果蝇综合大实验

（4）麻醉后的果蝇放在白瓷板上，用毛笔轻轻拨动进行观察。必要时可进行第二次麻醉。观察完毕后倒入煤油或酒精瓶中(死蝇盛留器)。

（四）果蝇的雌雄鉴别

（1）果蝇有雌雄之分，幼虫期区别较难，成虫区别容易。

（2）雌性体型较大，腹部环纹7节，末端尖，颜色浅，跗节前端无黑色鬃毛流苏。

（3）雄性体型较小，腹部环纹5节，末端钝而圆，颜色深。第一对脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏，称性梳。

（五）果蝇的培养

A、培养基的制备

果蝇在水果摊或果园里常可见到，但它并不是以水果为生，而是食生长在水果上的酵母菌，因此实验室内凡能发酵的基质，均可作为果蝇饲料。

目前本实验室所用的果蝇培养基配方如下：

A：葡萄糖10克，琼脂1.5克，加水65毫升，煮沸溶解。

B：玉米粉12克，加水50毫升，混合均匀。

将B 慢慢倒入A中，并不停搅动混合，加热成糊状后，再加一勺酵母膏，混合均匀，稍冷却后加入1毫升丙酸，调匀后即可分装到培养瓶中。

B、培养容器

培养果蝇的饲养瓶，常用的有牛奶瓶，大中型指管，用纱布包裹的棉花球作瓶塞（有条件的地方可改用泡沫塑料作瓶塞）。

饲养瓶先消毒，然后倒入饲料（2厘米厚），待冷却后，用酒精棉擦瓶壁，然后滴入酵母菌液数滴，再插入消毒过的吸水纸，作为幼虫化蛹时的干燥场所。

C、原种培养

在作为新的留种培养时，事先检查一下果蝇有没有混杂，以防原种丢失。亲本的数目一般每瓶5—10对，移入新培养瓶时，须将瓶横卧，然后将果蝇挑入，待果蝇清醒过来后，再把培养瓶竖起，以防果蝇粘在培养基上。

原种每2－4周换一次培养基（按温度而定），每一原种培养至少保留两套。培养瓶上标签要写明名称，培养日期等，作为原种培养，可控制到10—15℃，培养时避免日光直射。

第二部分果蝇设计实验

一、实验目的

1、理解基因分离定律、自由组合定律的原理，正确认识伴性遗传的正反交的差别。

2、在有致死基因的条件下验证基因分离定律、自由组合定律以及伴性遗传。

3、掌握果蝇两对基因杂交试验，学习实验数据收集和统计处理方法。

二、实验原理

卷翅基因（Cy）控制果蝇的翅型为卷翅，位于常染色体上，隐性纯和致死。隐性基因（l）和卷翅基因（Cy）位于一对同源染色体，也是隐性纯和致死。两个基因中间发生倒位，构建了平衡致死系，所以卷翅一直是永久杂合子。

实验采用用卷翅橙眼和直翅白眼为亲本验证基因分离、自由组合和伴性遗传定律，在实验过程中根据杂交后代的性状分离比来对各个定律进行验证。

1、验证基因分离定律：

在验证基因分离定律时，选择正交组的翅型的性状作为研究对象，正交亲本交配后,子一代产生性状分离,出现两种表型,呈1:1之比.如图：

P: 卷翅CyL/cl X cL/c/L 直翅

↓

F1: 卷翅Cy L/cL cl/cL直翅

1 : 1

2、验证基因自由组合定律:

由于一对基因的分离与另一对基因的分离是独立的,所以一对基因所决定的性状在杂种第二代产生一定的性状分离比。

在验证此定律时,要选择位于非同源染色体上的两对基因。所以,选择位于常染色体上的控制翅型的基因和位于性染色体上的控制眼色的基因作为研究对象。还是以正交组为例，1号瓶为F1的直翅杂交，2号瓶为F1卷翅杂交。

