QSH07572019地表土壤中油气指示微生物检测平板菌落计数法
土壤微生物的分离与平板菌落计数
土壤微生物的分离与平板菌落计数实验二土壤微生物的分离与平板菌落计数一、实验目的(1)几种常用分离纯化微生物的基本操作技术(2)掌握倒平板(3)学习平板菌落计数的基本原理和方法二.实验原理微生物的分离与纯化是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。
分离纯化微生物的常用方法有平板表面画线法、平板表面涂布法和琼脂培养基浇注法等，因为其方法简单、设备简单、分离效果好，所以一直被实验室普遍选用。
活菌计数的基本方法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
三.实验器材1.材料:土壤2.培养基:牛肉膏蛋白胨培养基3.仪器或其他用具:无菌培养皿，盛有9ml无菌水的试管，1ml移液器，玻璃涂布器，恒温培养箱四.实验步骤(一)采样取表层以下5-10cm处的土样，放入灭菌的袋中备用，或放在4 ?冰箱中暂存。
(二)倒平板(无菌操作)培养基加热溶化，待冷至55-60? ，然后在无菌操作条件下倒入培养基于无菌培养皿中，并在各培养皿上作好标记。
(三)制备土壤稀释液(无菌操作)1.制备土壤悬液用电子天平称取 5g土于装有45ml无菌水的三角瓶中，振摇约20min,使土壤与水充分混匀2.梯度稀释取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管，以此类推制成10-1 、10-2、10-3等不同稀释度的土壤溶液。
(四)平板分离单菌落(无菌操作)选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌的土壤悬液，在酒精灯旁进行划线操作，用左手控制培养皿，右手捏接种环，在标记处划3-4条连续的平行线作当作初步稀释的菌源。
烧去接种环上的残余菌样。
将烧去残余菌样后的接种环在平板培养基边缘冷却以下，然后将培养基另一区转至划线位置，将接种环通过菌源区而移至现在的划线区，依次类推划上几次。
《平板菌落计数法》课件
平板菌落计数法的实验步骤
1
准备工作
培养基的制备、实验器材的消毒、微生
涂布样品
2
物的接种。
涂布技巧、涂布密度的影响。
3
培养
培养条件、培养时间。
检查并计数
4
菌落数的计算方法、菌落形态的观察。
5
记录结果
实验注意事项
实验器材的消毒方法 涂布密度的掌握
培养基制备时的注意事项 培养条件的调整常见Biblioteka 题及解决方法《平板菌落计数法》
这是一篇关于平板菌落计数法的PPT课件。通过本课件，你将了解平板菌落计 数法的概念、应用领域、实验步骤和注意事项。
什么是平板菌落计数法
平板菌落计数法是一种常见的微生物计数方法，通过在培养基上培养微生物， 观察和计数形成的菌落，从而估计原始样品中的微生物数量。
平板菌落计数法的应用领域
对实验结果的分析和解读
在实验分析和解读时，你需要注意菌落形态、数量和培养条件等因素。
1 食品安全
用于检测食品中的细菌、霉菌等微生物污染情况。
2 医疗卫生
用于病原微生物的定性和定量检测，如细菌感染的诊断。
3 环境监测
用于评估土壤、水源等环境中微生物的种群数量。
平板菌落计数法的优缺点
优点
• 简单易行 • 成本低廉 • 结果可靠
缺点
• 无法区分不同种类的微生物 • 需要一定的培养时间 • 可能存在菌落重叠的情况
1 菌落生长过于密集
调整涂布密度或稀释样品。
2 菌落数量太少
使用适当的培养方法或增加接种量。
3 实验误差的控制
严格按照实验步骤操作，加强对实验环境的控制。
总结
实验步骤和注意事项
通过本课件，你已经了解了平板菌落计数法的实验步骤和注意事项。
平板菌落计数
平板菌落计数一、实验器材1土壤样品2培养基淀粉琼脂培养基（高氏一号培养基），牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基或马铃薯培养基3溶液试剂可溶性淀粉、牛肉膏、蛋白胨、葡萄糖、马铃薯、链霉素、孟加拉红水溶液NaCl、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、KH2PO4、高氏1号培养基配方：可溶性淀粉20gNaCl 0.5gKNO31gK2HPO4·3H2O 0.5gMgSO4·7H2O 0.5gFeSO4·7H2O 0.01g琼脂20g水1000mlpH 7.2-7.4配制时，先少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。
