生物样品的处理方法
生物样品预处理
生物样品预处理的应用与发 展趋势
第六章
生物样品预处理的应用领域
医学领域：用于疾病诊断、治疗和 药物研发
环境监测领域：用于水质、空气和 土壤等环境因素的监测
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
农业领域：用于农产品质量检测、 育种和病虫害防治
食品安全领域：用于食品添加剂、 农药残留和重金属等检测
生物样品预处理的发展趋势与展望
对于不同种类的生物样品，要分别 处理，避免交叉污染。
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
在操作过程中，要遵循无菌操作原 则，避免微生物、细菌等污染样品。
在处理过程中，要定期对操作台、 器具等进行清洁和消毒，保持清洁 卫生。
保证操作的安全性
生物样品具有潜在危险，操作时应佩戴个人防护装备 遵循实验室安全规定，确保工作环境安全 避免交叉污染，确保生物样品处理过程中的安全 正确使用和处理化学品，确保操作的安全性
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
实验要求：严格遵守操作规程，保 证实验结果的准确性和可靠性
实验步骤：按照操作规程进行实验， 记录实验数据并进行分析
检测方法与仪器
检测方法：生物样品预处理的方法应根 据检测目的和要求选择，常用的检测方 法包括光谱分析、色谱分析、质谱分析 等。
仪器选择：根据检测方法和生物样品的特 性，选择合适的仪器进行预处理，如离心 机、过滤器、萃取装置等。
仪器精度：仪器的精度对预处理结果的影 响较大，应选择精度高、稳定性好的仪器。
仪器维护：仪器的维护和保养也是影响 预处理效果的重要因素，应定期进行维 护和保养，确保仪器的正常运行和使用 效果。
操作人员技能与素质
生物样品预处理技术
取500g有代表性的猪肉可食部分，用组织捣碎机充 分捣碎均匀；
样品均匀化
取2g 捣碎样品，加入8ml乙酸钠缓冲液(pH=5.2)，再
• 固相萃取
• • • • • • • 操作： 活化 上样 淋洗 洗脱 收集 直接进样或者 浓缩后进样 与色谱理论相同
二、生物样品预处理方法
二、生物样品预处理方法
• 采用离心或者抽真空 的办法，以一定离心 力或者流速，进行上 样、淋洗和洗脱
二、生物样品预处理方法
• 固相萃取的优点：
• 无乳化现象 • 使用溶剂安全价格低廉
有机强酸
季铵碱、盐
有机酸、酚类
示例 不同生物样品中虎杖苷预处理方法
• A：虎杖苷标准对照品 由海王集团技术中心天然药物室提供 批号：03050803 • 3，4’，5-三羟基芪-3-β-D-葡萄糖苷 Mr390 • • B：二苯乙烯苷化学对照品 由中国药品生物制品检定所提供 • 2，3，5，4‘-四羟基二苯乙烯-β-D-葡萄糖苷 Mr406
• 萃取效率高
• 处理速度快，具有一定通量 • 易于同时萃取出目标药物及其代谢产物，包括极性 强的Ⅱ相代谢产物
• MCX固相萃取柱 • 反相作用和阳离子交换 作用
• 酸性环境中含氮碱性基 团与磺酸基结合 • 酸性药物呈分子状态发 生反相结合作用
对有机碱: 对有机酸、酚类 对有机强酸 对季铵碱、盐 pKa 2-8 pKa 2-10 pKa <1.0 pKa >10 选择 Oasis® MCX 选择 Oasis® WAX 选择 Oasis® WCX 选择 Oasis® MAX
• 储存条件
–20℃：大部分药物 –80℃：阿莫西林等抗生素 加稳定剂：卡托普利等
生物样品预处理的方法
生物样品预处理的方法一、生物样品预处理的重要性。
1.1 生物样品的复杂性。
生物样品那可是相当复杂的呀。
就拿血液来说吧，里面有各种各样的成分，像血细胞、血浆蛋白、各种离子、代谢产物等等。
这些成分混在一起就像一锅大杂烩，如果不进行预处理，想要准确分析其中特定的物质，那简直就是大海捞针，难上加难。
1.2 提高分析准确性。
预处理就像是给我们的分析工作打基础。
如果不把那些干扰的成分去除或者分离，分析仪器可能就会被误导。
