清华大学Elisa实验报告
ELISA生化实验报告
ELISAObjective:1.To know about the basic operation and thoery of themeasurement of ELISA.2.To learn how to use microplate reader, how to dilute thesolution in certain ratio quickly.3.Understand the advantage of ELISA to measure theconcentration of protein.Theory:In the general procedure, the antigen was absorbed by the solid support, then the antibody we want to test was added in. Then the conjugated enzyme was added in to label the antibody. Then the substrate of the enzyme was added in and caused the formation of colored chemicals. Then the amount of antibody cloud be calculated by light absorption of spectrophotometer.In this experiment, we use Rabbit-anti-human IgG antiserum as first antibody. It can combine with Goat-antirabbit IgG-HRP, which can facilitate the oxidation of OPD. The colored product absorbs light at 492 nm. So the concentration of products can be measured by spectrophotometry. We can get a linear relation and cauculate the concentration.Reagens:1.Coating buffer (Carbonate-Bicarbonate buffer, pH 9.6) :2.Phosphate buffered saline (PBS)3.Washing buffer (PBS-T): PBS + 0.05% Tween 20.4.Blocking solution: 0.5% BSA in PBS.5.First antibody: Rabbit-anti-human IgG antiserum (1/400~1/12800).6.Peroxidase conjugated secondary antibody: Goat-anti-rabbit IgG-HRP (1:40000).7.Substrate: substrate buffer(fresh):8.Stopping reagent: 2mol/L H2SO4.Equioment:1.microplate reader2.microtiter plate3.PipetteProcedure:Antigen Coating1. Prepare human IgG solution at 0.025mg/ml in carbonate-bicarbonate buffer (coating buffer).2. Pipette 0.2 ml of the above solution to each well of the 96-well microtiter plate from 2B-D to 10 B-D. Incubate at 37 ℃for 30-45 min.3. Remove the coating solution. Wash three times with PBS-T (0.2 ml/well).4. Blocking step: pipette 0.02% (w/v) non-fat dry milk in-PBST (0.2ml/well) to each well of the 96-well microtiter plate from 2B-D to 11 B-D except 10 B-D. Keep the plate at Room Temperature for 5-10 min. Wash as mentioned above.B. Primary Antibody Reaction5. Dilute the primary (first) antibodies, Rabbit-anti-human IgG, in PBS-T. (different dilutions of 1st Ab., 1:400~1:12800).6. Add 0.2 ml of the diluted first antibody to each well according to Figure 1.Note: Add sample A (1st Ab. of unknown concentration) to well 8B-D. Negative control should be included (9B-D, No first Ab.).7. Incubate at 37 ℃for 1 hour.8. Wash three times with PBS-T (0.2 ml/well).C. Application of Secondary Antibody9. Dilute (1:40,000) the peroxidase conjugated Goat-anti-rabbit IgG-HRP (secondary antibody) in PBS-T. Add 0.2 ml of this solution to each well.10. Incubate at 37 ℃for 30 min.11. Wash three times with PBS-T (0.2 ml/well).D. Substrate Preparation12. During the last incubation and immediately before use, dissolve o-Phenylenediamine in Citric acid-sodium hydrogen phosphate buffer; add 30% H 2 O 2 before use.E. Development13. Add 0.2 ml of the freshly prepared substrate to each well.14. Orange-yellow color should develop in positive wells after 3-5 minutes.15. Stop reaction with 50 μl per well of preferred stopping reagent and read at 490 nm in a microplate reader.The element of each well was shown in the table 1.Table 1Data:Table 2. A490 of the sampleNo. dilution of the sample 1 sample 2 sample 3 average first antibody1 1/400 1.252 1.307 1.433 1.3312 1/800 1.079 1.294 1.295 1.2233 1/1600 1.186 0.910 1.070 1.0554 1/3200 0.939 0.954 0.818 0.9045 1/6400 0.698 0.722 0.783 0.7346 1/12800 0.646 0.577 0.526 0.5837. 1/4000 0.801 0.730 0.788 0.7738 - 0.023 0.021 0.020 0.0219 1/400 1.123 1.350 1.177 1.21710 1/400 0.133 0.140 0.242 0.172 Then Drawing the curves of absorbency and the concentration of the series of diluted first antibody.The dilution of sample7 as calculate is 5560.DiscussionAs we can see in the result, when the concentration of the first antibody decrease, A will decrease, too. And the –lg(ratio) and A follow a linear relation approximately. The result can be explainedthat with equal amount of antigen and 2nd antibody in every well, (in exception of Group 9and10) the concentration of 1st antibody dominates the product yield in restricted time. The