再称取其他各成分依次逐一溶化。
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基配制牛肉膏3g蛋白胨10g氯化钠5g琼脂20g水1000mLpH 7.0-7.2马丁氏培养基配方如下：KH2PO41gMgSO4·7H2O 0.5g蛋白胨5g葡萄糖10g琼脂15-20g1/3000孟加拉红水溶液100ml水800mlpH自然由于链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。
可先将配成0.03%的链霉素溶液，临用前在培养基中加0.03%链霉素液100ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。
马铃薯培养基配方马铃薯（去皮）200g葡萄糖（或蔗糖）20g琼脂15~25g水1000ml自然pH去皮马铃薯200g，切成小块，放入烧杯中煮沸30min，注意用玻棒搅拌以防糊底。
然后用双层纱布过滤，取滤液加糖（酵母菌用葡萄糖，霉菌用蔗糖），加热煮沸后加入琼脂，继续加热融化并补水至1000mL。
二、操作步骤1.稀释涂布平板法( 1 ) 倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏I号琼脂培养基、马丁氏琼脂培养基加热溶化待冷至55～60℃时，高氏I号琼脂培养基中加入10%酚数滴，马丁氏培养中加入链霉素溶液(终浓度为30μg/ml)，混合均匀后分别倒平板，每种培养基倒三皿。
微生物检测菌落总数测定方法
微生物学磨练菌落总数的测定1 道理微生物活体数目的测定办法,经常应用平板造就计数法.它是经由过程将样品制成平均的一系列不合稀释度的稀释液,再取必定的稀释液接种,使其平均散布于造就皿中特定的造就基内,最后依据在平板上长出的菌落数盘算出每克（或mL）样品中的活菌数目.2 材料和仪器平皿：φ90mm.2.2无菌锥形瓶：容量250mL,500mL.2.3无菌吸管：1mL（具0.01mL个度）,10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头.2.4灭菌锅.2.5恒温造就箱2.6涂棒.2.7酒精灯.2.8超净工作台.2.9磁力搅拌器.0漩涡振荡器3磨练程序菌落总数的磨练程序见下图.办法①↙↘办法②↘4操纵步调4.1 造就基和试剂的配制平板计数琼脂造就基：LB造就基（最经常应用）牛肉膏 5g蛋白胨 10g氯化钠 5g琼脂 20g蒸馏水 1LpH 7.0～7.2将上述成分加于蒸馏水中,煮沸消融,调节pH值,分装锥形瓶中,121℃高压灭菌30分钟.无菌心理盐水的配制：称取8.5g氯化钠消融于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌30分钟.4.2 样品的稀释：固体样品：称取10g固体样品置于盛有90mL无菌心理盐水的无菌锥形瓶中（内装数粒无菌玻璃珠）,在扭转式摇床上200r/min充分振荡30min,制成1：10的样品均液,即10-1稀释液.用1mL无菌吸管或微量移液器汲取1：10样品均液1mL（汲取前须要摇匀1：10稀释液）,迟缓参加盛有9mL无菌心理盐水的无菌试管中（留意吸管或吸头尖端不克不及触及稀释液面）,用漩涡振荡器振荡,混杂平均,制成1：100的样品稀释均液.按照4.2.2操纵程序,制备10倍系列样品稀释液,每递增稀释一次,换用一次1mL无菌吸管或吸头.依据对样品活菌数目的估量,选择3~4个合适稀释度的样品均液（比方10-6,10-7,10-8,10-9稀释液）.4.2 平板接种与造就接种办法1：用1mL无菌吸管或微量移液器分离汲取不合稀释度的菌悬液1mL于一个无菌造就皿中（每个稀释度做三个反复）,再在造就皿平分离倒入10～15mL已熔化并冷却至45~50℃的造就基,盖好平皿盖子,趁热轻轻迁移转变造就皿,使菌液与造就基充分混杂平均,冷凝后在恒温造就箱中倒置造就24～２８ｈ,造就温度为36℃±1℃.同时以无菌水作空白对比.注：比方1000亿CFU样品稀释梯度可选择为：10-8,10-9,10-10.接种办法2：用1mL无菌吸管或微量移液器汲取稀释液均液于计数造就基平板上,将稀释液涂布平均,吸附,在恒温造就箱中倒置造就24～２８ｈ,造就温度为36℃±1℃.同时以无菌水作空白对比.（盘算时须要把0.2mL的倍数也盘算在稀释倍数内）注：比方1000亿CFU样品稀释梯度可选择为：10-7,10-8,10-9.菌落计数可用肉眼不雅察,须要时借用放大镜或菌落计数器,以防漏掉.