苯酚降解菌
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析
一株好氧反硝化苯酚降解菌的筛选和降解特性分析一、前言苯酚是一种常见的有机化合物，广泛应用于各种工业领域中，但长期的排放和使用会对环境产生严重的污染。
因此，开发一种高效的苯酚降解菌对于环境保护至关重要。
本研究旨在筛选一株好氧反硝化苯酚降解菌，并对其降解特性进行分析。
二、材料与方法2.1 筛选苯酚菌本实验采用活性污泥为菌源，经过序列分离筛选获得苯酚降解菌。
分离后的菌株进行纯化后，经过16S rDNA序列比对确定其菌种。
2.2 生长条件的优化在不同的培养基和培养条件下，探究苯酚降解菌的最适生长条件，并确定其最适浓度和最适pH值等。
2.3 苯酚降解试验将苯酚降解菌接入含有苯酚的培养基中，分别在不同时间段内收集样品，使用高效液相色谱（HPLC）检测降解产物。
2.4 剖析苯酚降解代谢途径通过GC-MS分析降解菌代谢苯酚的代谢产物，分析苯酚降解代谢途径。
三、结果分析经过序列分析和比对，鉴定出本次筛选获得的菌株为一株好氧反硝化菌，归属于福克斯氏菌属。
本次实验结果显示，最适生长温度为30℃，最适pH值为7.5，最适浓度为250mg/L。
本次实验结果显示，在48小时内，苯酚的降解率可达到85%，降解产物主要为苯酚羟基化物。
GC-MS分析结果显示，菌株代谢苯酚主要通过羟基化、甲基化、环化等途径进行，其中苯酚加氧羟基化产物的比例最高。
四、结论本研究成功筛选出一株好氧反硝化苯酚降解菌，其最适生长条件为30℃，pH值为7.5，浓度为250mg/L。
在48小时内，苯酚降解率达到了85%，代谢途径主要为羟基化、甲基化、环化等。
本研究的结果对于苯酚的治理与处理具有重要的实践意义。
苯酚降解细菌实验报告
苯酚降解细菌实验报告引言苯酚是一种有机溶剂和消毒剂，在工业生产和日常生活中广泛使用。
然而，由于其具有较强的毒性和对环境的潜在危害，苯酚的降解成为了一个重要的研究领域。
本实验旨在从自然环境中分离得到能够降解苯酚的细菌，并对其降解效果进行评估。
实验方法物质及设备- 实验材料：含有苯酚的培养基、蒸馏水、苯酚溶液- 实验仪器：培养皿、移液管、恒温振荡器、烧杯、离心机实验步骤1. 从自然环境中采集土壤、水样品。
2. 将土壤、水样品分别加入含有苯酚的培养基中。
3. 分别在不同温度下（比如25、37）进行恒温振荡培养，培养时间根据实验需求确定。
4. 取样品进行稀释，并分别接种在含有苯酚的琼脂培养基上。
5. 利用平板计数法，计算出细菌的菌落数目。
6. 采用高效液相色谱法检测苯酚的含量。
7. 进一步筛选表现出较强降解能力的细菌，进行进一步鉴定。
实验结果细菌菌落数目在实验过程中，我们成功分离到了一株对苯酚具有较强降解能力的细菌。
经过平板计数法的计算，其细菌菌落数目为1.2x10^6 CFU/ml。
苯酚的降解效果我们利用高效液相色谱法对苯酚的降解情况进行了检测。
实验结果表明，在细菌作用下，苯酚的降解速率较快。
在48小时内，苯酚的浓度从初始浓度的100 mg/L 降至5 mg/L，降解率达到了95%以上。
数据分析与讨论细菌的降解机制细菌通过代谢苯酚的酶系将苯酚降解为无机化合物，并利用其作为碳源和能源。
该细菌可能通过以下途径降解苯酚：1. 将苯酚通过羟化作用转化为苯酚羟化物；2. 苯酚羟化物经进一步代谢，生成苯甲酸、邻苯酚等化合物；3. 经过一系列代谢反应，最终生成无机化合物，如水和二氧化碳。
细菌的应用前景本实验分离得到的对苯酚具有降解能力的细菌，拥有较高的降解效率和广泛的适应性。
这些细菌可应用于苯酚的处理和环境修复，对于解决苯酚污染问题具有良好的应用前景。
结论通过本次实验，我们成功地分离出具有苯酚降解能力的细菌，并对其降解效果进行了评估。
苯酚降解菌TX1的分离鉴定及其降解特性
Ｋｅ ｒ ｓ Ｐｈ ｎ Ｉ Ｔ ／ ｈ ｓ ｏ ｏ Ｃａ ｅ ｈ １ ２ ｄ ｏ ｙ ｅ ａ ｅ Ｇｒ ｗｔ ｉ ｅ ｉｓ ｙ ｗｏ ｄ ： ｅ ｏ ｒ ｏ ｐ ｒ ｎ ｃ ｔ ｃ ｏＩ ． － ｉ ｘ ｇ ｎ ｓ ｏ ｈ ｋｎ ｔ ｃ
Ｉｄ ｃｂｅ ｉｔａ ｅｌ ｌ ｅ ｚ ｍ ｅ Ｗ ｉ ｈｅｄａａ ｏｂ ａｎ ｄ ｉ ａ ｃ ｕｔ ｆ ｈ ｔａｎ ＴＸ１ ｔ ｗｔ ｉｅ ｉｓ ｎ ｕ ｉｌ ｎ ｒ ｃ ｌ ａｒ ｎ ｙ ． ｕ ｔ ｔ ｔ ｔ ｉｅ ｎ ｂ ｔ ｈ ｃ ｌ ｒ ｏ ｅ ｓ ｒ ｉ ｈ ｕｅ ｔ ，ｉ ｇ ｏ ｈ ｋｎ ｔ ｓ ｒ ｃ
ｇｅ ｕ ｒｃ ｏ ｐ ｒ ｎ ｓ ｎ ｍ ｅ Ｘ１ ｎ ｓＴｉｈ ｓ ｏ ｏ ｐ． ａ ｄＴ ．Ｔｈ ｒ ｌ ｎ ｒ ｔ ｄ ｎｔ ｅｍｅ ａ ｏｉ ａ ｈ ｙｏ ｈ ｏ ｂ ｕ ｓｓｒ ｎ ｅｐ ｅｉ ａ ｙｓｕ ｙｏ ｈ ｔ ｂ ｌ ｐ ｔｗａ ｆｐ ｅｎ ｌ ｏ ｌｈｉ ｔａｉ ｍｉ ｃ ａ ｔ
Ｓａｇ ａ ｎｉ ｓ ｅｔ Ｓｉ］ ｓ ｈｎ ｈｉ Ｅ ｖ ｏｍ ｎａ ｃ ｒｅ ｒＴ ｌ ｅｃ
苯 酚降解 菌 Ｔ 的分 离鉴 定及其 降解特性 Ｘ１
邱凌峰
苯酚降解菌 Ｔ 的分离鉴定及其降解特性 Ｘ １
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某种苯酚降解细菌的分离,纯化,鉴定
某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定一、引言近年来，环境污染问题日益突出，其中有机污染物的排放成为了一个备受关注的话题。
苯酚作为一种有机化合物，其在工业生产和生活中被广泛使用，但是其排放也给环境造成了不小的压力。
寻找一种能够高效降解苯酚的细菌成为了当下研究的热点之一。
本文将围绕某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定展开讨论。
二、苯酚降解细菌的分离1. 采样地点选择在开始分离苯酚降解细菌之前，首先需要明确采样地点的选择。
一般来说，苯酚的排放源比较集中，因此我们可以选择一些工业废水排放口、化工厂周围土壤和水体等地点进行采样。
2. 细菌分离方法经过采样后，我们可以利用稀释涂布法将采样的土壤或水样涂布在琼脂平板上，然后在适宜的温度和培养基条件下进行培养。
通过分离光圈和纯化培养，我们可以获得一系列有苯酚降解能力的细菌菌落。
三、苯酚降解细菌的纯化1. 选优菌落的鉴定在得到一系列有苯酚降解能力的细菌菌落之后，我们需要通过形态学、生理生化特性等手段对细菌进行初步鉴定，筛选出表现最佳的细菌进行后续的纯化培养。
2. 纯化培养方法对选优细菌进行纯化培养可以采用多次转接法，即将单一细菌菌落进行二次以上的转接，以获得单一细菌培养物。