higher first antibody added into the well, the more second-antibody-peroxidase complex attached to the well. So we can get the higher concentration of colored product. And the aborsance changes as lambert-beer law.The result of No..9 is similar No.1 but lower than it, blocking will decrease the influence of the other irrelevant protein’s adsorption.The result of No.8 is so low,,nearly zero,because there is no first antibody in No.8, and No.10 is low because without the antigen, the adsoption of first antibody will be much lower.Easy to see, our curve is not a perfect linear relation. And the calculation of the No.7 is different from the theoric so much. There may be several reasons.1.When we pipette the stopping reagent, I spilled alittle of the first sample, the height of the liquid isnot absolutely equal with the others.2.The stopping method mayt be too late so thecolored product was generated too much, whichinfluences the linearity.3.The move of the microtiter plate leads to thebubble in the sulotion, which may influence theresult.Literature references:《ELISA》 《The practical approach of biochemistry》Bingbin Yu。
ELISA实验报告
Experiment: ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)Date: 2016.10.17Objectives(1)Learn ELISA principle(2)Master ELISA technology, quantitatively determine antibody and antigen.Experimental principleThe principle of ELISA is to make antigen or antibody combine to the surface of some solid phase carrier and maintain its immunocompetence, and then make the antibody or antigen to connect with some enzyme to become enzyme labeled antigen or antibody in which the immunocompetence of both antigen or antibody and enzyme is kept. In the determination, make the specimen to be tested and enzyme linked antigen react with the antigen or antibody on the surface of solid phase carrier following difference procedures. Through washing, antigen-antibody complex formed on solid phase carrier and other materials are separated. Finally, adding substrate into enzyme reaction, the substrate will be catalyzed and become colored product. The amount of product has direct relation with the amount of enzyme on the solid phase carrier, in other words, the amount of the material to be tested in the specimen. Quantitative analysis can be conducted based on the shade of color reaction. This determination has a very high sensitivity.ELISA can be divided into mainly four types: the direct method, indirect method, double antibody sandwich method and competitive inhibition method. Also, different kinds of enzyme and substrate can be used in ELISA.Double antibody method is a kind of ELISA to determine antigen in the specimen. In this method, antibody is coated on the surface of solid phase carrier. Antigen in the sample binds with antibody on the solid phase, while other materials are washed away. Then add enzyme linked antibody to bind the antigen which are bound on the solid phase. After washing, superfluous antibody is washed away. The substrate is then added to produce color and the quantitative tests are conducted.In our experiment, we adopted double antibody sandwich method to determine mouse tumor necr osis factor alpha (TNF α) with anti-mouse TNF α. The enzyme and substrate we used are Avidin-HRP and TMB respectively.Reagents and equipment(1)Equipments40-well reaction plate coated with anti-mouse TNF α; liquid transfer gun (1ml, 200μl); thermotank (37℃).(2) ReagentsWashing liquid (PBST); sealing fluid; antigen (1000pg/ml); anti-mouse TNF α; TMB;Avidin-HRP; 1M H2SO4.Method of operation(1) Empty out the solution in the plate and clean the plate with washing liquid for three times. Top up each hole and flap on absorbent paper to clean away the remaining liquid in each hole. Add 200μl sealing fluid in each hole and put the plate in 37℃ for 30mins.(2) Wash the plate for 3 times. Add reagents in 8 holes according to the table: (number refer to the co ncentration of antigen added, each hole is added 100μl liquid)1 2 3 4 5 6 7 831.25(this hole is antibody-free) Washingliquid31.25 62.5 125 250 500 1000Put the plate in 37℃ for 45mins.(3) Wash the plate for 3 times, add 100μl antibody in each hole, put the plate in 37℃ for 30mins.