比如说在检测血液中的某种药物成分时，如果血浆蛋白没有处理好，蛋白可能会包裹药物，导致检测到的药物含量比实际的少很多，这就会得出错误的结论。
所以预处理是让我们的分析结果更靠谱的关键一步。
二、常见的生物样品预处理方法。
2.1 蛋白质沉淀法。
这是一种比较简单粗暴但很有效的方法。
就像把混在沙子里的石子挑出来一样，我们通过加入一些试剂，像有机溶剂（如甲醇、乙腈）或者酸，让蛋白质沉淀下来。
这就好比给蛋白质使了个“定身术”，让它们从溶液里分离出来。
这样一来，那些被蛋白质包裹或者干扰的目标物质就能够更好地被检测到。
不过这种方法也有缺点，有时候会把一些小分子的目标物质也一起沉淀了，就像打扫卫生的时候不小心把有用的小物件也扫走了一样。
2.2 液液萃取法。
这就有点像油和水分离的感觉。
我们利用目标物质在两种互不相溶的溶剂中的溶解度差异，把目标物质从生物样品所在的溶剂中转移到另一种溶剂里。
比如说，我们要从血液的水溶液中提取一种脂溶性的药物，就可以加入一种有机溶剂，像氯仿，药物就会跑到氯仿层里，就像孩子找妈妈一样，然后我们把氯仿层分离出来，就得到了相对纯净的含有目标药物的溶液。
但是这个方法操作起来有点麻烦，就像走迷宫一样，要小心翼翼地确保每一步都准确。
2.3 固相萃取法。
这个方法可以说是比较高端大气上档次的。
我们把一种特殊的吸附剂装在一个小柱子里，然后让生物样品溶液通过这个柱子。
目标物质就像被磁石吸引一样，吸附在柱子里的吸附剂上，而那些杂质就流走了。
药物分析中的生物样品前处理方法研究
药物分析中的生物样品前处理方法研究近年来，随着生物医药领域的快速发展，药物分析在疾病的诊断和治疗中扮演着至关重要的角色。
为了获得准确可靠的分析结果，生物样品的前处理方法显得尤为重要。
本文将探讨药物分析中常用的生物样品前处理方法的研究进展。
一、血液样品的前处理方法研究血液样品作为一种常见的生物样品，在药物分析中扮演着重要的角色。
然而，血液样品中存在着各种成分的干扰，如蛋白质、血红蛋白等。
因此，研究人员提出了多种前处理方法来解决这些问题。
1. 血浆/血清的蛋白质沉淀方法血浆/血清中的蛋白质是最常见的干扰物之一。
为了降低蛋白质对分析结果的影响，研究人员开发了各种蛋白质沉淀方法。
例如，酸沉淀法可以通过改变pH值使蛋白质凝聚沉淀，从而去除蛋白质干扰。
此外，还有醇沉淀法、有机溶剂沉淀法等。
2. 血浆/血清的固相萃取方法固相萃取方法是血液样品前处理中常用的技术之一。
其原理是利用吸附剂对目标化合物进行特异性吸附，从而去除干扰物。
通过选择合适的吸附剂，可以实现对特定成分的富集。
例如，固相萃取柱常用于血浆/血清样品中药物的富集与净化。
二、尿液样品的前处理方法研究尿液样品常用于药物代谢和排泄的研究，但由于其复杂的成分和高度变异性，前处理方法显得尤为重要。
1. 尿液样品的前处理方法选择尿液样品前处理的关键是选择合适的方法。
常见的前处理方法包括尿液蛋白质去除、有机溶剂浓缩、尿液稀释等。
根据具体的分析需求和目标物质的特性，选择恰当的前处理方法可以显著提高分析结果的准确性和灵敏度。
2. 尿液样品的固相萃取方法研究固相萃取也是尿液样品前处理中常用的技术之一。
通过选择适当的吸附剂和前处理条件，可以有效地去除尿液中的杂质，提高目标物质的测量灵敏度。
例如，固相萃取柱结合气相色谱-质谱联用技术可以用于尿液样品中药物代谢产物的研究。
三、其他生物样品的前处理方法研究除了血液和尿液样品，还有其他生物样品在药物分析中的应用。
例如，头发样品被广泛用于毒品滥用的检测。
化学分析方法的生物样品前处理技术
化学分析方法的生物样品前处理技术化学分析是现代科学研究和工业生产中不可或缺的一环。
为了获得准确和可靠的化学分析结果，对于生物样品的前处理技术至关重要。
本文将介绍几种常用的生物样品前处理技术，包括固相萃取、液液萃取、溶剂萃取和分离提纯技术。
一、固相萃取技术固相萃取（Solid-phase Extraction，简称SPE）是一种用于生物样品前处理的重要技术。
