斑马鱼性腺促熟及早期发育模式
斑马鱼性腺促熟及早期发育模式
年月日姓名：专业年级：同组者科目：发育生物学实验题目：斑马鱼性腺促熟及早期发育模式一【目的要求】1、通过实验操作掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术2、通过斑马鱼早期发育的观察，巩固对硬骨鱼胚胎发生的认识二【实验材料】（一）器材培养缸、控温棒、解剖镜、显微镜(二)试剂经太阳晒过至少一天的自来水（三）动物斑马鱼（Danio sp.）三【实验内容】（一）亲鱼培育和性腺促熟挑选体长大于4厘米的斑马鱼放养于鱼缸中，水温保持在28℃左右，放养数量根据鱼缸中水体体积而定，密度5尾\L左右。
饲喂亲鱼用的饲料有活性饲料和配合饲料两种，直接购自于观赏鱼市场，要求每天投喂4次，及时清除残饵，隔天换水，快到繁殖季节时将雌雄分养，加强管理。
（三）繁殖繁殖前一天中午，将雌雄合养于繁殖缸里，要求雌雄比例为2:1。
由于斑马鱼有食卵的习性，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔为2-3毫米的网将亲鱼限制在繁殖缸的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。
一般次日凌晨到中午可以产卵和受精，受精卵便沉降于缸底，将繁殖后的亲鱼及时转移至别的培养缸中，吸取缸底受精卵，剔除异物以及眼观有白色小斑点、畸形异常卵。
（三）斑马鱼胚胎发育模式孵化期间，培养用水温度控制在25-28℃，每天要及时清除败育卵，并换水1-2次。
按时观察记录斑马鱼胚胎的早期发育过程，绘制斑马鱼的胚胎发育模式图。
1、受精卵：斑马鱼的卵呈圆球形，橙黄色、微透明，直径0.8-0.9 mm。
在水中，受精卵卵膜(壳膜)迅速膨胀，出现透明的卵周隙，在壳膜上可以看到呈漏斗状的卵膜孔。
2、卵裂：卵子受精后，细胞质迅速向动物极流动，并集中形成帽状的胚盘。
卵裂即在胚盘范围内进行，卵裂属于不全裂，盘状卵裂。
第一次分裂为经裂，分裂沟自上而下，但不到达底部，结果分为两个相等的不完整分裂球。
第二次分裂仍为经裂，分裂面与第一次垂直，仍是不完全分裂，于是分成大小相似的四个分裂球。
第三次分裂亦为经裂，两个分裂面在第一次分裂面两侧，并与第一次分裂面平行，形成两排，每排四个，共八个分裂球。
实验模式动物--斑马鱼
Chuck Kimmel
3
斑马鱼作为模式动物逐渐受到关注 Turn Eyes to Fish
• Christiane Nü sslein-Volhard
Wolfgang Driever
• 1995 诺贝尔奖获得者
was able to identify and classify a small number of genes that are of key importance in determining the body plan and the formation of body segments, turned eyes to fish and find a wide range of mutations
20
2.方法：实验前一天禁食。取成体斑马鱼分别臵 于含有30~ 50mL溶液的瓶中, 保持瓶中溶液温 度恒定在25℃，随机分为空白对照, 溶剂对照及 各药物浓度给药组, 每组含15条。分别给予纯净 水, 含不同浓度药物的纯净水。
记录不同浓度药液中斑马鱼在24h内的死亡数量 (只), 计算死亡率(% )。根据实验结果, 采用Bliss 法计算LC50值。
21
3.结果：雷公藤甲素、苦参碱和大黄素对于斑马 鱼的LC50值依次为5.02 x10-3、113.2和1.18 x103 ug /mL, 毒性大小顺序与12
心脏切除后心室肌的再生
Regeneration of ventricular myocardium in the resected zebrafish heart
13 DECEMBER 2002 VOL 298 SCIENCE
13
斑马鱼在药物评价中的应用
1.一般毒性评价 2.发育毒性评价 3.心血管毒性评价 4.肝脏毒性评价 5.神经毒性评价 6.肾毒性评价 7.肠胃毒性评价 8.视觉毒性评价 9.耳毒性评价 10.软骨毒性评价
关于斑马鱼的发育历程课件
合子期 卵裂期 囊胚期 原肠期 早幼期 孵化期 咽囊期 体节期
合子期（0-0.75h）
新受精的卵子直至其第一次卵裂发生，称合子期（图3），约受精后 40分钟。受精时形成的合子直径约0.7mm。合子期只含有一个分期， 但其间也发生很多变化，可以很容易划分这一时期（见 Hisaoka and Battle,1958）。
=250μm
束 时 卵 黄 消 失 处 。 比 例 尺
头 示 尾 芽 ， 尾 芽 腹 侧 （ 即 此 图 左 侧 ） 的 显 著 区 域 显 示 外 包 结