记载稀释倍数和响应的菌落数目.菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units,CFU）暗示4.3.1拔取菌落数在30~300之间,无舒展菌落发展的平板计数菌落总数.低于30CFU的平板记载具体菌落数,大于300的可记载为多不成计.每个稀释度的菌落数应采取3个平行平板的平均数. 4.3.2个中一个平板有较大片状菌落发展时,则不宜采取,而应以无片状菌落发展的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半菌落散布又很平均时,即可盘算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数.当平板上消失菌落间无显著界限的链状发展时,则将每条单链作为一个菌落计数.若空白对比上有菌落发展,则此次检测成果无效,需从新测定.5 菌落总数的盘算办法若只有一个稀释度的菌落数30~100的合适计数规模之间时,盘算三个平行的平均值,再乘以响应稀释倍数,作为每克中菌落总数成果.5.2如有2个稀释度,其平均菌落数在30~100的合适计数规模之间,应按两者菌落数之比值来决议;若其比例小于2应计数两者的平均数;若大于2则计数个中稀释度较小的菌落总数.若所有稀释度的平板上菌落数均不在30~100之间时,个中一部分小于30或大于100时,则以最接近30或100的平均菌落数乘以响应的稀释倍数盘算.5.4 若所有稀释度的平板上菌落数离30~100规模较远时,建议选择合适的稀释倍数从新测定.表1 样品活菌数目测定成果数据记载留意事项：检测进程中尽量防止情况杂菌干扰,操纵人员要用70％的酒精擦拭手和桌子.。
平板菌落计数法
平板菌落计数法（一）目标请求进修平板菌落计数的基起源基础理和办法.（二）基起源基础理平板菌落计数法是将待测样品经恰当稀释之后,个中的微生物充分疏散成单个细胞,取必定量的稀释样液接种到平板上,经由造就,由每个单细胞发展滋生而形成肉眼可见的菌落,即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞.统计菌落数,依据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数.但是,因为待测样品往往不轻易完整疏散成单个细胞,所以,长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞.是以平板菌落计数的成果往往偏低.为了清晰地阐述平板菌落计数的成果,如今已偏向应用菌落形成单位(colony-forming units,cfu)而不以绝对菌落数来暗示样品的活菌含量.平板菌落计数法固然操纵较繁,成果须要造就一段时光才干取得,并且测定成果易受多种身分的影响,但是,因为该计数办法的最大长处是可以获得活菌的信息,所以被普遍用于生物成品磨练(如活菌制剂),以及食物.饮料和水(包含水源水)等的含菌指数或污染程度的检测.（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液.2．造就基牛肉膏蛋白陈造就基.3．仪器或其他器具1mL无菌吸管,无菌平皿,盛有4.5ml无菌水的试管,试管架,恒温造就箱等.（四）操纵步调l．编号取无菌平皿9套,分离用记号笔标明10-4.10-5.10-6.(稀释度)各3套.另取6支盛有4.5mL无菌水的试管,依次标是10-1.10-2.10-3.10-4.10-5.10-6.2．稀释用lmL无菌吸管汲取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品),准确地放0.5mL至10-1的试管中,此即为10倍稀释.将过剩的菌液放回原菌液中.将10-1试管置试管振荡器上振荡,使菌液充分混匀.另取一支lml吸管拔出10 1试管中往返吹吸菌悬液三次,进一步将菌体疏散.混匀.吹吸菌液时不要太猛太快,吸时吸管伸人管底,吹时分开液面,以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢.用此吸管汲取10-1菌液lmL,准确地放0.5mL至10-2试管中,此即为100倍稀释.其余依次类推.放菌液时吸管尖不要碰着液面,即每一支吸管只能接触一个稀释度的菌悬液,不然稀释不准确,成果误差较大.3．取样用三支1mL无菌吸管分离汲取10-4.10-5和10-6的稀释菌悬液各lmL,对号放入编好号的无菌平皿中,每个平皿放0.2mL.不要用lmL吸管每次只靠吸管尖部吸0.2mL稀释菌液放入平皿臼,如许轻易加大统一稀释度几个反复平板间的操纵误差.4．