其原理是将待检样品与吸附剂接触或通过吸附剂时，目标分析物被吸附到吸附剂上，达到样品的富集和净化。
固相萃取技术具有以下优点：操作简单、灵敏度高、富集效果好、耗时短等。
在化学分析领域中被广泛应用。
二、液液萃取技术液液萃取（Liquid-Liquid Extraction，简称LLE）是一种通过溶剂与待检样品中目标分析物的选择性溶解度差异而发生分离的技术。
其原理是将待检样品与萃取溶剂进行充分混合搅拌后，静置，根据目标分析物在两种溶剂中的分配系数，使其转移到相应的溶剂层中。
液液萃取技术适用范围广泛，操作简单。
但其溶剂消耗大，使用过程中易产生有机溶剂挥发、环境危害等问题，因此在实际应用中需要加以控制和优化。
三、溶剂萃取技术溶剂萃取技术（Solvent Extraction）是指通过非挥发性溶剂将目标分析物从待测样品中提取出来。
它是一种在液液界面上基于物质间相互作用力原理进行的分离技术。
该技术广泛应用于生物样品的前处理中。
溶剂萃取技术不仅可以提取有机物，还能用于提取无机物，同时能实现溶液的浓缩和纯化。
在生物样品前处理中，该技术常与其他技术，如SPE技术结合使用，以实现样品更好的富集和净化效果。
四、分离提纯技术分离提纯技术在生物样品前处理过程中起到了至关重要的作用。
常见的分离提纯技术包括薄层色谱、气相色谱、高效液相色谱等。
薄层色谱技术（Thin Layer Chromatography，简称TLC）是一种常用的分离化合物的方法。
它通过将待测样品在薄层色谱板上作用，根据各种成分的溶解度差异和物理化学性质等特点进行分离。
生物样品的预处理
蛋白酶抑制剂的添加
保护剂的添加(β-巯基乙醇、EDTA、辅酶等)
提取物缓冲液的选择(中性)
提取液的澄清( 高速离心、沉淀、吸附等)
匀浆化前的预处理(冷冻)
1.2 动物组织预处理注意事项
各种发酵产品，由于菌种不同和发酵液特性不同，其预处理方法的选择也有所不同。
01
大多数发酵产物存在于发酵液中，也有少数产物存在于菌体中，或发酵液和菌体中都含有。
螯合剂法
叁
贰
壹
酚类化合物的干扰及对策
牛血清白蛋白（BSA）法 原花色素类物质与BSA间可产生类似于抗原－抗体间的相互作用，形成可溶性的或不溶性的复合物，减小了原花色素类物质与RNA结合的机会
丙酮法 用-70℃的丙酮抽提冷冻研磨后的植物材料,可有效从云杉、松树、山毛榉等富含酚类化合物的植物材料中分离到高质量的RNA
高速匀浆机
高速匀浆法为大规模细胞破碎的常用方法，设备由高压泵和匀浆阀组成。
研磨法与珠磨法 研磨法(实验室规模) 由陶瓷的研钵和研杆组成，加入少量研磨剂（如精制石英砂、玻璃粉、硅藻土） 珠磨法(工业规模) 进入珠磨机的细胞悬浮液与极细的玻璃小珠、石英沙、氧化铝等研磨剂（直径<1 mm）一起快速搅拌或研磨，研磨剂、珠子与细胞之间的互相剪切、碰撞，使细胞破碎,释放出内含物。在珠液分离器的协助下，珠子被滞留在破碎室内，浆液流出从而实现连续操作。 适用：微生物（细菌）与植物细胞
通过Li+或Ca2+沉淀RNA的方法可以将未被氧化的酚类化合物去除。
01
03
02
植物组织往往富含多糖，而多糖的许多理化性质与RNA很相似，较难将它们分开。含多糖的RNA沉淀难溶于水，或溶解后产生粘稠状的溶液，对RNA提取造成较大的干扰。
生物样品预处理.
三、常用的处理方法-除蛋白法
2.酶解法
操作：先将被测组织加Tris-缓冲液pH 10.5及酶， 60℃培育1h，用玻璃棉过滤，得澄清滤液， 即可供药物提取用。 优点：可避免某些药物在酸及高温下降解；对与 蛋白质结合牢的药物（如保泰松、苯妥英钠）， 可显著改善回收率；可用有机溶剂直接提取 酶解液而无乳化现象生成，当采用HPLC法检 测时，无需再进行过多的净化操作。
二、指导原则-预处理应考虑问题
1.药物的理化性质和存在形式
B.药物在体内的存在形式及蛋白结合率：
a.结合蛋白率高: 首先去蛋白 b.多为代谢缀合物：缀合物水解 C.药物的光谱特性及官能团特性：涉及分析仪器 的选择以及是否需要衍生化和特殊检测器。 紫外吸收强弱：是否用UV检测器 含有-NO2 、-Cl等电负性基团：ECD检测器