9h 10h
J 90%K 90%L
C
F 70%75%-
8.4h
G
） 增 大 为 小 膨 出 （箭头所示）； ；： ： 尾 芽 期 （ 外包期腹
侧 ）观 ，， 箭前 头侧 示脊 小索 膨前 出板 ，（ 短对 箭比
层期 在（ 其 一 侧） ；背 ： 侧观
， 外包期（ 箭头示轴中 ），在一些胚胎中可见尾芽 胚层与中线边界，近轴中胚
5.7h
H I 80%-
8h
； 外： 包 期（ 外包 ）， 期（ 箭 头示腹 ）， 侧： 薄 的 排外 泄包 区ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ；腹 ： 侧观
内卷运动的开始意味着原肠期的开始，目前可以说是发生于50%-外包时（图 11A）。结果在达到50%-外包后的数分钟内出现了一个增厚的外围区域，称作 胚环（germ ring），几乎与此同时完全包围了囊胚边缘（图11B，及C箭头所 指）。随后集合运动几乎同样快速地沿胚环产生一个局部的堆积，称胚盾（ embryonic shield , 图11D，及E箭头所指）。在发生这些事件期间，外包暂 时中止，但胚盾形成后外包又继续。胚层边缘沿卵黄细胞延伸直至将其完全 包绕（图11F-L）。其延伸近乎恒定速度进行，约每小时包绕卵黄细胞的15% ，这也提供了大部分原肠期分期的有用指标（图12）。
斑马鱼的发育历程ppt课件
内卷运动的开始意味着原肠期的开始，目前可以说是发生于50%-外包时（图 11A）。结果在达到50%-外包后的数分钟内出现了一个增厚的外围区域，称作 胚环（germ ring），几乎与此同时完全包围了囊胚边缘（图11B，及C箭头所 指）。随后集合运动几乎同样快速地沿胚环产生一个局部的堆积，称胚盾（ embryonic shield , 图11D，及E箭头所指）。在发生这些事件期间，外包暂 时中止，但胚盾形成后外包又继续。胚层边缘沿卵黄细胞延伸直至将其完全 包绕（图11F-L）。其延伸近乎恒定速度进行，约每小时包绕卵黄细胞的15% ，这也提供了大部分原肠期分期的有用指标（图12）。
1.25 h）；D：16-细胞期(1.5 h)；E：32-细胞期（1.75 h）；F：64-细胞期（
2 h）。比例尺=250μm
ppt课件
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囊胚期（2.25-5.25h）
囊胚期指从128-细胞期或第8次止这一段时期。此期
有 很 多 重 要 事 件 发 生 ： 胚 胎 进 入 囊 胚 中 期 转 变 （ midblastula transition, MBT）、卵黄合胞体层（the yolk syncytial layer, YSL）形 成、外包（epiboly）开始。外包将一直持续到原肠期。
）
C
F 70%8h
5.25h B
A 50%-
体节期（10-24h）
此期发生了一些有趣的形态学变化：体节发生、器官原基可见、尾芽 更为显著、胚体延长（图15）、AP和DV轴变得明确、第一次出现细 胞发生形态分化以及胚体开始运动。此期可称“尾芽期”，因为在此 整个时期，尾芽一直存在于不断伸长的胚轴末端。
ppt课件
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囊胚期胚胎正面观。A：256-细胞期（2.5h）；B：高囊胚期（3.3h）；C：高
斑马鱼在发育生物学中的研究进展
斑马鱼在发育生物学中的研究进展斑马鱼（Danio rerio）是一种常见的小型热带淡水鱼类，也是一种重要的生物模型，因为它们易于繁殖和维护，具有透明胚胎，容易观察和操纵发育过程的特点。
在过去的几十年里，许多生物学家使用斑马鱼进行发育生物学研究，探寻分子机制、细胞过程、组织发生、器官形成和行为等方面的问题。
本文将介绍斑马鱼在发育生物学中的研究进展及其应用。
1. 斑马鱼的发育过程斑马鱼的发育过程可分为四个主要阶段：受精、分裂、胚胎发育和幼鱼期。
受精后，卵细胞形成受精卵，随后通过有丝分裂发育成为多个细胞，其中包括前期胚胎、球胚和盘胚。
在这些早期阶段，斑马鱼的胚胎透明，发育过程可以通过显微镜直接观察。
在幼鱼期，斑马鱼游泳、摄食和生长，逐渐成为成年鱼。
2. 斑马鱼的发育成因对于斑马鱼的发育成因的研究可以通过突变体筛选、遗传分析、基因克隆等方法进行。
许多突变体显示了不同的发育缺陷，例如胃肠道畸形、神经系统缺陷、鳍/肢体畸形等。
通过对这些突变体的遗传分析和基因克隆，科学家发现了很多与斑马鱼发育相关的基因，如sonic hedgehog、hox等。
另外，近年来，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，科学家可以精确地改变斑马鱼基因组中的某些位点，以研究特定基因功能或疾病模型等方面的问题。