四、苯酚降解细菌的鉴定1. 生化鉴定利用生化试剂对细菌进行生化反应鉴定，例如利用氧化酶试剂对细菌进行氧化酶试验，利用酚红素试剂对细菌进行酚氧化酶试验等，从而初步判断细菌的代谢特性。
2. 分子生物学鉴定通过16S rRNA基因测序鉴定细菌的亲缘关系，确定其属种级别的分类位置。
五、个人观点和总结苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定是一项具有挑战性的工作，需要从多个角度进行综合分析和判断。
通过本文的探讨，我们不仅仅了解了苯酚降解细菌的基本分离和纯化方法，还深入了解了细菌鉴定和分类的相关技术。
希望通过这些工作，能够为环境污染治理和资源开发提供一些有益的参考和借鉴。
苯酚是一种常见的工业化合物，在工业生产和生活中被广泛使用。
苯酚降解菌MW-1的分离及其降解特性研究
苯酚降解菌ＭＷ－1的分离及其降解特性研究摘要：用以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐驯化液对沈阳某煤气厂土壤进行驯化培养。
从中分离筛选到1株苯酚降解菌。
编号为MW-1。
试菌株最高可耐受1600苯酚，其降解性能研究表明：该菌具有较强的苯酚降解能力。
在30。
C，pH5.5—7.5。
装液量为60mL，接种量20％，摇床振荡速度120 r／min的每件下，振荡培养6 h后可使400=e,／L的苯酚降解率逮80％以上。
虽然葡萄糖对该菌体的生长及降解苯酚均有一定的抑制作用。
但有葡萄糖(600 me／L)存在的情况下，该菌对苯酚的降解率仍接近60％。
这对处理含有其它碳源的含酚度水具有一定的意义。
关键词：苯酚；苯酚降解菌；特性试验文献标识码：A苯酚是焦化、造纸、石油、塑料、纺织、制药等工业废水中的主要污染物，也是生物降解多种人工合成化合物如杀虫剂时产生的一种中间代谢物。
大量酚类物质及其衍生物在土壤和水体中的排放和积累导致了生态环境的日趋恶化，许多国家已将其列入环境优先控制污染物的黑名单中。
近年来，国内外在苯酚生物降解方面进行了广泛的研究，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物有细菌、酵母菌等。
利用培养优势菌群的微生物法降解酚类化合物因其投资少、处理效率高、运行成本低、无二次污染等优点而得到越来越广泛的应用。
本试验从沈阳某废弃煤气厂土壤中分离筛选到一株高效苯酚降解菌，并对其降解特性进行了研究，旨在找到对酚类化合物具有高效降解能力的优势菌株，为今后的进一步研究及含酚废水的生物处理奠定基础。
1材料与方法1.1菌种的来源沈阳某废弃煤气厂土壤1.2培养基驯化培养液：为无机盐溶液中添加一定浓度的苯酚配制而成。
各种无机盐的含量为(g／L)：NaO0.2；NH4.N03 1.0。
分离及保存培养基：为含200 m#L儿苯酚的牛肉膏蛋白胨固体培养基。
1.3苯酚降解菌的驯化、筛选与分离取一定量的菌源土壤加入到苯酚浓度为300mv／L的驯化培养液中,室温通气富集培养，定时取样测定苯酚浓度，至苯酚完全降解后，再加入新的以苯酚为唯一碳源的驯化培养液进行驯化培养。
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究摘要从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，初步确定为假单胞菌属（Pseudomonas）；该菌株能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长；可以在20～40℃、pH值5.0～9.0范围内较好生长；降解苯酚最适温度为35℃，最适pH 值为7.0，最大降解率达到89％。
完全降解无机盐培养基中500mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L的苯酚分别需要60h、72h、108h。
关键词苯酚；生物降解；假单胞菌属苯酚是树脂制造、炼油、焦碳、染料、纺织、农药和医药生产等工业废水中的主要污染物[1-2]，在水体中，5～25mg/L的苯酚即可对鱼类的生存构成威胁[3]。
被美国环保署列入优先控制污染物和65种有毒污染物名单，也是我国优先控制污染物之一[4]。
因此，含酚工业废水的治理在环保中具有重大的意义。
除了传统的理化方法外，用微生物降解苯酚的方法对环境无害且成本低廉，因而在苯酚污染治理中起了越来越重要的作用[5]。
但是，目前生物处理技术只限于处理低浓度的含酚废水，而高浓度含酚废水具有污染物浓度高、可生化性差等特点，制约了这一技术在实际中的应用。
本实验从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，并对其降解特性进行了研究。
1 材料与方法1.1 培养基无机盐培养液[7]（g/L）：(NH4NO3 1.0，CaCl2 0.1，K2HPO4 0.5g，KH2PO4 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，NaCl 1.0，定容到1 000 mL，pH值7.0～7.2，固体培养基中加入1.5％～1.8％的琼脂，按实际需要加入相应浓度的苯酚。
1.2 高效降解细菌的筛选和驯化从某农药厂废水处理活性污泥中采集污泥样品，称取5.0g污泥置于预先灭菌的100mL苯酚浓度为500mg/L的无机盐培养液中，30℃、150r/min振荡培养，到培养液浑浊后，按1％接种量转接到苯酚浓度为1 000 mg/L的无机盐培养液中，继续振荡培养。
苯酚降解菌的固定化及其降解特性的研究
１ ２ 方 法 ．
ｆ
１ ２ １ 细菌 的培 养 ．． 将 菌株 接种 到牛 肉膏蛋 白胨培 养 基 中 ， ３ ％ 的 在 ０ 恒 温培 养箱 中活化 ７ ， ２ｈ 然后 从 驯 化 的菌 落 中挑 取适 合 的菌 落 接 种 到 牛 肉 膏 蛋 白胨 液 体 培 养 基 中，于 ３ ℃ 、 ５ ｍｉ 摇 床 培 养 ２ 。将 菌 悬 液接 种 至 ０ １ ０ｒ・ ｎ ４ｈ 新鲜 的牛 肉膏 蛋 白胨液体 培养 基 ， 相 同 的条件 下 培 在 养 １ ， 到对 数生 长期 的菌体 。 ２ｈ 得
摘
要 ｉ 海 藻 酸钠 为 载 体 ， 苯 酚 降 解 菌 进 行 细 胞 固定 化 ， 对 其 降 解 特 性 进 行 了研 究 。 通 过 单 因 素 实验 确 定 较 以 对 并