(4) Wash the plate for 3 times, add 100μl enzyme in each hole, put the plate in 37℃ for 20mins.(5) Wash the plate for 5 times, add 100μl substrate in each hole, put the plate in 37℃ for 5mins. Observe the coloration and take a picture.(6) Add 50μl 1M H2SO4 in each hole, observe the color change and take a picture.Notes:(1)All reagents shall be kept in dark place at 2-8℃.(2)Liquid feeding shall be limited at the bottom of holes instead of wall, without spillage.(3)When cleaning the plate manually, do not spill out the liquid in the holes in case that theadjacent holes pollute each other to cause false positive.(4)The results are only valid within 30mins after the termination of test.(5)Experiment wastes shall be treated as infectious samples.Discussion(1)From the result, we can see the gradient shade of coloration, which means the shade of coloration is in proportion to the concentrate of antigen. The exact shade of coloration can be detected by spectrophotometer, and be compared with the standard curve to get the concentrate value.(2)Every time when cleaning the plate, the washing liquid must be completely removed.Questions(1)Analyze the effect of impure enzyme labeled antibody to the testing result of antigen. (Double Antibody Sandwich Method)If the impurity can not be bond with antigen, it has no affect to the result; if the impurity can be bond with antigen, it will cause the result lower than the real concentrate.(2)Compare the most suitable testing objects of IFA and ELISA.IFA is used in vivo to locate a certain antigen; while ELISA is used in vitro condition to determine the presence and concentrate of a certain antigen or antibody.。
生化实验-ELISA-清华
现代生物学导论-生化实验报告-ELISA 生医9 田雪霏2009013189 （同组人：于淼）一、实验名称：酶联免疫吸附测定二、实验原理：ELISA是一种免疫测定（immunoassay，IA）。
基础:抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，由此进行定性或定量分析。
此次实验采用间接法，是检测抗体最常用的方法。
这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。
加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。
由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。
三、实验仪器和材料：1. 聚苯乙烯微量细胞培养板(平板, 96孔)。
2. 酶联免疫检测仪3. 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。
4. 包被液：0.05 mol/L 碳酸缓冲液（pH 9.6）：Na2CO30.15克,NaHCO30.293克，蒸馏水稀释至100 毫升。
5. 稀释液（PBS-Tween）：NaCl 8克,KCl 0.2克，KH2PO4 0.2克,Na2HPO4·12H2O 2.9g,Tween-20，0.5毫升，蒸馏水加至1000毫升。
6. 洗涤液：同稀释液。
7. 封闭液：0.5 % （质量分数）BSA（用PBS配制）。
8. 邻苯二胺溶液(底物)：0.1mol/L 柠檬酸(2.1克/100毫升), 取6.1毫升，0.2 mol/L Na2HPO4·12H2O (7.163克/100毫升),取6.4毫升,加蒸馏水12.5毫升,取邻苯二胺8毫克（溶解）；临用前加30 % （体积分数）H2O240 微升。
elisa实验报告结果分析
Elisa实验报告结果分析1. 引言Elisa（酶联免疫吸附实验）是一种常用于检测和定量分析生物样本中特定分子的方法。
本文旨在对实验结果进行分析，并根据分析结果得出结论。
2. 实验设计在本次实验中，我们选择了特定的生物分子作为目标，通过Elisa方法来检测样本中的该分子含量。
实验过程中，我们遵循了以下步骤： 1. 准备样本和试剂：收集样本并处理，准备所需的试剂。
2. 涂覆酶标板：将待测样本加入酶标板孔中，使样本中的目标分子与酶标板表面发生特异性结合。
3. 洗涤：去除未结合的物质。
4. 加入检测抗体：加入特异性抗体，与已结合的目标分子发生反应。
5. 加入标记物：加入标记物，用于检测目标分子的存在。
6. 洗涤：去除未结合的物质。
7. 反应底物：加入底物，观察颜色变化。
8. 停止反应：加入停止液停止反应。
9. 测量：使用酶标仪或光谱仪测量吸光度。
3. 结果分析根据实验结果，我们得到了一系列吸光度值。
下面我们将对吸光度值进行分析，并根据实验设计和已有知识得出结论。
3.1. 标准曲线分析实验中通常会使用一系列已知浓度的标准样品来构建标准曲线。
通过测量标准样品的吸光度值，我们可以绘制出标准曲线。
在实验中，我们可以使用标准曲线来确定未知样本中目标分子的浓度。
3.2. 样本浓度分析根据实验设计，我们在酶标板中加入了待测样本，并测量了其吸光度值。
通过标准曲线，我们可以将吸光度值转化为目标分子的浓度。
根据样本中目标分子的浓度，我们可以进行进一步的分析。
3.3. 结果验证为了验证实验结果的准确性和可靠性，我们可以进行重复实验或与其他方法进行比较。
此外，还可以进行质控实验来评估实验的可重复性和准确性。
4. 结论通过对Elisa实验结果的分析，我们得出以下结论： 1. 根据标准曲线分析，我们可以确定未知样本中目标分子的浓度。
2. 样本浓度分析结果显示，样本中目标分子的含量为X单位。
3. 实验结果经过验证，具有较高的准确性和可靠性。
ELISA实验报告(20200623015910)
Experime nt: ELISA (En zyme-li nked Immuno sorbe nt Assay) Date: 2016.10.17Objectives(1) Learn ELISA principle(2) Master ELISA tech no logy, qua ntitatively determ ine an tibody and an tige n.Experimental principleThe principle of ELISA is to make antigen or antibody combine to the surface of some solid phase carrier and maintain its immuno compete nee, and the n make the an tibody or an tige n to connect with some en zyme to become en zyme labeled an tige n or an tibody in which the immun ocompete nee of both an tige n or an tibody and en zyme is kept. In the determ in ati on, make the specimen to be tested and enzyme linked antigen react with the antigen or antibody on the surface of solid phase carrier follow ing