三、常用的处理方法
常用方法
1.有机破坏法 2.除蛋白法 3.缀合物的水解 4.分离，纯化 与浓集 5.衍生化法
重点介绍
除蛋白法 液液萃取法
三、常用的处理Hale Waihona Puke 法-有机破坏法1.有机破坏法
特 点 样 品 1、硫酸作为分解剂（消化剂），加氧化剂 血、尿、 硝酸 — 高氯酸法 （硝酸、高氯酸、过氧化氢等）作辅助分解剂。 组织 2、破坏能力强，反应比较激烈，操作时， 电热消化器法 应在通风橱内进行。 3、先低温反应，再高温蒸发，以免发生爆 电热板消化法 炸； 人发 4、所得的无机金属离子，一般为高价态。 烘箱消化法 1、适用于卤素、硒、硫、磷等微量元素分 高温炽灼法 析的前处理 2、高温炽灼法：坩埚，先完全炭化，再灰 化，盐酸溶解定容。盐酸加无水碳酸钠或氧化 血、人 氧瓶燃烧法 镁等以助灰化。（高温电子炉、低温等离子） 发 3、氧瓶燃烧法：密闭的燃烧瓶中进行燃烧， 选择适当吸收液。 分 类
生物样本的处理方法
生物样本的处理方法生物样本的处理是生物学、医学、药学等领域中非常重要的一个环节，其目的是为了获得可靠的实验数据，为后续的研究和应用提供支持。
本文将介绍几种常见的生物样本处理方法。
1. 血液样本的处理血液样本处理是临床医学中常见的操作。
为了获得准确的结果，需要注意以下几点：（1）采血前应让被测者保持安静状态，避免运动和饮食过多。
（2）采血前应充分消毒，避免感染。
（3）采血时应选择正确的采血针头和采血管，避免对血液样本的影响。
（4）采血后应立即将血液样本送往实验室，避免时间过长影响结果。
2. 细胞样本的处理细胞样本处理是生物学和医学中常见的操作，常用于细胞培养和细胞分离。
为了获得可靠的结果，需要注意以下几点：（1）细胞培养前应准备好培养基和培养器具，避免污染和误操作。
（2）细胞分离时应选择正确的酶和处理时间，避免对细胞的损伤。
（3）细胞培养过程中应控制培养条件，包括温度、湿度、CO2浓度等。
（4）细胞培养后应及时进行细胞计数和鉴定，以保证实验数据的准确性。
3. 组织样本的处理组织样本处理是医学和生物学中常见的操作，常用于病理学和组织学研究。
为了获得可靠的结果，需要注意以下几点：（1）组织采集前应选择正确的工具和方法，避免对组织的破坏。
（2）组织采集后应立即进行固定和包埋，避免组织变性和脱落。
（3）切片时应选择适当的厚度和方法，避免切伤或切变组织。
（4）染色前应选择正确的染色剂和条件，避免染色不均或误判。
4. DNA/RNA样本的处理DNA/RNA样本处理是分子生物学和基因工程中常见的操作。
为了获得可靠的结果，需要注意以下几点：（1）DNA/RNA采集前应选择正确的采集方法和工具，避免对样本的污染和误操作。
（2）采集后应立即进行裂解和纯化，避免DNA/RNA的降解和污染。
（3）纯化后应进行质量和浓度的检测，以保证实验数据的准确性。
（4）DNA/RNA的储存应选择适当的方法和条件，避免降解和污染。
生物样本的处理方法直接影响实验结果的准确性和可靠性。
生物样本样品前处理
4
常用液液提取溶剂
溶剂名称 二氯甲烷 乙酸乙酯 氯代正丁烷
乙醚 戊烷 环己烷 正己烷 甲苯 异丙醇* 四氢呋喃* 乙腈* 正丁醇* 水*
分子量 84.9 88.1 92.6 74.1 72.2 84.2 86.2 92.2 60.1 72.1 41.1 74.1 18.0
注：“*”表示与水互溶
沸点（℃） 40
5、固相萃取法：可实现自动化，基质效应降低，同时完成样品的富
集与净化；但成本较高
3
液液提取法
利用目标化合物在生物基质和与水不互溶的有机溶剂中溶解度或分配 系数的不同，使化合物从生物基质中转移至有机相中。
➢两相的分离需借助两相的密度差来实现
➢原理：相似相溶
➢分配系数：kA=yA/xA yA和xA分别表示在萃取相和萃余相中的质量比率
常见表面活性剂：Triton-X-100，吐温等
Tips
1、表面活性剂需确立一个浓度范围而不是单一浓度。 2、样本已经采集，考虑将待测物从容器中解离出来。
14
讨论和问题
Thank you!