倒平板尽快向上述盛有不合稀释度菌液的平皿中倒入熔化后冷却至45℃阁下的牛肉膏蛋白胨造就基约15mL/平皿,置程度地位敏捷旋动平皿,使造就基与菌液混杂平均,而又不使造就基荡出平皿或溅到平皿盖上.因为细菌易吸附到玻璃器皿概况,所以菌液参加到造就皿后,应尽快倒入熔化并于已冷却至45℃阁下的造就基,立刻摇匀,不然细菌将不轻易疏散或长成的菌落连在一路,影响计数.待造就基凝固后,将平板倒置于37℃恒温造就箱中造就.5．计数造就48h后,掏出造就平板,算出统一稀释度三个平板上的菌落平均数,并按下列公式进行盘算,每毫升中菌落形成单位(cfu)=统一稀释度三次反复的平均菌落数×稀释倍数×5一般选择每个平板上长有30~300个菌落的稀释度盘算每毫升的含菌量较为适合.统一稀释度的三个反复对比的菌落数不该相差很大,不然暗示实验不准确.现实工作中统一稀释度反复对比平板不克不及少于三个,如许便于数据统计,削减误差.由10-4.10-5.10-6三个稀释度盘算出的每毫升菌液中菌落形成单位数也不该相差太大.平板菌落计数法,所选择倒平板的稀释度是很主要的.一般以三个持续稀释度中的第二个稀释度倒平板造就后所消失的平均菌落数在50个阁下为好,不然要恰当增长或削减稀释度加以调剂.平板菌落计数法的操纵除上述倾泻倒平板的方法以外,还可以用涂布平板的方法进行.二者操纵基底细同,所不合的是后者先将牛肉膏蛋白胨造就基熔化后倒平板,待凝固后编号,并于37℃阁下的温箱中烘烤30min,或在超静工作台上恰当吹干,然后用无菌吸管汲取稀释好的菌液对号接种于不合稀释度编号的平板上,并尽快用无菌玻璃涂棒将菌液在平板上涂布平均,平放于实验台上20～30min,使菌液渗入造就基表层内,然后倒置37℃的恒温箱中造就24～48h.涂布平板用的菌悬液量一般以0.1mL较为合适,假如过少菌液不轻易涂布开,过多则在涂布完后或在造就时菌液仍会在平板概况流淌,不轻易形成单菌落.。
土壤微生物计数法
土壤微生物计数法土壤是最复杂、最丰富的微生物基因库，所含微生物不仅数量巨大，而且各类繁多，主要包括细菌、真菌和放线菌三大类，是土壤最活跃的成分。
土壤微生物数量测定方法可分为三大类：一类是根据在培养基上生长的菌落数来计算土壤微生物的数量，统称为培养计数法，主要有稀释平板法和最大或然计数法；二类是将土壤微生物染色后，在显微镜下观察计数，称为直接镜检法，包括涂片法、琼脂薄片法和膜过滤法等；三类是直接将微生物从土壤中分离和提取出来后再进行测定，主要有离心分离法。
1.1培养计数法1.1.1概要在自然条件下，土壤中的大多数微生物处于休眠状态，一旦供给可利用的碳源（如培养基），一些微生物将快速生长繁殖。
因此，根据在培养基上所生长的微生物数量，可以估算土壤中微生物的数量。
这种土壤微生物数量测定方法称为培养计数法，主要包括稀释平板计数法（简称稀释平板法）和最大或然计数法。
稀释平板计数法的基本原理：土壤微生物经分散处理成为单个细胞后，在特殊的培养基上生长并形成一个菌落，根据形成的菌落数来计算微生物的数量。
最大或然计数法的基本原理：假设被测定的微生物在稀释液中均匀分布，并在试管或平板上全部存活，随着稀释倍数的加大，稀释液中微生物的数量将越来越少，直到将某一稀释度的土壤稀释液接种到培养基上培养后，没有或很少出现微生物菌落。
根据没有出现菌落的最低稀释度和出现菌落的最高稀释度，再用最大或然计数法计算出样品中微生物的数量。
1.1.2稀释平板法一、试剂配制常用的培养基各类很多（见附录一），可根据需要测定的微生物种类选择培养基。
按配方配制培养基后，先在121℃下灭菌15min，冷却至45～50℃使用。
凝固后的培养基可加热溶解后使用。
二、仪器设备广口瓶或三角瓶及配套的橡皮塞，移液管（1ml、10ml，吸口用棉花塞住后用牛皮纸包好灭菌）培养皿（9㎝，用牛皮纸包好后灭菌）和显微镜等。
（1）土壤系列稀释液制备取新鲜土壤（＜2㎜）10.00g，放入经灭菌的装有70ml水的广口瓶中，塞上经灭菌的橡皮塞，在振荡机上振荡10min，此为10-1土壤稀释液。
平板菌落计数法
平板菌落计数法平板菌落计数法菌落形成单位(colony forming unit，cfu)是指在活菌培养计数时．由单个菌体或聚集成团的多个菌体在固体培养基上生长繁殖所形成的集落．称为菌落形成单位，以其表达活菌的数量。
菌落形成单位的计量方式与一般的计数方式不同，一般直接在显微镜下计算细菌数量会将活与死的细菌全部算入，但是CFU只计算活的细菌。