differe nee procedures. Through wash ing, an tige n-an tibody complex formed on solid phase carrier and other materials are separated. Finally, adding substrate into en zyme react ion, the substrate will be catalyzed and become colored product. The amount of product has direct relation with the amount of enzyme on the solid phase carrier, in other words, the amount of the material to be tested in the specime n. Quan titative an alysis can be con ducted based on the shade of color react ion. This determ in ati on has a very high sen sitivity.ELISA can be divided into mai nly four types: the direct method, in direct method, double an tibody san dwich method and competitive in hibiti on method. Also, differe nt kinds of en zyme and substrate can be used in ELISA.Double antibody method is a kind of ELISA to determine antigen in the specimen. In this method, antibody is coated on the surface of solid phase carrier. Antigen in the sample binds with antibody on the solid phase, while other materials are washed away. Then add enzyme linked antibody to bind the antigen which are bound on the solid phase. After washing, superfluous an tibody is washed away. The substrate is the n added to produce color and the qua ntitative tests are con ducted.I YY HIV Y I I YY IVisu-al chang* in^licafEai pngsanci ofprotsinIn our experiment, we adopted double antibody sandwich method to determine mouse tumor necrosis factor alpha (TNF a ) wrtbuaraiiTNF a . The enzyme and substrate we used areAvidi n-HRP and TMB respectively.Sandwich ELISALeditedcofiiaiineif2L prataini bind to去 E HCB » wash«d4.轴讯曲 antllwdhrbindite proleinaReagents and equipment(1) Equipments40-well react ion plate coated with an ti- mouse TNF a ; liquid tran sfer gun (1ml, 200 卩 I); thermotank (37 C ).⑵ Reage ntsWashing liquid (PBST); sealing fluid; antigen (1000pg/ml); anti- mouse TNF a ; TMB; Avidin-HRP; 1M H 2SO 4.Method of operation(1) Empty out the solution in the plate and clean the plate with washing liquid for three times. Top up each hole and flap on absorbe nt paper to clea n away the rema ining liquid in each hole. Add 200l sealing fluid in each hole and put the plate in 37C for 30mins.(2) Wash the plate for 3 times. Add reage nts in 8 holes accord ing to the table: (nu mber refer to the12 3 4 5 6 7 8 31.25(this hole is antibody-free)Wash ing liquid31.2562.51252505001000Put the plate in 37 for 45mins.Observe the colorati on and take a picture.(6) Add 50 l 1M HSO 4 in each hole, observe the color change and take a picture.⑶ Wash the plate for 3 times, add 100(4) Wash the plate for 3 times, add 100(5) Wash the plate for 5 times, add 100 l antibody in eaictelpdaepioit37 C for 30mins.l enzyme in each hole, putth £pfate2i0in3i7s.Notes:(1) All reagents shall be kept in dark place at 2-8 °C .(2) Liquid feeding shall be limited at the bottom of holes instead of wall, without spillage.(3) When cleaning the plate manually, do not spill out the liquid in the holes in case that theadjacent holes pollute each other to cause false positive.(4) The results are only valid within 30mins after the termination of test.(5) Experiment wastes shall be treated as infectious samples.Discussion(1) From the result, we can see the gradient shade of coloration, which means the shade of coloration is in proportion to the concentrate of antigen. The exact shade of coloration can be detected by spectrophotometer, and be compared with the standard curve to get the concentrate value.(2) Every time when cleaning the plate, the washing liquid must be completely removed.Questions(1) Analyze the effect of impure enzyme labeled antibody to the testing result of antigen. (Double Antibody Sandwich Method)If the impurity can not be bond with antigen, it has no affect to the result; if the impurity can be bond with antigen, it will cause the result lower than the real concentrate.(2) Compare the most suitable testing objects of IFA and ELISA.IFA is used in vivo to locate a certain antigen; while ELISA is used in vitro condition to determine the presence and concentrate of a certain antigen or antibody.。
ELISA实验报告
ELISA实验报告实验目的：本实验旨在通过ELISA（酶联免疫吸附试验）技术来检测细胞培养上清液中的蛋白质含量，从而了解该细胞株的蛋白质表达水平，进一步研究相关的细胞分子机制。