这种方法加速了斑马鱼发育生物学的研究和应用。
3. 斑马鱼的组织和器官形成斑马鱼的器官发生过程是发育生物学的热点研究之一。
在胚胎发育过程中，骨骼、肌肉、心脏、肝脏、胰腺等组织和器官的形成令人印象深刻。
例如，斑马鱼心脏的发育非常相似于人类的心脏发育过程。
斑马鱼心脏发育的详细解剖和功能特征使得我们可以更好地理解人类心脏疾病，包括先天性心脏缺陷和心肌病等。
在肌肉结构和功能方面，斑马鱼是一种适应游泳的生物模型。
它们的鱼体非常透明，我们可以观察和操纵它们的鱼肌和鱼晶体肌的发育和生理功能。
研究斑马鱼肌肉发育和运动调节机制有助于解决人类运动性疾病诊断和治疗的问题。
斑马鱼相关实验操作
斑马鱼相关实验操作斑马鱼⼈⼯繁殖、受精和胚胎发育⼀、实验⽬的了解斑马鱼的⽣活和繁殖习性，掌握斑马鱼⼈⼯繁殖技术，了解斑马鱼受精、胚胎发育过程和形态模式形成的特点。
⼆、斑马鱼的⽣活和繁殖习性斑马鱼（Danio rerio）为热带鱼类，可在⼀年内多次产卵。
在合适的养殖条件下，4⽉龄的斑马鱼即性成熟；性成熟后每1-2周可以产卵⼀次，⼀条雌鱼⼀次可以产出数百颗卵⼦。
斑马鱼产卵受温度和光照长度的调节。
最适产卵⽔温为28.5℃，产卵的光调节周期为光照14⼩时，⿊暗10⼩时。
为防⽌⾃然产卵，性成熟的雌、雄斑马鱼必须分开养殖。
斑马鱼具有下列特点：1、繁殖周期短，不受季节限制，容易获得所需要的精⼦、卵⼦和胚胎材料。
2、⼩型鱼类，可在实验室⾼密度养殖，饲养成本低。
3、是脊椎动物，具有和⼈类相似的器官和组织。
4、体外受精、体外发育，胚胎培养条件简单。
5、胚胎透明，可以在活体上直接观察器官的发育。
6、发育周期短，在28.5℃温度下培养，受精后24⼩时即可以形成个体的基本结构。
因此，斑马鱼现在选择作为发育⽣物学研究的模式动物。
三、实验器材和材料斑马鱼养殖系统，⼤塑料盆（直径约58cm）两个，塑料筛框（直径约36cm）⼀个，中号塑料盆（直径约36cm）1个，加热棒，加⽓泵，12cm培养⽫若⼲，9cm培养⽫若⼲，数个胶头滴管。
曝⽓⽔10L。
性成熟雌、雄性斑马鱼。
四、实验内容和程序实验前⼀天的准备：1、在实验前⼀天的早上向2个⼤塑料盆中放⼤半盆⼲净的⾃来⽔，放⼊⽓泵和加热棒，将加热棒温度调整⾄28℃（每个加热棒都有差异，需要放⼊温度计，根据温度计指⽰的实际温度调节和校准温度计），以供斑马鱼催产繁殖时使⽤。
2、曝⽓⽔将⼲净的⾃来⽔烧开后冷却，将⽓泵放⼊其中进⾏曝⽓，以为培养胚胎之⽤。
3、斑马鱼的选取和催产雌雄鱼的鉴别：性成熟的雄鱼体型修长，腹部较⼩，⽽雌鱼腹部较⼤。
选鱼的时间在实验前⼀天的晚上，在选取斑马鱼之前需要喂⾷红⾍，喂⾷后1⼩时才开始选鱼。
实验三 斑马鱼促性腺成熟机器早期发育模式共18页文档
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26、要使整个人生都过得舒适、愉快，这是不可能的，因为人类必须具备一种能应付逆境的态度。——卢梭
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
ห้องสมุดไป่ตู้
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
实验三 斑马鱼促性腺成熟机器早期发 育模式
1、 舟 遥 遥 以 轻飏， 风飘飘 而吹衣 。 2、 秋 菊 有 佳 色，裛 露掇其 英。 3、 日 月 掷 人 去，有 志不获 骋。 4、 未 言 心 相 醉，不 再接杯 酒。 5、 黄 发 垂 髫 ，并怡 然自乐 。
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斑马鱼性腺促熟及早期发育模式
斑马鱼性腺促熟和早期发育模式XXX,YYY,ZZZ一、目的与要求：1、掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术。
2、加深硬骨鱼早期形态发育模式的理解。
二、实验内容：（一）斑马鱼性腺促熟和产卵调控。
1、斑马鱼特性：斑马鱼一般4月龄性成熟，5月龄鱼繁殖较好；繁殖周期短，一般7天左右。
雌雄分辨：雌性（偏银灰色，体形丰满，腹部膨大、松软，仰腹可见有明显的卵巢轮廓，手摸富有弹性）；雄性（偏柠檬色，腹部扁平，身材显得修长）。
【如图一、图二】图一：雄鱼图二：雌鱼精、卵体外受精，体外发育，且速度快。
发育速度与温度密切相关：在25℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需36h；在28℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需24h，即胚胎发育成熟。
2、斑马鱼繁殖准备：将亲鱼雌、雄分开饲喂2～3天（要在饲养箱中加一玻璃隔板，将雌、雄分开，但同时相互之间又要能够看到），繁殖时将雌、雄按1：1或2∶1比例放入产卵池中进行产卵受精。