因此，可将菌液倍比稀释成不同浓度，每种浓度吸1毫升加到融化温度达50度的15毫升营养琼脂培养中混匀使其凝固，置35度孵育24小时，取出进行菌落计数，每个平板菌落数X稀释倍数得到每毫升中细菌数量，取平均值即可得到较准确的CFU/ml，一般对平板进行菌落计数，选择菌落数在30到300个平板为准。
个单位比“菌落数”更准确反映问题的实质。
从理论上认识，一个活细菌可以在条件合适的固体表面上形成一个菌落，但实际上远非如此。
例如，在环境因素作用下，每一个细菌的生活能力各不相同，会影响其在该条件下形成菌落的能力；又如，吸附于微小颗粒上的2个以上菌体或粘连在一起的菌团可能共同形成一个菌落等等。
致使形成的菌落数远远低于实际的活菌数。
因此目前可用菌落形成单位代替以往常用的“菌落数”单位。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不宜完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位（cfu ：colony-forming units），而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
[1][编辑本段]一、菌落总数介绍：菌落是指细菌在固体培养基上生长繁殖而形成的能被肉眼识别的生长物，它是由数以万计相同的细菌集合而成。
平板菌落计数法的流程
平板菌落计数法的流程平板菌落计数法呀，这可是微生物实验里超有趣的一个部分呢。
一、准备工作。
咱得先把要用的东西都准备好。
培养基那是必不可少的啦，就像盖房子得有砖头一样。
这个培养基要按照配方精确地调配哦，多一点少一点可能都会影响后面的结果呢。
还有培养皿，要干净又卫生的那种，要是培养皿脏兮兮的，微生物们住着也不舒坦呀。
接种工具也不能少，像接种环之类的，就像是把微生物运送到新家的小车子。
另外呢，咱还得有样品，这个样品可以是从各种地方来的，可能是从土壤里采集的，也可能是从食物上取下来的，就看咱要研究啥微生物啦。
二、样品处理。
拿到样品之后呀，可不能直接就往培养基上放。
如果是固体样品呢，得先把它弄成均匀的溶液，就像把一块糖在水里搅化了一样。
要是液体样品呢，也得进行一些适当的稀释。
为啥要稀释呢？这就像是人太多住不下，得分开住一样。
微生物太多了，在培养基上就会长成一大片，咱就数不清了。
所以要稀释到合适的浓度，这样微生物们在培养基上就能一个一个地长成小菌落，就像小朋友们排排坐一样，方便我们数呢。
三、接种。
这一步就像是送微生物们入住新房啦。
用接种工具蘸取处理好的样品，然后轻轻地在培养基表面划几下。
要轻轻地哦，不然把培养基弄破了可就不好了。
这个过程就像是在画布上画画一样，不过我们画的不是漂亮的图案，而是把微生物种在培养基上。
微生物们就在培养基这个新家里开始生长繁殖啦。
四、培养。
接种完了之后，就得把培养皿放在合适的环境里去培养啦。
不同的微生物喜欢的环境不一样呢。
有些微生物喜欢暖和的地方，就像我们人喜欢在温暖的房间里一样，那就把它们放在恒温箱里，温度调好。
有些微生物可能还需要特殊的气体环境，就像有些小宠物需要特殊的小窝一样。
在培养的过程中呀，微生物们就开始疯狂地生长，它们吃着培养基里的营养，一点点地变大变多。
五、计数。
经过一段时间的培养之后，就到了最激动人心的计数环节啦。
我们就看着培养皿上那些一个一个的小菌落，就像数星星一样。
实验 土壤中细菌总数测定平板计数
• Colony-Forming Units (CFUs) However, keep in mind that if the organism normally forms multiple cell arrangements, such as chains, the colony-forming unit may consist of a chain of bacteria rather than a single bacterium. In addition, some of the bacteria may be clumped together. Therefore, when doing the plate count technique, we generally say we are determining the number of Colony-Forming Units (CFUs) in that known dilution. By extrapolation, this number can in turn be used to calculate the number of CFUs in the original sample.