实验原理：酶联免疫吸附试验是一种常用的免疫学实验方法，通过特异性抗体与待测物结合来实现对特定蛋白质的检测。
该实验主要分为三个步骤：包被抗原、特异性抗体结合和酶底物显色。
实验材料：1.待测细胞上清液2.包被抗原3.特异性抗体4.酶标记的二抗5.酶底物6.缓冲液7.清洗缓冲液8.吸光度测定仪实验步骤：1.包被抗原的处理：将抗原溶液加入微孔板孔中，使其均匀附着在孔壁上。
然后将孔中的液体弃去，用清洗缓冲液进行孔的清洗。
2.探针的结合：将待测样品加入已经包被抗原的孔中，使其与抗原结合。
然后将孔中的液体弃去，用清洗缓冲液进行孔的清洗。
3.酶标记的二抗结合：将酶标记的二抗加入已经含有特异性抗体的孔中，使其与特异性抗体结合。
然后将孔中的液体弃去，用清洗缓冲液进行孔的清洗。
4.酶底物加入：将酶底物加入到孔中，使其在酶的作用下发生显色反应。
5.吸光度测定：使用吸光度测定仪读取吸光度值，根据吸光度值可以推断待测样品中蛋白质的含量。
实验结果：经过ELISA实验，我们得到了待测细胞上清液中蛋白质的含量。
根据吸光度值和标准曲线的对照，我们可以计算出待测样品中蛋白质的浓度。
实验结论：实验分析：本次实验利用ELISA技术成功检测了待测细胞上清液中的蛋白质含量。
该方法具有高灵敏度、高特异性、操作简单等优点，可以在生物医学、生物工程等领域广泛应用。
但需要注意的是，ELISA实验在操作过程中需要严格控制实验条件，避免交叉污染和误差的产生。
实验改进：为了进一步提高实验的准确性和可靠性，可以进行以下改进：1.增加重复次数，提高数据的可靠性和稳定性；2.使用更加准确的仪器和试剂；3.对实验流程进行优化，减少操作的差异性。
总结：本次实验通过ELISA技术成功检测了待测细胞上清液中的蛋白质含量，得出了蛋白质表达水平较高的结论。
elisa酶联免疫吸附试验报告
.elisa酶联免疫吸附实验报告一．实验目的酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay 简称ELISA）是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,ELISA过程包括抗原（抗体）吸附在固相载体上称为包被，加待测抗体（抗原）, 再加相应酶标记抗体（抗原）,生成抗原（抗体）－－待测抗体（抗原）－－酶标记抗体的复合物，再与该酶的底物反应生成有色产物。
借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
二．实验原理用于免疫酶技术的酶有很多，如过氧化物酶，碱性磷酸酯酶，β－Ｄ－半乳糖苷酶，葡萄糖氧化酶，碳酸酐酶，乙酰胆碱酯酶，6－磷酸葡萄糖脱氧酶等。
常用于ELISA法的酶有辣根过氧化物酶，碱性磷酸酯酶等，其中尤以辣根过氧化物酶为多。
由于酶摧化的是氧化还原反应，在呈色后须立刻测定，否则空气中的氧化1 / 11.作用使颜色加深，无法准确地定量。
辣根过氧化物酶（HRP）是一种糖蛋白，每个分子含有一个氯化血红素（protonhemin）区作辅基。
酶的浓度和纯度常以辅基的含量表示。
氯化血红素辅基的最大吸收峰是403nm，HRP酶蛋白的最大吸收峰是275nm，所以酶的浓度和纯度计算式是（已知HRP的A（1cm 403nm 1%）＝25，式中1％指HRP百分浓度为100ml含酶蛋白1g，即10mg/ml，所以，酶浓度以mg/ml 计算是HRP的A（1cm 403nm mg/ml=2.5）HRP纯度（RZ）=A403nm/A275nm纯度RZ（Ｒeinheit Zahl）值越大说明酶内所含杂质越少。
高纯度HRP的RZ值在3.0左右，最高可达3.4。
用于ELISA检测的HRP的RZ值要求在3.0以上。
ELISA的基本原理有三条：（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性；（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此，可以按底物显色的程度显示试验结果。
elisa实验报告实验目的
elisa实验报告实验目的Title: The Purpose and Procedure of ELISA ExperimentIntroductionEnzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) is a widely used technique in the field of immunology and biochemistry. It is used to detect the presence of specific proteins, such as antibodies, antigens, and hormones, in a sample. The purpose of this experiment is to understand the principles and procedure of ELISA and to demonstrate its application in detecting a specific antigen. Materials and MethodsIn this experiment, we used a commercial ELISA kit to detect the presence of a specific antigen in a sample. The kit included microplates coated with a capture antibody specific to the antigen of interest, a detection antibody conjugated to an enzyme, a substrate solution, and a stop solution. The procedure involved several steps, including coating the microplate with the capture antibody, blocking non-specific binding sites, adding the sample and the detection antibody, washing the plate to remove unbound substances, adding the substrate solution to produce a color change, and finally stopping the reaction and measuring the absorbance at a specific wavelength.ResultsThe results of the ELISA experiment showed a significant increase in absorbance at the specific wavelength, indicating the presence of the antigen in the sample. This demonstrated the specificity and sensitivity of the ELISA technique indetecting the target protein.DiscussionELISA is a highly sensitive and specific technique that has a wide range of applications in research, clinical diagnostics, and pharmaceutical development. It is a valuable tool for detecting and quantifying proteins in biological samples. The principles of ELISA can be adapted to detect various targets, making it a versatile and widely used method in the field of biomedical sciences. ConclusionIn conclusion, the ELISA experiment successfully demonstrated the principles and procedure of this technique and its application in detecting a specific antigen. The results obtained validated the sensitivity and specificity of ELISA in detecting the target protein. This experiment provided valuable insights into the practical application of ELISA and its importance in biomedical research and diagnostics.。
elisa实验报告
elisa实验报告随着科技的发展，实验方法也在不断更新和改进。
其中，酶联免疫吸附实验（ELISA）被广泛应用于生物学及临床医学研究中。
作为一种高效的检测方法，ELISA能够检测血清、尿液、唾液、细胞提取物等生物液、物质中的特定蛋白质，被广泛应用于病毒、癌细胞、蛋白质等方面的实验研究。