佳 的 固定 化 条 件 为 ： 藻 酸钠 质 量 浓度 ３ ０ 、 ａ １ 量 浓 度 ４ ０ 、 菌 体 量 ０ ４ｇ ｌ 海 ． Ｃ Ｃ 质 ． 湿 ． ／ Ｏ ｍＬ海 藻 酸钠 溶 液 ； 固定 化 细 胞
Ｎａ １ ， 酚 ０ ３ｇ 蒸 馏 水 １Ｉ， Ｈ 值 自然 。 Ｃ ｇ 苯 ５ ． ， ｐ
苯酚降解菌的筛选及其降解特性初探
Ｖ１７ 。 ｏ２ Ｎ． ． ４
Ａ ｇ２ １ ｕ．０ １
苯 酚 降解 菌 的 筛 选 及 其 降解 特 性 初 探
周倩倩 ， 丁 丛 ， 志平 ， 王 蔡伟 民
（ 上海交通大学 环境科 学与工程学 院 ， 上海 ２ ０４ ） ０ ２ ０
摘
要： 为深入 了解好氧颗粒污泥降解苯酚的 内在机 制 ， 用苯酚选择性培养基从 颗粒污泥 中筛选出 采
关键词 ： 生物 降解 ； 热带假 丝酵母 ； 苯酚 ； 降解特性
中图分 类号 ： １２ Ｘ ７ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ：６２— ９ ６ ２ １ ）４— ５４— ６ １７ ０ ４ （０ １ ０ ０ ４ ０
பைடு நூலகம்
Ｉ ｏ ａ ｉ ｎ ｏ ｅ ｏ － ｅ ｒ ｄｉ ｇ ｓｒ ｉ ｎ ｒ ｌ ｉ ｒ ｓ ｌ ｔｏ ｆｐｈ ｎ ｌｄ ｇ ａ ｎ ｔ ａ ｎ ａ ｄ ｐ ｅｉ ｎａ ｙ ｍ
第２卷 第４ ７ 期
２ １ 年８月 ０ １
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 （自然科 学版 ）
Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆＨ ｒ ｉ ｎｖｒｉ ｆ ｏ ｏ ｒ ａ ｏ ａ ｂｎ Ｕ ｉｅｓ ｙｏ ｍｍｅｃ Ｎａｕ ａ Ｓ ｉｎ ｅ ｄｔ ｎ ｔ Ｃ ｒｅ（ ｔｒｌ ｃ ｃｓＥ ｉｏ ） ｅ ｉ
苯酚降解菌的筛选及性能评价
少， 可分为单元酚 （ 如苯酚） 和多元酚 。按
其能 否与水蒸气 共沸而挥 发 ． 又分 为挥发
混凝 沉淀 和气浮 法 、 气提 及蒸 酚和不挥 发酚。 因此 ． 酚类不仅指 苯酚 ， 而 有盐析 法 、 馏法 、 吸 附法 、 萃取 法 、 离 子交换 法、 膜技 且还 包括邻位 和间位被烃基 、 卤素 、 烷基、 硝基、 亚硝 基 、 羧基 、 醛基、 苯 甲酞等 取 代
苯 酚 降 解 茵 的 筛 选 及 性 能 评 价
辽 宁阜 新 氟产 业 开发 区 高博
一Hale Waihona Puke 、引 言 苯酚是原生质毒 ， 属于高毒 物质。它 酚废水 。 但是 需要消耗大 量的能源 。离 子
吸收和经 口服 交换 法不 适 用于 处理 数万 毫克每 升的 高 随着石油化工、 塑料、 合成纤维、 焦化 可以通过皮肤粘膜 的接触 、 等 工业的迅速发 展 ． 各种 含酚废 水也相 应 而侵入人体 内部 ， 与细胞 原浆质蛋 白质能 浓度含酚废水 。 增多， 由于 含酚 废水 的毒 性较 大 。 而且 涉 及水 生生物 的生长和繁殖 ， 污染 饮用水 水 源。 因此对 含酚废水 的排 放必须 有严格 的 规定 。一般条 件下 ， 规定 饮用水 的含挥 发
性酚 的浓度为 ０ ． ０ ０ １ ｍｇ ／ Ｌ 。 水源 水体 中含
形成不溶性蛋 白质 ， 使 细胞失去活 力 ， 高 浓度酚可使蛋 白质凝 固及 引起组 织损伤 、
２ 、 含 酚废 水 的化学处理 法
化学处理法主要有化学沉淀法、 化学
酚最高容许浓 度为 ０ ． Ｏ ０ ２ ｍ ｇ ／ Ｌ ［ １ ］ 。 根 据这
（ 一） 、 含 酚 废 水 的 来 源
在水处理 中的利用率较低 。 且 臭氧生产 费 １ ９ ７ ２年 Ｆ ｕ ｊ ｉ ｓ ｈ ｉ ｍ ａ等发现 了 Ｏ ． 电极 上
高效苯酚降解菌的筛选及其特性的研究
鉴定该菌为球 菌， 兰氏染色阴性 。 实验结果表 明 ： 革 降解苯 酚的最佳条件为 ： 温度 ３ 、 Ｈ值 ７ ８ 葡 萄糖 浓度 １５０ｍｇ 、 ０ｏ ｐ Ｃ ～， ０ ／ 接 Ｌ
种 量 ｌ％、 液 量 ５ Ｌ Ｏ 装 ０ｍ 。 关键词 ： 酚 ； 化 ； 苯 驯 筛选 ； 响 因素 影
文章 编 号 ：６ ４ １２ （０ ０ ０ — ０ ５ ０ １ ７— ０ １ ２ １ ）９ ０４ — ３
长所 需 的各种 营 养物 质 。实 际工 业含 酚废 水 中可 能 苯 酚是 一种 重要 的有 机化 工 原料 ，是 丙烯 的重
要 衍 生物 之 一 ， 要用 于 生 产 酚醛 树 脂 、 主 己内酰 胺 、 双 酚 Ａ、 己二 酸苯胺 以及 水杨 酸 等 …， 成 为这 些 工 并
ｄｏ ｅ１ ％ ，ｉ ｉ ｏ ｕ ｅ５ ｍ Ｌ ｓ ０ ｌｑｕ ｄｖ ｌ ｍ ０ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｈｅ ｏ ； ｃ ｌｍａｔ ａｉ ｎ ｓ ｒ ｅ ｎｇ ｆ ｃｏ ｓ ｐ ｎ ｌａ ｃ ｉ ｉ ｔｏ ； ｃ ｅ ｎｉ ； ａ ｔｒ ｚ
中 图分 类 号 Ａ
Ｋ２ ＨＰＯ４０． Ｌ， Ｓ ５ Ｍｇ Ｏ４‘ ７Ｈ２ ０． ／ Ｃａ ２０． ／ ０ ２ ｇ Ｌ， Ｃ１ １ ｇ Ｌ，
业废 水 中 的主要 污染 物 。 中国等 许多 国家 已将 其列
入重点污染物的名单之中［。 ２ 近年来 ， １ 国内外许多学 者在生物降解苯酚方面进行了广泛的研究 ，已筛选 出多种 降 酚微 生物 菌株 ， 如假 单 胞 菌 （ｓｕｏ ｏａ— Ｐｅｄｍ ｎｓ ｓ． 、 ｐ ） 真养 产碱菌 （ ａｉｅｅ ｕｒ ｈ ｓ …、 Ａｌ ｌ ｎ ｓ ｔ ｐ ｕ ） 醋酸 钙 ｃ ｇ ｅ ｏ
高效苯 酚降解菌 的筛选及其特性 的研究
实验三 高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定
实验三高效苯酚降解菌的筛选及其性能测定一、实验目的1、掌握微生物分离纯化的基本操作；2、掌握用选择性培养基从环境中分离苯酚降解菌的原理和方法；3、掌握微生物对酚降解能力的测定方法；4、掌握4-氨基安替比林法测定苯酚含量的方法。
二、实验原理在工业废水的生物处理中，对污染成分单一的有毒废水，可以选育特定的高效菌株进行处理。
这些高效菌株以有机污染物作为其生长所需的能源、碳源或氮源，从而使有机污染物得以降解，具有处理效率高、耐受毒性强等优点。
苯酚是一种在自然条件下难降解的有机物，其长期残留于空气、水体、土壤中，会造成严重的环境污染，对人体、动物有较高毒性。
本实验通过筛选苯酚降解菌来处理含酚废水，将苯酚降解为为二氧化碳和水，消除对环境的污染。