四 操作步骤
无菌平皿编号→制备土壤稀释液→ 倾注 平板→ 培养(48h) → 计数
五 注意事项
倒平板时要注意控制培养基的温度。
稀释操作时，要尽量减少样品稀释误差，而且 每个稀释度的菌液应各用一支无菌吸管。
为使菌落能在平板上均匀分布，样品液加入平
皿后，应尽快倾注培养基并旋转混匀。
六 思考题
要测定某种液体饮料中的活细菌总数，除了采 用平板菌落计数法外，还可采用哪些方法？
土壤中细菌总数的测定
一 教学要求
平板菌落计数法
资料范本本资料为word版本，可以直接编辑和打印，感谢您的下载平板菌落计数法地点：__________________时间：__________________说明：本资料适用于约定双方经过谈判，协商而共同承认，共同遵守的责任与义务，仅供参考，文档可直接下载或修改，不需要的部分可直接删除，使用时请详细阅读内容平板菌落计数法（一）目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
平板菌落计数法操作步骤(精)
平板菌落计数法操作步骤(精)
平板菌落计数法是一种可以用来测定悬浮液中的菌落总数以及形成菌落的种类的微生物学分析方法。
它通常被用来评估牛奶、酒精发酵物、汤、和其它类似的系统的微生物活性的估计。
平板菌落计数法的步骤一般为：
1、准备样品：将根据样品的类型，制定合适浓度、保存适宜的培养基；
2、消耗样品：根据下联试验结果，将样品消耗在培养基中；
3、载体准备：准备一个混合培养剂载体，在此载体上种植样品，以便能够有效进行培养；
4、培养：将种植好的平板载体放入带有适宜温度的培养箱中培养，按照适定的培养时间培养；
5、观察计数：将培养好的载体放入显微镜底座下进行显微观察，根据观察结果，对形成的菌落进行计数；
6、计算：根据样品的量，和所观察的菌落总数，对每升份的大菌落进行计算，以求出平板菌落总数。
7、结果分析：根据测得的平板菌落总数，进行比较测试及结果分析，从而判断样品微生物活性情况。
油气勘查中的微生物测量法
油气勘查中的微生物测量法
吴传芝
【期刊名称】《国外地质勘探技术》
【年(卷),期】1995(000)005
【摘要】石油微生物测量是通过测定土壤中以渗漏轻烃为食物来源的微生物菌落来圈定烃类渗漏的范围。
微生物测量受岩性和温度条件控制不明显，对其测值有重大影响的唯一因素是土壤湿度含量。
微生物测量的第二个特点是其具有良好的重现性。
微生物测量技术可明显区分含油区和无油区，这种方法在含油区和无油区的重现率均常在９０％－１００％。
微生物测量法在描述地下油气储特征、预测地下构造是否含油方面，取得了良好效果。
微生物测量在的优势
【总页数】6页(P21-26)
【作者】吴传芝
【作者单位】无
【正文语种】中文
【中图分类】P618.130.8
【相关文献】
1.塔里木盆地玉北1构造带油气微生物勘查 [J], 杨帆;顾磊;许科伟;高俊阳;汤玉平;沈忠民
2.微生物方法在东海某区油气勘查中的应用效果 [J], 张建培;王飞
3.勘查油气田化探新方法——土壤相态烃测量法 [J], 李生郁;徐丰孚
4.地面热测量法勘查油气藏[J], K.,CГ;赵利华
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微生物学 实验7 土壤中细菌的分离纯化及计数
交叉划线法
连续划线法
正置培养过程中，培养基中水分蒸发后，会在培养皿
计算公式：
平均菌落数(个) 相应释倍数 CFU/g 100mL 0.2mL 10 g
平均菌落数——某一稀释度下三个平皿上的菌落平均数； CFU——菌落形成单位（colony-forming units，CFU）； 0.2mL——每个平皿加入的菌悬液体积； 100mL——10-1菌悬液的体积； 10g——称取的土壤重量。
平板菌落计数法根据微生物在固体培养基上所形成的 菌落一般由一个细胞繁殖而成的原理进行。即一长成的菌 落代表一个活的细胞。计数时先将待测样品作一系列稀释， 使其中的微生物充分分散成单个细胞，再吸取一定量的稀 释菌液接种到培养皿中，使其均匀分布于平皿中的培养基 内，经培养单个细胞繁殖形成菌落，统计菌落数目即可计 换算出样品的含菌数。
菌落计数原则（六条）