15
0.08 0.36 1.66 1.63 3.92 1.50 1.84
5
固相提取法
◇HLB(Hydrophilic-Lipophilic Balance Copolymer)材料的优点
△水可浸润 △反相保留 △PH1-14范围内稳定 △没有裸露硅羟基
6
固相提取法
7
固相提取法
8
固相提取法
改变化合物PH，酸性 保留，碱性洗脱
77.1 77
34.5 36.1 80.7
69 110.6 82.4
66 81.6 117 100
密度（g/mL) 1.33 0.90 0.89 0.71 0.63 0.78 0.66 0.87 0.79 0.89 0.78 1.00 1.00
生物样品的处理方法
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（3）分离纯化与富集
①液-液萃取法
水相pH值是萃取成功的关键 水相最佳pH值
碱性药物：高于pKa值12个pH单位
酸性药物：低于pKa值12个pH单位
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
但生物样品宜在碱性或近中性提取 ——生物基质中内源性物质多为酸性， 在碱性下不易萃取
②液-固提取法（固相萃取法）
原理： 将不同填料作为固定相装入微型小柱， 当含有药物的生物样品溶液通过时，由 于受到吸附、分配、离子交换或其它亲 和力作用，药物或杂质被保留在固定相 上，用适当溶剂清洗杂质，再用适当溶 剂洗脱药物。
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
(4)化学衍生化
化学衍生化目的 ①使药物变成具有能被分离的特性 ②提高对样品的检则灵敏度 ③增加药物的稳定性 ④提高对光学异构体的分离能力
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（5）有机破坏
方法：湿法破坏
干法破坏
氧瓶燃烧法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
22
第五章 药物定量分析与分析方法验证
1. 测定法
取空白生物基质（如血浆）数份，照标准曲线项下方法 操作，用标准曲线计算 在标准曲线范围内制备质控(quality control，QC)样品 ——高(接近上限)、中、低(接近LOQ) 3个浓度
——每一浓度至少5个样本
——与随行的标准曲线同法测定、计算，每个样品分析 测定1次
实际生物样品的量有限(如血浆，一般为0.5～2ml)
生物制药技术中的生物样品处理与分析方法
生物制药技术中的生物样品处理与分析方法生物制药技术在医药领域的应用日益广泛，其关键环节之一是生物样品的处理与分析。
生物样品处理与分析方法的选择和优化对于保证生物制药产品的质量和效力至关重要。
本文将介绍生物制药技术中常用的生物样品处理与分析方法，包括样品采集、样品前处理、样品分析等，以及其所涉及的原理和应用。
一、样品采集在生物制药技术中，样品采集是第一步，直接影响后续的样品处理与分析结果。
常见的生物样品包括血液、尿液、组织等。
对于血液样品，最常用的采集方法是采用针头抽血，然后将血液转移到适当的采样管中。
对于尿液样品，通常采用尿杯收集新鲜尿液，然后进行必要的保存和处理。
对于组织样品，常用的方法是通过手术或穿刺获取组织样本，并将其保存在适当的容器中。
二、样品前处理生物样品经过采集后，需要进行前处理来去除干扰物和提取目标分析物。
常见的前处理方法包括离心、过滤、沉淀等。
离心是通过旋转离心机使样品分离成上清液和沉淀物，用于去除离心后产生的沉淀物。
过滤是通过使用合适孔径的过滤器去除样品中的固体颗粒和杂质，例如细胞碎块和蛋白质等。
沉淀是通过加入特定试剂使样品中的目标分析物凝聚成沉淀物，然后通过离心或过滤的方式将其分离出来。
这些前处理方法能够有效地去除样品中的干扰物，提高后续分析的准确性和灵敏度。
三、样品分析生物制药技术中的样品分析是通过对样品中的目标分析物进行定量或定性分析，来评估生物制药产品的质量和效力。
常见的样品分析方法包括免疫学分析、核酸分析、代谢物分析等。
1. 免疫学分析免疫学分析是通过检测样品中的特定抗原或抗体来定量或定性样品中的分析物。
免疫学分析常见的方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光分析、免疫电泳等。
通过这些方法，可以检测生物制药产品中的特定蛋白质、抗体等成分，评估产品的纯度和含量。
2. 核酸分析核酸分析是通过检测样品中的DNA或RNA来定量或定性样品中的分析物。
常见的核酸分析方法包括聚合酶链反应（PCR）、核酸杂交、基因测序等。
生物样品前处理及在原子吸收光谱仪分析中应用
生物样品前处理及在原子吸收光谱仪分析中应用引言：原子吸收光谱仪是一种广泛应用于分析化学和环境科学领域的仪器，它基于原子在特定波长的光的吸收来测定样品中特定元素的含量。
在样品分析之前，必须进行一系列的前处理步骤，以准确地测定元素的含量。