+ COOHCH2CH2COOH CH3COOHCO2+H2O从环境中采样后，在以苯酚为唯一碳源的培养基中，经富集培养、分离纯化、降解实验和性能测定，可筛选出高效酚降解菌。
三、实验器材与试剂1、样品实验土样采自校园污水处理厂。
2、器材恒温培养箱、恒温摇床、分光光度计、比色皿、试管、250mL三角瓶、100mL 容量瓶、培养皿、涂布玻棒、量筒、天平、灭菌锅、酒精灯、接种环、棉花、棉线、牛皮纸、pH试纸。
3、试剂葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨、苯酚、四硼酸钠（Na2B4O7）、4-氨基安替比林、过硫酸铵（（NH4）2S2O8）、K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、琼脂。
苯酚标准溶液：称取分析纯苯酚1.0g，溶于蒸馏水中，稀释至1000mL，摇匀。
此溶液溶度为1000mg/L。
测定标准曲线时将苯酚浓度稀释至100mg/L。
Na2B4O7饱和溶液：称取Na2B4O740g，溶于1L蒸馏水中，冷却后使用，此溶液的pH值为10.1。
3% 4-氨基安替比林溶液：称取分析纯4-氨基安替比林3g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。
2% （NH4）2S2O8溶液：称取分析出（NH4）2S2O8 2g，溶于蒸馏水中，并稀释至100mL，置于棕色瓶中，冰箱保存，可用两周。
苯酚降解菌筛选及降解特性研究
（ Ｓ ｃ ｈ ｏ ｏ ｌ ｏ ｆＥ ｎ ｖ ｉ ｒ ｏ ｎ ｍ ｅ ｎ ｔ Ｓ ｃ ｉ ｅ ｎ ｃ ｅ ， Ｌ ｉ ａ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ ， Ｓ ｈ ｅ ｎ ｙ ａ ｎ ｇ １ １ ０ ０ ３ ６降解特性研 究
李鲜珠 ， 沈玉冰 ， 马溪平 ， 王 闻烨 ， 李万龙 ， 张宏亮 ， 徐成斌
（ 辽 宁大学环境学院 ， 辽宁 沈阳 １ １ ０ ０ ３ ６ ）
摘要 ： 针 对 焦化废 水 生物难 降 解有机 物含 量 高、 实 际生产过 程 中的 水质 和 水 量 变化 大的 特 点 ， 开展 了高效 菌株 处理含 酚 废水 的试 验研 究 。从 某焦化 厂水 处理 车 间生物 处理装 置 曝 气池活性 污泥 中驯
化、 分 离和 筛选得 到 ４株 以苯 酚为唯 一碳 源的 高效降解 茵 ， 并对 其进行 鉴 定及 降解特 性研 究。结 果
表 明： 初 步鉴 定 ｈ ３ ２ ａ ２ 、 ｂ ３ １ Ｂ 、 ｈ ３ １ Ａ和 ｂ ４ １ ａ为假 单胞 菌属 （ Ｐ ｓ ｅ ｕ ｄ ｏ ｍ ｏ ｎ ａ ￥ ｓ ｐ ． ） ； 通过 溴化 容 量 法测 定 苯酚含 量 ， 确定 了菌株 的最佳 降解条件为 ： 温度 ３ ２ ｏ Ｃ， ｐ Ｈ值 ７ ． ５ ， 培养 时间 １ ６ ｈ ， 接种 密度 １ ％， 且 单一
ｄ ｏ ｍｅ ｓ ｔ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ，ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ｒ ｅ ｅ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｏ ｔ ｈ ｅ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ａ ｔ ｅ ｄ ｓ ｌ ｕ ｄ ｇ ｅ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ａ ｅ ｒ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｔ ａ ｎ ｋ。ａ ｂ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｖ ｉ ｃ ｅ ，ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｗａ ｔ ｅ ｒ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｐ ｌ ａ ｎ ｔ ｉ ｎ ａ ｃ ｏ ｋ ｉ ｎ ｇ ｆ ａ ｃ ｔ ｏ ｒ ｙ ．Ｔ ｈ ｏ ｓ ｅ ｆ ｏ ｕ ｒ ｈ ｉ ｇ ｈ ｌ ｙ ｅ ｉｃ ｆ ｉ ｅ ｎ ｔ ｄ ｅ ｇ ｒ ａ ｄ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｉ ｒ ａ ｓ ｔ ｒ ａ ｉ ｎ ｓ ｗｅ ｒ ｅ ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉ ｆ ｅ ｄ
苯酚降解菌
苯酚降解菌2,3-邻苯二酚双加氧酶基因克隆和序列分析一．摘要：环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，通常含酚废水中又以苯酚和甲酚的含量最高。
目前环境监测常以苯酚和甲酚等挥发性酚作为污染指标。
苯酚广泛存在于石油、化工、煤气、焦化、钢铁及酚类生产厂排放的废水中。
含酚废水的排放导致水源污染,毒死鱼虾,危害农作物,并严重威胁人类的健康,在我国水污染控制中已被列为重点解决的有害废水之一。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数微生物所分解。
在油田地层水中分离出苯酚降解菌BF80，并且从BF80中克隆出编码2，3-邻苯二酚双加氧酶(参与苯酚降解所必须的一种酶)的基因序列；采用基因克隆的策略是通过PCR进行片段克隆，并用UNIQ-10柱形DNA 回收试剂盒回收产物，采用NCBI BLAST序列分析表明该基因片段长1207bp,序列比较分析表明该基因片段与2-苯酚羟化酶A相似度达88%，氨基酸序列分析表明其与2,3-邻苯二酚双加氧酶相似度达96%。
本实验研究编码降解苯酚的2,3-邻苯二酚双加氧酶的基因克隆及序列分析，为构建高效降解苯酚的基因工程菌奠定了基础。