在此过程中一般采用10h光照，14h黑暗的光周期。
斑马鱼一般在混合的次日凌晨产卵，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔2～3mm的网将亲鱼限制在产卵池的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。
每条雌鱼可产卵300～1000粒。
（二）斑马鱼早期发育观察：斑马鱼早期胚胎发育主要有以下七个时期（附有相应的时间）：（1）合子期Zygote Period(0-0.75h)（2）卵裂期Cleavage Period(0.75-2.2h)（3）囊胚期Blastula Period(2.25-5.25h)（4）原肠胚期Gastrula Period(5.3-10h)（5）体节期Segmentation Period(10-24h)（6）咽期Pharyngula Period(24-48h)（7）孵化期Hatching Period(48-72h)斑马鱼各时期的特征及图片如下：（1）合子期：特征：卵质由植物极向动物极一端流动，最后在卵的动物端形成一个充满卵质的“帽子”这标志着胚的形成。
斑马鱼的性腺发育
斑马鱼的性腺发育
第2页
繁殖期，V期精巢
斑马鱼的性腺发育
第3页
III期精巢；小叶腔显著，初级精母细胞排列多层，百 分比尺示24μm
Sg，精原细胞；ScⅠ，初级精母细胞；ScⅡ，次级精母细胞；St， 精子细胞；Sz，精子；LL，小叶腔；LC，间质细胞；SC，支持细 胞；ST，精小囊
斑马鱼卵巢一对，左右两叶， 大个别对称；成熟卵巢呈囊 状，位于体腔内，外被由平 滑肌和结缔组织形成卵巢膜， 卵巢膜不发达。
卵巢位于腹中线两侧，在鱼 体后端汇合成一短输卵管， 进入泄殖腔，由泄殖腔开口 于体外。
卵母细胞直径、核径和核质 比在不一样时相中改变:
斑马鱼的性腺发育
•卵母细胞在Ⅱ时相增加不显著，在Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ时相期增加 快速 •胞核直径在Ⅱ时相增加快速，在Ⅲ时相中期、Ⅳ时相增加 迟缓，几乎没有改变 •核质比在第Ⅱ时相最大，伴随卵母细胞发育，核质比越来 越小
第9页
卵巢壁:由两层被膜组成， 外层为腹膜，内层为白膜。 白膜由外到内依次为扁平上 皮细胞、疏松结缔组织、间 质组织和生殖上皮。
产卵板:白膜中结缔组织向 卵巢内部伸展与卵巢生殖上 皮共同组成板层状结构，称 产卵板，是卵子产生地方。
卵巢腔:存在于卵巢内部空 腔，与输卵管相通。
SB产卵板
斑马鱼的性腺发育
在精小叶内由许多精小囊组成，伴随精巢发育，精小叶内各精小囊间 生精细胞发育不一样时，而在同一精小囊内生精细胞发育是同时。
精小叶中央为小叶腔，小叶腔在精巢内相互连接成网状，最终通到输 精管，精原细胞位于精小叶边缘处，在分化过程中，当生殖细胞在精 小囊内发育成为成熟精子时，精小囊破裂，成熟精子释放到小叶腔中， 各小叶腔内精子最终聚集到输精管内并可借助于输精管排出，所以成 熟精子只在小叶腔和输精管内存在。
实验三 斑马鱼促性腺成熟机器早期发育模式
第10次卵裂 中期囊胚转换
囊胚早期
囊胚中期 囊胚晚期
囊胚早期 囊胚中期
50％下包
囊胚晚期
Gastrula Period (5.3-10 h)
50％下包
Segmentation Period (10-24 h)
Pharyngula Period (24-48 h)
Hatching Period (48-72点
➢ 斑马鱼胚胎发育时期的记录【选取6个以上 不 同 时 期 的 胚 胎 照 片 ， 并 注 明 时 间 hours post-fertilization (hpf)、温度，并对发育过程 做一简单描述，如卵裂类型，原肠作用中的 细胞运动】
实验二 环境因子对斑马鱼胚胎发育的影响（
自主设计实验）
1. 每组选取以下其中一种环境因子
酒精， 洗衣粉，重金属离子（ZnSO4或GuSO4） 葡萄糖，阿斯匹林等
2。稀释到不同浓度（建议3-5个浓度梯度）， 以正常发育为对照，观察对斑马鱼胚胎发育的
影响。
提供如下母液：
• 洗衣粉：3%母液 • 酒精：20% • 重金属：1g/L • 阿司匹林1g/L • 葡萄糖：10g/L
Zygote Period (0-.75h)
——卵质向动物极流动，形成胚盘
2-cell
Cleavage Period (0.75-2.2 h)
—— 6次卵裂，15-20 min间隔分裂一次
4-cell
8-cell
Blastula Period (2.25-5.25 h) ——卵黄合胞体层(yolk syncytial layer, YSL) 、表胚层(enveloping layer, EVL)、深层细胞(deep cells)