本文将介绍一些常见的生物样品前处理方法，并探讨其在原子吸收光谱仪分析中的应用。
一、生物样品前处理方法1.溶解方法：将生物样品溶解于适当的溶剂中，以便进一步处理和分析。
对于固体样品，常用的方法是使用强酸或共熔混合物进行溶解；对于液体样品，可以直接使用或进行适当的稀释。
2.液-液萃取：适用于有机物或水中低浓度的金属离子的分离和富集。
通过添加有机溶剂与水中的金属离子发生配位作用，使其从水相中转移到有机相中。
3.气-液萃取：适用于挥发性有机物的分离和富集。
将气相中的有机物吸附到液相中，通过溶解和挥发的反复过程来富集。
4.溅射：将固体样品溅射成为微细颗粒，以提高其表面积，便于进一步处理和分析。
5.气相色谱：通过样品的挥发性和分子量差异进行分离和富集，可用于分析挥发性有机物。
以上这些生物样品前处理方法可以根据样品类型、元素需要测定的量级、所需分析的基体元素等因素进行选择和操作，以获得准确可靠的测定结果。
二、原子吸收光谱仪分析中的应用原子吸收光谱仪是测定样品中金属元素含量的重要工具，其应用涉及许多领域，如环境科学、药学、食品安全等。
以下将以环境科学领域为例，介绍原子吸收光谱仪在生物样品分析中的应用。
1.土壤样品分析：土壤是环境中重要的污染介质，其中金属元素的含量与土壤质量和环境负荷密切相关。
使用原子吸收光谱仪可以准确测定土壤中的重金属元素，如铅、镉、铬等，从而评估土壤污染状况。
2.水样分析：水是人类生存的重要资源，其中金属元素的含量直接影响到水的质量。
原子吸收光谱仪可用于测定水中的重金属元素，如铜、锌、汞等，用于水质检测、环境监测等。
3.植物样品分析：植物在生态系统中起着重要的作用，并且可以作为环境污染的指示物。
生物样本样品前处理
包括抗凝、分离血清或血浆等步骤，为血液学实验提 供合格的样本。
THANKS
感谢观看
对于光敏感的样品，在处理和 保存过程中应避免直接光照， 采用避光容器或包装材料。
添加稳定剂
根据样品的性质，可以添加适量 的稳定剂，如抗氧化剂、防腐剂 等，以保持样品的稳定性。
减少处理时间
尽量缩短样品前处理的时间，减 少样品暴露在不利环境中的机会
，从而降低样品变质的风险。
05
样品前处理中的质量控制
质量控制标准制定
稳定性和可重复性。
前处理流程简介
样本收集与保存
根据研究目的和实验设计，选择合适的生物样本（如血液、尿液、组织等），并进行适当的保存和处理，以避免样本 变质或目标分析物的损失。
样本预处理
对收集到的生物样本进行初步处理，如离心、过滤、稀释等，以去除杂质和干扰因素，为后续的分析步骤提供纯净的 样本。
目标分析物的提取与富集
03
代谢物衍生化
利用色谱、质谱等技术对代谢物 进行分离和纯化，去除干扰物质。
对于某些难以检测或不稳定的代 谢物，可以通过衍生化反应提高 其检测灵敏度和稳定性。
其他生物样本前处理技术
组织样本前处理
包括组织固定、脱水、包埋、切片等步骤，为后续组 织学观察和实验提供基础。
细胞样本前处理
包括细胞培养、传代、冻存等步骤，为细胞实验提供 充足的细胞来源。
03
样品分离与纯化
分离技术介绍
01
02
03Leabharlann 色谱分离技术利用不同物质在固定相和 流动相之间的分配系数差 异，实现样品的分离，如 液相色谱、气相色谱等。
电泳分离技术
利用物质在电场作用下的 迁移速度差异，实现样品 的分离，如凝胶电泳、毛 细管电泳等。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证1.血浆血浆样品处理方法主要包括离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取。
首先，通过离心将血清和细胞分离，并将上清液收集。
然后，使用超滤技术去除高分子物质，如蛋白质，以得到更纯净的血浆样品。
接下来，可以使用蛋白沉淀方法去除血浆中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。
最后，固相萃取是常用的药物浓度测定方法，可以通过固相材料吸附目标药物，然后用洗脱液洗脱和浓缩样品，最后定量分析。
2.尿液尿液样品处理方法常采用固相萃取、pH调节、加入稳定剂等技术。
固相萃取可以去除尿液中的杂质，并将药物萃取到固相材料上，然后用洗脱剂将药物洗脱出来。
pH调节可以使药物离子化或去离子化，以提高其固相萃取的效率。
此外，加入稳定剂可以保持样品的稳定性，防止药物分解或降解。
3.组织和细胞组织和细胞样品处理方法包括离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等技术。
首先，通过离心将组织或细胞分离，并收集上清液。
然后，使用组织切割技术将组织样品切成适当的大小。
对于细胞样品，可以使用细胞溶解剂将细胞完全裂解。
最后，蛋白沉淀可以去除样品中的蛋白质，以便进一步分析非蛋白质药物。
方法学验证是为了确保分析方法的准确性和可靠性而进行的步骤和操作流程的验证。
主要包括以下几个方面：1.线性范围验证：验证方法在一定浓度范围内，药物浓度与测定结果之间的关系是否呈线性。