在本次实验中，我们通过ELISA方法检测了病毒包膜蛋白VP1在样品中的含量。
以下是实验流程及结果。
实验步骤1. 样品制备首先，需要使用人工合成的病毒包膜蛋白VP1来准备标准物质。
将标准物质分别加入含有5% BSA的PBS缓冲液中，配置不同浓度的标准曲线样品，分别为100 ng/ml、50 ng/ml、10 ng/ml、5ng/ml和0 ng/ml。
2. 包被ELISA板将96孔ELISA板添加200 uL/well的coating buffer，放置于4℃下孵育过夜。
第二天将ELISA板洗涤3次，每次250 uL/well的PBS缓冲液，并用吸头吸干。
3. 比色反应将每个标准曲线样品和样品加入各对应孔中，分别孵育1h。
然后将ELISA板洗涤3次，每次250 uL/well的PBS缓冲液，并用吸头吸干。
添加200 uL/well的酶化抗体，并于室温下孵育1h。
接下来，将ELISA板洗涤3次，每次250 uL/well的PBS缓冲液，并用吸头吸干。
加入200 uL/well的酶标记物，并于室温下孵育1h。
将ELISA板洗涤3次，每次250 uL/well的PBS缓冲液，并用吸头吸干。
加入200 uL/well的底物，于室温下孵育30min。
随后，加入50 uL/well的终止剂，用多功能酶标仪在450 nm波长下测量各标准曲线样品的OD值。
数据处理在对比各标准曲线样品的OD值与曲线的线性函数后，将检测到的样品OD值带入曲线线性函数中，计算出其含量。
实验结果本次实验结果表明，我们成功使用ELISA方法检测出了样品中病毒包膜蛋白VP1的含量。
elisa实验报告
elisa实验报告ELISA 实验报告一、实验目的本次 ELISA 实验的目的是检测样本中特定蛋白质的含量，以评估实验对象的生理或病理状态。
二、实验原理ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种基于抗原抗体特异性结合反应的免疫测定技术。
其基本原理是将已知的抗原或抗体固定在固相载体（如聚苯乙烯微孔板）上，然后加入待检样本，使其中的待测抗原或抗体与固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
接着，加入酶标记的第二抗体（或抗原），形成抗原抗体酶标记抗体复合物。
最后，通过加入底物，酶催化底物显色，根据显色的强度来定量测定待测抗原或抗体的含量。
三、实验材料1、试剂包被缓冲液（pH 96 碳酸盐缓冲液）洗涤缓冲液（含 005% Tween 20 的 PBS 缓冲液）封闭液（含 5% 脱脂奶粉的 PBS 缓冲液）标准品（已知浓度的待测蛋白质）样本（待检测的生物样本，如血清、血浆、细胞培养上清等）酶标抗体（辣根过氧化物酶标记的特异性抗体）底物溶液（TMB 底物溶液）终止液（2 M 硫酸溶液）2、仪器酶标仪移液器（20 μL、200 μL、1000 μL）恒温箱离心机四、实验步骤（一）包被1、用包被缓冲液将捕获抗体稀释至适当浓度。
2、在聚苯乙烯微孔板中，每孔加入100 μL 稀释后的捕获抗体，4℃过夜包被。
（二）洗涤1、次日，弃去孔内液体，每孔加入300 μL 洗涤缓冲液，浸泡 3 分钟，然后弃去洗涤液，重复洗涤 3 次。
1、每孔加入200 μL 封闭液，37℃孵育 1 小时。
（四）加样1、弃去封闭液，洗涤 3 次。
2、将标准品和样本用稀释液稀释至适当浓度。
3、向孔中分别加入100 μL 标准品和样本，空白对照孔只加稀释液，37℃孵育 1 小时。
（五）洗涤同步骤（二）。
（六）加酶标抗体1、每孔加入100 μL 酶标抗体，37℃孵育 1 小时。
（七）洗涤同步骤（二）。
（八）显色1、每孔加入100 μL 底物溶液，37℃避光孵育 15 30 分钟，直至空白对照孔颜色不再加深。
ELISA实验报告
酶联免疫吸附测定实验报告ELISA一实验原理酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,简称ELISA是在免疫酶技术（immunoenzymatic techniques）的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术。
ELISA过程包括：抗原（抗体）吸附在固相载体上——包被,加待测抗体（抗原）,加相应酶标记抗体（抗原）, 生成抗原（抗体）-待测抗体（抗原）-酶标记抗体的复合物,在于该酶的底物反应生成有色产物。
然后借助分光光度计的光吸收计算抗体（抗原）的量。
待测抗体（抗原）的定量与有色产生成正比。
ELISA常用的有4种方法，分别是直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法。
在我们的实验中,采用的是间接法。
主要步骤有：将抗原吸附于固相载体表面；加抗体,形成抗原-抗体复合物；加酶标抗体；加底物（测定底物的降解量=抗体量）。
二实验用品及器具1 聚苯乙烯微量细胞培养板（平板, 96 孔）2 酶联免疫检测仪3 辣根过氧化物酶羊抗兔IgG4 包被液0.05mol/L 碳酸缓冲液（pH 9.6）Na2CO3 0.15gNaHCO3 0.293g蒸馏水稀释至100mL5 稀释液（PBS-Tween）NaCl 8gKCl 0.2gKH2PO4 0.2gNa2HPO4 • 1OH2O 2.9g6 Tween-20,0.5mL蒸馏水加至1000mL7洗涤液：同稀释液8封闭液：质量分数为0.5%的BSA用PBS配制）9邻苯二胺溶液（底物）配置：0.1mol/L 柠檬酸（2.1g/100ml），取6.1ml0.2mol/L Na z HPQ • 12H20（7.163g/100ml），取6.4ml加蒸馏水12.5ml取邻苯二胺8mg（溶解）临用前加30%（体积分数）^0240卩L10 终止液：2mol/L H2SO4三实验步骤1在培养板的B2-B10、C2-C10 D2-D10号的well中分别加入0.025mg/ml的含Human IgG的包被液各200卩L,在37C的环境中存放30min2取出培养板，将包被液倒出，用PBS-T洗涤三次，每次每格200卩L3洗涤之后加入含0.5%BSA的PBS封闭液），每格200卩L,在37C的环境中存放30mim4取出培养板，将封闭液倒出，用PBS-T洗涤三次，每次每格200卩L5 将浓度为1:400 的Rabbit- a -human IgG antiserum 溶液（一抗）稀释为浓度为1:800、1:1600、1:3200、1:6400、1:12800、1:25600、1:51200 的溶液，一次加入B2-B9、C2-C9 D2-D9，每格200卩L,在B11、C11、D11中加入1:400的溶液200卩L,在37 C的环境中存放1h6取出培养板，将溶液倒出，用PBS-T洗涤三次，每次每格200卩L7 在B2-B11、C2-C11、D2-D11 中分别加入Goat- a -rabbit IgG-HRP（浓度为1:20000）溶液（二抗）,每格200卩L,在37 C的环境中存放30min8取出培养板，将溶液倒出，用PBS-T洗涤三次，每次每格200卩L9每格加入200卩L邻苯二胺溶液进行反应，约5min后加入终止液（2mol/L的H2SQ溶液）10将培养板放入酶联免疫检测仪内进行分析，得出数据数据图表如下：（从图表中可以看出，在1:400到1:51200浓度的范围内，数据基本上是呈线性变化的）由图线可知，在误差范围内，吸光度与被检血清浓度接近正比关系。
ELISA实验报告(两篇)
引言概述:ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种常用于测定抗体或抗原的定量和定性的快速、敏感和特异性的实验技术。
本文将继续讨论ELISA实验的一些重要内容，包括实验操作步骤、控制样品的使用、结果分析和解释。
通过深入了解这些实验细节，我们可以更好地理解ELISA的原理和应用。
正文内容:一. 实验操作步骤1. 准备样品和标准曲线- 收集所需的样品，可以是血清、尿液或细胞上清等。
- 确定需要测定的抗体或抗原，并准备相应的标准曲线。
2. 处理样品- 样品处理包括离心、稀释或加热等步骤，以去除可能干扰测定的物质。
3. 准备实验板- 将酶标板预先涂覆上抗体或抗原，然后用非特异性蛋白质阻断剂进行阻断。
4. 加入样品和标准曲线- 将处理后的样品和标准曲线加入预先涂覆抗体或抗原的孔中。
5. 孔洗涤和加入检测抗体- 通过洗涤孔来去除非特异性结合物质。
- 加入检测抗体，它可以是与标准曲线中的抗体相同的抗体或与待测物质结合的抗体。
6. 孔洗涤和加入底物- 通过洗涤孔来去除未结合的检测抗体。
- 加入底物，它会与酶结合并产生可测定的信号。
7. 信号检测和结果记录- 使用酶标仪测量底物的反应产物生成的光信号。
- 将光信号与标准曲线进行比较，得出待测样品中目标物质的含量。
二. 控制样品的使用1. 阳性对照样品- 阳性对照样品是已知含有目标抗体或抗原的样品，用于验证实验的准确性和可靠性。
2. 阴性对照样品- 阴性对照样品是未含目标抗体或抗原的样品，用于确定实验的特异性。
3. 反应性对照样品- 反应性对照样品是含有不同浓度目标抗体或抗原的样品，用于绘制标准曲线并进行定量测定。
4. 标准曲线的制备- 使用已知浓度的标准样品制备标准曲线，该曲线用于将光信号转换为目标物质的定量结果。
5. 控制实验条件- 控制实验条件，包括温度、时间和洗涤次数等，以确保实验的可重复性和可比性。
三. 结果分析1. 原始数据处理- 使用酶标仪测量的吸光度值为原始数据，在计算吸光度值之前，需要进行空白校正和标准曲线外推。
elisa测抗原实验报告范文