斑马鱼性腺发育的组织学观察
基因组学与应用生物学，2011年，第30卷，第2期，第168－174页Genomics and Applied Biology,2011,Vol.30,No.2,168－174研究报告A Letter斑马鱼性腺发育的组织学观察王晶王冰李纪同杨磊张永忠*聊城大学生命科学学院,聊城,252059*通讯作者,Dr.yzz@摘要在过去几十年，斑马鱼(Danio rerio)由于其发育周期短且速度快，胚胎发育透明，已经成为众多研究领域的典型模式生物。
斑马鱼的性腺发育和分化非常特殊，雄性和雌性幼鱼的性腺在早期全部发育成“类卵巢”结构。
目前，对于斑马鱼的性别分化和性腺分化机制还不清楚。
本文以孵化后不同时期的斑马鱼仔鱼和幼鱼的生殖腺为材料，经石蜡切片和苏木精染色后，荧光显微镜下观察了斑马鱼仔鱼性腺从出现、分化到成熟的发育过程。
结果发现：孵化后5~10日龄仔鱼腹腔两侧可以观察到没有分化的生殖腺，其中的生殖细胞明显比周围的体细胞大；孵化后14~24日龄仔鱼的生殖腺中可见由卵原细胞分裂形成的生殖包囊，其中的生殖细胞进一步分化、分裂形成体积更大、数量更多的卵母细胞；25日龄左右的仔鱼，其性腺成为在腹腔两侧对称，而且在组织结构上也较为典型的卵巢样结构。
到35日龄前后可见一部分仔鱼的性腺逐步由卵巢样结构向精巢结构转变的过程。
我们在2周左右的仔鱼的性腺中观察到了生殖包囊存在，这一现象还未见有前人报道。
在本试验中，我们不仅清楚地观察到类似卵巢的性腺中“卵母细胞”逐渐凋亡消失的过程，还观察到性腺由最初的类似卵巢样结构逐渐变成典型的精巢结构的整个过程。
这些研究成果将为发育生物学提供有价值的信息和第一手资料。
关键词斑马鱼,性腺发育,石蜡切片,生殖包囊,组织学观察Histological Observation of Zebrafish Gonad DevelopmentWang Jing Wang Bing Li Jitong Yang Lei Zhang Yongzhong*Department of Life Sciences,Liaocheng University,Liaocheng,252059*Corresponding author,Dr.yzz@DOI:10.3969/gab.030.000168Abstract Over the past few decades,zebrafish(Danio rerio)has become a typical model species for several re-search areas,primarily due to its short generation time and rapid,transparent embryonic development.Zebrafish gonad development and differentiation are rather special for that in both of early male and female juveniles the go-nad develop into overy-like-structure(‘juvenile ovary’).The sexual differentiation mechanism of zebrafish is far from being fully understood at present.In this study,juvenile zebrafish gonad developmental process from the ear-liest recognizable stage,through differentiation,to maturation,was observed under fluorescent microscope after hematoxylin staining.The results showed that undifferentiated gonads could be observed on both sides of dorsal abdominal cavity of5~10days'juveniles,in which germ cells were significantly bigger than the surrounding somatic cells;germline cysts derived from oogonium division could be seen in the gonads of14~24days'juveniles,in which the germ cells further differentiated and increased both in number and in size.Gonads