2.灵敏度验证：验证方法的最低检测限、最低定量限和测定范围等指标，以评估方法对药物浓度的敏感度。
3.精密度和准确度验证：通过重复测定和与参考方法比较等方法验证方法的重复性和准确性。
4.选择性验证：验证方法对样品中其他可能存在的干扰物的选择性，以保证药物的测定不受干扰。
5.稳定性验证：验证样品在不同温度、时间、pH条件下的稳定性，以评估样品的保存期限和条件。
综上所述，体内药物分析常用的生物样品处理方法包括血浆的离心、超滤、蛋白沉淀和固相萃取，尿液的固相萃取、pH调节和加入稳定剂，组织和细胞的离心、组织切割、细胞溶解和蛋白沉淀等。
生物样品的采集、储存和预处理的SOP
生物样品的采集、储存和预处理的SOP1. 生物样品的采集：服药前取空白血样，服药后取样点应包括吸收相，分布相，消除相；药浓度峰值前至少有4个点，峰后取6个点或6个以上点，峰时间附近应有足够的取样点。
总取样点不少于11个，取样应持续到3 ～ 5个半衰的1/10 ～1/20。
具体可依据文献报道及预试验结果确定具体采血时期，或Cmax间点。
于服药前（0 h）和各时间点，取前臂静脉血5mL，处理后，离心10 min ( 3000r.p.m)，分离血浆或血清样品置试管中。
2. 生物样品的储存:血浆、血清样品，尽快分离（24h内），冷冻保存；短期内分析，可置4℃冰箱内冷藏。
长期分析，于－ 20℃冰箱内冷冻保存。
3. 生物样品的预处理:依据药物的理化性质，其酸碱性（pKa）、分子的亲脂性、挥发性、稳定性及可能的生物转化途径，制定相应的预处理方法。
a. 沉淀蛋白法生成不溶性沉淀:酸性试剂（三氯醋酸、高氯酸、钨酸、焦磷酸）重金属盐类（锌盐、铜盐、银盐、汞盐）盐析、脱水:硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等中性盐。
甲醇、乙腈、丙酮等可与水混溶的有机试剂。
各种沉淀试剂使用情况表b. 液-液萃取法水相pH：碱性药物最佳pH应高于其p Ka 2 ～ 3个单位酸性药物最佳pH应低于其p Ka 2 ～ 3个单位常用的有机溶剂：正己烷、异辛烷、环己烷、四氯化碳、甲苯、乙醚、苯、1，2-二氯乙烷、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯（极性由依次小至大）。
有机溶剂与水相容积比一般为 1：1或2：1。
选择提取溶剂的原则：对被测物有较大的亲和力；与水不互溶，极性较小；沸点适宜；不影响紫外检测；价廉、无毒、不易燃烧；化学性质稳定。
体内药物分析常用生物样品处理方法和方法学验证
精品文档
31
精品文档
32
萃取小柱一次性使用，防止交叉污染！
精品文档
33
固相萃取操作一般有五步：
活化——甲醇/乙腈 润湿小柱，活化填料； 平衡——水或适当缓冲液冲洗平衡小柱； 上样——将样品转移上柱，抽去废液； 淋洗——水或缓冲液最大程度洗去干扰物； 洗脱——用小体积的溶剂将被测物质洗脱下来并收集。
精品文档
16
实际应用中，多是取50uL的血浆，加入500uL的有机溶 剂，涡旋离心后，取上清进样；
若沉淀后，信号相应不好，可尝试更换有机溶剂或者 在沉淀时，加入酸或碱，调节pH值，可能会对结果影 响很大；
常用的酸碱有：盐酸，甲酸，乙酸，氨水等。
精品文档
17
优点：操作简单，为方法开发中最先考虑使用的。
尿液中药物浓度较高，但尿液浓度受尿量的影响，通常变 化较大，应测定一定时间内排入尿中药物的总量。
精品文档
12
5 唾液
唾液中所含成分比较简单，且容 易获得，但是只有少数药物的唾 液浓度和血浆游离药物浓度具有 相关性，实际使用不多，当药物 血浆结合率高的时候，唾液中药 物的浓度极低，很难检测。
精品文档
精品文档
39
HPLC中化学衍生化法，包括柱前衍生化和柱后衍生化两 种方法。
柱前衍生化分析前尽可能将药物进行提取分离后再衍生 化，防止其他含有相同的功能基团的杂质也被衍生化， 影响分离。柱后衍生化是药物经色谱柱分离之后进行的 ，所以可形成对检测器具有高灵敏度的衍生物。
HPLC法常用的衍生化试剂有邻苯二醛、丹磺酰氯、荧胺 等。
精品文档
15
1.沉淀蛋白
①有机溶剂沉淀法 加入水溶性的有机溶剂，可使蛋白质的分子内及分子间
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
一、方法特异性
方法的特异性(specificity) ——又称专属性或专一性，通常与选择性(selectivity)互用
——系指当有内源性物质存在时，方法准确测定待测物质的能力
专属性——表示所检测的信号(响应)系属于待测药物所特有的 选择性 ——系指将待测物质与其代谢物及同服的其它药物加以区 分(分离)的能力 特异性——涵盖二者，以验证所测定的物质与待测药物的同一性 考察一个分析方法是否具有特异性。
生 物 样 品 的 处 理 方 法
湿法破坏
常用试剂：硝酸或硝酸-高氯酸. 特点：破坏能力强、反应激烈，无机 金属离子为高价态. 应用：适用于血、尿、组织等生物样 品的破坏.