1、先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个 平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应 以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌 落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其 余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的 菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该 稀释度的平均菌落数。
计算菌落总数方法举例（加样量为1mL）
例次 １ 不同稀释度的平均菌落数 10-1 1365 10-2 164 10-3 20 两个稀释 度菌落数 之比 － 菌落总数 （个／mL） 1.64×104 备注
２ ３
４ ５
2760 2890
无法计数 27
295 271
1650 11
46 60
513 5
1.6 2.2
4、若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应 按稀释度(倍数)最高的平均菌落数乘以稀释倍数 （见下表，例4）。
《平板菌落计数法》课件
02
稀释时需使用精确的稀释比，并 确保无菌操作，避免交叉污染。 稀释后的样品应尽快进行平板涂 布，以免菌落过度生长。
菌落计数的标准与误差控制
菌落计数是平板菌落计数的核心环节 ，需要遵循一定的标准。
计数时应选择菌落数在30-300之间的 平板进行计数，以减小误差。同时， 应定期对计数结果进行质量控制，确 保计数的准确性。
实验过程中的质量控制
质量控制是保证实验结果可靠性的重要手段。
实验前应对所有器具进行灭菌处理，确保无菌环境。实验过程中应定期对培养基、稀释液、样品等各 环节进行质量检查，及时发现并纠正问题。同时，应定期对实验人员进行培训和考核，提高实验技能 和素质。
04
平板菌落计数法的应用实例
在食品微生物检测中的应用
限制
平板菌落计数法对于一些特殊微生物的计数可能存在困难，如厌氧微生物、营 养要求较高的微生物等。此外，该方法需要较长时间的培养和计数，对于一些 快速繁殖的微生物可能不适用。
02
平板菌落计数法操作流程
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 培养基制备
总结词
培养基是菌落生长的温床，其制备是平板菌落计数法的第一 步。
详细描述
根据实验需求选择合适的培养基配方，按照比例称取所需的 成分，加入适量的蒸馏水，搅拌均匀后调节pH值，然后进行 灭菌处理。灭菌后的培养基倒入无菌平板中，冷却备用。
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样品稀释
总结词
样品稀释是为了将菌落分散开来，便于计数。
详细描述
将待测样品进行稀释，通常选用生理盐水或磷酸盐缓冲液作为稀释液。按照适当 的稀释比例，将样品与稀释液混合均匀，确保每个菌落都能独立分散开来。
平板菌落计数法的流程
平板菌落计数法的流程平板菌落计数法呀，这可有意思啦。
一、准备工作。
咱得先把要用的东西都准备好。
那都有啥呢？培养基是肯定不能少的，就像做饭得有食材一样。
这个培养基得按照正确的配方去调配，可不能瞎弄哦。
还有培养皿，这就像是小盘子，是细菌们要住的小房子。
另外呢，接种工具也得备着，像接种环之类的。
再就是我们要计数的样品啦，不管是从哪儿弄来的样品，都得小心处理，就像对待宝贝一样。
而且啊，整个操作过程得在干净的环境里进行，要是周围脏兮兮的，那细菌的数量可就不准啦。
二、样品处理。
拿到样品以后呢，要把它处理成合适的状态。
如果是固体的样品，可能得先溶解或者研磨一下，让里面的细菌能分散开来。
要是液体样品呢，也得注意有没有沉淀之类的，要是有，得想办法让它均匀一点。
这一步就像是给细菌们做个前期的准备工作，让它们能更好地在培养基里生长。
三、接种。
接种这个环节可关键啦。
用接种工具蘸取处理好的样品，然后轻轻地在培养基上划呀划。
就像画画一样，不过这画的可是细菌的“家”呢。
要注意接种的量，不能太多也不能太少。
太多了的话，细菌们都挤在一起，长成一团，那就没法准确计数了。
太少呢，可能有些细菌都长不出来，那也不行。
而且在接种的时候，动作要轻柔，别把培养基给弄破了，培养基要是破了，就像房子塌了一样，细菌们可就没地方好好生长啦。
四、培养。
接种完了就该让细菌们在合适的环境里生长啦。
这个环境得是温暖的，温度要刚刚好，就像我们人住的房子温度得适宜一样。
还要注意湿度之类的条件。
在培养的过程中，可不能老是去打扰细菌们，得让它们安安静静地生长。
但是呢，也要时不时地去看看，就像看小宠物一样，看看它们有没有好好地长出来。
五、计数。