elisa测抗原实验报告范文标题：Elisa测抗原实验报告摘要：本实验采用酶联免疫吸附实验（Elisa）方法，对抗原进行测定。
通过建立适当的实验步骤和计算公式，成功测定出样品中抗原的含量。
实验结果表明，Elisa方法具有高灵敏度、高特异性和高重复性，可广泛应用于抗原检测领域。
1.引言抗原是指能被免疫系统识别并产生免疫反应的物质。
在临床诊断、药物研发和疫苗制备等领域，对抗原进行准确测定具有重要意义。
Elisa作为一种敏感、特异性强的检测手段，被广泛应用于抗原检测领域。
2.材料和方法2.1实验材料-微孔板：含有96个孔。
-标准溶液：含有不同浓度的抗原溶液。
-样品溶液：待测抗原的溶液。
- Elisa试剂盒：包含酶标板、标准物质、免疫酶标试剂、洗涤缓冲液、底物A和底物B、停止液等。
- ELISA Reader：用于测量发光强度。
2.2实验方法1)预处理：将标准溶液和样品溶液分别稀释至合适浓度。
2)反应孔板：用吸管将酶标板的底液抽去，然后加入标准物质和样品溶液，分别加入2个孔，每个孔加入100μl。
3)加入试剂：依次加入免疫酶标试剂、底物A和底物B，每个孔加入100μl。
4)理化吸光：在37℃下孵育30分钟，然后用洗涤缓冲液洗涤孔板，最后加入停止液停止反应。
5) 测量发光：将孔板放入ELISA Reader中，测量各孔的发光强度。
6)构建标准曲线：根据标准物质的浓度和吸光值构建标准曲线。
7)计算样品抗原含量：根据样品的吸光值在标准曲线上查找浓度，进而计算出样品中抗原的含量。
3.结果与讨论3.1标准曲线通过对标准物质吸光值的测定，得到了标准曲线的数据，并使用线性拟合法进行了拟合。
标准曲线呈现出良好的线性关系，拟合方程为Y=0.012X+0.234（X为浓度，Y为吸光值）。
3.2样品测定将样品溶液加入反应孔板，并按照实验方法进行测定，得到了样品的吸光值。
将样品吸光值代入标准曲线方程，计算得到样品中抗原的含量为XXμg/ml。
elisa实验报告
elisa实验报告Elisa实验报告。
实验目的，通过Elisa实验，检测血清中特定抗体的含量，从而了解免疫反应的情况。
实验原理，Elisa（酶联免疫吸附测定）是一种通过酶标记抗体与待测物相互作用，再用底物显色的方法进行检测的免疫学实验。
在实验中，待测物会与特定抗体结合，形成抗原-抗体复合物，然后通过酶标记的二抗结合复合物，最终通过底物显色来检测抗体的含量。
实验步骤：1. 吸附，将特定抗体吸附在微孔板上；2. 阻断，用蛋白质溶液阻断未结合的吸附位点；3. 反应，加入待测样品，待样品中的抗原与吸附的抗体结合；4. 洗涤，去除未结合的物质；5. 二抗结合，加入酶标记的二抗，与抗原-抗体复合物结合；6. 洗涤，去除未结合的二抗；7. 显色，加入底物，观察颜色变化；8. 停止反应，加入停止液，停止底物的反应。
实验结果分析，根据实验结果的光密度值，可以计算出样品中特定抗体的含量。
光密度值越高，抗体含量越高。
实验应用，Elisa实验可以应用于临床医学、生物学研究等领域，用于检测病毒、细菌感染，肿瘤标志物等。
实验注意事项：1. 实验操作要严格按照操作规程进行，避免交叉污染；2. 应使用高质量的试剂和耗材，避免实验结果的误差；3. 实验过程中要注意洗涤的次数和充分洗涤，以避免干扰物的影响；4. 应根据实验目的选择合适的Elisa试剂盒和标准曲线，以确保实验结果的准确性。
结论，Elisa实验是一种准确、灵敏的免疫学实验方法，可以用于检测血清中特定抗体的含量，对于疾病诊断和生物学研究具有重要意义。
通过本次实验，我们成功检测出样品中特定抗体的含量，为进一步的研究和临床应用提供了可靠的数据支持。
希望本实验结果能对相关领域的研究和实践提供有益的参考。
elisa实验报告
elisa实验报告Elisa实验报告。
实验目的，通过elisa实验，检测血清中特定蛋白的含量，为疾病的诊断和治疗提供依据。
实验原理，elisa是一种免疫学检测方法，通过抗原与抗体的特异性结合来检测特定蛋白的含量。
在实验中，首先将待检测的标本加入到包被有特定抗原的微孔板中，然后加入特异性的酶标记的抗体，再加入底物，最后通过酶反应产生的色素来测定蛋白的含量。
实验步骤：1. 准备工作，将所需试剂和标本取出，并标记清楚。
2. 包被抗原，将包被抗原加入到微孔板中，并在4℃下孵育一夜。
3. 洗板，将洗板缓冲液加入到微孔板中，用洗板机洗涤，重复3次。
4. 加样本，将待检测的标本加入到微孔板中，孵育一定时间后洗涤。
5. 加抗体，加入特异性的酶标记的抗体，孵育一定时间后洗涤。
6. 加底物，加入底物，孵育一定时间后停止反应。
7. 测定，用酶标仪测定吸光度，计算出蛋白的含量。
实验结果，根据实验数据，我们成功检测出待测蛋白的含量，得出了相应的浓度曲线和标准曲线。
通过比对标准曲线，我们可以准确地计算出待测样本中蛋白的含量。
实验分析，elisa实验是一种高灵敏度、高特异性的检测方法，能够快速、准确地检测出待测蛋白的含量。
通过该实验，我们可以为临床诊断提供重要的参考依据，也为疾病的治疗和预后评估提供了重要的实验数据。
实验总结，通过本次elisa实验，我们深入了解了该实验的原理和操作步骤，掌握了一种重要的蛋白检测方法。
在未来的实验中，我们将进一步应用elisa技术，开展更多的生物学研究和临床诊断工作。
结语，elisa实验作为一种重要的生物学实验方法，对于科研工作者和临床医生来说具有重要的意义。
通过不断地学习和实践，我们将能够更好地应用elisa技术，为人类健康事业做出更大的贡献。
elisa测抗原实验报告范文
elisa测抗原实验报告范文实验报告：Elisa测抗原实验一、引言：ELISA（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）即酶联免疫吸附试验，是用于在体外检测抗原或抗体的一种常用技术。
在本实验中，我们将通过Elisa测定血清中特定抗原的含量。
二、实验目的：1. 掌握Elisa的原理和操作步骤；2. 学习使用Elisa测定血清中抗原的含量；3.分析实验结果并进行正确解读。
三、实验材料和方法：1.实验所需材料：抗原样本、酶标板、洗涤缓冲液、稀释液、酶复合物、底物、终止液；2.实验步骤：（1）将抗原样本添加到酶标板孔中；（2）孔内孵育，使抗原与吸附在孔内的特异抗体结合；（3）将孔中的物质全部倒掉，然后用洗涤缓冲液洗涤酶标板；（4）加入酶复合物，使其结合于抗原分子上；（5）加入底物，激活酶复合物，产生色变；（6）用终止液终止反应，并测定吸光度值；（7）根据标准曲线，计算出样品中抗原的含量。
四、实验结果与分析：我们测量了一系列不同浓度的抗原样本并制作了标准曲线。
通过比对各组样品的吸光度值，我们可以确定抗原的含量。
表1：抗原浓度与吸光度值的关系抗原浓度（μg/ml）吸光度值0.0 0.0450.5 0.1631.0 0.3182.0 0.6654.0 1.2038.0 1.874[在此插入标准曲线图]由于抗原浓度与吸光度值之间呈正相关关系，我们可以通过拟合曲线来计算未知样品中抗原的含量。
五、讨论与总结：通过本实验，我们成功地使用Elisa测定了未知样品中抗原的含量。
然而，实验过程中也存在一些潜在的误差和限制。
首先，Elisa测定的结果受许多因素影响，如温度、洗涤步骤中的操作技巧等。
因此，在进行实验时，需要保持实验环境的恒定和操作的准确性。
其次，标准曲线的制作在一些特定情况下可能存在困难，比如当抗原样本的浓度过低或过高时，或者当抗原的结构性质发生改变时。
因此，在实验前需进行相关的预处理步骤，以保证结果的准确性。
elisa双抗体夹心法实验报告
elisa双抗体夹心法实验报告Elisa双抗体夹心法实验报告引言：Elisa（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）是一种常用的免疫学实验技术，广泛应用于生物医学研究和临床诊断。
本实验旨在通过Elisa双抗体夹心法检测特定抗原的存在与浓度。
本文将详细介绍实验的步骤、原理和结果分析。
实验步骤：1. 准备样品：收集待测物质样品，如血清或细胞上清液，并进行必要的预处理，如离心、稀释等。
2. 涂布抗体：将特异性抗原抗体溶液均匀涂布在微孔板的孔底，使其吸附在固相上。
3. 阻断：加入适量的阻断剂（如牛血清蛋白）封闭孔底未被抗体吸附的部分，以防止非特异性结合。
4. 样品加入：将处理好的样品加入微孔板中，与固相上的抗体发生特异性结合。
5. 洗涤：用洗涤缓冲液多次洗涤微孔板，去除未结合的物质。
6. 检测抗体：加入与待测物质特异性结合的检测抗体，形成夹心复合物。
7. 二抗结合：加入与检测抗体结合的酶标记二抗，形成二抗-检测抗体-待测物质的三重夹心复合物。
8. 底物添加：加入底物溶液，使酶标记二抗催化底物发生显色反应。
9. 反应终止：加入反应终止液，停止底物的反应。
10. 读取结果：使用酶标仪测量吸光度值，根据标准曲线计算待测物质的浓度。
实验原理：Elisa双抗体夹心法基于特异性抗原抗体的结合反应，通过将待测物质夹在两个特异性抗体之间，实现对待测物质的定量检测。
该方法的关键在于使用两个不同特异性的抗体，一个用于固定在微孔板上，另一个用于检测抗体结合。
在实验过程中，首先将特异性抗原抗体固定在微孔板上，形成固相。
然后加入待测物质样品，样品中的特定抗原与固相上的抗体发生特异性结合。
接着，加入检测抗体，该抗体与待测物质上的特异抗原结合。
最后，加入酶标记的二抗，该二抗与检测抗体结合，形成夹心复合物。
通过加入底物和反应终止液，可以测量底物反应产生的吸光度值，从而计算待测物质的浓度。
结果分析：根据实验结果，通过测量吸光度值，可以得到待测物质的浓度。
Elisa实验报告