P: X B X B CyL/cl x cL/cLX w Y

橙卷雌↓白正雄

F1：X B X w CyL/cL X B YCyL/cL X B X W cL/cl X B YcL/cl

橙卷雌橙卷雄橙正雌橙正雄

1号：正常翅杂交

F1：X B XｗcL/cl x X B YcL/cl

橙正雌橙正雄

F2：橙正：白正=3：1

2号：卷翅杂交

F1：X B XｗCyL/cL x X B YCyL/cL

橙卷雌橙卷雄

F2：橙卷：橙直：白卷：白直=6:3:2:1

3、验证伴性遗传：

伴性遗传定律：位于性染色体上的基因在遗传给子代时常伴随着性别的差异。

由于果蝇控制眼色的基因位于X染色体上,所以,以此果蝇眼色作为研究对象观察性状。

正交P: X B X B x X W Y

橙雌↓ 白雄

F1：X B X W X B Y

橙雌橙雄

反交P: X W X W x X B Y

白雌↓橙雄

F1：X B X W X W Y

橙雌白雄

三、实验材料：

1、橙眼卷翅果蝇、白眼直翅果蝇

2、器具：解剖镜、毛笔、白瓷板、麻醉瓶、25℃恒温培养箱

3、试剂：乙醚

四、实验流程

1. 取橙眼卷翅雌性处女蝇与白眼正常翅雄性果蝇各若干只作亲本置于1号培养瓶中，.取橙眼卷翅雄性果蝇与白眼正常翅雌性处女蝇若干只作亲本装入2号培养瓶，然后将培养瓶置于25℃恒温箱中培养。

2. 待培养7-8天后，弃除亲本果蝇，继续培养。

3. 再培养5天左右，收集F1代个体。准备4个心得培养瓶，标号3、4、5、6。将1号瓶中的F1代果蝇转移到另一瓶中进行麻醉，选取其中的雄果蝇直翅与卷翅各5-7只分别装入3、4号瓶，弃掉雌果蝇；将2号瓶中的F1代果蝇转移到另一瓶中进行麻醉，选取其中的雄果蝇直翅与卷翅各5-7只分别装入5、6号瓶，弃掉雌果蝇。将6个培养瓶放入恒温箱继续培养。12h后，再次将1号瓶中的F1代果蝇转移到另一瓶中进行麻醉，选取其中的雌果蝇直翅与卷翅各5-7只分别装入3、4号对应培养瓶中，弃掉雄果蝇。将2号瓶中的F1代果蝇转移到另一瓶中进行麻醉，选取其中的雌果蝇直翅与卷翅各5-7只分别装入5、6号对应培养瓶中，弃掉雄果蝇。将4个培养瓶放入恒温箱进行培养。

4. 培养7-8天后，弃除F¬1代果蝇，放入恒温箱继续培养。

5. 培养5天左右，开始对瓶中的F2代根据不同的性别和性状进行分类计数并进行记录。记录的总数应超过500只，一次记录的数目不到500只可以过几天进行第二次计数，但从弃掉F1代果蝇开始，不得超过20天，否则，F3代果蝇出现，影响结果。

6. 利用卡方检验对记录的实验结果进行检验，是否符合遗传定律。

五、预期结果

橙卷雌与白直雄正交:

P: X B X B CyL/cl x X W YcL/cL

橙卷雌↓白直雄

F1：X B X W CyL/cL X B YCyL/cL X B X W cL/cl X B YcL/cl

橙卷雌橙卷雄橙直雌橙直雄

1号：直翅杂交

F1：X B X W cL/cl x X B YcL/cl

橙直雌橙直雄

F2：橙直：白直=3：1

2号：卷翅杂交

F1：X B X W CyL/cL x X B YCyL/cL

橙卷雌橙卷雄

F2：橙卷：橙直：白卷：白直=6:3:2:1

白直雌与橙卷雄反交：

P: X W X W cL/cL x X B YCyL/cl

白直雌↓橙卷雄

F1：X B X W CyL/cL X W YCyL/cL X B X W cL/cl X W YcL/cl

橙卷雌白卷雄橙直雌白直雄

3号：直翅杂交

F1：X B X W cL/cl x X W YcL/cl

橙直雌白直雄

橙直：白直=1:1

4号：卷翅杂交

F1：X B X W CyL/cL x X W YCyL/cL

橙卷雌白卷雄