等细菌们在培养基上长成一个个小菌落的时候，就可以开始计数啦。
这可有点像数星星呢，不过要更仔细。
要用小眼睛仔细地看，一个一个地数。
有时候菌落可能会长得挨在一起，这时候就得靠我们的判断力啦，要把那些看起来像是分开的菌落都准确地数出来。
菌落总数检验原始记录-平板计数法-2022版
菌落总数检验原始记录（平板计数法）计算方法.假设只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g（mL）样品中菌落总数结果。
1 .假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按式⑴计算。
z ZCN =（勺+0.14）"式中：N——样品中菌落数：EC——平板（含适宜范围菌落数的平板）菌落数之和：m一—第一稀释度（低稀释倍数）平板个数；n2一一第二稀释度（高稀释倍数）平板个数；d一—稀释因子（第一稀释度）。
2 .假设所有稀释度的平板上菌落数均大于300 CFU,那么对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计, 结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
3 .假设所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,那么应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4 .假设所有稀释度（包括液体样品原液）平板均无菌落生长，那么以小于1乘以最低稀释倍数计算。
5 .假设所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU-300CFU之间，其中一局部小于30CFU或大于300 CFU时，那么以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
计算过程：方法报告1 .菌落总数小于100CFU时，按“四舍五入”原那么修约,以整数报告。
2 .菌落总数大于或等于100CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原那么修约后，采用两位有效数字，后面用0 代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五人”原那么修约后，采用两位有效数字。
3 .假设空白对照上有菌落生长，那么此次检验结果无效。
4 .称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
报告人报告日期复核人复核日期。
平板菌落计数法之欧阳索引创编
平板菌落计数法欧阳家百（2021.03.07）（一）目的要求学习平板菌落计数的基本原理和方法。
（二）基本原理平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可来自样品中的2～3或更多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
平板菌落计数法虽然操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是，由于该计数方法的最大优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验(如活菌制剂)，以及食品、饮料和水(包括水源水)等的含菌指数或污染程度的检测。
（三）器材1．菌种大肠杆菌菌悬液。
2．培养基牛肉膏蛋白陈培养基。
3．仪器或其他用具1mL无菌吸管，无菌平皿，盛有4.5ml 无菌水的试管，试管架，恒温培养箱等。
（四）操作步骤l．编号取无菌平皿9套，分别用记号笔标明10-4、10-5、10-6。
(稀释度)各3套。
另取6支盛有4.5mL无菌水的试管，依次标是10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。
2．稀释用lmL无菌吸管吸取lmL已充分混匀的大肠杆菌菌县液(待测样品)，精确地放0.5mL至10-1的试管中，此即为10倍稀释。
将多余的菌液放回原菌液中。
将10-1试管置试管振荡器上振荡，使菌液充分混匀。
另取一支lml吸管插入10 1试管中来回吹吸菌悬液三次，进一步将菌体分散、混匀。
吹吸菌液时不要太猛太快，吸时吸管伸人管底，吹时离开液面，以免将吸管中的过滤棉花浸湿或使试管内液体外溢。