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
干法破坏
高温炉高温破坏
应用——适合人发样品的破坏
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
氧瓶燃烧法
应用——血浆、人发中卤素、硫、硒等 血浆：血浆1ml分次点于无灰滤纸上60℃ 烘干,按规定折叠后固定. 人发：洗净、干燥（60℃ ~ 80℃）剪碎, 称取0.1 ~ 0.3g置无灰滤纸,按规定 折叠固定.
第五章 药物定量分析与分析方法验证
②液-固提取法（固相萃取法）
原理： 将不同填料作为固定相装入微型小柱， 当含有药物的生物样品溶液通过时，由 于受到吸附、分配、离子交换或其它亲 和力作用，药物或杂质被保留在固定相 上，用适当溶剂清洗杂质，再用适当溶 剂洗脱药物。
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
含羟基、羧基、氨基和巯基药物
+ 葡萄糖醛酸→葡萄糖醛酸苷缀合物
含酚羟基、芳胺和醇类药物
+ 硫酸→ 硫酸酯缀合物
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
常用方法:
酸水解:盐酸
酶水解: 葡萄糖醛酸苷酶
硫酸酯酶 葡萄糖醛酸苷酶-硫酸酯酶
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
空白血清在pH2、pH7和pH13缓冲液中乙 醚提取，提取液用RP-HPLC(UV)测定，碱 性(pH13)下提取液的杂质峰最少
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
空白血清乙醚提取物的HPLC色谱图 生 物 样 品 的 处 理 方 法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
(4)化学衍生化
化学衍生化目的 ①使药物变成具有能被分离的特性 ②提高对样品的检则灵敏度 ③增加药物的稳定性 ④提高对光学异构体的分离能力
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（5）有机破坏
方法：湿法破坏
干法破坏
氧瓶燃烧法
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
（1）去除蛋白质(血样)
生 物 样 品 的 处 理 方 法
①加与水混溶的有机溶剂 —蛋白质分子内和分 子间氢键发生改变. (乙腈、甲醇、丙酮、四氢呋喃) ②加中性盐—蛋白质脱水. (饱和硫酸铵、硫酸钠、镁盐、
磷酸盐及枸橼酸盐等)
③加强酸 — 与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀
( 10%三氯醋酸、6%高氯酸、5%偏磷酸等)
④加含锌盐及铜盐的沉淀剂—与蛋白质阴离
子形成不溶性盐沉淀. (CuSO4-Na2WO4、ZnSO4-NaOH) ⑤酶解法—枯草菌溶素.适用于酸不稳定及蛋白 结合牢固药物.
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（2）缀合物的水解(尿样)
生物样品定量分析方法验证内容与基本要求 1．特异性——避免干扰 2．标准曲线与线性范围——覆盖所有浓度范围 3．准确度——与实际状况相符
4．精密度——结果可重现
5．定量限——达到峰浓度的1/10～1/20
6．稳定性——确保所有样品准确测定
7．提取回收率——确保准确度
第五章 药物定量分析与分析方法验证
18
第五章 药物定量分析与分析方法验证
二、标准曲线与线性范围
标准曲线（standard curve）—— calibration curve or working curve ——生物样品中所测定药物浓度与响应的相关性（比例的程度）
——通常用回归分析方法所得的回归方程来评价
——除少数方法（免疫分析法）外，标准曲线通常为线性模式 ——回归分析法为最小二乘法（least squares） 或加权最小二乘法（weighted least squares） 线性范围（linear rang）——标准曲线的最高与最低浓度的区间 ——模拟生物样品的测定结果应达到试验要求的精密度和准确度
生 物 样 品 的 处 理 方 法
（3）分离纯化与富集
①液-液萃取法
水相pH值是萃取成功的关键 水相最佳pH值
碱性药物：高于pKa值12个pH单位
酸性药物：低于pKa值12个pH单位
第五章 药物定量分析与分析方法验证-样品前处理
生 物 样 品 的 处 理 方 法
但生物样品宜在碱性或近中性提取 ——生物基质中内源性物质多为酸性， 在碱性下不易萃取
第五章 药物定量分析与分析方法验证
第五章 药物定量分析与分析方法验证
第一节 定量分析样品的前处理方法
第二节 定量分析方法的特点 第三节 药品分析方法的验证
第四节 生物样品分析方法的基本要求
第五章 药物定量分析与分析方法验证
生物样品分析的特点
1．干扰物质多——生物样品中含有大量的内源性物，如质蛋白 质、脂肪等，以及代谢物、结合物等干扰分能重复取样——生物样品多数在特定条件下采
集，无法再次取样
3．被测成分浓度低——对分析方法的灵敏度及专属性要求较高
第五章 药物定量分析与分析方法验证
体内分析方法要求
1. 检测方法的高灵敏度—最低检测量10-9~10-7g或10-15~10-12g 2. 分离方法的高选择性、高专属性 为满足各项要求，最常用的分析方法有 1 ） 色 谱 法 ——GC 、 HPLC 、 HPCE （ highperformance capillary electrophoresis） 2）免疫分析法——RIA、EIA 3）联用技术——GC-MS、LC-MS