from about25days'juveniles developed into typical symmetic localization and typical ovary-like in shape and histological structure.From about 35days,gonads in some juveniles revealed clear transformation process from ovary-like shape and histological structure into testises.We identified the occurrence of the germline cyst in the gonads of juvenile zebrafish2weeks post-hatching,to our konwledge,this phenomenon has not been reported previously.In this study we both clearly基金项目：本研究由山东省自然科学基金(Y2007D06)和国家自然科学基金(31071268)共同资助observed the apoptotic process of“oocyte”in the ovary-like gonads,untill all the“oocytes”disapear gradually,and the whole process of morphological changes of the gonad from the overy-like-structure to typical testis gradually. These observations will provide valuable information and firsthand materials to the the developmental biology. Keywords Zebrafish(Danio rerio),Gonad development,Paraffin section,Germline cyst,Histological observation斑马鱼(Danio rerio)属鲤科(Cyprinidae)，短担尼鱼属(Danio)，原为一种典型的亚热带观赏鱼。
斑马鱼怎么看快产卵了
斑马鱼怎么看快产卵了繁殖特性：4月龄性成熟，5月龄体成熟，繁殖周期短，一般7天左右，一年四季都可产卵，产卵可达～粒，成活率高。
40日龄即可上市，市场价每条1元左右，成本低，养殖效益较显著，是一种短、平、快的淡水观赏经济鱼类。
斑马鱼除了具备经济、观赏价值外，由于体小、卵小、卵径1～1.5mm，产卵周转慢，目前已沦为研究脊椎动物(包含灵长类)胚胎发育及对外界环境变化，例如紫外线、重金属盐类、农药、工业污水、放射性物质等对人类影响的较好研究材料;就是一种极好的实验模式鱼;就是替代青蛙、果蝇、小白鼠等做为研究对象的优良试验材料;其发展前景十分宽广。
人工繁殖方法介绍如下：1 亲鱼培育：喂食亲鱼的目的就是为了赢得高质量的受精卵。
喂食和亲鱼用的饲料存有活性饲料和协调饲料两种，所饲协调饲料蛋白质应当大于40%，粗脂肪大于3.5%，水分高于4%，钙0.9%～1.6%，磷0.8%～1.4%，并嵌入适度对性腺发育存有促进作用的物质，如ve、va、vd、微量元素锌等，每天喂食1～2次。
产卵季节，每周可以减少投过喂食2～3次枝角类、桡足类，丰年虫或开水烫过并切碎的小鱼、小虾等生动饲料。
在饲喂时应注意：①自来水预先放置2～3天。
②水质ph调到6.5～7.5。
③水的ph7～8。
2 性别鉴定：首先看皮肤，偏银灰色的为雌性，偏柠檬色的为雄性。
其次性成熟的雌鱼体形丰满，腹部膨大、松软，仰腹可见有明显的卵巢轮廓，手摸富有弹性。
雄性斑马鱼腹部扁平，身材显得修长。
3 受精卵：将和亲鱼公、母分离喂食2～3天(相互之间能看见，可以在圈养箱中加一玻璃隔板，将立、母分离)产卵时将公、母按1～2∶1比例放进繁殖池中展开繁殖受精卵。
斑马鱼通常凌晨繁殖，为避免亲鱼毁灭鱼卵，需用网孔2～3mm的网将和亲鱼管制在繁殖池的上半部活动，以避免亲鱼吞吃鱼卵。
每条雌鱼可以繁殖～粒。
4 人工孵化：受精结束后获得的受精卵要及时捞出，剔除异物，将眼观有白色小斑点、畸形异常卵去除。
优选斑马鱼的发育历程(实用资料)ppt
囊胚期（2.25-5.25h）
囊胚期指从128-细胞期或第8次合子细胞分裂开始形成球 形胚盘直到第14次卵裂开始原肠期为止这一段时期。此期
有 很 多 重 要 事 件 发 生 ： 胚 胎 进 入 囊 胚 中 期 转 变 （ midblastula transition, MBT）、卵黄合胞体层（the yolk syncytial layer, YSL）形 成、外包（epiboly）开始。外包将一直持续到原肠期。