Elisa实验报告一、引言二、材料与方法1.样品制备：收集目标蛋白样品，将其加入适当的缓冲液中，并离心去除杂质。
2.准备试剂和工具：包括抗原涂板、试剂盒、显色底物、酶标仪等。
3. Elisa过程：a.将样品加入抗原涂板中，与涂板表面的抗体结合。
b.洗涤抗原涂板，除去未结合的物质。
c.加入检测抗体，与样品中的抗原结合。
d.再次洗涤抗原涂板，除去未结合的物质。
e.加入显色底物，使反应物质变色。
f.结束反应后，使用酶标仪测量样品的吸光度。
三、结果与讨论1.实验结果：根据测量的吸光度值，计算出目标蛋白质的浓度。
2.数据处理：使用相关软件或公式对实验结果进行数据处理和统计分析。
四、结论通过Elisa方法，成功检测并定量了目标蛋白质的含量。
实验结果表明该方法可用于快速、准确地检测目标蛋白质，具有较高的灵敏度和特异性。
然而，实验中可能存在的误差需要进一步探究和改进，以提高实验结果的准确性和可靠性。
五、实验改进建议1.优化样品准备过程，确保样品中的目标蛋白质不受污染或降解。
2.优化抗原涂板的选择和处理，以提高抗原与抗体的结合效率和稳定性。
3.准确定量样品的吸光度值，增加测量几组数据以降低实验误差。
4.定期校准酶标仪，确保测量结果的准确性和可重复性。
六、总结Elisa实验是一种常用于检测目标蛋白质含量的方法，通过酶作为报告信号，实现了定量性分析。
本实验通过Elisa方法成功检测到目标蛋白质，并完成了浓度的定量分析。
然而，实验中还存在一些潜在误差，需要进一步改进和优化实验方法。
我们相信通过不断的实验改进和优化，Elisa方法将在临床和科研应用中发挥更大的作用。
ELISA酶联免疫吸附试验报告
大学实验报告酶联免疫吸附试验学院：专业：姓名：学号：一．实验原理酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种用酶标记抗原或抗体的方法，此法是将抗原、抗体免疫反应的特异性和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的技术，可敏感地检测体液中微量的特异性抗原或抗体。
基本原理如下：①先使用抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性；②使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或酶标抗体，这种酶标抗原或酶标抗体即保留了其免疫活性，又保留了酶活性；③试验时，把受检标本（抗体或抗原）和酶标抗原或酶标抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，用洗涤法去除固相载体上的游离物质，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的多少有关。
当加入酶反应的底物后，底物被酶催化而产生有色物质。
颜色反应深浅与受检抗原或抗体的量成正比。
因此，可借助颜色反应的深浅来定性、定量抗体或抗原。
本技术的特点是敏感性高，特异性强，操作简易，结果容易观察。
图1 ELISA实验原理示意图二．实验材料BSA抗原、兔抗BSA抗体（一抗，分别用PBS稀释成1:2, 1:4, 1:16, 1:32, 1:64, 1:128, 1:256七个浓度）、酶标羊抗兔IgG（二抗）、0.05M PH9.6碳酸盐包被缓冲液、洗涤液（PBS）、底物溶液、2mol/L H2SO4。
三．实验方法1.包被板的处理：加BSA（包被缓冲液稀释为10μg/ml）至酶标板中，每孔100μl，置湿盒中4℃过夜。
第二天取出，用PBS洗涤3-4次。
2.取包被好的酶标板，在第一孔中加入100μl PBS作阴性对照，在第2-8孔加入上述稀释的一抗各100μl，置37℃保温1h。
3.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入二抗各100μl，置37℃保温30min。
4.倾去液体，用PBS洗涤3-4次后加入底物溶液各100μl，在暗处37℃避光显色20min，最后加入50μl、2M H2SO4终止反应。
5.在波长490nm处，测定各孔的光密度吸收值。
elisa实验报告
elisa实验报告Elisa实验报告引言Elisa（酶联免疫吸附测定）是一种常用的实验方法，用于检测和测量样本中特定蛋白质的存在和浓度。
本实验旨在通过Elisa方法检测血清中的特定抗体，以了解免疫系统的功能和疾病的发展。
实验步骤1. 样本准备：收集一定数量的血清样本，并将其离心以分离血浆。
血浆中含有丰富的抗体，用于检测特定蛋白质的存在。
2. 酶标板涂覆：将特定抗原溶液均匀涂覆在酶标板的孔中，并在低温下孵育一段时间，使抗原充分吸附在酶标板表面。
3. 样本加入：将待测血清样本加入到酶标板的孔中，使样本中的抗体与酶标板上的抗原结合。
4. 洗涤：使用缓冲液洗涤酶标板，去除未结合的物质。
5. 酶标记抗体加入：加入与待测抗体特异性结合的酶标记抗体，使其与待测抗体结合。
6. 洗涤：再次使用缓冲液洗涤酶标板，去除未结合的酶标记抗体。
7. 底物加入：加入底物溶液，使其与酶结合，产生可测量的光学信号。
8. 反应停止：加入反应停止剂，停止底物的反应，并阻止进一步的颜色发展。
9. 测量：使用酶标仪测量酶标板中的吸光度，得到与抗体浓度相关的信号。
结果与讨论通过Elisa实验，我们可以得到血清样本中特定抗体的存在与否以及浓度的信息。
根据实验结果，我们可以进一步了解免疫系统的功能和疾病的发展。
在本实验中，我们以某种疾病的抗体为例，对血清样本进行Elisa检测。
通过与正常血清样本的对比，我们可以判断该疾病是否存在，并根据抗体浓度的高低评估疾病的严重程度。
实验中，样本准备是非常关键的一步。
血清样本的收集和离心过程需要严格控制，以确保样本的纯净度和稳定性。
如果样本受到污染或不完全离心，可能会导致实验结果的误差。
酶标板涂覆和洗涤步骤也需要仔细操作。
涂覆抗原的过程需要均匀且适量，以确保抗原充分吸附在酶标板表面。
洗涤步骤的目的是去除未结合的物质，避免干扰实验结果。
在酶标记抗体加入的步骤中，选择特异性较好的酶标记抗体非常重要。
如果酶标记抗体与待测抗体结合不紧密或选择不当，可能会导致实验结果的误差。
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Elisa实验报告
实验名称：
酶联免疫吸附剂测定
实验原理：
酶联免疫吸附测定是一种免疫测定技术。
测定中，先使抗原吸附在固相载体上，然后加待测的抗体，再用某种酶标记抗体，形成抗原-抗体-酶标记抗体的“双抗体夹心”，此时酶仍保有活性，同时标记抗体亦有免疫活性。
之后再加入酶的底物，在酶的催化下产生反应并产生有色物，颜色深浅与待测物质的量直接相关。
至此，酶的催化放大作用与免疫反应的特异性相完美结合，提高了测定的准确性与灵敏度。
实验材料与试剂：
1．聚苯乙烯微量细胞培养板(平板, 96孔)。
2．酶联免疫检测仪。
3．辣根过氧化物酶羊抗兔IgG。
4．包被液：0.05 mol/L 碳酸缓冲液（pH 9.6）：
Na2CO3 0.15g,
NaHCO3 0.293g，
蒸馏水稀释至100 ml。
5．稀释液（PBS-Tween）：
NaCl 8g,
KCl 0.2g，
KH2PO4 0.2g,
Na2HPO4·12H2O 2.9g,
Tween-20，0.5ml，
蒸馏水加至1000ml。
6．洗涤液：同稀释液。
7．封闭液：0.5 % （质量分数）BSA（用PBS配制）。
8．邻苯二胺溶液(底物)：
配制：
0.1 mol/L 柠檬酸(2.1g/100ml), 取6.1ml，
0.2 mol/L Na2HPO4·12H2O (7.163g/100ml),取6.4ml,
加蒸馏水12.5ml,
取邻苯二胺8mg（溶解）；
临用前加30 % （体积分数）H2O2 40μl。
9．终止液：2 mol/L H2SO4。
实验步骤：
１．包被抗原：用包被液将抗原作适当稀释, 一般为1~10μg/孔，每孔加200μl, 37 ℃温育30min。
２．洗涤：倒尽板孔中液体，加200μl洗涤液，反复三次，最后将反应板倒置在吸水纸上，使孔中洗涤液流尽。
３．加封闭液200μl，37 ℃温育30min。
４．洗涤同2。
５．加被检血清：用稀释液将被检血清作几种稀释，每孔200μl。
同时作稀释液对照。
37 ℃温育30min。
６．洗涤同2。
７．加辣根过氧化物酶羊抗兔IgG, 每孔200μl, 37 ℃温育30min。
８．洗涤同2。
９．加底物：邻苯二胺溶液加200μl，室温暗处5min。
１０．加终止液：每孔50μl。
１１．观察结果：用酶联免疫检测仪记录OD490nm读数。
实验结果
数据如下：
P.S:紫色数据表示异常
实验讨论：
1无一抗（10）数据值存在异常。
理论上应趋近于零。
可能是由于受污染所致
实验现象比较清晰，随浓度由浓到稀，颜色由深黄渐变为浅黄。
2线性关系比较明显。
但斜率随浓度减小而有所增大。
这可能是在使用取液器时有气泡混入，导致实际浓度低于理论上的浓度。
3组号（2）（4）（5）中3个样本数据差别较大，可能是因为配血清时混合不够均匀所致。
这个实验采用了间接法测定，利用酶的催化放大作用提高了检测的灵敏度。
作为一名精仪系的学生，这给予我的启示就是，在直接测量精度如果遇到瓶颈时，没有合适的方法提高精度，那么可以考虑寻找一个“中介”，而这个“中介”应该具有“在变量产生微小变化时能放大这种变化，或者用另一种形式体现这种变化”的特性，从而测量变得可行。
而该实验中，最终效果就是我们可以直接通过颜色深浅大致看出浓度的不同。
这一点很值得思考。
另外由于操作不熟练、不仔细，也带来了一些粗大误差，如无一抗（10）。
这是我们实验中应该避免的。