Phenol degrading bacteria 2 - phenol hydroxylase gene sequence analysisAbstract:Phenol pollution in the environment mainly refers to phenolic compounds on water pollution, waste water containing phenol is usually turned around the highest levels of phenol and cresol. Often present environmental monitoring such as phenol and cresol Phenol as pollution indicators. Phenol widespread in the petroleum, chemical, gas, coke, steel and phenolic wastewater plant emissions. Phenolic wastewater emissions of water pollution, poisoned fish, damage crops, and a serious threat to human health, water pollution control in China has been a key to solve one of the harmful waste. The toxicity of phenol organics still only a small number of micro-organisms, their decomposition.In oilfield water of phenol degrading bacteria isolated from BF80, and BF80 was cloned from the 2,3 - catechol dioxygenase (involved in phenol degradation of an enzyme necessary) of the gene sequence; using gene cloning strategy were cloned by PCR, with UNIQ-10 column DNA extraction kit recycling products, using NCBI BLAST sequence analysis showed that the gene fragment was 1207bp, Sequence analysis showed that the gene fragment and 2 - A similarity to phenol hydroxylase 88% amino acid sequence analysis showed that with 2,3 - catechol dioxygenase similarity of 96%. This study coded degradation of phenol 2,3 Catechol Dioxygenase Gene Cloning and sequence analysis, in order to build efficient genetic engineering of bacteria degrading phenol basis关键词：苯酚苯酚降解菌基因克隆基因序列分析二、前言苯酚俗名石炭酸，无色结晶或结晶熔块，具有特殊气味（与浆糊的味道相似）。
苯酚的降解实验报告
一、实验目的1. 了解苯酚的性质及其对环境的危害。
2. 掌握苯酚降解实验的基本原理和方法。
3. 研究不同降解方法对苯酚降解效果的影响。
二、实验原理苯酚是一种有机化合物，化学式为C6H5OH。
苯酚在水中溶解度较低，但在酸性条件下溶解度会增大。
苯酚具有毒性，对环境和生物体均有害。
本实验采用多种方法对苯酚进行降解，包括生物降解、化学氧化和吸附法等。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 苯酚标准溶液- 酸性高锰酸钾溶液- 氯化铁溶液- 活性炭- 菌株（苯酚降解菌）- 培养基- pH试纸- 温度计- 分光光度计2. 实验仪器：- 磁力搅拌器- 烧杯- 移液管- 烧瓶- 滴定管- 恒温水浴锅四、实验方法1. 苯酚降解实验（1）生物降解实验：将苯酚降解菌接种于含有苯酚的培养基中，在适宜的温度和pH条件下培养。
定期取样，测定苯酚含量，研究苯酚降解效果。
（2）化学氧化实验：将苯酚溶液与酸性高锰酸钾溶液混合，在适宜的温度下反应。
定期取样，测定苯酚含量，研究化学氧化对苯酚降解效果的影响。
（3）吸附法实验：将苯酚溶液与活性炭混合，在适宜的温度下反应。
定期取样，测定苯酚含量，研究吸附法对苯酚降解效果的影响。
2. 苯酚含量测定采用紫外分光光度法测定苯酚含量。
在特定波长下，苯酚溶液的吸光度与其浓度呈线性关系。
通过测定吸光度，计算苯酚浓度。
五、实验步骤1. 生物降解实验（1）将苯酚降解菌接种于含有苯酚的培养基中，置于恒温培养箱中培养。
（2）定期取样，测定苯酚含量，记录数据。
2. 化学氧化实验（1）将苯酚溶液与酸性高锰酸钾溶液混合，置于恒温水浴锅中。
（2）定期取样，测定苯酚含量，记录数据。
3. 吸附法实验（1）将苯酚溶液与活性炭混合，置于恒温水浴锅中。
（2）定期取样，测定苯酚含量，记录数据。
4. 苯酚含量测定（1）取一定量的苯酚溶液，置于比色皿中。
（2）使用分光光度计测定吸光度。
（3）根据吸光度与苯酚浓度的线性关系，计算苯酚浓度。
污水中苯酚降解菌的分离与初探
０ ０ １ ｇ （ Ｈ ）ｚ０ ２ ｇ ＨＰ １ ． ，琼 脂 ． ０ ， Ｎ Ｓ ４ ，Ｋ ２Ｏ ０ ７ ｇ １ ，水 １ ０ Ｅ Ｈ ７ ０ ｇ ７ ０ ０ ｍ ，ｐ ． 。 １ １ ４ 主要仪器 ．．
标准双人净化工作 台 （Ｗ Ｃ－ Ｃ Ｓ－ Ｊ１ ），蒸汽消毒 器 （ ＸＧ ２ ＹＱ０ ），电热鼓风干燥箱 （ Ａ－ ），恒 １ｌＢ １ ０ 温培养箱 （Ｒ一 ５一 ），光学显微镜 （ ２ ０Ａ ＬＨ ２０Ｇ Ｌ ００ ）， 恒温振荡器 （ Ｚ ８） Ｓ － ２ ，架盘药物天平 （ Ｐ １０ ）， Ｈ Ｊ－ ００ 冰箱 （Ｃ－８ＫＦＲ ，磁力加热搅拌器 （９Ｉ ＢＤ１３ ＆ ） ７－ ），
要 ：用基本培养基采用涂布平板 法从工业和生活 污水 中共分 离得 到 ４ １种菌株 ，其 中有 １ 能够在 以苯酚为唯 ３株
碳源 的无机盐培养基上生长即为苯酚 降解 菌——细 菌 １ 株 ，真 菌 １ ，放 线菌 １株 。同时对其进行 了革 兰氏染色、生 １ 株
关键词 ：污水；苯酚降解菌；苯酚 ；分 离 中图分类号 ：Ｘ１２ ７ 文献标识码 ：Ａ 文章编号 ： １７ ．６ ８２ １）４０ ９ ．３ ６ ２４ ５ （０ ０ ．１００ １
ｐ ．４～ ７ 。 Ｈ７ ．６
１ — 反 应 ）Ｖ Ｐ
