μｇ ／ｍＬ） ０．１２５－ ≥２５６ ０．２５－ ≥２５６ ≤０．０６－ ≥１２８ ０．１２５－ ≥６４ ０．０６－ ≥１２８ １－ １６ ０．５－ ４ ０．５－ ２
表 ２ ６３ 株 溶 血 葡 萄 球 菌 对 大 环 内 酯 类 耐 药 表 型 分 析
药敏表型 ＥＲＹＲ ＋ ＣＬＩＲ ＥＲＹＳ ＋ ＣＬＩＲ ＥＲＹＳ ＋ ＣＬＩＳ ＥＲＹＲ ＋ ＣＬＩＳ
Ｄ 试验阳性 Ｄ 试验阴性
株数（ ％） ６（ ９．５） ２（ ３．２） １２（ １９．０）
１５（ ２３．８） ２８（ ４４．４）
基 金 项 目 ： 广 东 省 深 圳 市 科 技 局 资 助 项 目 （ 编 号 ： ２００６０２０８５） 作 者 单 位 ： ５１８０２０ 广 东 省 深 圳 市 人 民 医 院 儿 科 （ 潘 小 梅 ） ， 检 验 科（ 吴伟元， 吴劲松， 卢月梅， 李文青） ， 产科（ 刘碧云） 通讯作者 ： 吴伟元 Ｅ－ｍａｉｌ： ｗｅｉｙｗｕ＠１６３．ｃｏｍ
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实 用 医 学 杂 志 ２００７ 年 第 ２３ 卷 第 ７ 期
溶血葡萄球菌对 ８ 种抗菌药敏感性及多重耐药分析
潘小梅 吴伟元 刘碧云 吴劲松 卢月梅 李文青
摘 要 目的： 分析我院新生儿分离溶血葡萄球菌对 ８ 种抗菌药的敏感性及多重耐药特点， 指导临床用药。 方 法 ： 使 用 琼 脂 稀 释 法 测 定 ８ 种 抗 菌 药 对 ６３ 株 溶 血 葡 萄 球 菌 的 最 低 抑 菌 浓 度 （ ＭＩＣ） ， 采 用 Ｄ 试 验 检 测 大 环 内 酯 类 诱 导 型 克 林 霉 素 耐 药 （ ＭＬＳＢ 耐 药 ） ， 按 临 床 实 验 室 标 准 委 员 会 （ ＣＬＳＩ） ２００６ 年 标 准 判 读 结 果 。结 果 ： 利 奈 唑 胺 抗 菌 活 性 最 高 ， 敏 感 率 为 １００％， ＭＩＣ５０ ／ＭＩＣ９０ 为 ２、２ μｇ ／ｍＬ； 其 次 为 万 古 霉 素 和 替 考 拉 宁 ， 敏 感 率 均 为 ９８．４％， ＭＩＣ５０ ／ＭＩＣ９０ 分 别 为 １、２ μｇ ／ｍＬ 和 ２、４ μｇ ／ｍＬ； 红 霉 素 、庆 大 霉 素 和 环 丙 沙 星 抗 菌 活 性 较 差 ， 耐 药 率 为 ６６．７％～７７．８％， 大 环 内 酯 类 诱 导 型 ＭＬＳＢ 耐 药 占 ２３．８％， 多 重 耐 药 的 耐 甲 氧 西 林 溶 血 葡 萄 球 菌 占 ６４．５％。 结 论 ： 我 院 新 生 儿 分 离 溶 血 葡 萄 球 菌多重耐药率高， 应加强细菌耐药的监控。
耐药（ ％）０ ０
１０７１
中介（ ％） － ０ ４．８ ４．８ ０ １．６ ０ ０
敏感（ ％） １．６
２２．２ ２０．６ ２８．６ ８７．３ ９８．４ ９８．４ １００
２．２ 万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺的 ＭＩＣ 分布 图 １～３ 显示， 万古霉素对 ６２ 株溶血葡萄球菌的 ＭＩＣ 集中在 １ 和 ２ μｇ ／ｍＬ， 另发现 １ 株对万古霉素敏感性 减 低 （ ＭＩＣ＝４ μｇ ／ ｍＬ） ， Ｅ － ｔｅｓｔ 法 检 测 该 菌 株 ＭＩＣ＝ ３ μｇ ／ｍＬ， 万 古 霉 素 耐 药 筛 选 试 验 阴 性 ， 证 实 该 菌 株