药理学实验

药理学实验 （异）戊巴比妥钠半数有效量ED50和半数致死量LD50测定

[目的] 用小白鼠求戊巴比妥钠的LD 50、ED 50及其治疗指数

（1）戊巴比妥钠半数致死量（LD 50）的测定（实验示例，供同学参考）

[方法] 取体重20g 左右小鼠50只，分为5组，每组10只。各组分别腹腔注射不同剂量戊巴比妥钠。注射后24小时，记录各组死亡鼠数。结果如下所示。按公式： LD 50=㏒-1[Xm-i (ΣP-0.5)]计算或机率单位—对数剂量作图法求得LD 50=120mg/kg 。 结果 组别 剂量D (mg/kg) 1ogD 实验鼠数 死亡鼠数 死亡反应百分率（%） P LD 50(mg/kg) 1 187.5 2.273 10 10 100 1.0 120

2 150.0 2.176 10 7 70 0.7

3 120.0 2.079 10 6 60 0.6

4 96.0

1.982 10 2 20 0.2 5 7

2.0 1.857 10 0 0 0 （1）按公式LD 50=1og -1[Xm-i （Σp-0.5）]计算，求LD 50。 其中Xm=最大剂量对数值 P=动物死亡率（用小数表示） Σp=各组死亡率的总和 I=相邻两组剂量比值的对数（高剂量做分子） 将实验结果代入上述公式 Xm=1og187.5=2.273 Σp=1.0+0.7+0.6+0.2+0=2.5 i=1og =1og1.25=0.0969 LD 50=1og -1[Xm-i(Σp-0.5)] =1og -1[2.273-0.0969(2.5-0.5)] =1og -1[2.273-0.1938]= 1og -12.0792 =120.0(mg/kg)

（2）戊巴比妥钠半数有效量（ED 50）的测定

[材料]

药品：戊巴比妥钠溶液（浓度为0.20%，0.25%，0.31%，0.39%，0.49%） 器材：注射器0.25ml （或1ml ） 5 针头、天平、鼠笼 0

.1505.1872

1

动物：小白鼠（20g 左右）50只

[方法]取体重20g 左右小鼠10只，分为5组，每组2只，称重。每组分别给与腹腔注射不同剂量戊巴比妥钠49、39、31、25、20 mg/kg ，以翻正反射消失作为入睡指标，给药15分钟后，记录各组出现催眠反应的鼠数。采用公式ED 50=1og -1[Xm-i(Σp-0.5)]计算或机率单位—对数剂量作图法求得出现催眠反应的ED 50。

[记录]

组别

剂量D(mg/kg) 1ogD 实验 鼠数 催眠 鼠数 催眠反应 百分率% P ED 50(mg/kg) 1

49 1.6900 2

39 1.5911 3

31 1.4911 4

25 1.3979 5 20 1.3010 汇总整个实验室结果，按公式ED50=1og-1[Xm-i(Σp-0.5)]计算，求ED 50与LD 50=1og -1[Xm-i(Σp-0.5)]公式相比。其中P=动物反应率用小数表示，如20%即0.2。Σp=各组反应率的总和。

（3）戊巴比妥钠治疗指数的测定。

由以上实验所测得戊巴比妥钠的LD 50和ED 50，求得治疗指数。

治疗指数=

药物血浆半衰期的测定

[目的]以磺胺类为例学习测定药物半衰期（t1/2）的基本方法。

[材料]

药品: 5%磺胺钠溶液，7.5%三氯醋酸溶液，0.5%亚硝酸钠溶液，0.5% 麝香草酚钠溶液，草酸钾结晶，20%乌拉坦溶液

器材: 试管20只，移液吸管10ml ，1只；1ml ，2只；2ml 8只；移液器1支，吸头若干，试管夹，试管架，离心机，722型分光光度计，手术剪，眼科剪，止血钳，动脉夹，眼科镊，缝线，药棉，纱布，捆扎绳，注射器10ml 1支，5ml 1支。

动物: 兔1只

[呈色原理]

磺胺类药物为对氨基苯磺酰胺类化合物，在酸性溶液中，可与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐。在碱性溶液中，重氮盐可与酚类化合物（麝香草酚）起偶氮反应，形成橙红色的偶氮化合物。

50

50ED LD

[方法]

1、取试管5只，依次用A 1、A

2、A 3……A 5标记，各加入7.5%三氯醋酸2ml 备用。

2、取试管5只，依次用B 1，B 2，B 3……B 5标记，各加入草酸钾结晶几粒。

3、取家兔，称重以乌拉坦溶液1g/kg 耳缘静脉注射麻醉，麻醉后将兔背位固定于手术台上，正中切开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，结扎其远心端，并在近心端夹上动脉夹，以阻断血流，再将放血导管向心脏方向插入颈总动脉内，用线打活结固定。

4、松开动脉夹，放血约1ml ，置于B 1管，迅速摇匀抗凝，然后耳缘静脉注入5%磺胺钠3ml/kg （150mg/kg ），记录注完时间（准确到分钟）。

5、给药后5min 、10min 、20min 及40min ，用同样方法放血约1ml ，分别置于B 2、B 3、B 4、B 5管，迅速摇匀，记录取血标本的准确时间，然后准确吸取50μl 加入相应的各A 管, 各管以1500转/分离心5min ，分别取离心后的上清液1.5ml ，加0.5%亚硝酸钠溶液0.5 ml ，摇匀，再加0.5%麝香草酚1ml ，可见橙红色反应，用722型分光光度计，于525nm 波长测定其光密度，在标准曲线上查得磺胺钠浓度。

[记录]

管号

1 2 3 4 光密度值

磺胺钠浓度

时间

[计算]

根据一级动力学消除公式

Ct=Coe -kt

logCt=logCo 将给药时间t 与已求得的磺胺血浆浓度对数值logCt 作直线回归，即可得回归方程的斜率（-K/2.303）和截距（logCo ）应用公式t1/2=0.693/K ，Vd=D/Co ，CL=K ·Vd ，便可求得t1/2、Vd 和CL 。

附：计算器或计算机的直线回归程序

（1）MODE 2 屏幕显示LR ，进入线性回归计算状态；

（2）INV AC 消除储存器内的全部数据

t

K 303

.2