高氏 １ 号培养基：可溶性淀粉 ２ ，Ｋ０ ， ０ｇ Ｎ １ｇ
Ｎ Ｃ ０ ５ ｇ， Ｋ Ｈ Ｏ ａ １ ． Ｐ ４・ ３ ０ ５ ２ Ｈ ０ ． ｇ， Ｍ Ｓ ４ ‘７ ２ ｇ０ Ｈ０ ２
葡萄糖蛋 白胨水培养基：蛋白胨 ２５ｇ ． ，葡萄
糖 ２ ５ ｇ ２Ｐ ４１ ｇ ． ，ＫＨ ０ ，水 ５ ０ ｍ ，ｐ ． 。 ０ Ｌ Ｈ ７ ２
ＶＰ试剂：Ｃ Ｓ １ｇ － ｕ ０ ，蒸馏水 １ Ｌ ０ｍ ，浓氨水 ｐＨ ． ７ ４～ ７ ６。 ． ４ Ｌ ＯＮ Ｏ ５ Ｌ ０ｍ ，１％ ａＨ ９ ０ｍ 。先将 Ｃ Ｓ ｕ０ 溶于蒸馏水 中， 然后 加 浓氨水 ，最后 加 １％ ａＨ ０Ｎ ０ 。 Ｐ Ａ培养基 ：土豆 ２ ０ｇ Ｄ ０ ，葡萄糖 ２ ，琼 ０ｇ 将菌种接种培养在 ３ ７℃下，培养 ２ ～ ８ ｈ ４ ４ ， 脂 １ ，水 １ ０ Ｌ ｐ 自然 。 ７ｇ ０ ０ｍ ， Ｉ － Ｉ
实验一 苯酚降解菌的分离及降解性测定
实验一苯酚降解菌的分离及降解性测定实验原理：在污染环境中，大部分微生物由于受到毒害而死亡，少数微生物具有较强的降解能力或通过诱变改变其基因型或诱导产生某些酶而能在污染的环境中存活，成为有机污染物的高效降解菌或耐性菌株。
从污染环境中取样，通过在选择性培养基上培养，可筛选出目的性微生物。
本实验取青年湖水样作为菌种的来源，在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基进行培养，分离苯酚降解菌。
实验步骤：1. 从污染地区取样品（污水，污泥或受污染的土壤）。
2. 配制无碳源的无机盐培养基，加入苯酚储备液，使培养基中苯酚浓度达100 mg/L。
121℃灭菌20 min。
3. 吸取1 ml活性污泥，加入灭菌培养基，同时做空白对照，28℃恒温摇床培养24 h（160rmp/min）.4. 测定苯酚降解率。
苯酚降解率的测定方法：a.标准曲线的绘制分别吸取0、1、2、3、4、5mL 酚标准溶液（100 mg/L）于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。
加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。
用722型分光光度计460nm波长处比色测定。
b.以不加酚的试剂作空白对照，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准曲线。
c.培养液中苯酚降解率的测定吸取培养液2mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。
加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL 4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。
用722型分光光度计460 nm波长处比色测定。
d.根据标准曲线求出苯酚含量以分解苯酚的百分数表示酚分解作用强弱。
附：无机盐含酚培养基KH2PO40.5gK2HPO40.5gMgSO4•7H2O 0.2gCaCl2 0.1gNaCl 0.2gNH4NO3 1.0gFeCl210%溶液1滴苯酚100mg/L水1000mL调pH 值7.5，121℃灭菌20min。
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
［ 键词】 苯 酚； 关 降解 ；６ Ｄ Ａ； 形 芽孢 杆 菌 １Ｓ ｒ Ｎ 球
酚 降 解 菌株 ； 利用 形 态观 察 、 生理 生 化检 测 、 ６ Ｄ Ａ序 列 分 析 进 行 初 步鉴 定 。 结 果 ： 选 获 得 １ 苯 酚 降 解 菌 Ｊ Ｍ一 — ， １Ｓ ｒ Ｎ 筛 株 Ｄ ２ １
该 菌 能 够 以苯 酚 为 惟 一 碳 源 ，耐 酚 能 力 高 达 ２ ２０ ｍ ／ ０ ｇＬ，在 ３ ℃和 ｐ ７０条 件 下 ，２ ｈ 内能 将 ８０ ｍ ／ 的苯 酚彻 底 降 ０ Ｈ． ４ ０ ｇＬ
ｐ ｙ ｉｌｇ ｃ ｌ ａ ｄ ｂ ｏ ｈ ｍｉａ ｈ ａ ｔｒｓｉｓ ａ ｄ ６ Ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ．Ｔ ｉ ａ ｔｒａ ｔ ｉ ｃ ｕ ｄ ｔ ｉｅ ｐ ｅ ｏ ｓ ａ ｓ ｌ ｈ ｓｏｏ ｉ ａ ｎ ｉｃ ｅ ｃ ｌｃ ａ ｃｅ ｔ ， ｎ １ Ｓ ｒ ＮＡ ｅ ｕ ｎ ｅ ｈ ｓ ｂ ｃ ｅ ｌ ｓ ａｎ ｏ ｌ ｕ ｉ ｚ ｈ ｎ ｌ ａ ｏ ｅ ｒ ｉ ｃ ｉ ｒ ｌ ｃ ｂ ｎ ｏｅ ａｅ ｐ ｅ ｏ ｏ ０ ／ ，ａ ｄ ｄ ｇ ａ ｅ ｐ ｅ ｏ ｏ ０ ／ ｏ ｌｔ ｌ ｎ ｐ ｒ ｄ ｏ ２ ｈ ｗｈ ｎ ｇ ｏ ｎ ｎ ｒ ａ ｏ ，ｔ ｌｒ ｔ ｈ ｎ ｌ ｆ ２ ２ ０ ｍｇ Ｌ ｎ ｅ ｄ ｈ ｎ ｌ ｆ ８ ０ ｍｇ Ｌ ｃ ｍｐ ｅ ｅｙ ｉ ｅ ｏ ｆ ４ ｅ ｒ ｗｉ ｇ ｏ ｒ ｉ
ｂ ｃｅ ａ ｔ ｉ ＤＭ一 —１ ａ ｔｒ ｌｓｒ ｎ Ｊ ｉ ａ ２ ｗａ ｓ ｌｔｄ ａ ｄ ｉｅ ｔ ｅ ｒｌ ｎ ｒｙ ａ ａ ｉｕ ｐ ａ ｒ ｕ ｏ ｈ ａ ｉ ｏ ｔ ｒ ｈ ｌｇｃ ， ｓ ｉ ａｅ ｎ ｄ ｎｉ ｄ ｐｅｉ ａ ｌ ｓ Ｂ ｃｌ ｓ ｓ ｈ ｅ ｉｓ ｎ ｔｅ ｂ ｓｓ ｆｉ ｍｏｐ ｏｏ ｉａ ｏ ｉ ｆ ｍｉ ｉ ｌ ｃ ｓ ｌ
炼油废水苯酚降解菌的分离筛选及特性初步研究
碳 源培 养基上 生长的 茵株 ，通过耐 受性 实验 ，筛选 出能够耐 受１０ ｍｇ 苯酚浓度 的菌株ｚ 一 。该 ００ ／ Ｌ Ｊ１ 菌株 最适 降解温度 为３ ℃，最适 降解ｐ ２ Ｈ值在７ 左右 ；接 种量 为１ ｍＬ （．×１ ｍ ）时 ，该菌株 ． ５ ４ ７ ０＆／ Ｅ 在４ 小时 内苯酚 降解率 可达８ ． ％。培 养液 中苯酚浓度 在３ ０ ０ ｍｇＬ 间时，该 菌株 的降解率 ８ １３ ３ ０ ～５ ０ ／ ￣ 比较 明显 ， 当苯酚浓度 大于１０ ｍｇ 时 ，无明显降解效果 。 ００ ／ Ｌ 关键词 ：苯酚 降解 降解率
腐蚀研究
ｒ Ｃｏｒ ｏｓｉ ￣ ｅａ ｃｈ ｒ ｏｎ Ｒ
臣 冒 嗣
炼油废水苯酚 降解菌的分离筛选及
特性初步研究
何 军 晁群芳 彭 卫
（ 中国石 油乌鲁木 齐石化 公 司研 究院 ，新 疆 乌鲁木 齐 ８０ １ ） ３ ０ ９
摘