内卷运动的开始意味着原肠期的开始，目前可以说是发生于50%-外包时（图 11A）。结果在达到50%-外包后的数分钟内出现了一个增厚的外围区域，称作 胚环（germ ring），几乎与此同时完全包围了囊胚边缘（图11B，及C箭头所 指）。随后集合运动几乎同样快速地沿胚环产生一个局部的堆积，称胚盾（ embryonic shield , 图11D，及E箭头所指）。在发生这些事件期间，外包暂 时中止，但胚盾形成后外包又继续。胚层边缘沿卵黄细胞延伸直至将其完全 包绕（图11F-L）。其延伸近乎恒定速度进行，约每小时包绕卵黄细胞的15% ，这也提供了大部分原肠期分期的有用指标（图12）。
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实验三 斑马鱼促性腺成熟机器早期发育模式PPT共18页
11、战争满足了，或曾经满足过人的 好斗的 本能， 但它同 时还满 足了人 对掠夺 ，破坏 以及残 酷的纪 律和专 制力的 欲望。 ——查·埃利奥 特 12、不应把纪律仅仅看成教育的手段 。纪律 是教育 过程的 结果， 首先是 学生集 体表现 在一切 生活领 域—— 生产、 日常生 活、学 校、文 化等领 域中努 力的结 果。— —马卡 连柯(名 言网)
拉
60、生活的道路一旦选定，就要勇敢地 走到底 ，决不 回头。 ——左
13、遵守纪律的风气的培养，只有领 导者本 身在这 方面以 身作则 才能收 到成效 。—— 马卡连 柯 14、劳动者的组织性、纪律性、坚毅 精神以 及同全 世界劳 动者的 团结一 致，是 取得最 后胜利 的保证 。—— 列宁 摘自名言网
15、机会Leabharlann 不守纪律的。——雨果56、书不仅是生活，而且是现在、过 去和未 来文化 生活的 源泉。 ——库 法耶夫 57、生命不可能有两次，但许多人连一 次也不 善于度 过。— —吕凯 特 58、问渠哪得清如许，为有源头活水来 。—— 朱熹 59、我的努力求学没有得到别的好处， 只不过 是愈来 愈发觉 自己的 无知。 ——笛 卡儿
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年月日姓名：专业年级：同组者
科目：发育生物学实验题目：斑马鱼性腺促熟及早期发育模式
一【目的要求】
1、通过实验操作掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术
2、通过斑马鱼早期发育的观察，巩固对硬骨鱼胚胎发生的认识
二【实验材料】
（一）器材
培养缸、控温棒、解剖镜、显微镜
(二)试剂
经太阳晒过至少一天的自来水
（三）动物
斑马鱼（Danio sp.）
三【实验内容】
（一）亲鱼培育和性腺促熟
挑选体长大于4厘米的斑马鱼放养于鱼缸中，水温保持在28℃左右，放养数量根据鱼缸中水体体积而定，密度5尾\L左右。
饲喂亲鱼用的饲料有活性饲料和配合饲料两种，直接购自于观赏鱼市场，要求每天投喂4次，及时清除残饵，隔天换水，快到繁殖季节时将雌雄分养，加强管理。
（三）繁殖
繁殖前一天中午，将雌雄合养于繁殖缸里，要求雌雄比例为2:1。
由于斑马鱼有食卵的习性，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔为2-3毫米的网将亲鱼限制在繁殖缸的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。
一般次日凌晨到中午可以产卵和受精，受精卵便沉降于缸底，将繁殖后的亲鱼及时转移至别的培养缸中，吸取缸底受精卵，剔除异物以及眼观有白色小斑点、畸形异常卵。
（三）斑马鱼胚胎发育模式
孵化期间，培养用水温度控制在25-28℃，每天要及时清除败育卵，并换水1-2次。
按时观察记录斑马鱼胚胎的早期发育过程，绘制斑马鱼的胚胎发育模式图。
1、受精卵：斑马鱼的卵呈圆球形，橙黄色、微透明，直径0.8-0.9 mm。
在水中，受精卵卵膜(壳膜)迅速膨胀，出现透明的卵周隙，在壳膜上可以看到呈漏斗状的卵膜孔。
2、卵裂：卵子受精后，细胞质迅速向动物极流动，并集中形成帽状的胚盘。
卵裂即在胚盘范围内进行，卵裂属于不全裂，盘状卵裂。
第一次分裂为经裂，分裂沟自上而下，但不到达底部，结果分为两个相等的不完整分裂球。
第二次分裂仍为经裂，分裂面与第一次垂直，仍是不完全分裂，于是分成大小相似的四个分裂球。
第三次分裂亦为经裂，两个分裂面在第一次分裂面两侧，并与第一次分裂面平行，形成两排，每排四个，共八个分裂球。
第四次分裂仍为经裂，两个分裂面在第二次分裂面的两侧，并与第二次分裂面平行，分裂为四排每排有四个分裂球，共形成十六个分裂球。
第五次分裂，有经裂也有纬裂，分裂面己不整齐，分裂球大小也不一致。