要 ：从 乌鲁木 齐市石 化公 司炼 油厂 污水池的活性污 ｎ ｐ ｅ ｏ ｏ ｃ ｎ ｒ ｔｏ ａ ｇ ｒ ｍ ０ ｍ ｇ Ｌ ｏ ５ ０ ｇ Ｌ． ｈ ｎ ｐ ｅ ｏ ｏ ｃ ｎｒ ｔ ｎ ｎ ｉａ ｅ ｅ ｈ ｎ ｌｃ ｎ ｅ ｔａｉ ｎ ｒ ｎ ｅ ｆｏ ３ ０ ／ ｔ ０ ｍ ／ Ｗ ｅ ｈ ｎ ｌｃ ｎ ｅ ｔａ ｉ ｏ ｏ ｅ ｏ ｔ１ ０ ／ ｅｄ ｇ ａ ａｉ ｎｗａ ｆｎ ｆｅ ｔ ｖ ｒ ｕ ０ ０ ｍｇ Ｌ ｔ ｅ ｒ ｄ ｔ ｓｏ ｏ ｅｆ ｃ． ｈ ｏ Ｋｅ ｒ ｓ ｐ ｅ ｏ ； ｅ ｒ ｄ ｔ ｎ ｄ ｇ ａ ａｉ ｎｒ ｔ ｙｗｏ ｄ ： ｈ ｎ ｌ ｄ ｇ ａ ａｉ ； ｅ ｒ ｄ ｔ ａｉ ｏ ｏ ｏ
变性和凝 固 。水 中含酚量＞１ ｍｇ Ｌ ０ ／ ，鱼 类等水生生
实验8苯酚生物降解菌的筛选
环保领域
除了在废水处理和土壤修复方面 的应用外，苯酚生物降解菌还可 应用于环保领域的其他方面，如 监测苯酚污染情况、评估环境质
量等。
对未来研究的建议与展望
深入研究菌株降解机制
优化菌株培养条件
为了更好地了解苯酚生物降解菌的作用机 制，需要进一步深入研究其降解过程中的 基因表达、酶活性等关键因素。
结果讨论
结合实验结果和相关文献，探讨苯酚 生物降解菌的筛选方法、影响因素以 及在实际应用中的潜在价值。
05
结论与展望
实验结论总结
苯酚生物降解菌的筛选成功
01
通过实验，我们成功筛选出了具有高效降解苯酚能力的菌株，
这为苯酚污染治理提供了新的解决方案。
实验方法的有效性
02
实验过程中采用的方法具有可行性，为后续研究提供了参考和
学习并掌握实验操作技能
1 2
3
培养基配置
学习如何根据配方配置培养基，掌握培养基的灭菌技术。
接种与培养
学习如何进行微生物的接种和培养，掌握无菌操作技术。
菌种分离纯化
学习并掌握菌种的分离、纯化和保藏方法。
理解苯酚生物降解菌在环境保护中的重要性
去除污染物
苯酚生物降解菌能够降解苯酚等有机污染物，降低其对环境的危害{01}
目 录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与数据分析 • 结论与展望
01 实验目的
了解苯酚生物降解菌的筛选过程
筛选原理
通过富集培养基培养含有苯酚的 废水，从中筛选出能够降解苯酚 的微生物。
筛选步骤
配置富集培养基、接种废水、培 养、观察并记录微生物的生长情 况、分离纯化菌种。
菌种的分离与纯化
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苯酚降解菌2,3-邻苯二酚双加氧酶基因克隆和序列分析一．摘要：环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，通常含酚废水中又以苯酚和甲酚的含量最高。
目前环境监测常以苯酚和甲酚等挥发性酚作为污染指标。
苯酚广泛存在于石油、化工、煤气、焦化、钢铁及酚类生产厂排放的废水中。
含酚废水的排放导致水源污染,毒死鱼虾,危害农作物,并严重威胁人类的健康,在我国水污染控制中已被列为重点解决的有害废水之一。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数微生物所分解。
在油田地层水中分离出苯酚降解菌BF80，并且从BF80中克隆出编码2，3-邻苯二酚双加氧酶(参与苯酚降解所必须的一种酶)的基因序列；采用基因克隆的策略是通过PCR进行片段克隆，并用UNIQ-10柱形DNA 回收试剂盒回收产物，采用NCBI BLAST序列分析表明该基因片段长1207bp,序列比较分析表明该基因片段与2-苯酚羟化酶A相似度达88%，氨基酸序列分析表明其与2,3-邻苯二酚双加氧酶相似度达96%。
本实验研究编码降解苯酚的2,3-邻苯二酚双加氧酶的基因克隆及序列分析，为构建高效降解苯酚的基因工程菌奠定了基础。
Phenol degrading bacteria 2 - phenol hydroxylase gene sequence analysisAbstract:Phenol pollution in the environment mainly refers to phenolic compounds on water pollution, waste water containing phenol is usually turned around the highest levels of phenol and cresol. Often present environmental monitoring such as phenol and cresol Phenol as pollution indicators. Phenol widespread in the petroleum, chemical, gas, coke, steel and phenolic wastewater plant emissions. Phenolic wastewater emissions of water pollution, poisoned fish, damage crops, and a serious threat to human health, water pollution control in China has been a key to solve one of the harmful waste. The toxicity of phenol organics still only a small number of micro-organisms, their decomposition.In oilfield water of phenol degrading bacteria isolated from BF80, and BF80 was cloned from the 2,3 - catechol dioxygenase (involved in phenol degradation of an enzyme necessary) of the gene sequence; using gene cloning strategy were cloned by PCR, with UNIQ-10 column DNA extraction kit recycling products, using NCBI BLAST sequence analysis showed that the gene fragment was 1207bp, Sequence analysis showed that the gene fragment and 2 - A similarity to phenol hydroxylase 88% amino acid sequence analysis showed that with 2,3 - catechol dioxygenase similarity of 96%. This study coded degradation of phenol 2,3 Catechol Dioxygenase Gene Cloning and sequence analysis, in order to build efficient genetic engineering of bacteria degrading phenol basis关键词：苯酚苯酚降解菌基因克隆基因序列分析二、前言苯酚俗名石炭酸，无色结晶或结晶熔块，具有特殊气味（与浆糊的味道相似）。
置露空气中或日光下被氧化逐渐变成粉红色至红色，在潮湿空气中，吸湿后，由结晶变成液体。
酸性极弱（弱于Ｈ２ＣＯ３），有特臭，有毒，有强腐蚀性。
环境中的酚污染主要指酚类化合物对水体的污染，含酚废水是当今世界上危害大、污染范围广的工业废水之一，是环境中水污染的重要来源。
在许多工业领域诸如煤气、焦化、炼油、冶金、机械制造、玻璃、石油化工、木材纤维、化学有机合成工业、朔料、医药、农药、油漆等工业排出的废水中均含有酚。
这些废水若不经过处理，直接排放、灌溉农田则可污染大气、水、土壤和食品。
目前对含酚废水的处理方法主要以下五种，一、吸附法，利用一些多孔吸附剂较高的比表面积表现出的较强的吸附性能将废水中的酚类物质吸附,吸附剂吸附饱和后可再生使用,酚类物质也可以回收利用。
常用的吸附剂主要有活性炭、磺化煤、大孔吸附树脂及有机合成吸附剂等。
此种方法的最大优点是设备简单、操作方便、净化效率高、吸附量大及吸附选择性高等。
活性炭吸附虽然吸附量大,但再生困难,因而其使用逐渐不为人们看好。
磺化煤的吸附容量较小，处理后废水中含酚量远达不到排放标准，需进行二级处理。
所以活性炭和磺化煤在处理高浓度含酚废水时受到了一定的限制。
二、萃取法，萃取法主要是利用难溶于水的萃取剂与废水接触,使废水中的酚类化合物在从水相转移到溶剂相中,从而达到酚类物质与水分离的目的。
根据目前回收与处理含酚废水的技术水平和经济核算的结果,对于浓度高于1000ｍｇ/Ｌ的高浓度含酚废水,采取溶液萃取工艺,不失为一种经济高效的处理方法。
三、液膜分离技术，液膜分离技术和溶剂萃取过程相似，也是由萃取与反萃取两个过程构成的。
但是在液膜分离过程中，萃取与反萃取是同时进行，一步完成的。
其传质速率明显提高，甚至可以实现溶质从低浓度向高浓度的传递。
四、气提及蒸馏气提法，气提法是根据挥发性酚类化合物与水蒸气形成共沸化合物,四、气提及蒸馏气提法利用酚在两相中的浓度差将酚水分离,从而使水得以净化。
高浓度的含酚废水可用气提法处理,去除率在80%～85%。
此种方法可回收酚,效率高,操作简单,但对不挥发性酚不能使用。
五、生物法，对于高浓度的含酚废水来说，生物法的处理效果不是很好，但是随着生物新技术的发展，近来用生物法处理高浓度含酚废水也有一些报道。
应用包埋法固定化微生物技术处理废水是废水处理的新技木。
经固定化酶和固定化微生物普遍比未固定化的微生物性能好，稳定、降解有机物能力强、耐毒、抗杂菌，耐冲击负荷。
在生物法当中，苯酚降解菌扮演着重要角色，目前国内外有关苯酚降解菌的分离及分离物多样性分析，以及苯酚降解菌的分离鉴定及其苯酚降解特性分析的研究已见诸报道；另外也有对于外界条件对嗜热菌BF80生长及苯酚降解的影响研究，但对参与编码苯酚降解过程的各种酶的基因的研究目前尚少见报道。
苯酚降解菌是一种能有效降解苯酚的微生物目前对该类微生物的种类研究尚不清晰，有报道用富集培养和直接涂平板培养的方法,从含酚废水处理系统的悬浮污泥中分别分离了57株和55株苯酚降解菌（参见文献1）。
蝙蝠80苯酚降解菌，是苯酚降解菌的一种，有研究表明Ca2+和Mg2+对嗜热菌BF80生长有促进作用，二者对嗜热菌BF80的最大苯酚降解率几乎没有影响，但Ca2+降低其降解速率，而Mg2+可提高嗜热菌BF80的苯酚降解速率；0·5%浓度的酵母粉最适合BF80的生长，可使其最大生长量达到1·563（参见文献2-3），本次试验展开对嗜热菌BF80苯酚降解菌研究，获得对编码该菌降解苯酚所需的酶基因的序列和氨基酸序列进行分析，为其对苯酚降解机理提供依据。
三、材料与方法1、嗜热菌BF80由油田地层水中分离得到；2、菌种活化：取BF80菌苔一环于20ml于LB液体培养基中，振荡培养24h，离心分离菌体，用生理盐水洗涤2次，悬于10ml的生理盐水中3、用SDS裂解法大量制备菌株BF80总DNA；4、设计引物：根据GanBank数据课公布的序列设计二对兼并引物一、二（表1）；5、对基因片段进行PCR以获得目的片段；（1）PCR反应体系：PCR反应体系由生工提供的50微升体系：Taq酶（0.25微升），dntp（10mmol/l）,Mg2+（25mmol/l）,boffer（15微升），引物1（1微升），引物2（1微升），去离子水（36.75微升）（2）PCR程序：变性温度95℃；退火温度50℃、30s；复性温度72℃、10min，共30个循环；40℃无限循环；（3）；①PCR产物的检测：用0.9%的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物大小及其特异性（结果显示于图1）；②PCR产物回收（UNIQ-10柱形DNA回收试剂盒回收产物）6、将目的片段连接到载体并转化入大肠杆菌（1）以E.coilDH5a作为DNA操作时用的受体菌；（2）感受态细胞的制备①液氮或低温冰箱中取出大肠杆菌DH5a，在LB平板上划线。
37摄氏度过夜至全长出菌落；②挑直径1-3mm的单菌落多个，接种到250ml锥形瓶的SOB培养基培养基不可再多，会影响效率；③在18℃、150-250r/min培养19-50小时（没有冷却的药床可在室温进行），温度不可超过37℃；④OD600约0.4-0.8时培养放在冰水中冷却10min；⑤在4摄氏度、300r/min离心15h,回收菌体；⑥去掉上清后用1/3体积的冷TB溶液悬浮，冷10min；⑦再次离心回收菌体；⑧用1/12.5体积的TB悬液添加最终浓度为7%的DMSO再冷却10min；⑨0.121ml分装，直接在液氮上冻；⑩在液氮或-80℃保存。
（3）用大肠杆菌克隆载体PGEM-T-Easy（载体大小为450bp,含有抗性）（4）连接载体体系由宝生物提供：10微升体系，PMD-19-T 0.5微升，solution2.5微升DNA4.5微升16℃连接过夜。