以后几次分裂，分裂球愈分愈小。
3、囊胚期：由于细胞不断分裂，数目增多，细胞体积逐渐变小，分裂球层次增加，同时在胚盘与卵黄之间产生一空腔，即为胚盘下腔，此时称囊胚期，又分为囊胚早期、中期和晚期，也称高囊胚、中囊胚和低囊胚。
4、原肠胚期：囊胚晚期后，细胞逐渐向植物半球下包，胚盘变扁，开始进入原肠期。
当胚盘下包到卵黄的一半时，胚环最大，背唇呈新月状，此即胚盾开始，即原肠早期。
胚盘继续下包到胚胎的三分之二时，由于细胞不断集中于胚环的一处，致使该处呈一盾状隆起即
胚盾，此时称原肠中期。
胚盘继续下包到整个胚胎的四分之三时，胚盾更为明显，胚体将在胚盾处建成，此时为原肠晚期。
5、观察由神经胚直至出膜期的形态变化：当胚盘下包到整个胚胎的五分之四时，神经板已经形成，胚体已转为侧卧，此时为神经胚期。
随着胚盘下包，胚孔逐渐变小，直到胚孔关闭，前端膨大成脑。
胚体中部有1-2对体节出现，即为胚孔封闭期。
胚体的头部越来越明显，前脑两侧膨大成视泡，脑己分化。
尾端粗钝，胚体中部出现3-5对体节，此为视泡期。
后脑两侧有椭圆型淡色结构，即是听板。
此时已有15-16对体节，称为听板形成期。
在前脑的前方，可见一对嗅窝，胚体此时出现17-19对体节，即为嗅窝形成期。
视杯中晶体开始形成，胚体有20-21对体节，并开始收缩，此即晶体形成期，在头部和卵黄囊之间，可见到管状的心脏开始搏动，并可见血细胞在血管内流动，此时为心跳期，已有25对体节。
在头部后端，背面两侧可见耳囊已呈小泡状，并可见耳囊中有一对暗色的耳石，视杯中出现色素，此时有26-27对体节出现。
心跳期后，尾略向背方举起，胚胎在膜内转动，尾部不断摆动，经一定时间，胚体破膜而出，即为孵化期。
、
四【作业】
1、电子版上交斑马鱼各主要发育阶段的照片。
高囊胚时期中囊胚
低囊胚50%下包
80%下包尾芽期
10—12体节心跳期
刚孵化斑马鱼
五【思考题】
1、鱼类生殖调控的机制。
答：鱼类能够按照环境条件的周期性综合调整它们的生理机能。
包括下丘脑-垂体-性腺中各种激素的分泌活动在鱼类生殖发育和调控的过程中发挥着关键作用。
鱼类的下丘脑能分泌促性腺激素释放激素（GnRH），刺激腺垂体分泌促性腺激素（GtH），从而促进性腺的发育。
而下丘脑视前隐窝区的前腹视前围脑室核（（NPP），多为多巴胺——抑制腺垂体分泌GtH。
在性腺发育的整个时期，GtH分泌活动都受到促性腺激素释放抑制因素（GRIF）的紧张性抑制。
排卵前，下丘脑会减少GRIF的分泌，由此带来两个效果：①GtH自动分泌增加；②GnRH促进GtH分泌作用更加显现。
在排卵前，会引起鱼血液中GtH 急剧升高。
同时性类固醇性激素对GtH分泌也有反馈作用。
在鱼类性腺发育期间，一般对GtH分泌有负反馈作用，在产卵期间尤为明显。
2、鱼类常见的性腺促熟和人工繁殖技术。
答：1)促使亲鱼成熟、产卵的方法，一般可分为生态法、生理法和生态生理结合法。
生态法是在鱼类繁殖的适温季节里，选择成熟的亲鱼进行雌雄配对，满足其产卵的生态条件，使亲鱼自行繁殖或进行人工采卵和受精。
此法适用于鲤、鲫、非鲫和虹鳟等。
生理法是在繁殖季节对某些无法满足其成熟产卵生态条件、而性腺发育良好的亲鱼注射催情剂，促其性成熟、产卵和排精，适用于草鱼、青鱼、鲢、鳙等养殖鱼类、印度鲤科鱼类、闪光鲟和鮻等。
生理生态法是将上述两法结合运用，既注射催情剂又提供合适的生态条件。
2)鱼类人工繁殖指的是：根据鱼类自然繁殖习性，在人为条件下控制鱼类发育、成熟、产卵和孵化的技术措施。
人工繁殖方法，按亲鱼来源于天然水域或人工培育，可分为半人工繁殖和全人工繁殖。
一般采用人工繁殖生理生态法，整个过程分亲鱼培育、催情、授精和孵化4个环节。
①亲鱼培育。
是将达到性成熟年龄的亲鱼培育至性腺发育成熟的过程。
在进行人工繁殖前约1个月，应适当减少投饵和施肥量，并每日冲注新水4～6次，促其性腺进一步发育。
性腺发育良好的雌鱼在外形上腹部膨大、下腹松软、泄殖孔红润，可选作催情用鱼；雄鱼当轻压下腹部时有入水即散开的乳白色精液流出，方可选用。
②催情。
对卵巢出现上述性状的亲鱼，须注射催情剂促其发情、产卵。
③授精。
有自然授精和人工授精两种。
自然授精是催情后的亲鱼在产卵池中自行产卵、排精、完成受精作用。
随后，待卵子吸水膨大、卵膜增厚时，开始收集受精卵，或使受精卵从产卵池自动流入孵化环道。
人工授精是在亲鱼发情高潮将要产卵时，进行采卵、采精，使成熟的精、卵在盛器内完成授精作用。
由于卵和精子在淡水中存活的时间很短，因此，人工授精应迅速进行。
④孵化。
将受精卵置于孵化环道、孵化桶等工具中进行。
在孵化环道和孵化桶内都应
形成循环不息的微流水，具有溶氧量高、容卵量大、孵化率高、劳动强度低和管理方便等优点。
不同鱼类的孵化时间和要求的水温不一。
草鱼、青鱼、鲢、鳙等孵化适温是22～28℃，时间为18～25小时。
虹鳟的孵化适温为6～13℃，时间为25～60天。